人巨细胞病毒对红系祖细胞的影响

目的：探讨人巨细胞病毒（ＨＣＭＶ）对红系祖细胞（ＣＦＵ－Ｅ）的分化和增殖的影响,并初步探讨其作用机制。方法：取１５例脐血标本,用红系祖细胞单向半固体培养技术,观察３种不同浓度的ＨＣＭＶ ＡＤ１６９株对ＣＦＵ－Ｅ集落形成的影响,用ＰＣＲ和ＲＴ－ＰＣＲ检测集落中的ＨＣＭＶ ＤＮＡ与ｌａｔｅ ｍＲＮＡ。结果：３个感染组ＣＦＵ－Ｅ均减少,与正常对照组比较,分别为１１．４６％、２１．８８％、３４．４５％（Ｐ     

人巨细胞病毒对人脐血巨核系祖细胞生长的影响及作用机制研究

[目的]探讨人巨细胞病毒(HCMV)对巨核系祖细胞生长的影响及其机制.[方法]采用造血祖细胞体外半固体培养技术,用HCMVAD169株分别感染去除T细胞和未去除T细胞的脐血单个核细胞.观察CFU-MK集落数;用原位聚合酶链反应(IS-PCR)检测集落细胞中的HCMVDNA.[结果]2个感染组的CFU-MK集落数均减少,与灭活病毒组比较,分别为29.5%和48.6%(P<0.05),未去除T细胞组CFU-MK集落数减少比去除T细胞组明显(P<0.05),经IS-PCR检测发现各病毒感染组CFU-MK细胞中有HCMVDNA存在.[结论]HCMV在体外能抑制CFU-MK的分化和增殖,HCMV感染引起的血小板减少可能与该病毒对巨核系祖细胞的直接抑制以及免疫因素有关.     

用双重PCR检测人巨细胞病毒DNA

选取HCMV IEV基因区为扩增的靶序列,合成两对引物,其中一对巢居于另一对之间。扩增片段分别为721 bP和167bp。单次PCR扩增灵敏度达0.5～1.0fg,双重扩增可提高灵敏度10～100倍。用HSV-1,HSV-2,CoxB组1～6型病毒培养物作模板,无非特异扩增。14例疑为CMV感染患儿尿标本经PCR测定,12例检出HCMV DNA,其中11例病毒分离阳性。PCR快速,可靠,比病毒分离简便易行,对临床HCMV感染的诊断有重要意义。     

人巨细胞病毒感染对脐血淋巴系祖细胞增殖的影响

目的探讨人巨细胞病毒(HCMV)感染对脐血淋巴系祖细胞(CFU-TL)集落增殖能力的影响。方法采用甲基纤维素半固体培养CFU-TL集落,不同浓度HCMV-AD169持续攻击CFU-TL,观察计数CFU-TL集落数、抑制率、集落峰值时间及集落维持时间;用MTT法测量HCMV对宿主细胞增殖活性的影响;用流式细胞仪测定相应表面抗原阳性T-淋巴细胞百分率;并用聚合酶链反应(PCR)技术检测集落细胞内HCMV-AD169DNA。结果HCMV感染组CFU-TL集落数明显低于对照组(P<0.01),抑制程度与病毒感染滴度呈剂量依赖关系;HCMV感染组CFU-TL集落维持时间明显缩短,而各组集落出现时间及集落维持时间无明显差异;HCMV感染组48h、72h宿主细胞增殖指数分别1.59、1.28,感染96h、120h的增殖指数分别为0.58、0.32.;CD3+细胞较培养前明显提高,占集落组成细胞的(90.4±5.6)%,表明集落组成细胞中绝大部分细胞为T淋巴细胞;通过PCR,在HCMV感染组CFU-TL集落细胞内检测到HCMV-AD169存在。结论HCMV在体外试验中能抑制CFU-TL的分化和增殖;淋巴系祖细胞是HCMV的宿主细胞之一,HCMV-AD169能直接感染淋巴系祖细胞。此作用可能是HCMV感染所致的免疫功能低下的主要原因之一。提示HCMV感染引起的细胞免疫功能紊乱与CFU-TL受该病毒抑制有关。     

检测人巨细胞病毒的免疫—PCR方法的建立

目的：依据免疫－ＰＣＲ基本原理，建立检测人巨细胞病毒（ＨＣＭＶ）活动性感染的免疫＿ＰＣＲ方法。方法：我们建立的免疫－ＰＣＲ方法与酶联免疫ＥＬＩＳＡ不同之处是，用ＰＣＲ扩增生物素化线性ＰＢＶ２２０ＤＮＡ代替ＥＬＩＳＡ的酶催化底物，经琼脂糖凝胶电泳溴化乙锭染色观察分析扩增产物异条带，判断结果。结果：用本法检测ＨＣＭＶ的敏感性高于ＥＬＩＳＡ法１０＾３－１０＾５倍，可检测到５个感染ＨＣＭＶ细胞；而检测ＨＳ     

人巨细胞病毒的PCR检测

①目的 寻找早期快速检测人类巨细胞病毒（HCMV）感染的敏感方法。②方法 用HCMV即刻早期（IE）基因和晚期（LA）基因的7对待异性引物分别进行普通聚合酶链的反应（PCR），套式PCR（nPCR)和双重PCR，检测血清中的HCMV DNA，比较不同引物及不同PCR方法的灵敏度。③结果 同一基因的不同引物扩增HCMV DNA灵敏度差别无显著意义；LA基因的引物扩增灵敏度高于IE基因的引物；3种方法中以nPCR灵敏度最高，其次为双重PCR，普通PCR最低。④结论 用LA基因的特异性引物进行nPCR是早期快速检测HCMV感染的敏感方法。     

白细胞中巨细胞病毒及血清巨细胞病毒抗体检测与冠心病

巨细胞病毒属疱疹病毒科,是巨细胞包涵体病的病原体.在其基因结构上含有感染细胞特异性的多肽区段,都具有免疫原性[1].Fabricant首先用疱疹病毒成功诱导动脉硬化鸡的模型.巨细胞病毒基因组与单纯疱疹病毒一样是由L和S两个基因节段相连接而组成.1987年Adam首次报道了巨细胞病毒感染与动脉硬化有关.我们采取了不同方法检测了40例冠心病患者血清中巨细胞病毒IgM抗体及30例患者外周血单个核细胞的巨细胞病毒,旨在探讨人巨细胞病毒感染与冠心病发生之间的关系,现报告如下.     

人巨细胞病毒对巨核细胞生长的影响及其反义寡核苷酸的抗病毒活性

目的探讨人巨细胞病毒(HCMV)对人巨核系祖细胞的抑制作用及其机制,初步研究HCMV反义寡核苷酸(ASON)的抗病毒感染作用。方法采用体外悬浮培养巨核系细胞,观察HCMV AD169株对巨核系祖细胞生长的影响。用流式细胞术检测HCMV感染巨核系细胞上HCMV pp65抗原的表达。用HCMV感染经ASON预处理的巨核细胞,计数存活巨核细胞数,用FACS检测巨核细胞上HCMV pp65蛋白表达,并用MTT法测定ASON的细胞毒性。结果HCMV AD169株在体外能明显抑制巨核系祖细胞的增殖,悬浮培养第12天,与对照组相比,HCMV感染组的巨核细胞数减少了67.86%(P<0.05)。HCMV感染的巨核系细胞有HCMV pp65抗原的表达,其表达率为(24.5±3.1)%。0.08μmol/L的UL36反义寡核苷酸(UL36Anti)能对抗HCMV的作用,使巨核细胞数保持在未被感染时的水平,与HCMV感染组巨核细胞数比较有显著差异(P<0.05)。UL36Anti组巨核细胞上几乎无HCMV pp65蛋白的表达。MTT结果表明UL36Anti显著影响细胞生长的浓度为90μmol/L。结论HCMV感染引起的血小板减少与其抑制巨核系祖细胞增殖有关。特异的ASON有一定的抗HCMV活性,有可能作为一种新的手段用于HCMV感染引起的血小板减少症的防治。     

人类巨细胞病毒与肺癌关系初探

目的 :评价人类巨细胞病毒与肺癌的关系。方法 :对 6 0例原发性肺癌和 2 0例肺良性疾病的病理标本采用PCR扩增后电泳判断人类巨细胞病毒DNA的检测率。结果 :肺癌组人类巨细胞病毒DNA的检测率明显高于肺良性疾病组。结论 :人类巨细胞病毒感染与肺癌的发生有关 ,人类巨细胞病毒可能是肺癌发生的病因之一     

巨细胞病毒宫内感染的初步研究

目的：寻找巨细胞病毒宫内感染产前诊断的途径。方法：应用酶联免疫吸附试验（ＥＬＩＳＡ）和聚合酶链反应（ＰＣＲ）技术，对２４例妊娠患有巨细胞病毒（ＣＭＶ）活动性感染的产妇，分娩的新生儿脐血抗ＣＭＶ－ＩｇＭ型抗体和羊水及尿液ＣＭＶ－ＤＮＡ进行检测。结果：２４例ＣＭＶ活动性感染孕妇中有１４例发生宫内感染，宫内感染率５８．３％，与对照组比较有高度显著性差异。宫内感染儿羊水ＣＭＶ－ＤＮＡ阳性率７８．６％，显著高于脐血ＣＭＶ－ＩｇＭ阳性率．孕妇尿液排毒状态与宫内感染的发生无明显关系。结论：宜将ＣＭＶ－ＩｇＭ阳性孕妇视为有宫内感染潜在危险的对象；羊水ＰＣＲ－ＣＭＶ检测可望成为产前诊断ＣＭＶ宫内感染的有效手段。     

应用聚合酶链反应技术产前诊断人巨细胞病毒感染及其追踪监测结果

对４５例血人巨细胞病毒阳性的孕妇，在孕８－２６孕周取绒毛或羊水用聚合酶链反应技术进行检测。结果显示，绒毛检测组２７例，ＨＣＭＶ－ＤＮＡ阳性１３例，占４８．１４％，对照组３０例，３例阳性，占１０．００％；羊水检测组１８例，ＨＣＭＶ－ＤＮＡ阳性８例，占４４．４４％，对照组３０例，２例阳性，占６．６６％。     

肺部感染性疾病巨细胞病毒感染状态分析

目的 分析肺部巨细胞病毒（ＣＭＶ）感染状况及其意义，方法 应用ＰＣＲ技术检测４５例肺部感染性疾病患者的肺泡灌洗液（ＢＡＬＦ），保护性标本刷（ＰＳＢ）洗涤液及血白细胞ＣＭＶＤＮＡ，应用ＥＬＩＳＡ技术检测血清ＣＭＶＩｇＭ，结果 ＢＡＬＦ，ＰＳＢ，血白细胞ＣＭＶ－ＤＮＡ及血清ＩｇＭ的阳性率分别为３１．１１％，３５．５５％，１３．３３％和５１．１１％，肺部ＣＭＶ感染病毒血症的发生率为２８．５７％，肺癌与非     

PCR法检测武汉地区幼儿园正常儿童尿中人巨细胞病毒DNA

目的：探讨正常人群中人巨细胞病毒（Ｈｕｍａｎ Ｃｙｔｏｍｅｇａｌｏｖｉｒｕｓ，ＨＣＭＶ） 的感染状况。方法：按常规方式提取幼儿园正常儿童的尿标本ＤＮＡ，以特异性的ＨＣＭＶＤＮＡ引物，用多聚酶链反应方法进行检测。结果：在所检测的７２ 例武汉地区幼儿园正常儿童中，查出ＨＣＭＶ ＤＮＡ阳性者３９ 例，占５４－２ ％ ，在小于２ 岁与大于２ 岁两个年龄组之间，阳性检出率差异有显著性（ 分别为３４－４ ％ 和７０．０％ ，Ｐ＜０－００５） ，而２ 个年龄组间男女之间的检出率无差异。结论：提示在人群中与排毒者密切接触是儿童感染ＨＣＭＶ 的重要途径。     

不育妇女巨细胞病毒感染的研究

目的 :探讨妇女不育与巨细胞病毒 (HCMV)感染的关系。方法 :应用酶联免疫吸附试验 (ELISA)方法 ,对 98例育龄妇女的血清进行了巨细胞病毒抗体IgM、IgG的检测 ,其中 48例为不育妇女 ,另 5 0例为正常对照组。结果 :不育组HCMV_IgG的阳性率为 6 2 .5 % ,对照组为 70 .0 % ,两者差异不明显 (P >0 .0 5 ) ,但不育组HCMV_IgM阳性率为 48.5 % ,明显高于对照组的 4.0 % (P <0 .0 5 )。对不育组中习惯流产的患者进行清宫 ,组织送病检发现 :IgM阳性的患者其绒毛滋养层细胞明显增生 ,而合体细胞层无增生 ,蜕膜呈不同程度变性坏死 ,腺体高度分泌。结论 :巨细胞病毒感染可能与不育有关 ,对原因不明的不育妇女进行巨细胞病毒感染的检测有一定的临床意义。     

白细胞介素－2对人红系早期祖细胞生长的调节作用

应用微量甲基纤维素半固体培养红系早期祖细胞（ＢＦＵ－Ｅ）的方法，观察了白细胞介素－２（ＩＬ－２）和白细胞介素－２刺激人外周血单个核细胞的条件培养液（ＩＬ－２－ＭＮＣＣＭ）对１１例正常骨髓ＢＦＵ－Ｅ生长的调节作用。发现ＩＬ－２并不直接刺激ＢＦＵ－Ｅ增殖，而ＩＬ－２－ＭＮＣＣＭ对ＢＦＵ－Ｅ有增殖作用。提示体外ＩＬ－２对ＢＦＵ－Ｅ的增殖作用可能通过辅助细胞为媒介。     

半套式荧光定量聚合酶链反应检测肾移植前后人巨细胞病毒感染状态

目的：研究肾移植受者手术前后人巨细胞病毒（ＨＣＭＶ）的感染率及ＨＣＭＶＤＮＡ含量变化。方法：采用半套式荧光定量聚合酶链反应（ＡｍｐｌｉＳｅｎｓｏｒＰＣＲ）方法定量检测术前肾移植受者６１例，术后３２例，用四格表比较手术前、后的感染率，用ｔ检验比较病毒含量。结果：手术前、后肾移植受者ＨＣＭＶ的感染率分别为７７％和８７５％；ＨＣＭＶＤＮＡ平均含量（拷贝数每升）分别是１０７×１０７Ｌ－１和７４１×１０７Ｌ－１，两者之间感染率无显著差异（χ２＝１６５Ｐ＞００５），但病毒平均含量存在极显著差异（ｔ＝６４６Ｐ＜００１）。结论：研究结果显示：①免疫抑制治疗激活了潜伏性ＨＣＭＶ感染，导致术后ＨＣＭＶ含量显著增加；②决定肾移植受者ＨＣＭＶ感染状态的主要是机体本身的免疫力，减少ＨＣＭＶ感染，术后合理使用免疫抑制剂，避免过度抑制可能更重要