TLR2和TLR4在单肺通气麻醉中的表达

目的:研究Toll样受体2(TLR2)和Toll样受体4(TLR4)在单肺通气麻醉过程中的表达变化并探讨其临床意义。方法:选择胸科肺癌行肺叶切除手术30例,随机分为两组,A组(n=11,双肺通气),B组(n=19,单肺通气组),收集开胸后/单肺通气后15(T1),30(T2),45(T3),90(T4)min血清,采用ELISA法检测两组血清中IL-8,TNF-α的表达;收集切除标本后的肺组织,电子显微镜观察细胞形态病理变化,采用RT-PCR检测TLR2mRNA和TLR4mRNA,免疫组化检测肺组织TLR2和TLR4蛋白的表达。结果:电镜检测表明:两组均发生肺细胞炎症反应,其中B组发生炎性反应明显比A组显著;两组TLR2mRNA和TLR4mRNA表达比较,B组的TLR2mRNA和TLR4mRNA表达明显高于A组,差异有统计学意义(P<0.05);A、B两组中的IL-8,TNF-α浓度在各时点均有不同程度的升高,其中组内比较T4时点的IL-8,TNF-α浓度明显高于T1时点,差异有统计学意义(P<0.05);A、B两组间比较,在T4时点IL-8,TNF-α浓度B组明显高于A组,差异有统计学意义(P<0.05),其余时点表达比较差异无统计学意义(P>0.05)。A、B两组免疫组化比较,B组的TLR2和TLR4阳性率明显高于A组,差异有统计学意义(P<0.05)。结论:单肺通气期间,随着时间的延长,炎症反应更为显著,TLR2、TLR4表达上调并参与炎症反应。     

TLR2和TLR4在原因不明复发性流产绒毛和蜕膜中的表达及其意义

目的本实验通过检测原因不明复发性流产(URSA)患者和健康早孕者TLR2和TLR4在子宫绒毛和蜕膜中的表达,及外周血清中TNF-α及IL-10的水平,初步探讨TLR2和TLR4与URSA存在相关性,以及在URSA发生发展中的可能途径。方法前瞻性研究2008~2009年在浙江大学医学院附属妇产科医院和杭州市第一人民医院门诊患者。年龄在25~35周岁,孕龄<12周。将有≥3次自然流产的URSA患者作为研究组;将曾有正常生育史,本次要求行人工流产终止妊娠的早孕健康妇女作为对照组,分别选择20例。免疫组化检测TLR2和TLR4在两组绒毛和蜕膜中的表达;用ELISA法检测血清TNF-α及IL-10的水平,比较是否存在差异性。结果①TLR2在两组绒毛、蜕膜中表达差异无统计学意义(P>0.05);②TLR4在研究组绒毛、蜕膜表达明显增强,有显著统计学意义(P<0.05);③TNF-α在研究组中的水平明显增高,有显著统计学意义(P<0.05);IL-10在两组中的差异无统计学意义(P>0.05)。结论 TLR4可能是通过释放过量的Th1型细胞因子,导致Th1/Th2失衡,从而极可能参与URSA的发病。     

TLR2与TLR4在大肠癌组织中的表达特点

目的 观察Toll样受体2(TLR2)和Toll样受体4(TLR4)在大肠癌组织和大肠癌细胞株上的表达特点.方法 采用SP免疫组化法检测70例大肠癌组织和配对癌旁相对正常组织TLR2,TL4的表达,采用免疫荧光流式细胞术检测TLR2,TLR4在大肠癌细胞株Lovo和SW480细胞上表达的平均荧光强度及阳性细胞率.结果 TLR2在大肠癌组织上的表达明显强于癌旁组织(X2=13.629,P=0.003),而TLR4的表达在大肠癌组织与癌旁组织差异元显著性(P＞0.05).根据平均荧光强度及阳性细胞率,TLR2,TLR4在大肠癌细胞株Lovo和SW480上基本无表达.结论 TLR2可能与大肠癌的疾病过程密切相关.     

A族链球菌感染巨噬细胞激活TLR2及TLR4表达的研究

目的通过分析A族链球菌(GAS)感染巨噬细胞后TLR2及TLR4的活化情况,以此来研究GAS感染后产生炎症反应的信号通路,为GAS感染巨噬细胞的预防及治疗奠定基础。方法 GAS及热灭活GAS以感染复数(MOI)为100∶1感染小鼠巨噬细胞RAW264.7细胞后1,2,4,6 h,提取总RNA采用real-time PCR技术检测TLR2/4的表达情况;同时GAS及热灭活的GAS注射C57小鼠腹腔,24 h后分离腹腔巨噬细胞并提取蛋白,利用Western blot及免疫荧光技术对TLR2和TLR4的表达量进行分析。结果巨噬细胞表面TLR2及TLR4在GAS感染后1 h活化不明显,但作用2 h后TLR2及TLR4表达明显升高(P<0.05),4 h时达到高峰,6 h后开始降低。热灭活GAS感染巨噬细胞TLR2的表达与GAS感染比较未见到统计学差异(P>0.05),但巨噬细胞表面TLR4的表达与GAS组具有明显的差异(P<0.05)。结论 GAS感染小鼠巨噬细胞可同时激活TLR2及TLR4受体,其中TLR4受体主要通过位于GAS表面及其分泌的活性蛋白成分激活,TLR2受体则主要由其菌体成分进行活化。     

乙型肝炎患者血清中TLR2和TLR4的表达及其意义

目的 检测乙肝患者血清标本中TLR2和TLR4的含量,关注其表达特征,探讨其表达的意义.方法 本实验以130例乙肝患者的血清标本作为观察组,60例正常体检成人的血清标本作为对照组,应用酶联免疫吸附实验检测二组中TLR2和TLR4的表达,分析其在不同临床病理特征之间意义及相互关系.结果 乙肝患者血清中TLR2和TLR4的表达明显高于对照组[(85.46±15.46) ng/L vs (28.75±2.35) ng/L;(100.23±23.25) ng/L vs (64.34±4.32) ng/L],血清中TLR2和TLR4的含量与乙肝患者病情的严重程度有关,乙型肝炎患者血清中TLR2和TLR4的表达呈正相关(P=0.021 4,r=0.39).结论 乙型肝炎患者血清中TLR2和TLR4高表达,二者可能具有协同作用.联合检测血清中TLR2和TLR4的含量可能与判断病情的严重程度有关.     

运动量对糖尿病动脉粥样硬化大鼠TLR2、TLR4的影响

目的:探讨不同强度的运动对糖尿病动脉粥样硬化大鼠主动脉组织Toll样受体2(TLR-2)、Toll样受体4(TLR-4)的影响.方法:选取健康SD大鼠100只,随机分成对照组20只及糖尿病动脉粥样硬化组80只,糖尿病动脉粥样硬化模型采用高糖高脂饮食加链脲佐菌素(STZ)(30 mg/kg)注射建立.其中糖尿病动脉粥样硬化组又分成模型组、小运动量组、中等运动量组和大运动量组(每组20只).经过估计力竭运动时间及游泳训练后,小运动量组(12 min/次),中等运动量组(21 min/次),大运动量组(30 min/次),进行6周的运动干预,1次/d,一周6次.用PCR法测定各组大鼠主动脉组织的TLR2、TLR4mRNA的表达.结果:模型组较对照组血管组织中TLR2、TLR4水平升高;运动干预后,各运动组TLR2、TLR4水平较模型组降低,以中等运动量、大运动量组下降明显.结论:糖尿病动脉粥样硬化大鼠主动脉组织中TLR2、TLR4水平升高,TLR2、TLR4水平的升高可能是糖尿病动脉粥样硬化的发病机制之一,运动能够降低TLR2、TLR4的表达.     

平喘颗粒对哮喘小鼠肺组织TLR2和TLR4表达的影响

目的:观察平喘颗粒对哮喘小鼠肺组织Toll样受体2(toll-like receptor2,TLR2)和TLR4表达的影响.方法:将30只BALB/c小鼠随机分为对照组、模型组、平喘颗粒(31.2 g·kg-1)组,每组10只.除对照组外,采用腹腔注射加雾化卵清蛋白(ovalbumin,OVA)致敏液[100μgOVA...     

TLR4在膀胱尿路上皮癌中的表达及意义

目的探讨TLR4蛋白在膀胱尿路上皮癌（BUEC）中的表达及意义。方法膀胱BUEC组62例标本经病理复检,WHO和ISUP病理分级具低度恶性潜能的乳头状尿路上皮肿瘤（G1） 5例,低度恶性乳头状尿路上皮肿瘤（G2）24例,高度恶性乳头状尿路上皮肿瘤（G3）33例。11例正常膀胱粘膜和13例癌旁膀胱粘膜组织标本作为对照组。应用免疫组化非生物素即用型二步法检测组织TLR4的表达。结果两对照组TLR4均100%呈强阳性表达,G1中60%强阳性、40%弱阳性,G2中21%弱阳性、79%阴性,G3中3%弱阳性、97%阴性,随肿瘤病理分级上升,TLR4阳性表达率逐渐下降。结论TLR4表达与BUEC分级相关,可成为估计肿瘤预后的一项指标。     

TLR4在肝癌患者外周血单核细胞中的表达及意义

目的 研究肝癌患者外周血单核细胞TLR4的表达情况及意义.方法 采用流式细胞术检测50例肝癌患者和30例健康正常人外周血单核细胞表面TLR4的表达,采用ELISA法检测肝癌组及对照组血浆NF-κB、IL-6的表达.结果 肝癌患者外周血TLR4、NF-κB、IL-6表达明显高于正常对照组（P＜0.01）;肝癌患者TLR4的表达与NF-κB呈正相关（r=0.352,P＜0.05）;结论 肝癌患者外周血TLR4表达较正常人明显增高,TLR4可能与原发性肝癌的发生密切相关.     

早期脓毒症大鼠肝TLR4和MD-2基因的表达及丙泊酚对其的影响

目的 观察早期脓毒症大鼠肝Toll 样受体4(TLR4)、髓样分化蛋白-2(MD-2)基因的表达,并以丙泊酚进行干预,比较肝TLR4、MD-2基因表达的差异.方法 采用大鼠尾静脉注射脂多糖复制脓毒症模型.按完全随机化原则分为正常对照组(N组)、脂多糖组(L组)、脂多糖+丙泊酚组(LP组),每组20只.每组再依照注药后1...     

TLR4和HBD-2在鼻黏膜组织中的表达及意义

目的:探讨Toll样受体4(Toll like receptor 4,TLR4)mRNA及人β防御素2(human beta-defensin-2,HBD-2)在鼻黏膜组织中的表达及意义.方法:采用核酸分子原位杂交技术和免疫组织化学技术分别检测慢性鼻、鼻窦炎患者鼻黏膜组织中TLR4 mRNA和HBD-2的表达.结果:TLR4 mRNA在病变组鼻黏膜组织中的表达明显强于对照组(P＜0.05).但在病变组中13例Ⅰ型和17例Ⅱ型慢性鼻、鼻窦炎患者的病变鼻黏膜组织中的表达差异无显著性;HBD-2在对照组未见表达,而在病变组均出现不同程度的表达,两组间的表达差异具有显著性(P＜0.01),而且在Ⅱ型病变鼻黏膜组织中的表达明显强于Ⅰ型(P＜0.05).结论:TLR4可能参与了鼻黏膜天然免疫,HBD-2可能是炎症反应的重要产物之一. 致炎因子通过TLR4对病原微生物进行识别,激活鼻黏膜上皮细胞, 最终导致炎性细胞产生大量的HBD-2,这可能在鼻黏膜启动有效的炎性免疫反应过程中具有一定的作用.     

地塞米松和TLR4在淡水淹溺型大鼠急性肺损伤中的作用

目的:探讨地塞米松和TLR4在大鼠淡水淹溺型肺损伤中的作用?方法:72只大鼠随机分为对照组?淹溺组和地塞米松组,通过淡水气道内吸入方法建立大鼠淡水淹溺型急性肺损伤模型,观察各时间点血气分析,检测0.5?2.0?4.0和8.0 h血清TNF-α?IL-6的含量以及肺组织湿/干重比值(W/D值)?MPO和TLR4 mRNA相对含量?结果:大鼠淡水淹溺型急性肺损伤模型建立成功;与对照组比较,淹溺组PaO2灌入淡水后急剧下降,随后逐渐回升,但仍维持较低水平?血清炎症因子TNF-α ?IL-6 分别在0.5?2.0 h开始表达,肺组织W/D值?MPO和TLR4 mRNA 含量分别在淹溺后0.5?2.0和8.0 h升高?地塞米松可抑制炎症因子和TLR4 mRNA表达,减轻肺损伤?结论:TLR4参与淡水淹溺型大鼠肺损伤,地塞米松通过抑制其表达可减轻肺损伤?     

Toll样受体4、9mRNA在带状疱疹患者外周血单个核细胞中的表达及意义

目的研究带状疱疹患者外周血单个核细胞中Toll样受体TLR4、TLR9mRNA的表达情况,并探讨其与带状疱疹的发病关系。方法采用实时荧光定量PCR方法检测30例带状疱疹患者和20例正常人的外周血单一核细胞中Toll受体TLR4、TLR9mRNA的表达水平。结果带状疱疹患者与正常人对照,其外周血单一核细胞中TLR4、TLR9mRNA的表达水平均明显升高,具有显著的统计学差异（P〈0.05）。结论带状疱疹患者外周血单一核细胞中TLR4、TLR9mRNA的表达水平均明显升高,说明在带状疱疹患者的发病过程中,TLR样受体4、9可能参与了水痘-带状疱疹病毒的识别及抗病毒免疫。     

TLR4在妊娠合并梅毒感染的胎盘与胎膜中表达

目的检测TLR4基因在妊娠合并梅毒感染人胎盘与胎膜中表达变化。方法取妊娠合并梅毒感染及正常足月分娩之胎盘与胎膜样本各5例;应用RTPCR技术对妊娠合并梅毒感染胎盘与胎膜组织上TLR4基因的mRNA表达的检测;应用免疫组化技术对妊娠合并梅毒感染胎盘与胎膜组织上TLR4基因的蛋白表达的检测。结果TLR4基因在妊娠合并梅毒感染人胎盘与胎膜中表达水平显著高于正常晚期妊娠胎盘与胎膜。在妊娠合并梅毒感染胎膜组织中TLR4基因表达较正常胎膜组织升高50%,P〈0.05;在妊娠合并梅毒感染胎盘组织中TLR4基因表达较正常胎盘组织升高120%,P〈0.05。TLR4在妊娠合并梅毒感染的胎盘合体滋养细胞、羊膜上皮细胞和胎膜中的平滑绒毛膜细胞滋养细胞上表达增强,与RT-PCR结果一致。结论TLR4基因在妊娠合并梅毒感染人胎盘与胎膜中表达水平显著增加,提示TLR4可能在妊娠合并梅毒感染的胎盘与胎膜分子病理中发挥作用。     

铜绿假单胞菌肺部感染对小鼠 Toll 样受体 2、4 的影响

目的探讨Toll样受体（TLR）2、4mRNA在铜绿假单胞菌慢性感染小鼠肺内的动态改变及其作用。方法56只雄性Balb／c小鼠随机气道接种含有铜绿假单胞菌（PA）琼脂糖珠（感染组,34只）和无菌琼脂糖珠（对照组,22只）。于第1、3、5、7、10天处死小鼠,取肺组织细菌培养,行肺组织病理观察,ELISA法检测肺泡灌洗液（BALF）中自介素（IL）-6和IL-17的含量,采用Real—timePCR检测TLR2mRNA及TLR4mRNA表达。结果感染组在接种后第3天IL-6和IL-17水平均达高峰,分别为（154．83±12．51）ng／L和（601．05±25．53）ng／L,均显著高于对照组（40．05±2．98）ng／L和（213．75±9．25）ng／L,差异有统计学意义（P〈0．05）,且两者在接种后第10天仍处于高水平。感染组中TLR4mRNA的相对表达量第7天达高峰（4．09±0．25）,与对照组第7天（0．97±0．05）比较,差异有统计学意义（P〈0．05）;而TLR2mRNA在感染组和对照组各时间相比变化均不明显（P〉0．05）。结论TLR4与小鼠肺部慢性感染PA的发生发展密切相关,其机制可能与TLR4在肺的免疫损伤中起到重要作用有关。     

失血性休克后小鼠肺组织TLR4受体表达及其意义

目的探讨单纯性失血性休克(无复苏)后肺组织TLR4表达变化及意义。方法C57BL/6小鼠随机分为失血性休克组、脂多糖(LPS)刺激组、假手术组。复制各组动物模型,在不同时间点取出肺组织,通过免疫组化方法,观察TLR4在肺组织的表达变化。结果在失血性休克和LPS刺激后肺部出现明显的中性粒细胞浸润、红细胞渗出。在失血性休克1、2及4 h后,肺巨噬细胞、肺泡上皮细胞及肺间质TLR4表达逐渐增加,6 h开始下降;而LPS刺激后1、2、4及6 h肺TLR4表达逐渐增加。假手术组未见TLR4表达。结论失血性休克后肺TLR4变化可能与急性肺损伤(ALI)的发生有关。失血性休克及LPS刺激后肺组织TLR4变化增强了机体的非特异性免疫能力,同时增加了宿主对随后各种刺激的易感性,过度表达的TLR4可能造成组织、器官结构和功能的损害。     

肝硬化患者小肠细菌过度生长与外周血内毒素水平、TLR2、TLR4表达的关系

目的 探讨肝硬化患者小肠细菌过度生长与内毒素及TLR2、TLR4表达的关系。方法 58例肝硬化患者和26例健康志愿者,采用显色基质鲎试剂试管法检测外周血内毒素浓度,流式细胞术检测外周血PBMC表面TLR2、TLR4的表达,乳果糖氢呼气试验（LHBT）评估小肠细菌过生长情况。结果 肝硬化组SIBO发生率为43.10%,显著高于健康对照组的7.69%（χ²=10.32,P=0.001）;肝硬化组LHBT小肠集值、外周血内毒素浓度、TLR2、TLR4高于健康对照组（t值分别为11.573、9.958、12.380、10.319,P均<0.05）;在肝硬化患者中SIB0阳性患者LHBT集值、外周血内毒素浓度、TLR2、TLR4水平高于SIBO阴性患者（t值分别为12.746、8.067、11.804、6.258,P均<0.05）。Pearson相关分析结果显示,肝硬化组、肝硬化SIBO阳性组的LHBT小肠集值与内毒素浓度、TLR2、TLR4呈正相关（P均<0.05）,且内毒素浓度与TLR2和TLR4呈正相关（P均<0.05）。结论 肝硬化患者小肠细菌过度生长更易出现高内毒素血症,并通过TLR2、TLR4的高表达引发炎症损伤,加重肝硬化病情。     

TLR2、TLR4在乙型肝炎病毒转染的HepG2细胞株的表达

目的探讨乙肝病毒全基因组瞬时转染HepG2细胞后，对HBV抗原分泌，病原识别受体Toll样受体2、4（TLR2、4）的表达及细胞增殖的影响。方法已构建pBlueScript—HBV质粒并经测序，转化宿主菌，摇菌后提取质粒，用Sapl酶切，获得HBV 3．2kb基因组，采用脂质体瞬时转染肝癌细胞株HepG2，IMX检测HBV所分泌抗原，台盼蓝计数检测细胞增殖活性，直接免疫荧光流式细胞术（FCM）检测TLR2、4在细胞株上表达的阳性细胞率，并与空白对照绗对比。结果HBsAg利HBeAg的分泌随着转染HBV DNA量的增加而升高，除4μg和6μg组两组间比较的表面抗原外，差异均有显著性意义（P〈0．05）。TLR2、4在转染后均有上调，TLR4在各组间差异显著（P〈0.05），但TLR2只在最大剂量转染组时差异有显著性（P〈0．05）。台盼蓝拒染法示细胞存活随转染剂量的升高而减少（P〈0．05），但4μg和6μg两组间比较无显著意义（P〉0．05）。而各转染剂量组HBsAg和e抗原的分泌及细胞的存活数均与TLR2、4的表达呈显著正相关（P〈0．01）。结论研究结果初步表明乙肝病毒可能直接引起HepG2细胞TLR2、4的上调，而且TLR的上调可能启动了细胞的凋亡或坏死机制，成为HBV损伤细胞的非免疫细胞介导机制。     

小鼠呼吸道合胞病毒感染肺TLR4表达与气道高反应性

目的:研究小鼠呼吸道合胞病毒(RSV)感染对肺TLR4表达与气道高反应性的影响。方法:生后6周16只清洁级BALB/c小鼠被同等分成RSV感染组和对照组,感染后1周两组经吸入相同递增浓度乙酰甲胆碱检测气道高反应性,使用RT-PCR方法测定肺组织TLR4mRNA表达,并对二者的相关性进行了分析。结果:在吸入乙酰甲胆碱浓度为3.2g/L时两组气道阻力差异有显著性(P<0.01)。TLR4/β-actin的值分别为对照组0.239±0.055,RSV感染组0.361±0.102,两组间有显著性差异(P<0.05);TLR4 mRNA表达与吸入3.2g/L乙酰甲胆碱时的气道反应性呈正相关,相关系数为0.721(P<0.05)。结论:小鼠RSV感染后肺TLR4表达增强并呈气道高反应性,二者之间有显著正相关。