抗CXCR4单克隆抗体12G5对胃癌细胞粘附与侵袭的影响

目的:探讨抗CXCR4单克隆抗体12G5对SGC7901细胞与基质的粘附性与侵袭性的影响.方法:应用MTT法、Transwell Chamber体外侵袭实验技术检测12G5(5μg/ml、10μg/ml、20μg/ml)对胃癌细胞株SGC7901粘附、侵袭和迁移能力的影响.结果:(1)10μg/ml的12G5即可使胃癌细胞粘附Matrigel的能力明显受抑,与对照组相比(P<0.01).随着时间的延长及单抗浓度的加大,实验组的粘附能力低于对照组,差异有统计学意义(P<0.01).(2)SGC7901细胞对照组和实验组侵袭迁移实验穿膜细胞数分别为:121.7±5.51,54.3±9.07;140.3±6.03,62.0±11.53.实验组的侵袭迁移能力明显低于对照组,差异有统计学意义(P<0.01).结论:12G5能在一定程度上抑制SGC7901细胞的粘附性及侵袭性.     

抗CXCR4单克隆抗体对与正常骨髓基质细胞共培养的HL-60细胞Bcl-2、PCNA、Fas蛋白表达的影响

目的　目前研究发现 ,骨髓基质细胞分泌的基质衍生因子 1(stromalcellderivedfactor 1,SDF 1)及其受体CXCR4可能参与髓内残留病变的形成。因此 ,本研究着重探讨了阻抑SDF 1活性对与正常骨髓基质细胞共培养的HL 60细胞增殖、生存的影响。方法　培养并共培养HL 60细胞。实验分为两组 ,实验组采用抗CXCR4单克隆抗体 12G5( 2 0ug/ml)阻断SDF 1生物作用 ,孵育 2 4小时后采用免疫组化染色检测HL 60细胞Bcl 2、PCNA、Fas蛋白表达。 结果　免疫组化染色显示 ,实验组中Bcl 2、PCNA及Fas阳性率分别为 ( 15 .7± 4.9) %、( 4 2 .1± 3 .9) %及 ( 3 9.7± 7 5 ) % ,而对照组分别为 ( 3 1.6± 5 .2 ) %、( 67.4± 8.5 ) %和 ( 2 4.1± 6.7) % ,t检验显示 12G5下调HL 60细胞Bcl 2及PCNA蛋白表达 ,上调Fas蛋白表达。结论　 12G5可在一定程度抑制HL 60细胞增殖 ,促进凋亡 ,影响其生存。     

阻抑正常骨髓基质SDF-1作用对HL-60细胞生物学性质的影响

目的本研究通过应用抗CXCR4单克隆抗体12G5抑制趋化因子SDF-1的生物活性,观察HL-60细胞生物学性质的变化,探讨SDF-1在维持HL-60细胞生存、增殖中的作用.方法培养HL-60细胞并与正常骨髓基质细胞共培养,采用12G5阻断SDF-1生物作用,孵育2 h后观察对照组及单抗组HL-60细胞在骨髓基质层上的粘附情况,24 h后测定细胞粘附率;2、4、6、8 h应用台盼蓝排染法测定细胞存活率,MTT法检测HL-60细胞活力,流式细胞术观察HL-60细胞增殖周期变化.结果①12G5孵育后24 h,骨髓基质对HL-60的粘附率为(19.1±8.6)%,显著低于对照组.②单抗孵育后HL-60细胞存活率下降,且随单抗孵育时间延长而逐渐下降.③细胞活性下降.④12G5孵育2、6 h后,处于增殖周期中G0/G1期的细胞分别为(54.7±6.37)%,(55.1±7.04)%,而S期的细胞分别为(38.4±4.51)%,(37.1±4.08)%.结论 12G5可改变HL-60细胞的生物学特性,从而在一定程度上抑制白血病细胞的增殖,影响细胞生存.     

抑制SDF-1活性对HL60细胞增殖影响的实验研究

目的：通过应用SDF-1受体CXCR4单克隆抗体(12G5)观察抑制SDF-1活性对HL60细胞增殖活性的影响，探讨趋化因子SDF-1在维持HL60细胞生存能力中的作用。方法：培养骨髓基质细胞，并与HL60细胞共培养，采用SDF-1受体CXCR4单克隆抗体阻断SDF-1生物活性后，用MTT法检测HL60细胞活力，流式细胞术观察HL60细胞增殖周期变化、检测细胞膜表面CXCR4表达，同时检测CXCR4单克隆抗体应用前后HL60细胞内游离钙离子浓度等。结果：应用抗CXCR4单克隆抗体后，HL60细胞出现下列变化：(1)细胞膜表面CXCR4表达下调；(2)增殖周期中G0／G1期的细胞增多，增殖期细胞减少；(3)细胞活性下降；(4)细胞内游离钙离子浓度降低，并与单抗浓度呈正相关。结论：抑制SDF-1活性可在一定程度上抑制白血病细胞增殖，但对于抑制髓内残留病变的形成尚需进一步研究。     

抗CXCR4单克隆抗体对胃癌细胞增殖与凋亡的影响

目的 探讨抗CXCR 4单克隆抗体12G5对SCG7901细胞的增殖和调亡的影响.方法 应用台盼蓝排染法检测12G5(10μg/ml)对细胞存活的影响,绘制细胞生长曲线;通过流式细胞仪检测细胞凋亡率.结果 ①12G5(10μg/ml)孵育细胞后24h,实验组的细胞存活率为(85.22±1.0)%,对照组为(98.06±1.9)%,二者差异具有统计学意义(P<0.05);②比较细胞凋亡率,实验组为(9.30±0.58)%,对照组为(3.32±0.16)%,差异具有统计学意义(P<0.05).结论 12G5能在一定程度上抑制SCG7901细胞的增殖与调亡.     

CXCR4/SDF-1对乳腺癌细胞MCF-7增殖作用的影响

目的:探讨CXCR4/SDF-1生物学轴对人乳腺癌细胞MCF-7生长与增殖的影响. 方法:采用Western Blot免疫印迹法检测MCF-7细胞CXCR4蛋白的表达. 以CXCR4单克隆抗体(CXCR4 mAb)作用MCF-7细胞,通过MTT比色法、软琼脂克隆形成实验和细胞周期检测观察MCF-7细胞的生长情况;通过流式细胞仪检测MCF-7细胞的增殖细胞核抗原(PCNA)表达. 结果:MCF-7细胞表达CXCR4蛋白;CXCR4 mAb作用后,MCF-7细胞生长能力明显降低,并且PCNA蛋白含量由对照组的(91.6±5.3)%降为(78.1±3.6)%(P＜0.05). 结论:CXCR4 mAb可明显抑制MCF-7细胞的增殖.     

雷公藤多甙对人急性髓性白血病细胞株HL-60的生长抑制及凋亡诱导作用

目的：探讨雷公藤多甙对人急性髓性白血病细胞株HL-60细胞的增殖及凋亡的影响。方法：应用四甲基偶氮唑蓝（MTT）法、荧光染色法、流式细胞仪（FCM）检测、DNA片段化分析等方法研究雷公藤多甙对HL-60细胞的影响。结果：雷公藤多甙能显著抑制白血病细胞的增殖,降低肿瘤细胞的存活率,其半数细胞抑制剂量( IC50 )为5.0 μg/ml,阻滞细胞周期于G2/M期（P<0.05）。雷公藤多甙实验组在形态学上可见明显凋亡细胞,且凋亡细胞百分率显著上升(P<0.05),凝胶电泳分析有DNA梯状条带出现。结论：雷公藤多甙能显著抑制人急性髓性白血病细胞株HL-60细胞的生长增殖并促进细胞凋亡。     

正常人骨髓成纤维样基质细胞系对白血病细胞U937增殖的影响

目的 :观察正常人骨髓成纤维样细胞系HFCL对白血病细胞U937增殖的影响 .方法 :采用免疫组化对HFCL细胞进行鉴定 .建立U937细胞和HFCL细胞共培养体系 ,台盼蓝拒染法测定生长曲线 ;HE染色和瑞氏 吉姆萨染色后进行分裂指数 (MI)测定 ;流式细胞仪 (FCM)检测细胞周期的变化 ;WesternBlot检测增殖细胞核抗原 (PCNA)表达 .结果 :与单独U937细胞培养相比 ,与HFCL细胞共培养后 ,U937细胞生长受抑 ,且与HFCL细胞直接接触组的抑制作用大于用transwell组 .其分裂指数单独白血病细胞组 >用transwell组 >与HFCL直接接触组 .细胞周期分析发现U937细胞与HFCL细胞共培养后 ,G1期细胞增高 ,S期细胞减少 ,以直接接触组为甚 .与HFCL细胞共培养后 ,U937细胞的PCNA表达下调 ;而与U937细胞共培养 ,HFCL细胞生长和细胞周期无明显变化 .结论 :正常人骨髓成纤维样细胞HFCL能抑制白血病细胞U937的增殖 ,阻止U937细胞细胞周期的运行 ,而U937细胞对HFCL细胞的生物学特性影响不大     

CXCR4/SDF-1对鼻咽癌细胞增殖与迁移能力的影响

目的 观察鼻咽癌不同恶性程度的细胞中趋化因子受体CXCR4的表达,检测CXCR4/SDF-1反应轴对鼻咽癌细胞的增殖作用,SDF-1对CXCR4阳性肿瘤细胞的趋化作用,探讨CXCR4/SDF-1生物学轴对人鼻咽癌细胞增殖与迁移能力的影响.方法 以鼻咽癌成瘤高转移细胞株5-8F及成瘤不转移细胞株6-10B为研究对象,采用Western blot免疫印迹法检测鼻咽癌细胞株CXCR4蛋白的表达情况,SDF-1及CXCR4阻断剂AMD3100作用于两种细胞后,MTT法检测细胞的增殖能力,体外迂徙实验检测CXCR4/SDF-1反应轴对鼻咽癌细胞的趋化作用.结果 5-8F细胞株CXCR4蛋白的表达明显高于6-10B细胞株;SDF-1能明显增强5-8F细胞增殖与迁移能力,CXCR4阻断剂AMD3100作用后,5-8F细胞增殖与迁移能力明显降低;SDF-1对6-10B细胞的迁移及增殖能力无明显影响.结论 CXCR4/SDF-1生物学轴与鼻咽癌细胞株的增殖与迁移有一定的关系,AMD3100可明显抑制鼻咽癌细胞的增殖与迁移能力.     

双氢青蒿素人对急性髓系白血病HL-60细胞凋亡的诱导作用

目的 探讨双氢青蒿素诱导人急性髓系白血病HL-60细胞凋亡的作用和机制.方法 用二甲氧唑黄细胞增殖及细胞毒性检测试剂盒检测双氢青蒿素对HL-60细胞生长的抑制作用,Annexin V-FITC/PI染色流式细胞仪检测细胞凋亡,流式细胞仪检测细胞内线粒体膜电位变化,分光光度法检测细胞Caspase-3活性变化.结果 双氢...     

FOXO3a转录因子对自血病HL60细胞增殖和凋亡的影响研究

目的:研究转录因子FOXO3a对急性粒细胞白血病HL60细胞株增殖、凋亡的影响及可能的分子机制.方法:将FOXO3a表达质粒pcDNA3.1-FOXO3a及空载对照质粒pcDNA3.1分别经阳离子脂质体介导转染HL60细胞,用G418筛选出FOXO3a稳定表达细胞株.台盼蓝拒染法和MTT法检测HL60细胞增殖,流式细胞...     

急性白血病骨髓基质细胞对HL-60细胞增殖、分化的影响

目的 为探讨急性白血病骨髓基质对HL-60细胞的影响。方法 骨髓基质与白血病细胞共培养，采用MTT检测基质对白血病细胞的粘附，流式细胞仪检测粘附的HL-60细胞周期，非特异性酯酶及过氧化物酶染色观察白血病细胞分化及绘制白血病细胞生长曲线。结果 白血病骨髓基质对HL-60细胞的粘附率及粘附的白血病细胞处于G0／G1期比例均明显高于正常骨髓基质；正常骨髓基质对HL-60细胞的生长抑制作用及诱导分化作用均明显强于白血病基质。结论 急性白血病骨髓基质对HL-60细胞的增殖、分化作用均存在异常。     

MRP1和XIAP基因在急性髓系白血病及细胞株中的表达及临床意义

目的 本研究旨在探讨多药耐药相关蛋白1 (MRP1)和X连锁凋亡抑制蛋白(XIAP)基因在急性髓系白血病(AML)患者及K562、K562/ADM细胞株中的表达,探讨其在AML发生及多药耐药中的意义.方法 应用实时荧光定量PCR方法和蛋白免疫印迹法检测81例AML患者与20例正常人骨髓细胞(对照组),以及K562、K562/ADM细胞株中MRP1、XIAP基因mRNA及蛋白表达.结果 K562/ADM细胞MRP1、XIAP基因mRNA及蛋白水平明显高于K562细胞(P＜0.05).AML患者初治组和复发难治组MRP1、XIAP基因mRNA及蛋白表达水平均高于对照组(P＜0.05),复发难治组MRP1、XIAP基因mRNA及蛋白表达水平明显高于初治组(P＜0.05).结论 MRP1、XIAP基因的异常表达与白血病发病及复发密切相关,可能通过诱导白血病细胞耐药及抑制细胞凋亡的途径发挥作用,其表达水平的高低对评估AML患者预后及治疗效果有重要意义.     

丙戊酸钠对急性髓系白血病细胞株HL-60增殖和凋亡的影响

目的研究丙戊酸钠（VPA）对急性髓系白血病细胞株HL-60细胞的增殖抑制及诱导凋亡作用,探讨其可能作用机制。方法采用CCK-8法检测细胞生长抑制率;经瑞氏-姬姆萨（Wright—Giemsa）染色,光镜下观察经VPA处理后细胞的形态学改变;应用流式细胞仪检测细细胞周期和细胞凋亡率。结果VPA对HL-60细胞的增殖抑制作用呈时间和浓度依赖性。经2．0mmol／LVPA处理HL-60细胞48h后,显微镜下可见凋亡细胞胞体固缩、核固缩、核碎裂及凋亡小体。经1．0和2．0mmol／LVPA处理HL-160细胞48h后,流式细胞仪检查结果表明细胞凋亡率由处理前的（1．25±0．457）％分别上升为（3．27±0．984）％和（10．3±3．4）％,差并有统计学意义（P〈O．05）;G0／G1期细胞比例逐渐上升,S期细胞比例及细胞增殖指数（PI）呈下降趋势,细胞被阻滞在G0／G1期（P〈0．01）。结论VPA对HL-60细胞具有增殖抑制和诱导细胞凋亡作用。且呈剂量一时间依赖性;作用机制与细胞周期阻滞有关。     

急性早幼粒白血病细胞ATRA耐药株HL-60R、NB4R的构建及鉴定

目的：构建急性早幼粒细胞白血病细胞系HL-60、NB4的全反式维甲酸耐药株HL-60 R、NB4 R,并对其生物学性状进行鉴定。方法：以全反式维甲酸（ ATRA ）为诱导药物,采用浓度递增间歇诱导法构建HL-60、NB4细胞相应的ATRA耐药株。 CCK8法鉴定其ATRA耐药性,并检测耐药细胞株的生长曲线及多药耐药性。结果：成功构建了ATRA耐药细胞株HL-60 R、NB4 R,并发现与亲代细胞相比,其生长增殖速度减慢,群体倍增时间延长,且对其它多种化疗药物产生一定程度的交叉耐药。结论：成功构建的耐药细胞系HL-60R、NB4R为急性早幼粒细胞白血病多药耐药机制的进一步研究奠定了基础。     

氟伐他汀对人早幼粒白血病HL-60细胞增殖和凋亡的影响

目的：观察氟伐他汀对人早幼粒白血病HL-60细胞增殖和诱导凋亡的影响,为其抗肿瘤研究提供理论依据。方法：将HL-60细胞分为不同浓度氟伐他汀处理组（终浓度分别为0、0.5、5.0、10.0和20.0 μmol•L^-1）,对照组不加氟伐他汀,阳性药对照组加入全反式维甲酸(ATRA,终浓度为10 μmol•L^-1）,计数活细胞数目检测细胞增殖情况;用CCK-8试剂盒检测HL-60细胞生长抑制率;用流式细胞术检测细胞周期分布和细胞凋亡率。结果：与对照组比较,氟伐他汀0.5、5.0、10.0和20.0 μmol•L^-1处理1~4 d 的HL-60细胞,活细胞数有不同程度减少(P<0.01),且随着氟伐他汀剂量的增加和作用时间的延长,活细胞数明显减少。用氟伐他汀处理HL-60细胞2~72 h后,细胞生长抑制率随着氟伐他汀剂量的增加和处理时间的延长逐渐升高,其中氟伐他汀10.0和20.0 μmol•L^-1处理48和72 h后,细胞生长抑制率明显高于同浓度氟伐他汀作用2 h后（P<0.01）。流式细胞仪分析结果表明,与对照组比较,氟伐他汀处理HL-60细胞48 h后,G₀/G₁期细胞百分比明显上升（P<0.05）,S期细胞百分比明显下降及细胞凋亡率增加（P<0.01）。当用甲羟戊酸和氟伐他汀共同处理HL-60细胞后,可逆转氟伐他汀的上述作用（G₀/G₁期细胞56.11% ,S期细胞37.12%）。结论：氟伐他汀能抑制HL-60细胞增殖并诱导其凋亡₀作用可能是通过甲羟戊酸途径介 导的。     

塞来昔布对大肠癌细胞株HT-29增殖和凋亡的影响

目的体外观察塞来昔布对大肠癌细胞株HT-29细胞增殖和凋亡的影响,探讨其可能的作用机制.方法采用噻唑蓝(MTT)比色法,流式细胞(FCM)、吖啶橙/溴化乙啶染色结合荧光显微镜、Western印迹法等技术,研究塞来昔布对HT-29细胞增殖的抑制和可能的机制.结果塞来昔布抑制HT-29细胞生长,呈浓度和时间依赖性.流式术检测出典型的亚二倍体"凋亡峰",凋亡率(7.31±2.37)%～(48.30±2.86)%;使G0/G1期细胞比例升高,S期和G2/M期比例缩小、细胞核固缩、凋亡小体形成等.凋亡比例呈剂量和时间依赖.塞来昔布降低细胞周期素依赖蛋白激酶CDK2和CDK4的表达、上调细胞周期素依赖蛋白激酶抑制因子p21WAF1/CIP1n蛋白表达.结论体外塞来昔布抑制HT-29细胞增殖,并诱导细胞凋亡;下调CDK2和CDK4蛋白表达,上调P21WAF1/CIPln蛋白表达.塞来昔布抑制HT-29细胞增殖、诱导凋亡可能与阻止细胞周期进展有关.     

二烯丙基二硫对人白血病细胞增殖和钙网蛋白表达的影响

观察二烯丙基二硫(DADS)对人白血病HL-60细胞增殖和钙网蛋白(CRT)表达的影响。DADS(1.25 mg/L)处理HL-60细胞24、48和72 h,siRNA抑制CRT的表达,采用MTT法检测细胞活力,实时定量PCR和Western blot检测CRT的表达。与对照组比较,DADS处理24、48和72 h组HL-6细胞的增殖水平均显著性降低,呈现时间依赖性(均P<0.05)。与对照组比较,siRNA瞬时转染显著降低了CRT mRNA的表达(P<0.05),也显著降低了细胞的增殖水平(P<0.05),与DADS具有协同效应。DADS抑制了HL-60细胞增殖,其机制可能与下调钙网蛋白的表达有关。     

微小RNA-132对白血病K562细胞增殖及凋亡的影响

目的 研究miRNA-132对白血病细胞株K562增殖、凋亡的影响,探讨其可能的作用机制。方法 应用LipofectamineTM 2000转染K562细胞,实时荧光定量PCR检测转染后miRNA-132的表达。CCK-8及流式细胞术检测转染后对K562细胞增殖及凋亡的影响。Western Blot法分别检测SRIT1及P53的表达量变化。结果 miRNA-132在正常细胞中的表达明显低于在K562细胞株中的表达,与空白对照组和阴性对照组相比,转染组miRNA-132的表达量明显升高。转染miRNA-132 mimics后,K562细胞增殖能力减弱,凋亡率明显增加。与空白对照组和miRNA-132-NC组相比,miRNA-132高表达后,转染组的SIRT1蛋白表达量明显降低,P53蛋白表达量明显升高。结论 高表达的miRNA-132对白血病K562细胞有显著的增殖抑制和凋亡诱导作用,其机制可能与其增强SIRT1、P53的活性有关。     

葛根总黄酮联合三氧化二砷对Kasumi-1和HL-60细胞增殖和凋亡的影响

目的探讨葛根总黄酮(PRF)联合三氧化二砷(ATO)对M2型急性髓系白血病细胞株Kasumi-1和HL-60细胞增殖和凋亡的影响。方法以100μg/mL PRF和1μmol/L ATO联合处理Kasumi-1和HL-60细胞48 h(RRF+ATO组),MTT法检测细胞增殖抑制率,Annexin V-FITC/PI双染法流式细胞术检测细胞早期凋亡率,Real-Time PCR检测凋亡抑制基因Bcl-2、SurvivinmRNA表达,Western blotting检测细胞凋亡相关蛋白酶Caspase-3、-8、-9的表达。设立单用100μg/mL PRF的PRF处理组和空白对照组。结果 RRF+ATO组Kasum-1细胞增殖抑制率、早期凋亡率以及Caspase-3、-9表达均显著高于PRF处理组(P<0.05),细胞中Bcl-2 mRNA表达的下调趋势明显。RRF+ATO组HL-60细胞各项指标检测结果与PRF处理组比较差异均无统计学意义(P>0.05)。结论 PRF联合ATO能有效抑制Kasumi-1细胞增殖并诱导早期凋亡,而对HL-60细胞则无明显影响。