几种半薄切片染色法的比较与改进

半薄切片是超薄切片前的一个重要步骤。光镜检查半薄切片,可确定电镜观察部位,判断组织固定和包埋的质量。半薄切片染色法很多,我们对几种常用方法进行了一些比较和改进,现将实践中的体会介绍如下,供参考。一、方法及结果:用Epon812包埋的组织块切成1微米或1.5微米厚的半薄切片,捞到滴有蒸馏水的载片上,在烘箱内烤干,待染色。1.甲苯胺兰染色法:将染液滴于切片上,在酒精灯上加热数秒钟,勿煮沸,流水冲洗,自然干燥,树胶封固后观察。不必经酒精及二甲苯,免切片皱缩不平。如染色适度,组织染成兰色,结构清楚,而树脂无色。2.苏木精—伊红染色法:锇酸固定、树脂包埋的组织,用此法难于着色,一般须先用氢氧化钾溶液脱去树脂,然后染色.为避免氢氧化钾液对组织可能产生的损伤,我们参考Chang法改用2.5%高碘酸处理切片,并用滴     

眼组织的透射电镜制样方法

介绍一种眼组织透射电子显微镜标本制备方法。组织先用４％多聚甲醛－２．５％戊二醛混合固定液预固定,１％四氧化锇固定液后固定,丙酮逐级脱水,延长Ｅｐｏｎ８１２包埋液的浸透时间并包埋,用玻璃刀或钻石刀作超薄切片,醋酸主枸橼酸铅双重染色,Ｈ６００－Ⅳ型透射电子显微镜观察。此方法的优点在于眼组织各层超微结构保存良好,没有损伤及变性,我们对该方法的操作要点作了讨论。     

胰岛B细胞、A细胞的快速双染

组织学特殊染色技术及免疫组织化学技术已广泛应用于基础医学和临床医学的科研工作中。本快速染色法即用组织学醛品红染色法和免疫组织化学 SP法在同一张切片上对胰岛 B细胞和 A细胞进行了双重染色 ,取得较好的效果 ,现作简单介绍。取大鼠胰腺 ,Bouin液固定 ,石蜡包埋 ,切 5 μm厚切片。双染步骤如下第一步 ,胰岛 B细胞的醛品红染色 :切片脱蜡到水 ;入 0 .2 5 %浓硫酸和 0 .2 5 %高锰酸钾等量混和液中 3min;蒸馏水洗后入 5 %草酸 2 min;蒸馏水洗 ;再经 70 %酒精后入醛品红染液 1 5 min;70 %酒精分色后 ,蒸馏水洗。第二步 ,胰岛 A细胞的免…     

实验动物肝组织制片和胶原纤维染色方法的改进

在组织制片中 ,实验动物免疫损伤性肝纤维模型组织切片难度较大 ,因此我们改变了组织固定、脱水、透明、浸蜡和切片与Ｈ、Ｅ染色 ,提高了制片质量。特别是根据实验病理组织形态变化的要求 ,进行二种特殊对比染色 ,所选用和改进的显示胶原纤维的Ｓｉｒｉｕｓｒｅｄ(天狼星红 ) [1] 和Ｍａｓｓｏｎ三色染色法[2 ] ,已得到了较好的染色效果。1　材料和方法1 1　肝组织采用 1 5 %　中性甲醛固定液 ,得到了较好的固定效果。解剖后的动物大鼠肝脏标本切开 3～ 5块 ,置固定液中 5小时后 ,取材 0 2～ 0 .3ｃｍ厚度 ,再固定 5～ 1 0小时可得到充分…     

石蜡包埋全喉大切片的制备及特殊染色

我们参考王德田等[1] 的方法 ,采用石蜡包埋、普通轮转式切片机 ,制成全喉大切片 ,并对其进行特殊染色。得到较好的效果。一、材料与方法1 把尸检切取的全喉和手术切除的喉癌标本根据需要在水平、冠状和矢状三个方向切开 ,选用 5 4%的甲醛固定。2 取材时应用刀锋锐利的解剖用刀 ,对已有钙化的甲状软骨用 5 %的硝酸水溶液进行脱钙 ,限 72ｈ为宜 ,脱钙后流水充分冲洗去除脱钙液。3 切片过程 :( 1)制片 :将切取的全喉组织放在适当有盖容器内依次进行脱水、透明和浸蜡。 75 %、85 %乙醇各脱水12ｈ ;95 %乙醇和 2次无水乙醇各脱水 12ｈ ;3次二…     

用已固定组织制作冷冻切片体会

经福尔马林固定的组织不能直接做冷冻切片 ,为此作者经过反复试验 ,探索出一种利用液氮快速冷冻制作冷冻切片的方法 ,取得了满意的效果 ,现介绍如下。1　材料和方法　　经常规福尔马林固定 1～ 2天的外检和动物标本 (骨和含钙组织除外 ) ;低温恒冷切片机、ＯＣＴ包埋剂、包埋托、涂有防脱片胶的载玻片、液氮一罐。将福尔马林固定的组织常规取材 ,用滤纸吸干周围水分 ,置包埋托上加ＯＣＴ包埋剂 ,入液氮 3～ 5ｍｉｎ后取出 ,置于冷冻切片机冷冻台上片刻 ,修切组织 ,切片 ,吹干 ,不需固定 ,直接ＨＥ染色。2　体会　　组织从液氮中取出不宜立即…     

庆大霉素在肾近端小管吸收途径的形态学证据

利用活体肾小管显微穿刺技术 ,将 3H-庆大霉素注入近端小管腔内 ,间隔 5分钟、2 0分钟后 ,用 1%戊二醛分别固定各自的肾小管 ,摘除肾脏 ,将含有显微穿刺的肾小管取出 ,1%锇酸后固定 1小时 ,逐级酒精脱水 ,Epon812包埋 ,半薄、超薄切片 ,铀铅双重染色。光镜放射自显影切片 ,浸入 L M- 1乳胶 7～ 8秒钟 ,置 4℃冰箱中 1～ 2周 ,显影、定影、甲苯胺兰染色 ,显微镜观察并摄影。电镜放射自显影超薄切片 ,碳喷镀后 ,利用金属套环法将 Ilfore- L4核乳胶涂片 ,放置 4℃冰箱中 2～ 3个月 ,显影、定影。JEM- 12 0 0型电子显微镜观察。结果 :光镜放…     

制作疏松结缔组织教学铺片的探索

关于疏松结缔组织铺片的染色技术 ,近年来不少改进 ,能同时显示三种细胞两种纤维的方法也有几种 ,但是仍有不令人满意之处 ,比如巨噬细胞吞噬颗粒太少 ,显示不清楚 ,我们推测与甲醛液固定后水洗使其溶解有关 ,也可能与台盘蓝浓度有关。所以我们经过多次实验 ,作了如下探索和改进 :1将来复红染色法中的 1 %台盘蓝注射液改为 1 .5 % ;2采用了 1 0 %、2 0 %两种不同浓度甲醛固定液固定和 95 %酒精固定进行比较。结果 2 0 %甲醛效果较佳。具体操作如下 :材料和方法 :取 2 5 0 g重大鼠 ,腹腔注射台盘蓝 ,每天 1针 ,共注射 5针 ,第五针注射后两小…     

硫酸阿尔新蓝染色方法介绍

<正>淀粉样蛋白的鉴别是淀粉样变病理诊断重要的参考。传统方法依赖于刚果红染色,但其存在过程复杂,影响因素较多的缺点,近年国外新兴的一种染色方法——硫酸阿尔新蓝染色(SAB法)用于淀粉样蛋白的鉴别具有显著优势,我院病理科近期采用该方法取得良好效果,特介绍如下。1材料与方法1. 1组织标本选自武汉大学中南医院病理科活检组织,10%中性福尔马林固定,石蜡包埋切片,切片厚度8～10μm。1. 2试剂准备及配置阿尔新蓝染色液,1%硫酸钠溶液,     

显示石蜡组织切片脂质的染色方法

在实验动物脂质代谢模型中，为了观察组织中脂质的分布情况，笔者采用石蜡包埋连续切片，进行脂质染色，克服了冷冻切片不能有效原位固定脂质的局限性。经过改进油红乙醇液和Tracy染色法的石蜡制片，获得较好的染色效果。     

改良阿辛蓝染色显示硫酸化粘液物质

在胃粘膜上皮肠腺化生时,常采用阿辛蓝(ｐＨ10～25)染色进行肠腺化生类型鉴别,特别是大肠型肠腺化生具有临床意义。但在阿辛蓝(ｐＨ10)染色时,对大肠腺化生中含有硫酸化酸性粘液物质的大肠腺及杯状细胞着色浅,常为阴性或弱阳性表达,针对这一现象,我们采用醋酸钠盐酸缓冲液配制阿辛蓝染液和在染色前用高碘酸氧化,以增强阿辛蓝的染色能力。取得了很好的效果,现介绍如下。1　材料与方法11　材料　胃粘膜活检组织经病理诊断有肠腺化生者50例,组织经10%福尔马林固定,石蜡包埋,切片厚度5μｍ。12　染色配制121　01ｍｏｌ/Ｌ醋酸钠盐酸缓冲液(ｐＨ1…     

微波滴染法在临床肾穿组织特殊染色中的应用

肾穿标本的光镜病理诊断在临床诊断肾病方面具有重要作用 ,作者采用微波湿盒滴染法 ,应用于肾穿标本的ＰＡＳＭ Ｍａｓｓｏｎ、ＰＡＳ、ＨＥ 3种染色 ,既明显缩短时间 ,又节省大量试剂 ,不用使用染色缸等 ,效果满意 ,现予报道。一、材料与方法1.标本与切片 :临床肾穿标本 ,均经皮肾穿刺活检。经ＰＢＦ Ａ液 (甲醛 乙醇 磷酸盐缓冲液 )固定[1] 1ｄ ,换成 0 .1ｍｏｌ/ＬＰＢＳ保存 ,然后按石蜡包埋程序包埋 ,每步脱水及透明各 10ｍｉｎ ,浸蜡 1ｈ ,用 5 8～ 6 0℃石蜡包埋。用一次性刀片切片 2 μｍ厚 ,6 0℃烤片过夜 ,脱蜡入水。2 微波炉…     

脑切片星蓝染色法在塑化包埋技术中的实验研究

<正>脑切片标本在教学和科研方面起着重要作用。为了便于观察人们使用各种染色法对脑切片的灰质或白质进行染色,从而提高了灰、白质间的对比度,改善了观察效果[1～4]。近年发展起来的断层塑化包埋标本,具有使用寿命长、透明度高、结构保持原位,而且无毒、无味等众多优点。如果能够将染色后的脑切片标本进行塑化包埋,则可兼具二者的优点,提高断层塑化包埋标本质量。     

介绍一种新的弹性纤维染色法——改良Luna法

在研究人及某些脊椎动物视神经筛板的发育及结构过程中,我们将Luna弹性纤维染色法加以改良,后发现新方法能较清晰地显示弹性纤维的组织分布情况。现介绍如下。1 材料和方法标本用10%中性缓冲甲醛溶液或2.5%～5%戊二醛磷酸缓冲固定液(pH7.4)固定。石蜡包埋、切片厚5μm。染液配方:     

真空负压LSAB免疫组化法在相关抗原检测中的应用

同时用常规ＬＳＡＢ和真空负压ＬＳＡＢ法对ＥＴ 1(内皮素 1)抗原的表达进行对照研究。方法 :①制片 :线栓法建立大鼠局部脑缺血模型。于缺血后 12ｈ、1ｄ、3ｄ、7ｄ及 14ｄ灌注取脑、液氮冷冻及冷冻切片 ,片厚 16微米。每个时间点切片2 0张 ,冷丙酮固定 ,分常规法和真空负压法 2组进行ＬＳＡＢ染色。②真空负压ＬＳＡＢ法 :脑切片 0 0 1ｍｏｌ/ＬＰＢＳ冲洗 5ｍｉｎ 3次 ,加入 10 %正常羊封闭血清后 ,将切片放入真空负压干燥冷冻机内 ,持续抽气直至负压达 6 6 6 6ｋＰａ(5 0 0ｍｍＨｇ)后 ,持续 5ｍｉｎ ;切片ＰＢＳ冲洗后 ,加入兔抗人Ｅ…     

甲基丙烯酸羟乙酯塑料包埋切片技术在小鼠胎脑组织学分析中的应用

目的 探索塑料包埋切片法在小鼠胎脑组织学分析中的应用。 方法 取胚胎期13.5d（E13.5）小鼠,4% 多聚甲醛4℃固定过夜,分离胎鼠头部,甲基丙烯酸羟乙酯(HEMA)塑料包埋组织并切片;对切片进行HE 染色。 结果 与石蜡包埋相比,采用HEMA塑料包埋的方法进行胎鼠脑组织学分析,形态结构保存较完整、HE染色效果较清晰。 结论 利用塑料包埋技术进行小鼠胎脑组织学分析,优于石蜡包埋方法。     

出生前后大鼠胸腺的体视学初步分析

<正> SD大鼠第16天的胎鼠(F16)和生后1 天(N_1)和5天(N5)的乳鼠,取其胸腺称重,测比重计算色埋前体积。组织切成小块后用戊二醛和四氧化锇先后固定,树脂包埋,作1μm切片,甲苯胺蓝染色,油镜观     

胃癌组织中淋巴细胞的超微结构研究

为了观察胃癌组织中癌细胞和癌间质中淋巴细胞的超微结构改变及两者之间的关系,我们对3例胃低分化腺癌进行了电镜观察。每例取肿瘤和正常组织交界处组织多块,以2.5%戊二醛作前固定;1.0%锇酸1.5%亚铁氰化钾作后固定;Epon 812包埋;半薄切片定位后超薄切片,在H-500型透射电镜下观察。结果发现,胃癌间质中有两种形态的淋巴细胞:一种细胞体积小,胞浆内细胞器少,核大呈圆形,细胞没有伪     

激光照射豚鼠皮肤的形态学改变

<正> 用CO_2激光照豚鼠背部皮肤,右侧为照射区,左侧非照区;在照射前三周取左,右侧皮片,照射20次及40次后分别切取左,右侧皮片。固定于Bouin液,常规制片,分别作H.E及Weigert弹性纤维染色。电镜材料用0.25%戊二醛固定,锇酸后固定,Epon812包埋,超薄切片,醋酸铀     

一种可用于支持细胞功能判定的染色法

在光学显微镜下对支持细胞(Sertoli细胞)的功能进行快速直接的判定,一直缺少客观有效的方法.通过数年的摸索,找到了一种通过特异地对残余体及其前体进行染色来判定支持细胞功能状况的染色方法.具体的染色方法如下:1 材料与方法1.1 动物成年雄性Wilster大鼠.1.2 染色方法1.2.1 染色液的配制天青Ⅱ号0.5g、美蓝0.5g、伊红1g,加少量水顺次溶解后,加水至100ml,于瓶中敝口静置48小时,过滤、留上清液备用.最好于用前1周内配制.1.2.2 染色步骤动物睾丸用Bouin液或4%甲醛固定24～72小时,石蜡包埋,切片4～5μm厚.切片脱蜡至水,置染色液中染色12～24小时.染色后蒸馏水冲洗,晾干,切片置装有五氧化二磷干燥瓶中干燥24～48小时,直接入二甲苯透明,中性树胶封片.