染色体17p13.3肿瘤杂合性缺失区域内外显子的分离

目的 在染色体１７ｐ１３．３杂合性缺失区域内进行表达的分离。方法 采用外显子搏获法对位于１７ｐ１３．３杂合性缺失区域内的ＢＡＣ基因组克隆进行外显子的分离。结果 在获得的克隆中,４个克隆为已知基因的外显子,另４个史隆属于３个上显子（２个克隆中的外显子片段序列一致）。结论 在染色体１７ｐ１３．３杂合性缺失区域内获得了一些表达序列。     

肝癌染色体17p13.3区的杂合性缺失分析及缺失区连续克隆群？…

目的 检测原发性肝癌在染色体１７ｐ１３．３区的杂合性缺失状况,确定其共同缺失范围和最小热点缺失范围,并获得缺失范围内基因组克隆和构建连续克隆群。方法 应用Ｓｏｕｔｈｅｍ杂交分析ＶＮＴＲ（ｖａｒｉａｂｌｅ ｎｕｍｂｅｒ ｏｆ ｔａｎｄｅｍ ｒｅｐｅａｔ,ＶＮＴＲ）和ＲＦＬＰ标志在肝癌中杂合性缺失（ＬＯＨ）状况。应用ＰＣＲ扩增微卫星标志,变性聚丙烯酰胺凝胶电泳分析各个微卫星标志的ＬＯＨ状况。以微卫星标     

肝癌染色体17p13.3区的杂合性缺失分析及缺失区连续克隆群的构建

目的　检测原发性肝癌在染色体 17p13.3区的杂合性缺失状况 ,确定其共同缺失范围和最小热点缺失范围 ,并获得缺失范围内基因组克隆和构建连续克隆群。方法　应用Southern杂交分析VNTR(variablenumberoftandemrepeat,VNTR)和RFLP标志在肝癌中杂合性缺失 (LOH)状况。应用PCR扩增微卫星标志 ,变性聚丙烯酰胺凝胶电泳分析各个微卫星标志的LOH状况。以微卫星标志为引物 ,经过 3轮PCR筛选阳性基因组克隆。通过检测各位点标志对基因组克隆的反应 ,构建连续克隆群。结果　检测了 5 4份原发性肝癌样品在染色体 17p13.3区 16个位点标志和染色体 17p13.1区的p5 3基因的TP5 3位点标志的LOH情况 ,发现从D17S5位点至D17S34位点间的各个标志都有较高LOH ,频率 >6 3%。而从D17S5位点起、近着丝粒方向的 3个标志LOH率都较低或无LOH。染色体17p13.1的TP5 3标志只有 31%的LOH ,低于染色体 17p13.3区的D17S5至D17S34位点间各标志的LOH率。有 2例肝癌样品在近端粒的D17S34、D17S186 6位点和近着丝粒的D17S5、D17S15 74位点均无LOH ,但在D17S849至D17S15 74间的各位点上均呈LOH或为纯合子。在缺失范围内 ,共筛选了 18个位点的基因组克隆 ,获得了相对应的阳性基因组克隆 ,经过检测各位点对基因组克隆的反应性 ,构建了覆盖 9个标     

鼻咽癌染色体11q13等位基因杂合性缺失的研究

目的：对鼻咽癌中染色体11q13上的4个位点进行微卫星多态性分析,明确这些位点染色体位基因杂合性丢失的情况。方法：采用显微切割的方法获取较纯的肿瘤组织,然后用PCR的方法以PYGM、D11S4946、D11S449和INT－2为引物,对38例鼻咽癌进行微卫生序列分析。结果38例鼻咽癌组织中,至少有一个位点出现杂合性缺失者36例,占94．7％。其中D11S4946杂合性缺失的频率最高,占78．8％（26／33）,其余的引物分别为：INT－2占51．5％（17／33）,PYGM占45．5％（15／33）,D11S449占45．7％（16／35）。结论鼻咽癌染色体11q13区发生高频率杂合性缺失,提示缺失区域可能存在与鼻咽癌发生有关的抑癌基因。     

显微切割鼻咽癌组织16号染色体杂合性缺失的研究

目的：研究鼻咽癌中１６号染色体的缺失情况。方法：采用显微切割的方法获取肿瘤组织,然后用ＰＣＲ的方法以１６号染色体上的８对引物对３８例鼻咽癌进行分析。结果：３８例鼻咽癌组织中所有标本至少有一个位点出现有杂合笥缺失,其中Ｄ１６Ｓ５３３出现杂合性缺失的频率最高,占８６．１％（３１／３３）,此外,杂合性缺失频率超过５０％的有引物Ｄ１６Ｓ３９８、Ｄ１６Ｓ３００和Ｄ１６Ｓ４２０。分别占７８．８％（２６／３３）     

鼻咽癌全基因组杂合性缺失分析

目的：分析鼻咽癌（nasopharyngeal carcinoma,NPS)全基因组染色体杂合性缺失（loss of heterozygosity,LOH),定位NPC发生高频率LOH的区域,为定位NPC相关基因提供分子遗传学依据。方法：用PCR微卫星多态性分析（335个位点）技术检测98例NPC肿瘤基因组DNA等位基因缺失。结果：在22对染色体中,19对染色体在所选取位点中有至少1个位点LOH频率≥30%,3对染色体（15号,20号和22号）无LOH频率大于30%的位点;在335个位点中,4个位点LOH频率≥60%,其中3个在3号染色体,1个在9号染色体;5个位点LOH频率介于50%-59%,其中3个在3号染色体,5号和11号染色体各1个位点;22个位点LOH频率介于40%-49%,52个位点LOH频率介于30%-39%,轼52个位点LOH频率低于30%,提示为背景缺失;LOH频率≥30%的位点主要集中于12个染色体臂,分布于：1p36-34,3p24-26,3p14-21,3q25-27,4q35-31,5q15-21和5q32-33,8p22-23,9p21-23和9q33-34,11p12-14,11q13-23,13q13-14和13q31-32,14q11-13,14q23-24,14q32。本研究新报道在染色体区带1p,5q和19q等发生高频率LOH,LOH精细图谱提示这些区域内可能存在与NPC相关的TSG。结论：NPC肿瘤细胞在多染色体区带发生高频率LOH是常见的分子事件,提示在这些缺失区,可能存在与NPC发生,发展过程中起重要作用的肿瘤抑制基因。     

肺癌组织9p21区域杂合性缺失和p16基因异常的分析

目的：研究肺癌组织９ｐ２１杂合性缺失和ｐ１６基因的变化。方法：４９例癌组织和相应的１６例转移性肺门淋巴结ＲＮＡ进行ＲＴ－ＰＣＲ和ＳＳＣＰ分析,对其中３８例肺癌组织ＤＮＡ进行杂合性缺失分析（９不７１和ＩＦＮＡ两个位点）。结果：９ｐ２１区域杂合笥缺失频率：４７．３％（１８／３８）。Ｄ９Ｓ１７１和ＩＦＮＡ位点杂合性缺失频率分别为：２６．３％（１０／３８）和３６．８％（１４／３８）。原发灶和转移性林巴结果     

胃癌7号染色体长臂的杂合性缺失分析

目的:检测胃癌患者7号染色体长臂微卫星位点的杂合性缺失(loss of heterozygosity,LOH),以初步确定7号染色体长臂上与胃癌相关基因连锁最密切的微卫星多态位点及LOH的临床意义.方法:在70例原发性胃癌中应用多重PCR技术扩增覆盖整个7号染色体长臂的9个微卫星位点(平均遗传距离为10cm),聚丙烯酰胺凝胶电泳分离PCR产物,用GeneScan、Genotyper软件进行分析.结果:9个微卫星位点的LOH均可发生于原发性胃癌,总的LOH频率为34.3%(24/70),其中D7S486和D7S798位点的LOH频率较高,分别为24.0%(12/50)和19.2%(5/26);总的LOH频率随临床分期而显著增高(P=0.046),D7S486位点的LOH频率在淋巴结转移者显著高于无淋巴结转移者(P=0.015).结论:在7号染色体长臂D7S486和D7S798位点附近,可能存在与胃癌发展相关的抑癌基因.     

肝外胆管癌染色体3p21.3区段微卫星不稳定和杂合性缺失分析

目的:研究肝外胆管癌染色体3p21.3区段的微卫星不稳定性(MSI)及杂合性缺失(LOH),探讨染色体3p21.3区段遗传不稳定性与肝外胆管癌的发生发展的关系,定位该区段上肝外胆管癌相关肿瘤基因。方法:用PCR-SSCP方法检测24例肝外胆管癌染色体3p21.3区段上D3S1568,D3S1621,D3S1578和D3S1289四个微卫星位点的MSI和LOH发生率,分析其与临床病理因素之间的关系。结果:24例肝外胆管癌组织中,四个微卫星位点的MSI和LOH平均发生率分别为7.23%和15.63%。其中D3S1621位点的LOH最高(45.83%,11/24),并与TNM分期、是否伴有局部/淋巴结转移相关(p<0.05)。结论:染色体3p21.3区段D3S1621位点高频率杂合性缺失,提示3p21.3区段可能定位有肝外胆管癌的候选抑癌基因,并在肝外胆管癌的发生发展过程中发挥重要作用。     

乳腺癌与癌前病变的微卫星不稳定性与3p杂合性缺失

目的探讨微卫星不稳定性(MSI)与3号染色体短臂杂合性缺失(LOH)在乳腺癌发生机制中的作用及其临床病理学意义。方法采用PCR-SSLP及银染方法检测41例乳腺癌和13例癌前病变中MSI状态以及3p上11个微卫星位点LOH发生情况;应用免疫组化SP法检测错配修复(MMR)基因hMLH1、hMSH2和3p上相关基因的表达情况。结果(1)乳腺癌MSI发生率为36.6%,低分化乳腺癌MSI发生率明显高于高中分化组;癌前病变的发生率为15.4%;良性增生均表现微卫星稳定。(2)乳腺癌中微卫星异常主要分布于D3S1766、D2S2739和TP53 3个位点,癌前病变和乳腺癌具有相同的高频不稳定位点D3S1766和D2S2739。(3)97.0%乳腺癌患者发生3p LOH,检出率较高的位点分别是D3S1295、D3S1029和D3S1038。癌前病变患者3p LOH发生率为41.7%,缺失率较高的位点是D3S1295和D3S1029。(4)hMLH1和hMSH2蛋白在乳腺癌中阳性表达率分别为45.0%和40.0%,在癌前病变中分别为61.5%和76.9%,均明显低于良性增生组(P<0.05)。乳腺癌中两种蛋白阳性率与组织学分级相关(P<0.05),高分化组明显高于低中分化组。MSI 乳腺癌和癌前病变均表现MMR蛋白表达缺失。结论错配修复基因表达缺陷和MSI是乳腺癌多步骤发展过程的早期事件,在进展阶段MSI与乳腺癌低分化相关;D3S1766和D2S2739可能是检测乳腺癌与癌前病变MSI较敏感的位点。3p最小共同缺失区位于3p14-p25,提示该区域有与乳腺肿瘤发生发展相关并影响其生物学行为的候选抑癌基因。     

以VNTR作为多态标记检测人类白血病p53基因杂合子性缺失

用ＰＣＲ－ＶＮＴＲ多态分析，以白血病缓解期患者的骨髓有核细胞作为胚系对照，对２７例急性白血病患者进行ｐ５３基因杂合子性缺失进行检测，结果发现在２７例中１３例呈异质性，其胚系的多态性率为４８．２％（３／２７）。对１３例胚系的ＶＮＴＲ呈多态性的白血病患者（ＡＬＬ１０例，ＡＭＬ３例），进一步进行白血病细胞与胚系的ＰＣＲ－ＶＮＴＲ配对分析，结果发现１例ＡＬＬ患者白血病细胞的ＶＮＴＲ异质性消失，而呈均一性。提示此例ＡＬＬ患者ｐ５３基因缺失一条等位基因，呈ＬＯＨ。结果提示ｐ５３基因功能失活在急性淋巴细胞白血病的发病中可能起一定的作用。     

乳腺癌组织BRCA1、BRCA2基因区域杂合性缺失的研究

目的　研究乳腺癌组织BRCA1、BRCA2基因区域的杂合性缺失 (LOH)情况。方法　采用聚合酶链式反应(PCR)和聚丙烯酰胺凝胶电泳 ,对 30例散发性乳腺癌和 2例姐妹乳腺癌进行LOH的检测 ,同时还采用G显带法对姐妹乳腺癌患者的外周血淋巴细胞染色体畸变情况进行分析。结果　在散发性乳腺癌中 ,BRCA1、BRCA2基因区域的杂合性缺失率分别为 6 12 %和 5 77% ;姐妹二人乳腺癌组织在BRCA2基因区域的D13S173位点处存在LOH ,且她们的外周血淋巴细胞发生了大量的稳定性和非稳定性畸变 ,畸变率远远高于自发畸变率。结论　乳腺癌易感机理在东西方种族有可能存在差异 ,应深入进行研究     

乳腺癌p53、c—erbB—2的表达及其与组织学分级的关系

目的：探讨癌基因蛋白ｐ５３、ｃ－ｅｒｂＢ－２与乳腺癌组织学分级的关系。方法：用免疫组织化学法（ＬＳＡＢ）检测ｐ５３、ｃ－ｅｒｂＢ－２癌基因蛋白在４０例乳腺癌的表达,并分析其与乳腺癌组织学分析的关系。采用ｘ＾２检验进行统计学处理。结果：ｐ５３、ｃ－ｅｒｂＢ－２过度表达在乳腺癌Ⅱ级、Ⅲ级明显高于Ⅰ级,各级间差异有显著性（Ｐ〈０．０１）;４０例乳腺癌两种癌基因蛋白共同表达者２１例,占５２．５％,均为Ⅱ级和Ⅲ级。结论：ｐ５３、ｃ－ｅｒｂＢ－２与乳腺癌组织学分级有密切关系,是判断乳腺癌预后的重要指标;多个癌基因蛋白的表达异常及协同作用与乳腺癌生物学行为有一定的相关性。     

微卫星DNA不稳定性及杂合性缺失和胃癌的血液或淋巴转移的关系

为了明确胃癌的血液或淋巴转移和微卫星ＤＮＡ不稳定性（Ｍｉｃｒｏｓａｔｅｌｉｔｅｉｎｓｔａｂｉｌｉｔｙ，ＭＳＩ）及杂合性缺失（Ｌｏｓｓｏｆｈｅｔｅｒｏｚｙｇｏｓｉｔｙ，ＬＯＨ）的关系，选择２９个多态微卫星ＤＮＡ标记（ＭＳ），采用ＰＣＲ－聚丙烯酰胺凝胶电泳及银染技术，分析了３８例胃癌的ＭＳＩ和ＬＯＨ频率。其中胃癌伴有血液或淋巴转移的２４例；不伴有血液或淋巴转移的１４例，结果表明：总的ＭＳＩ和ＬＯＨ频率分别为２０．８４％和２７．５９％，伴有血液或淋巴转移的胃癌，ＭＳＩ在Ｄ７Ｓ５２０、Ｄ８Ｓ２７９位点频率最高为５４．１７％；ＬＯＨ在Ｄ６Ｓ４３０位点频率最高为６２．５０％。无血液或淋巴转移的胃癌，ＭＳＩ和ＬＯＨ频率均为５７．１％。经χ２检验，ＬＯＨ和ＭＳＩ的发生频率在伴有或不伴有血液或淋巴转移胃癌中，两者无统计学差异。表明胃癌的血液或淋巴转移和ＭＳＩ及ＬＯＨ的发生频率无关，目前还难以以这两个指标作为辅助性的判断预后。     

乳腺浸润性导管癌p53蛋白、增殖细胞核抗原表达与预后的关系

目的探讨p53蛋白、增殖细胞核抗原（PCNA）在乳腺浸润性导管癌中表达的相关性及和预后的关系。方法应用免疫组织化学ABC法检测乳腺浸润性导管癌组织P53蛋白和PCNA的表达。结果死亡组P53蛋白阳性表达率（32／35）和PCNA指数（PI）（56．5％±26．54％）明显高于存活组的P53蛋白阳性率（31／65）和PI（31．5％±26．88％）。且两者表达与淋巴结转移和临床分期有显著关系。结论p53蛋白表达与PI间有显著的正相关关系，两者综合指标（PI＞50％，P53 ）对于估测患者预后有重要意义。     

Allele Loss on Chromosome 17 in Ovarian Cystic Teratomas

We examined the DNA from 12 patients with ovarian tumors (fourbenign germ cell tumors, one malignant germ cell tumor, onebenign common epithelial tumor and six common epithelial carcinomas)for the allele loss on chromosome 17 using 12 probes for hypervariableloci. At THH59 loss of heterozygosity (LOH) was detected inthree benign germ cell tumors and two epithelial carcinomas.At a more distal locus, KKA35, LOH was detected in three benigngerm cell tumors and one epithelial carcinoma.     

LOSS OF HETEROZYGOSITY AT 17p13 IN GASTRIC CANCER AND COLORECTAL CANCER

Bothgastriccancerandcolorectalcancerarecommonhumantumors.Althoughlittleisknownregardingthemolecularpathogenesisoftheneonlasms,itisnowgenerallyacceptedthattheactivationofoncogenesandinactivationoftumorsuppressorgenesmightbecriticalforthetumorcarcinogenesisandprogression.Inthepresentstudy,weemployedtheSouthernhybridizationbyprobesphP53BandPYNZ22,whichwereobtainedfromtheAmericanTypeCultureCollection,todetectthelossofheteroZygosity(LOH)at17pl3ingastriccancerandcolorectalcancer.Wefurtheranaly…     

乳腺癌肌上皮细胞的免疫组织化学观察

作者应用免疫组化技术对50例乳腺癌、20例乳腺良性病变以S—100蛋白和癌胚抗原(CEA)作PAP染色对肌上皮细胞进行了观察。结果表明:1.所有乳腺良性病变S—100标记显示肌上皮细胞均有不同程度的增生,而各型乳腺癌的癌巢、管状结构周边均无S—100阳性的细胞。因此可确认,肌上皮细胞的增生或消失对判断乳腺良恶性病变有着重要意义;2.50例乳腺癌的癌细胞S—100标记,有23例呈不同程度的阳性(46％);3.S—100标记显示阳性的细胞,在H·E切片上,细胞核有异型性,作者认为肌上皮细胞参与了癌瘤的生成;4.50例乳腺癌CEA有不同程度的表达者占90％(45/50),S—100阳性表达占46％(23/50)。我们同意Biggs和McDivitt认为乳腺癌来自具有双向分化能力的干细胞这一推论。