氯化两面针碱对人骨肉瘤细胞的诱导凋亡作用及其机制

目的探讨氯化两面针碱对人骨肉瘤MG-63细胞诱导凋亡作用及其相关机制。方法将不同浓度的氯化两面针碱作用于MG-63细胞,采用MTT法检测其增殖抑制作用;利用荧光显微镜和电镜观察其对细胞形态的影响;利用流式细胞仪检测不同浓度的氯化两面针碱诱导MG-63细胞的凋亡率;Western blotting法分析caspase-3、caspase-9、Bcl-2和Bax表达的变化。结果 MTT结果表明,氯化两面针碱可明显抑制MG-63细胞的增殖,并存在时间-剂量依赖性。荧光显微镜下,氯化两面针碱处理过的细胞呈现典型的凋亡形态,如细胞核清亮,大小不一,有的裂解成亮蓝色的颗粒。透射电镜下,同样可看到细胞凋亡现象,如胞质内出现大量空泡,细胞核边集,细胞表面微绒毛减少。流式细胞仪结果表明氯化两面针碱诱导细胞凋亡呈明显的剂量依赖性,随着药物浓度升高,凋亡率升高。Western blotting证实,氯化两面针碱能上调MG-63细胞中cleaved-caspase-3、cleaved-caspase-9和Bax的表达,同时下调pro-caspase-3、pro-caspase-9和Bcl-2的表达。结论氯化两面针碱可诱导人骨肉瘤MG-63细胞凋亡,其具体机制可能与激活caspase凋亡通路有关。     

高效液相色谱法测定两面针不同药用部位氯化两面针碱的含量

[目的]比较广东、广西产两面针不同部位中氯化两面针碱的含量差异.[方法]采用体积分数70%甲醇超声提取,高效液相色谱法(HPLC)测定,色谱柱为Hypersil ODS C18(4.6 mm×200 mm,5μm);以乙腈为流动相A,1.22 g/L甲酸-三乙胺(pH4.5)为流动相B,梯度洗脱.[结果]氯化两面针碱的...     

氯化两面针碱促进骨髓瘤细胞凋亡的机制研究

目的 探究氯化两面针碱促进骨髓瘤细胞凋亡的机制。方法 将人多发性骨髓瘤(MM)细胞株RPMI 8226培养至对数生长期,采用CCK-8法检测细胞活性并测定半数抑制浓度(IC₅₀)。将MM细胞株RPMI8226随机分为空白组、硼替佐米(BTZ)组、氯化两面针碱(NCe)组和BTZ+NCe组。BTZ组加入500μL10 nmol/L BTZ溶液,参照IC₅₀在NCe组加入500μL 4.5μmol/L NCe,BTZ+NCe组加入250μL 10 nmol/L BTZ和250μL 4.5μmol/L NCe,继续培养24 h。采用流式细胞术检测各组细胞凋亡情况,实时荧光定量聚合酶链反应、Western blotting检测各组细胞STK4、YAP1、Cl-caspase-3 mRNA和蛋白的表达。结果 与空白孔相比,其余各孔的细胞存活率均降低(P <0.05);与0μmol/L NCe孔比较,1μmol/L、2μmol/L、4μmol/L、8μmol/L NCe孔的细胞存活率均降低(P <0.05)。孵育24 h的IC_50<...     

氯化两面针碱对肝癌细胞Bel-7402自噬的影响

目的:探讨氯化两面针碱(NC)对肝癌Bel-7402细胞系自噬的影响.方法:选取肝癌Bel-7402细胞株,在透射电子显微镜下观察NC处理Bel-7402细胞24h后吞噬泡、自噬小体、自噬溶酶体等结构;Westernbloting检测微管相关蛋白轻链3(LC3)和P62蛋白表达水平的改变;采用CCK-8法检测不同浓度N...     

氯化两面针碱对前列腺癌细胞PC-3增殖与凋亡的影响

目的 探讨氯化两面针碱对前列腺癌细胞PC-3增殖及凋亡的影响作用。方法 采用MTT、细胞划痕和Transwell侵袭实验评估氯化两面针碱对人前列腺癌细胞PC-3增殖与侵袭的影响;流式细胞术检测氯化两面针碱对PC-3细胞凋亡的影响;免疫印迹检测AKT/mTOR及细胞凋亡蛋白B细胞淋巴瘤基因-2相关X蛋白(Bax)和B细胞淋巴瘤基因-2(Bcl-2)的表达,应用PI3K通路抑制剂LY294002探讨抑制AKT通路对前列腺癌细胞PC-3的影响。结果 氯化两面针碱能抑制PC-3细胞的增殖与侵袭,且具有剂量依赖性(P<0.01)。氯化两面针碱可下调Bcl-2、而上调Bax的蛋白表达,Bax/Bcl-2比例明显上升(P<0.01),抑制AKT和mTOR通路的磷酸化,诱导前列腺癌细胞PC-3凋亡。联合应用LY294002发现,抑制AKT通路可增强氯化两面针碱对前列腺癌细胞PC-3增殖和侵袭的抑制作用。结论 氯化两面针碱能够抑制前列腺癌细胞PC-3的增殖与侵袭,诱导其凋亡,并通过抑制AKT/mTOR磷酸化发挥其抗前列腺癌作用,可作为一种潜在治疗前列腺癌的药物。     

氯化两面针碱对垂体腺瘤GH3细胞的抑制作用

目的 探讨氯化两面针碱对垂体腺瘤GH3细胞的抑制作用及其机制。方法 不同浓度的氯化两面针碱作用于GH3细胞,培养不同时间后分别检测其作用效果:CCK-8检测各组GH3细胞存活率;Annexin V/PI凋亡试剂盒染色后,采用流式细胞术检测各组GH3细胞凋亡率;PI染色后采用流式细胞术进行细胞周期分析;实时定量PCR检测凋亡相关基因Bax、 Bcl-2,以及细胞周期相关基因Cyclin B1、CDK1、p21和p27的mRNA表达水平;Western blotting法检测Bax、Bcl-2、Cyclin B1和CDK1蛋白,以及丝氨酸/苏氨酸激酶(AKT)和细胞外信号调节激酶(ERK)信号通路蛋白的表达水平。结果 氯化两面针碱可抑制GH3细胞增殖,促进GH3细胞凋亡及细胞周期阻滞于G2/M期;氯化两面针碱能够抑制AKT及ERK信号通路的激活。结论 氯化两面针碱有效抑制垂体腺瘤GH3细胞的增殖和促进其凋亡,可作为有效治疗垂体腺瘤的潜在药物。     

氯化两面针碱对斑马鱼胚胎心脏影响的初步研究

目的观察不同浓度的氯化两面针碱对斑马鱼心脏的影响。方法用发育正常的受精后48 h（48 hpf）的斑马鱼胚胎作为实验模型,用浓度为5.00 mg/L、3.15 mg/L、2.00 mg/L、1.58 mg/L、1.12 mg/L的氯化两面针碱处理上述胚胎,分别于受精后60 h和72 h时观察胚胎心脏的形态及心率的变化。结果各给药组在受精后60 h和72 h时均出现胚胎心脏中毒现象。5.00 mg/L、3.15 mg/L实验组中,胚胎主要表现为心脏跳动停止、心脏区域出血,2.00 mg/L、1.58 mg/L、1.12 mg/L实验组的胚胎则主要表现为心脏发育畸形。心率随着浓度的升高而明显下降,随着暴露时间的延长,心率下降不明显。结论氯化两面针碱对斑马鱼胚胎有心脏毒性。     

粉防己碱对喉癌耐药细胞株KBV200耐药逆转作用的研究

目的:研究天然有效成分粉防己碱(Tetrandnne,TET)对喉癌耐药细胞株KBV200的耐药逆转作用.方法:本研究以喉癌耐药细胞株KBV200为研究对象,采用粉防己碱逆转KBV200对常用抗肿瘤药物阿霉素的多药耐药作用,以经典逆转剂维拉帕米(Verapamil,VRP)为对照组,用四甲基偶氮唑蓝(MTT)法测定其对实验细胞的增殖抑制率.结果:低毒剂量的粉防己碱能逆转实验细胞株埘阿霉素的多药耐药(muhidrug resistance,MDR)作用,逆转指数为22.96;维拉帕米逆转指数为9.31.结论:低毒浓度的天然药物粉防己碱能逆转喉癌耐药细胞株KBV200对阿霉素的耐药作用,其逆转效果优于经典逆转剂维拉帕米.     

苦参碱与8种抗肿瘤药联合对KBV200耐药细胞株细胞周期的影响

目的探讨8种常用抗肿瘤药物长春新碱、阿霉素、平阳霉素、顺铂、5一氟尿嘧啶、环磷酰胺、阿糖胞酐,三尖杉酯与苦参碱联合对KBV200耐药细胞株细胞周期的影响。方法以喉癌KBV200耐药细胞株为研究对象,通过流式细胞仪（FCM）检测8种抗肿瘤药物分别联合苦参碱对KBV200细胞株细胞周期的影响。结果苦参碱加顺铂组使KBV200耐药细胞株G0～G1期细胞下降,G2～M期细胞升高;苦参碱加阿糖胞酐组使KBV200耐药细胞株G0～G1期细胞升高,G2～M期细胞下降;苦参碱加5-Fu组对KBV200耐药细胞株的凋亡作用加强;苦参碱与长春新碱、阿霉素、三尖杉酯、环磷酰胺、平阳霉素联合个组中,对KBV200耐药细胞株细胞周期及凋亡均无明显变化。结论苦参碱分别与顺铂和阿糖胞酐联合作用后,均可影响KBV200耐药细胞株的细胞周期。     

氯化两面针碱通过JAK2/STAT3信号通路对胶质瘤细胞上皮-间质转化的抑制作用

目的:探讨氯化两面针碱(NC)对胶质瘤细胞上皮-间质转化(EMT)的抑制作用,并阐明抑制作用的信号机制.方法:体外培养人胶质瘤U87细胞,分为对照组(不做处理)、EMT组[转化生长因子β1(TGF-β1)诱导胶质瘤细胞EMT]和不同浓度(2.5、5.0、7.5和10.0μmol·L-1)NC组(不同浓度NC+10μg·...     

miRNA-21对乳腺癌细胞放射敏感性的影响及其机制

目的：观察miRNA-21对乳腺癌细胞放射敏感性的影响,并初步探讨其作用机制。方法：乳腺癌T47D和MDA-MB-361细胞分别给予0.0、2.5和5.0 Gy γ射线照射,CCK8法检测细胞存活率,流式细胞术分析细胞周期进程,实时定量PCR法检测72 h内细胞中miRNA-21表达水平。T47D和MDA-MB-361细胞分别转染anti-miRNA-21序列（anti-miRNA-21组）和阴性对照序列（阴性对照组）,并设置未转染细胞为空白对照组,实时定量PCR法检测各组细胞中miRNA-21表达水平;经0.0和5.0 Gy γ射线照射后,CCK8法检测细胞存活率,流式细胞术分析细胞周期进程。结果：经5.0 Gy γ射线照射后,T47D细胞存活率明显高于MDA-MB-361细胞（P<0.05）;与0.0 Gy照射组比较,5.0 Gy照射组T47D和MDA-MB-361细胞G₂/M期细胞百分率均明显升高（P<0.05）,miRNA-21表达水平均明显升高（P<0.05）。与空白对照组比较,anti-miRNA-21组T47D和MDA-MB-361细胞中miRNA-21表达水平均明显降低（P<0.05或P<0.01）;给予5.0 Gy γ射线照射后,anti-miRNA-21组T47D和MDA-MB-361细胞存活率均明显降低（P<0.05或P<0.01）,T47D细胞G₂/M期细胞百分率明显降低（P<0.05）,而subG₁期细胞百分率明显升高（P<0.05）。结论：miRNA-21表达下调能够增强乳腺癌细胞的放射敏感性,其机制可能与抑制细胞周期G₂/M期阻滞有关。     

汉黄芩素对多发性骨髓瘤细胞周期及P-Wee1和P-Akt蛋白表达的影响

目的探讨汉黄芩素对多发性骨髓瘤RPMI8226细胞的增殖抑制作用及其可能的机制。方法以不同浓度的汉黄芩素(5～100μg/ml)作用于RPMI8226细胞24h,使用CCK-8法、流式细胞仪检测细胞的增殖活性和细胞周期的变化;运用Western-blot法检测汉黄芩素作用前后细胞内P-Wee1、P-Akt蛋白表达的变化。结果汉黄芩素对RPMI8226细胞具有增殖抑制作用,并有剂量依赖性,IC50为43.71μg/ml;汉黄芩素浓度为50μg/ml时,用药组的G2/M%为(25.4333±2.35433)%,明显高于溶剂对照组的(6.8333±1.52753)%;Western-blot检测结果显示,用药组汉黄芩素浓度≥50μg/ml时,与对照组相比,P-Wee1、P-Akt蛋白表达明显减少。结论汉黄芩素能明显抑制RPMI8226细胞的增殖,可能是通过Akt/Wee1途径使肿瘤细胞发生G2/M期阻滞,从而发挥增殖抑制作用。     

昆明山海棠碱对Jurkat淋巴瘤细胞株的细胞周期和凋亡时相的影响

目的 探讨昆明山海棠(THH)碱对Jurkat T淋巴瘤细胞的细胞毒性、细胞周期和凋亡时相特异性的影响，以了解THH碱诱导细胞凋亡的机制。方法 台盼蓝染色法检测细胞生长和细胞活力；DNA染色法、TUNEL标记结合流式细胞术检测细胞周期和凋亡时相特异性。结果 THH碱能有效抑制Jurkat细胞增殖、细胞活力下降，细胞在增殖周期中被阻滞于G1期。THH碱首先能诱导S、C2／M期细胞凋亡，同时能诱导G1期细胞凋亡。结论 提示THH碱能抑制Jurkat细胞的DNA合成，抑制细胞增增殖，并可显著诱导各期相细胞发生凋亡。     

鬼针草提取物对Hela细胞及A549细胞增殖及细胞周期的影响

目的 研究鬼针草提取物(BPE)对Hela细胞及A549细胞体外增殖的抑制作用及对细胞周期的影响.方法 常规MTT法分析BPE对Hela细胞及A549细胞体外增殖的抑制作用并计算IC50;Hochest33342染色分析10 μg/mL BPE对肿瘤细胞的凋亡诱导作用;流式细胞术分析BPE对肿瘤细胞周期的影响.结果 BPE能抑制Hela细胞及A549细胞的体外增殖并呈剂量依赖性,IC50分别为10.34 μg/mL及8.31 μg/mL;Hochest染色证实BPE能诱导肿瘤细胞凋亡;流式细胞术分析证实BPE能将肿瘤细胞阻滞在G0/G1期.结论 鬼针草能使细胞停滞于G0/G1期,并能诱导肿瘤细胞凋亡从而抑制肿瘤细胞的增殖.     

Disabled-1在人乳腺癌细胞中的表达及其对细胞周期的影响

目的：探讨Disabled-1（Dab1）基因在乳腺上皮细胞及乳腺癌细胞中的表达情况,并阐明Dab1对乳腺癌细胞周期的影响。方法：体外培养永生化的乳腺上皮细胞MCF-10A及乳腺癌细胞MCF-7、BT-549和MDA-MB-231,实时荧光定量（Real-time PCR）法检测MCF-10A、MCF-7、BT-549和MDA-MB-231细胞中Dab1 mRNA的表达水平,Western blotting法检测Dab1蛋白的表达水平。取对数生长期的BT-549细胞,分为对照组、转染pKH3组和转染pKH3-Dab1组,采用流式细胞术检测各组细胞周期的变化情况。结果：Real-time PCR法检测,与MCF-10A细胞（0.998±0.020）比较,乳腺癌细胞MCF-7（0.504±0.037）、BT-549（0.302±0.027）和MDA-MB-231（0.330±0.031）中Dab1 mRNA相对表达水平明显下降（P<0.05）。Western blotting法检测,与MCF-10A细胞（0.227±0.021）比较,乳腺癌细胞MCF-7（0.134±0.014）、BT-549（0.076±0.01）和MDA-MB-231（0.074±0.005）中Dab1蛋白表达水平明显下调（P<0.05）。流式细胞术检测,与对照组和转染pKH3组比较,转染pHK3-Dab1组BT-549细胞出现细胞周期G₁期阻滞。结论：Dab1在体外培养乳腺癌细胞系中表达下调,Dab1过表达可阻滞乳腺癌细胞G₁细胞周期进展。     

泰素对放射所致鼻咽癌细胞周期阻滞、凋亡的影响

目的研究泰素对放射所致鼻咽癌细胞（CNE）细胞周期阻滞和凋亡的影响。方法采用流式细胞术和MTT法分别检测放射或放射联合泰素诱导的细胞周期阻滞、凋亡及其细胞存活率。结果泰素可使放射所致的;1）G2/M期阻滞峰值降低,阻滞时间缩短,有极显著的统计学意义（P〈0.01）;2）凋亡率明显升高,有极显著的统计学意义（P〈0.01）;3）细胞存活率明显降低,有显著的统计学意义（P〈0.05）且其Dq（实验组） 〈Dq（对照组）。结论泰素可作为鼻咽癌放射治疗的增敏剂。     

电离辐射对Jurkat T细胞周期进程的影响

目的：探讨电离辐射诱导Jurkat T细胞损伤过程中细胞周期进程的变化规律。方法：采用流式细胞术 (FCM) 检测低剂量（0.075 Gy）和较大剂量（0.5、1.0、2.0、4.0及6.0 Gy）X射线照射后Jurkat T细胞周期进程变化的时间-效应关系和剂量-效应关系。结果：时间-效应关系研究发现,2.0 Gy X射线照射后Jurkat T细胞相继发生S期延迟和G₂期阻滞,S期细胞百分率于照射后立即增加(P<0.001),而G₂+M期细胞百分率照射后8 h开始显著增加（P<0.001）。剂量-效应关系研究发现,75 mGy低剂量X射线照射即可诱导Jurkat T细胞发生S期延迟（P<0.001）和G₂期阻滞（P<0.05）;0.5~6.0 Gy较大剂量X射线照射后,Jurkat T细胞发生S期延迟和G₂期阻滞。与假照组相比较,G₀/G₁期细胞百分率显著降低（P<0.001）,在0.5~6.0 Gy内具有剂量依赖性,而S期和G₂+M期细胞百分率显著升高（P<0.05或P<0.001）。结论：X射线照射可以改变Jurkat T细胞周期进程,诱导其相继发生S期延迟和G₂期阻滞,在0.5~6.0 Gy内具有剂量依赖性。     

冬凌草甲素诱导胰腺癌PANC-1细胞凋亡及对G2/M细胞周期的阻滞作用

目的 探讨冬凌草甲素对胰腺癌PANC-1细胞生长抑制以及促进凋亡的机制.方法 采用MTT还原法检测冬凌草甲素对PANC-1细胞生长的抑制作用;碘化丙啶(PI)染色和Hoechst 33342染色法观察细胞形态学的变化;PI染色流式细胞术检测细胞周期分布;膜联蛋白V(Annexin V)/pI双标流式细胞术测定凋亡细胞比...     

eIF3 P170对发育心肌细胞周期的调控及其机制

目的：探讨eIF3 P170,cdc2,cyclinD1,cyclinB1在小鼠发育心肌细胞细胞周期中的表达及eIF3 P170与cdc2, cyclinD1,cyclinB1之间的相关关系。方法：取不同时间点小鼠心肌细胞,RT-PCR检测eIF3 P170,cdc2,cyclinD1和cyclinB1 mRNA的表达。结果：eIF3 P170,cdc2,cyclinD1和cyclinB1 mRNA的表达在胚胎第13,15,18天（G13,G15, G18）及小鼠出生后第1,2,3,5天（P1,P2,P3,P5）的表达均较强,在小鼠出生后第5天表达达到最强（P5与其他各时间点比较,P〈0.05）,而后表达逐渐减弱,在出生后第30天（P30）的表达降至最弱（P30与其他各时间点比较, P〈0.05）。eIF3 P170与cdc2,cyclinD1和cyclinB1 mRNA表达之间具有正相关关系。结论：eIF3 P170,cdc2,cyclinD1和cyclinB1 mRNA的表达在胚胎期及出生早期均较强,在小鼠出生后第5天达到最强,之后逐渐下降。     

Chk1在K562/A02细胞耐药中的作用机制

目的 研究检测点激酶1(Chk1)对K562/A02细胞周期及凋亡的影响,探讨Chk1在肿瘤细胞耐药中的作用机制.方法 以人红白血病细胞系K562及其耐药细胞株K562/A02为研究对象,与阿霉素共同孵育后,RT-PCR检测Chk1 mRNA表达水平,Western blot检测其蛋白质的表达及磷酸化水平,MTT法检测药物敏感性,流式细胞术检测细胞周期分布和细胞凋亡.结果 Chk1 mRNA及蛋白表达水平在两种细胞间无显著差异(均P>0.05);Chk1磷酸化水平在K562/A02细胞为 (0.79±0.56),K562细胞为(0.27±1.47),其差异有显著性意义(P<0.05).阿霉素作用6 h后,致K562/A02细胞阻滞在G2/M期的细胞百分率为(54.12±0.57)%,显著高于K562细胞的(36.99±1.28)%(P<0.05),K562/A02细胞凋亡率为(6.25±0.81)%,显著低于K562细胞的(66.47±1.26)% (P<0.05).阿霉素对K562/A02和K562细胞的IC50值分别为(109.65±0.26)mg/L、(1.08±0.74)mg/L, 耐药倍数为102倍.结论 由于G2/M期阻滞是导致白血病细胞耐药的机制之一, Chk1磷酸化水平与G2/M期阻滞和细胞凋亡密切相关,提示Chk1的活化状态可能参与K562/A02细胞的耐药机制.