利用小鼠全胚胎培养研究环磷酰胺致畸作用

本文应用小鼠全胚胎培养技术 ,通过妊娠 d8分别 ip5,1 0 ,1 5和 2 0 mg·kg-1环磷酰胺 ( CP) ,研究了该药对器官原基形成期胚胎的致畸作用 ,并对其致畸机理作了初步探索 .给药 4h后取胚胎进行培养 ,于 d 1 0 .5收获胚胎 ,测量其卵黄囊直径 ,头长及颅臀长并记录其大体形态的变化 .结果表明 ,1 5mg· kg-1组尾畸形率最高 ;2 0 mg· kg-1组生长迟缓率最高 .电镜观察所显示的细胞凋亡的形态学变化及 DNA琼脂糖凝胶电泳的结果均提示 CP致畸作用可能与其诱导的细胞凋亡有关 .     

细胞凋亡在致畸中的作用

细胞凋亡 (ａｐｏｐｔｏｓｉｓ)或程序性细胞死亡 (ｐｒｏｇｒａｍｍｅｄｃｅｌｌｄｅａｔｈ) ,是一种特殊形式的细胞死亡 ,具有典型的形态学和生化学特征。它是广泛存在于胚胎发育过程中的重要生理性因素 ,在胚胎正常发育、器官和组织形态发生和功能确定等多种生命活动的调节中发挥重要作用 ,这种形式的细胞死亡受基因程序的控制 ,致畸原可通过直接或间接干扰已知或未知发育关键基因的表达 ,引起凋亡等调节作用的失常 ,从而导致畸形的发生。 80年代末以来 ,有关细胞凋亡与致癌、致突变等的研究逐渐成为生命科学研究的一大热点 ,关于细胞凋…     

胚胎异常发育中的细胞凋亡（二）

众所周知 ,发育是一个受基因严密调控的过程 ,此过程中任一环节受到干扰都会影响胚胎的正常发育 ,出现畸形甚至死亡。发育过程中几乎所有组织都要发生程序性细胞死亡 (ＰＣＤ)或细胞凋亡 (ａｐｏｐｔｏｓｉｓ) ,ＰＣＤ是保证个体发育成熟的必需过程[1 ] 。但ＰＣＤ又是一易受到致畸物干扰的过程 ,致畸物可诱导 (抑制 )ＰＣＤ ,造成靶细胞的缺失、发育不良、生长过度等不良后果。因此ＰＣＤ与胚胎异常发育的关系近年来受到人们的密切关注 ,成为畸胎学或发育毒理学的重要研究课题。我们将扼要介绍几种致畸物的致畸作用与细胞凋亡的关系 ,并对…     

碳铂对大鼠胚胎毒性与致畸作用的研究

碳铂(卡铂,Carboplatin)是继顺铂之后第二代铂类抗癌新药,它与顺铂有相似的抗癌谱,而消化道和肾毒性明显较低,国内自80年代末广泛用于临床。本文报道它的胚胎毒性和致畸作用。 材料与方法 碳铂,水溶性白色粉末,溶于6％葡萄糖溶液中使用,昆明贵金属研究所杨懿昆和熊惠周等同志合成和提供。动物用Wistar大鼠,体重223±229(X±SD)。方法参照Keller等[1～3]。雌雄2:     

环磷酰胺对小鼠最佳致畸剂量及给药时间的研究

环磷酰胺(CP)是已知的致畸剂,其对大鼠致畸有效剂量范围和最佳给药时间的研究已有许多报道,但对小鼠致畸作用剂量及给药时间的研究不多,且实验结果也不一致。有人报告,给孕小鼠5～10mg/kg CP(腹腔注射)未见畸形发生。在孕后第8～12天分别给予2009/kg CP,出现多种足畸形,而40mg/kg CP就足以引起100％胚胎死亡。也有人报告,给妊娠11～14天的DM/MK小鼠注射50和100mg/kg CP可产生腭裂、并趾和卷     

环磷酰胺致神经管畸形与细胞凋亡的关系

有研究证明环磷酰胺 (ＣＰ)有强烈地致神经管畸形(ＮＴＤ)和骨骼发育异常等作用 ;亦有学者对其ＮＴＤ的发生率和致畸原因作了初步探讨[1～ 3] 。但尚未见有关ＮＴＤ与细胞凋亡相关的研究报道。本研究利用光镜和透射电镜观察了ＣＰ致ＮＴＤ与神经上皮细胞凋亡的关系 ,从形态学方面阐明ＣＰ致ＮＴＤ的原因。1　材料与方法1 1　动物分组及处理　选用未孕ＳＤ大鼠 ,雌性 30只 ,雄性15只 (山东医科大学实验动物中心提供 ) ,体重 180～ 2 5 0 ｇ ,颗粒饲料喂养 ,普通饮水。雌、雄按 2∶1比例合笼过夜 ,次日晨作阴道涂片 ,查出精子者为受精第 0天。…     

环磷酰胺致SD大鼠胎仔脊髓神经细胞凋亡的研究

目的:观察脊髓凋亡细胞,明确环磷酰胺对SD大鼠胎仔脊髓神经细胞凋亡作用。方法:大鼠胚胎-胎仔发育毒性试验中,妊娠第10天给予尾静脉注射不同剂量环磷酰胺(7.2 mg/kg和9.0 mg/kg),于妊娠第20天解剖将胎仔脊髓制成病理切片,并行HE和免疫组化染色。结果:实验结果显示实验组脊髓神经出现大量凋亡细胞;与生理盐水组胎仔胸髓和腰髓前角细胞的Bax和Bcl-2表达比较,环磷酰胺低剂量组胎仔胸髓和腰髓前角细胞的Bax表达明显增强,Bcl-2蛋白表达减弱。结论:在大鼠孕第10天给予7.2 mg/kg环磷酰胺尾静脉注射,其对大鼠胎仔脊髓神经细胞凋亡有促进作用。     

环磷酰胺诱发叙利亚地鼠胚胎细胞的恶性转化

给予３７．５，７５和１５０ｍｇ·Ｌ－１环磷酰胺（ＣＰ）均可稳定地引起叙利亚地鼠胚胎细胞的表型转化．转化细胞在传至９９代时，仍然具有旺盛的分裂增殖能力，对细胞生长因子的依赖程度下降，转化细胞可因植物凝集素的存在而发生凝集，具有在软琼脂培养基上形成集落的能力，表现出抛锚独立性生长特性；接种同种动物及无胸腺裸鼠后能形成肿瘤．瘤切片病理观察显示所形成肿瘤均为分化程度较高的纤维肉瘤，从而证明ＣＰ能够诱导叙利亚地鼠胚胎细胞发生恶性转化．     

体外全胚胎培养技术及其在药物生殖发育毒性评价中的应用

体外全胚胎培养（whole embryo culture，WEC）技术是一项在受控的体外环境中培养动物胚胎的技术，是研究药物及化学物质在胚胎发育过程中的药理毒理及作用机制的重要方法之一。本文从大鼠和兔的WEC技术发展概况、培养条件、胚胎发育终点的评分系统和拓展的胚胎发育评价终点、药物生殖发育毒理学应用等方面，对WEC技术及近年来研究进展进行介绍。WEC技术是药物生殖发育毒性研究中重要的替代学研究方法之一。其中，对大鼠与兔组合的WEC研究更具有重要价值，可为胚胎发育毒性研究提供更全面的信息。     

全胚胎培养移植条件对胚胎发育影响的研究

大鼠和小鼠植入后全胚胎培养方法（Ｗｈｏｌｅｅｍｂｒｙｏｃｕｌｔｕｒｅ，ＷＥＣ）现已广泛应用在胚胎生理学、胚胎器官形成及致畸学领域［１］。全胚胎培养方法可大致分为胚胎准备和胚胎培养两个阶段。它包括处死孕鼠，取出子宫并将胚胎从蜕膜中分别解剖取出，贮存于Ｈ...     

胚胎停止生长绒毛细胞凋亡研究

目的研究胚胎停止生长患者绒毛组织中的细胞凋亡及细胞凋亡调控基因bcl-2和bax在凋亡的作用。方法收集妊娠12周以内经B超证实为胚胎停止生长患者的绒毛组织30例;对照组30例为正常早孕要求人工流产者。所有研究对象均无生殖器畸形和感染性疾病,无内、外科合并症及妊娠并发症。应用TUNEL技术检测绒毛组织中的凋亡细胞,用免疫组织化学SP法观察细胞凋亡调控基因bcl-2和bax在绒毛组织中的表达。结果正常早孕和胚胎停止生长患者绒毛组织中均可见到凋亡细胞,但胚胎停止生长患者的绒毛组织中凋亡细胞显著增多。与正常早孕对照组比较有显著性差异(P<0.05);胚胎停止生长患者绒毛组织中可见bax过表达,与正常早孕对照组比较差异有显著性(P<0.05);而bcl-2在胚胎停止生长患者绒毛组织中表达低于正常对照组,两者比较差异有显著性(P<0.05)。结论胚胎停止生长患者绒毛组织中细胞凋亡指数显著增加且与bax表达呈正相关,而与bcl-2的表达呈负相关。     

环磷酰胺对新西兰兔胚胎-胎仔发育的毒性作用研究

目的探讨环磷酰胺用作兔胚胎一胎仔发育毒性实验阳性对照药物的可行性及最佳用药方案,为顺利开展规范化生殖毒性试验提供依据。方法实验用普通级新西兰兔,以交配成功日为妊娠第0天（GD0）,采用计算机完全随机区组法将妊娠兔分为4组,包括环磷酰胺A组（14只,GD6～20环磷酰胺18mg／kg,10：／a灌胃）、B组（11只,GD10—13环磷酰胺25mg／kg,1次／d皮下注射）、C组（12只,GD6～18环磷酰胺15mg／kg,1次／d肌内注射）和溶媒对照组（12只,GD6—18生理盐水2ml／kg,1次／d灌胃）。观察用药期间动物的一般情况,分别于GD0、3、6、10、13、15、18、20、24、28对各组妊娠兔称重并计算宫外增重,于GD5和GD28取兔血清测定睾酮、黄体酮和雌二醇水平。GD28处死各组兔,取胎仔,记录黄体数、着床数、活胎率、吸收胎率、死胎率;检查胎仔,计算外观、内脏和骨骼畸形发生率。结果环磷酰胺A组兔GD10和GD15、环磷酰胺B和C组兔GDl5体重均明显低于溶媒对照组（P〈0．05或P〈0．01）;环磷酰胺A组宫外增重明显低于溶媒对照组[（-0．013±0．163）kg比（0．208±0．194）kg,P〈0．01]。GD28与GD5的激素水平差值比较显示,环磷酰胺A组激素水平变化明显,与溶媒对照组相比,雌二醇和睾酮变化幅度差异有统计学意义（P〈0．01或P〈0．05）,黄体酮变化幅度差异无统计学意义（P〉0．05）;环磷酰胺B组及C组激素变化幅度与溶媒对照组相比,均无统计学意义（P〉0．05）。大体解剖未见母兔有明显异常。环磷酰胺A组、B组活胎率（65．1％、19．2％）均明显低于溶媒对照组（93．1％）（均P〈0．01）,吸收胎率（17．4％、53．9％）及死胎率（17．4％、26．9％）均明显高于溶媒对照组（4．2％、2．8％）（均P〈0．01）。环磷酰胺A组、B组、C组胎仔外观畸形发生率（60．6％、93．3％、16．1％）、内脏畸形发生率（62．9％、93．3％、25．9％）及骨骼畸形发生率（91．4％、100．0％、61．7％）均明显高于溶媒对照组（0、0、3．0％）（均P〈0．01）。结论环磷酰胺用作新西兰兔胚胎-胎仔发育毒性实验阳性对照药物是可行的,其最佳用药方案为18m∥kg,10c／a灌胃,GD6～20连续用药15d。     

甲氨蝶呤联合环磷酰胺对胶原诱导性关节炎大鼠滑膜细胞凋亡作用的研究

目的通过对类风湿关节炎(RA)动物模型胶原诱导性关节炎(CIA)大鼠的实验研究,从滑膜细胞凋亡的角度,探讨甲氨蝶呤(MTX)联合环磷酰胺(CTX)的协同作用和机制。方法建立Ⅱ型胶原诱导性雌性Wistar大鼠CIA模型,将造模成功的60只大鼠随机分成4组:CIA模型对照组、小剂量MTX治疗组(MTX0.9mg/kg,每周1次)、小剂量CTX治疗组(24mg/kg,每3周1次)及小剂量MTX联合小剂量CTX治疗组(0.9mg/kg,每周1次,CTX24mg/kg,每3周1次);再选8只为正常对照组。治疗24周后全部动物处死取材,再经固定、脱钙、包埋,通过TUNEL法检测滑膜细胞凋亡。结果各治疗组滑膜细胞凋亡均较CIA模型组增加,联合治疗组凋亡程度最高,各组间平均灰度值差异有统计学意义(P<0.05)。结论提示MTX和CTX联合治疗RA为协同作用。     

邻苯二甲酸二-（2-乙基己基）酯对小鼠胚胎致畸作用和心肌细胞的毒性

邻苯二甲酸酯类被广泛用作增塑剂，在某些塑料产品中，含量甚至高达50％。由于其应用广泛，及易于从塑料中迁移出来，故对环境污染严重。而邻苯二甲酸二-(2-乙基己基)酯(DEHP)的用量占了增塑剂的25％，主要用于食品包装和医用器材等。动物实验表明邻苯二甲酸酯类具有致畸性，亦有资料表明它是内分泌干扰物。     

啮齿类动物全胚胎培养技术及其应用

用于毒物发育毒性检测的常规方法,实验周期长、工作量大、费用较贵,难以迅速对大量化学物质进行发育毒性的评价,因而迫切需要建立毒物发育毒性的初筛方法。体外发育系统实验比整体实验省钱、省时、易行。 各种体外发育系统(细胞、器官和全胚胎培养)用于对正常和异常的胚胎发育进行形态学和生     

亚硒酸钠诱发大鼠胚胎中脑神经细胞凋亡的观察

目的：研究亚硒酸钠对大鼠胚胎中脑神经细胞凋亡的影响。并探讨其中可能的机制。方法：采用原代培养的大鼠胚胎中脑神经细胞,加入不同浓度的亚硒酸钠（1、5、10、20μmol/L),观察亚硒酸钠对神经细胞凋亡的影响,用透射电镜观察神经细胞超微结构的变化,流式细胞仪分析法检测DNA含量及凋亡细胞百分率。结果高浓度的亚硒酸钠（≥10μmol/L）会导致神经细胞凋亡,并呈剂量依赖性,10μmol/L的亚硒酸钠作用的神经细胞导现出典型的凋亡形态学改变,且凋亡细胞百分率达13．4％。结论：高浓度的硒可通过激发生氧自由基和调节有关调节基因（P53）的活性等多种途径诱发神经细胞凋亡。     

克隆人体胚胎细胞在研究和治疗中的应用

近来关于源自克隆人体胚胎的干细胞研究的成果，把生物和医药领域的发展向前推进了一小步，具有重大意义。这些技术的发展，将使一种全新的方式对人类基因疾病的研究成为可能。