B7基因转染骨髓干/祖细胞及表达的实验研究

目的探索非实体瘤白血病转基因治疗的可能性,以便临床应用.方法利用脂质体为载体,将B7基因转导入骨髓干/祖细胞内,通过G418筛选,收集转导的阳性细胞;以CD80单克隆抗体免疫荧光标记检测,观察B7基因在人骨髓干/祖细胞内基因转移及其表达的稳定性.结果通过脂质体介导,B7基因在人的骨髓细胞可以有效的稳定表达;用G418筛选可使转导的阳性细胞富集.结论利用脂质体做载体介导骨髓造血干/祖细胞转移B7基因是可行的.     

重组B7-1/B7-2逆转录病毒载体的构建及其在小鼠肝癌基因治疗中的应用

目的构建表达Ｂ７－１／Ｂ７－２的重组逆转录病毒载体，并观察Ｂ７－１／Ｂ７－２的表达对体内外抗小鼠肝癌免疫反应的影响。方法粘端定向克隆构建重组逆转录病毒载体ＬＸＳＮ－ｍＢ７－１和ＬＸＳＮ－ｍＢ７－２，依次转导包装细胞系ＰＥ５０１和ＰＡ３１７，并用重组病毒上清感染小鼠肝癌细胞系Ｈｅｐａｌ－６，流式细胞术检测Ｂ７－１／Ｂ７－２的表达，并用Ｂ７－１／Ｂ７－２表达阳性的Ｈｅｐａｌ－６在体内外诱导抗肿瘤免疫反应。结果１．表达Ｂ７－１／Ｂ７－２阳性的Ｈｅｐａｌ－６致瘤性明显降低；２．单独Ｂ７－１／Ｂ７－２基因转染仅能诱导部分细胞毒性和部分保护性免疫反应；３．Ｂ７－１／Ｂ７－２基因转染与细胞因子处理联合应用则能诱导强烈的细胞毒性和完全的抗Ｈｅｐａｌ－６保护性免疫反应。结论Ｂ７－１／Ｂ７－２共刺激分子在小鼠肝癌的表达是激活抗肿瘤免疫所必需的但不是充分的条件，而Ｂ７基因转染联合ＩＦＮ－γ等细胞因子处理能诱导彻底的抗肿瘤免疫反应     

B7联合HSV-TK基因对大鼠乳腺癌的治疗作用

目的：探讨逆转录病毒介导的单纯疱疹病毒胸苷激酶基因（ＨＳＶ－ＴＫ）和共同刺激因子Ｂ７基因联合作用对乳腺癌动物模型的体内治疗作用。方法：应用重组技术,构建分别携带ＨＳＶ－ＴＫ,Ｂ７及ＨＳＶ－ＴＫ／Ｂ７双基因的逆转录现毒载体。以ＳＨＺ－８８细胞细胞株建立乳腺癌动物模型,随机分为组、ＴＫ组、Ｂ７组及ＴＫ／Ｂ７组,每组２０只。２周后于瘤体内分别注射转染有空载及不同的重组载体的乳腺癌细胞,３天后于腹腔内连续     

骨髓增生异常综合征CD7抗原的表达

目的 ＣＤ７的测定在骨髓增生异常综合征（ＭＤＳ）的诊断及预后判断中的意义。方法 应用单克隆抗体采用间接免疫荧光法对３０例ＭＤＳ患者骨髓单个核细胞（ＭＮＣ）进行ＣＤ７的检测。结果 ＭＤＳ患者ＣＤ７抗原表达增高,而且随ＭＤＳ恶化,即由ＲＡ／ＲＡＳ向ＲＡＥＢ／ＲＡＥＢ－Ｔ转化,ＣＤ７抗原表达增高,易于转化为白血病。结论 ＭＤＳ患者ＭＮＣ表面ＣＤ７的检测有助于ＭＤＳ的诊断,也可协助预后判断。     

人脐血造血祖细胞体外培养的研究

应用体外培养方法对人脐血造血祖细胞（ＣＦＵ－ＧＭ、ＣＦＵ－Ｅ、ＢＦＵ－Ｅ、ＣＦＵ－Ｆ）数量及其特征进行观察，并与成人外周血及骨髓相比较。结果显示：①脐血中ＣＦＵ－ＧＭ、ＣＦＵ－Ｅ、ＢＦＵ－Ｅ数量约相当于成人外周血的７～１８倍；ＣＦＵ－ＧＭ及ＣＦＵ－Ｅ数量与骨髓相比无统计学差异，但ＢＦＵ－Ｅ低于骨髓；②脐血中ＣＦＵ－ＧＭ的集落大小、细胞构成、集落生长曲线明显不同于成人外周血及骨髓；③脐血红系祖细胞生长模式近似于骨髓；④脐血中可培养出ＣＦＵ－Ｆ，其数量约为骨髓的２／５，而外周血中则无ＣＦＵ－Ｆ形成。提示人脐血中富含造血干／祖细胞，而且在数量和特征上明显不同于外周血和骨髓，在移植中可能更具有重建骨髓造血的能力。     

重组人骨形态发生蛋白—2／7融合基因的构建及其在大肠杆菌 …

构建重组人骨形态发生蛋白－２／７融合体,研究其在大肠杆菌中的表达及生物学活性。利用ＤＮＡ重组技术,将编码人骨形态发生蛋白－２（ＢＭＰ－２）成熟肽的０．３６ｋｂ基因片段与编码人骨形态发生蛋白－７（ＢＭＰ－７）成熟肽的０．４４ｋｂ基因片段连接,得到重组人骨形态发生蛋白－２／７融合基因;经测序鉴定后,将其克隆到表达载体ｐＢＶ２２２中,转化大肠杆菌ＤＨ５ａ,温度诱导表达,表达蛋白经初步纯化后测定其对培养小     

PCNA、p53、pRb基因产物的表达与间叶组织肿瘤良恶性关系研究

采用免疫组化法检测１２７例间叶组织肿瘤中ＰＣＮＡ、ｐ５３、ｐＲｂ基因产物的表达与间叶组织肿瘤恶性程度的相关性。结果：８５例恶性间叶组织肿瘤中,ＰＣＮＡ、ｐ５３、ｐＢｂ基因产物的阳性表达率分别为８４．７％（７２／８５）,５４．１％（４６／８５）,５８．８％（５０／８５）;４２例良性间叶组织肿瘤中,ＰＣＮＡ、ｐ５３、ｐＢｂ基因产物的阳性表达率分别为４０％（１７／４２）,１６．７％（７／４２）,２１．４     

重组人骨形态发生蛋白-2/7融合基因的构建及其在大肠杆菌中的表达和初步活性测定

构建重组人骨形态发生蛋白－２／７融合体, 研究其在大肠杆菌中的表达及生物学活性。利用ＤＮＡ 重组技术,将编码人骨形态发生蛋白－２ （ＢＭＰ－２） 成熟肽的０．３６ ｋｂ 基因片段与编码人骨形态发生蛋白－７ （ＢＭＰ－７） 成熟肽的０．４４ｋｂ 基因片段连接,得到重组人骨形态发生蛋白－２／７ 融合基因; 经测序鉴定后,将其克隆到表达载体ｐＢＶ２２２中,转化大肠杆菌ＤＨ５α, 温度诱导表达。表达蛋白经初步纯化后测定其对培养小鼠成骨样细胞增殖、分化及碱性磷酸酶活性的影响。克隆质粒转化的工程菌,经４２℃诱导４～６ ｈ 后,高效表达重组人骨形态发生蛋白－２／７, 在ＳＤＳ－ＰＡＧＥ上出现一新的蛋白带, 分子量约２９ ｋｕ,约占菌体总蛋白的２０％ ,表达蛋白以包涵体的形式存在,经初步纯化、裂解、复性后的ＢＭＰ－２／７ 蛋白具有促进成骨样细胞分化、增殖及增加碱性磷酸酶活性的作用。ＢＭＰ－２／７ 融合基因的构建和表达,可能提供一种全新的具有诱导成骨作用的蛋白     

应用PCR检测恶性淋巴瘤骨髓浸润及其临床意义

目的：检测恶性淋巴瘤（ＭＬ）的骨髓浸润（ＩＢＭ）并探讨其与临床分期、疗效和预后的关系。方法：以克隆性ＩｇＨ和ＴＣＲγ基因重排分别作为Ｂ和Ｔ细胞淋巴瘤克隆基因标志，应用ＰＣＲ基因扩增技术检测ＭＬ患者ＩＢＭ。结果：（１）３４份ＭＬ患者骨髓标本ＩＢＭ检出率为７０．６％（２４／３４），明显高于形态学检测方法（３８．６％，Ｐ＜０．０５）。（２）１９例形态学检测正常的非霍奇金淋巴瘤（ＮＨＬ）骨髓标本，ＩＢＭ阳性率５７．９％（１１／１９），其中８例Ｂ－ＮＨＬ（８／１４）检测到克隆性ＩｇＨ基因重排；５例同时还检测到克隆性ＴＣＲγ基因重排，２例Ｔ－ＮＨＬ（２／３）检测到克隆性ＴＣＲγ基因重排，无克隆性ＩｇＨ基因重排；２例免疫分型不明确ＮＨＬ患老中１例（１／２）检测到克隆性ＩｇＨ基因重排，无克隆性ＴＣＲ，基因重排。２例霍奇金病（ＨＤ）和１０例非淋巴系肿瘤骨髓ＩＢＭ均阴性。（３）Ⅲ，Ⅳ期ＮＨＬ患者ＩＢＭ检出率显著高于ＩＩ期（ｐ＜０．０１），初诊未治及复发患者也显著高于部分或完全缓解患者（Ｐ＜０．０１）。（４）ＩＢＭ阳性组ＮＨＬ２年死亡率５４．５％（６／１１），明显高于ＩＢＭ阴性（ｐ＜０．０５）。结论：ＰＣＲ方法检测ＩＢＭ有助于估     

一种检测异基因骨移植后供体植活的巢式PCR方法

目的 利用ＢＡＬＢ／Ｃ（Ｈ－２Ｋ＾ｄ）和Ｃ５７ＢＬ／６（Ｈ－２Ｋ＾ｂ）小鼠Ｈ－２Ｋ等位基因不同,建立一种检测异基因骨髓移植后供体植活的方法。方法 分别以供鼠（ＢＡＬＢ／Ｃ）和受鼠（Ｃ５７ＢＬ／６）及ａｌｌｏ－ＢＭＴ后小鼠骨髓和脾细胞ＤＮＡ为模板进行巢式ＰＣＲ,并用琼脂糖凝胶电泳分析ＰＣＲ扩增产物。结果 以供鼠和移植后小鼠骨髓和脾细胞ＤＮＡ行巢式ＰＣＲ可扩增了约４２１ｂｐ的特异性片段,而未经移植的Ｃ