副溶血性弧菌临床分离株血清型、毒力基因和PFGE分子分型特征分析

目的分析从2007-2012年腹泻病例标本中分离的168株副溶血性弧菌血清型分布、毒力基因携带情况和PFGE分子分型特征。方法采用血清学凝集实验,检测菌株的血清型别;采用实时荧光PCR方法,检测耐热性溶血毒素基因(tdh)和耐热性溶血毒素相关溶血毒素基因(trh);采用脉冲场凝胶电泳技术(PFGE),分析56株O3∶K6型副溶血性弧菌的基因分型特征。结果 (1)168株菌可分为14种血清型,主要血清型为O3∶K6(114,67.9%)、O4∶K8(25,14.9%)、O3∶K29(6,3.6%);食物中毒分离株与腹泻门诊分离株血清型构成不同,但优势血清型均为03∶K6。(2)168株菌可分为4种毒力基因类型,分别为tdh+trh-(161,95.8%)、tdh+trh+(3,1.8%)、tdh-trh+(1,0.6%)、tdh-trh-(3,1.8%);食物中毒分离株与腹泻门诊分离株毒力基因类型构成不同,但优势毒力基因类型均为tdh+trh-。(3)56株O3∶K6型副溶血性弧菌共有15种PFGE带型(P1～P15),相似度>86%,有10个带型分别有多株菌处于同一聚类(P1～P4、P6、P7、P9、P10、P12、P15)。结论副溶血性弧菌临床分离株以tdh+trh-的O3∶K6为主;O3∶K6型副溶血性弧菌临床分离株的PFGE条带型相似性度高,菌株间亲缘关系较近。     

副溶血性弧菌致病因素检测

目的了解副溶血性弧菌致病力及药敏等情况,以在副溶血性弧菌中毒机理及临床治疗方面提供科学依据。方法按国家标准GB/T-4789-2008[1]操作规程进行副溶血性弧菌致病因素检测。结果60株副溶血性弧菌(病人分离的菌株37株,外环境菌株23株),刚果红侵袭力试验均阴性;内毒素检测96.7%阳性;溶血毒素检测病人分离的菌株100%阳性,外环境分离的菌株均阴性。产毒荧光定量PCR体外检测副溶血弧菌,病人分离的菌株97.3%(36/37)阳性,外环境分离的菌株13.0%(3/23);对治疗由本菌引起中毒病人,复方新诺明、氯霉素、庆大霉素等是首选药物。结论副溶血性弧菌致病性与其产生的内毒素、毒力、溶血毒素有密切相关。     

一起由副溶血弧菌引起的食物中毒的实验室检测

目的：对一起可疑食物中毒的病原菌相关实验室检测。方法：参照GB／T7489、WS／T．9-1996对食物中毒患者肛拭子进行致病菌检测，并对分离的可疑致病菌进行毒力基因检测、随机扩增多态性分析（RAPD）和药敏试验。结果：11份患者肛拭标本中，8份（占72．7％）分离出副溶血弧菌，血清分型均为03：K6；毒力基因检测为tdh阳性，trh阴性；RAPD结果显示，8株副溶血弧菌具有相似的RAPD图谱。结论：结合流行病学资料、可疑致病菌检测、毒力基因检测及随机扩增多态性分析结果，证实该起食物中毒是由副溶血弧菌引起，致病毒素主要为tdh编码的TDH。     

北京市副溶血弧菌病原学和分子流行病学特征分析

目的 了解北京市副溶血弧菌腹泻病例分离株的病原学和分子流行病学特征.方法 2010年4-12月从临床收集散发腹泻病例2118份粪便标本,进行副溶血弧菌的分离培养、生化鉴定.阳性菌株进行血清分型;采用药敏纸片法对12种抗生素进行敏感性检测;用实时荧光定量PCR方法检测毒力基因tlh、tdh和trh;用脉冲场凝胶电泳(PFGE)进行分子分型.结果 2118份粪便标本分离出副溶血弧菌114株,阳性分离率为5.38％.114株副溶血弧菌分属于23种血清型,其中O3:K6为优势血清型,占63.16％.临床分离株对氨苄西林和庆大霉素产生耐药;对阿莫西林、头孢曲松、氯霉素、亚胺培南、萘啶酸和四环素等均具有较高敏感性.全部菌株tlh基因阳性;tdh存在于大部分菌株中,所占比例为93.86％;只有1株菌trh阳性.O3:K6型菌株tdh基因阳性率(98.61％)明显高于非O3:K6型菌株(85.71％)(P=0.0098).114株副溶血弧菌分成54种PFGE型别,72株O3:K6型菌株分成34种PFGE型别,带型分散,无明显聚集性.结论 北京地区感染性腹泻病例副溶血弧菌分离株以O3:K6型为主.毒力基因tlh和tdh携带率高,且O3:K6型临床分离株毒力更强.副溶血弧菌对多数抗生素均具有较高敏感性.PFGE结果提示北京地区流行的副溶血弧菌存在多克隆来源.     

深圳西乡近五年副溶血弧菌的分子特征及血清型别变迁研究

目的了解深圳西乡街道五年来引起感染性腹泻的副溶血弧菌血清型分布、毒力因子及分子流行病学特征,为暴发疫情早期预警预测提供基础数据。方法用传统血清凝集法做血清型鉴定、用荧光PCR法检测毒力基因,再采用脉冲场凝胶电泳(PFGE)对副溶血弧菌进行分子分型。并用BioNumerics软件对PFGE分型图谱进行聚类分析。结果从4 825份标本中,分离出目标致病菌1 077株,其中病原菌副溶血弧菌851株,占79.01%。851株中,563株副溶血弧菌为O3:K6型,占66.15%,其次是O4:K8型,占10.34%。93.4%(795/851)的菌株是tdh+tlh+trh-菌株。对60株O3:K6型副溶血弧菌进行PFGE图谱分析共得到20种不同的PFGE图谱类型,各菌株图谱条带差异小于3条。结论深圳西乡街道五年来副溶血弧菌感染以O3:K6型为主,93.4%的菌株是tdh+tlh+trh-菌株。各菌株图谱具有同源性。     

一起由副溶血弧菌引起食物中毒的检测结果报告

目的对一起可疑食物中毒的病原菌进行相关实验检测。方法按照GB/T4789-2003《食品卫生微生物学检验》对分离的菌株进行生化鉴定、毒力因子检测、动物毒力试验、药敏试验。结果4份患者肛拭标本分离出4株副溶血弧菌。毒力因子KP溶血试验阳性,可致小白鼠7 h内死亡,对氨苄青霉素类耐药。结论结合流行病学调查和实验室检测结果,证实该起食物中毒是由副溶血弧菌引起。     

蚌埠市2018年水产品致病性弧菌污染情况检测结果分析

目的 了解蚌埠市水产品中致病性弧菌的污染情况、副溶血弧菌毒力基因携带情况,为食源性疾病防控提供依据.方法 采集蚌埠市农贸市场、超市、饭店水产品样品,依据《2018年国家食品污染和有害因素风险监测工作手册》对水产品中的副溶血弧菌、霍乱弧菌、创伤弧菌、溶藻弧菌、河弧菌进行分离培养鉴定;采用荧光PCR方法检测副溶血弧菌不耐热溶血素(TLH)、耐热性溶血素(TDH)、耐热相关溶血素(TRH)和TOXR基因.结果 共采集水产品2 00份,检出致病性弧菌93株,阳性数为80份,阳性率为40.0％,其中副溶血弧菌检出率22.5％、霍乱弧菌检出率3.5％、创伤弧菌检出率0.5％、溶藻弧菌检出率17.0％、河弧菌检出率3.0％;全部副溶血弧菌毒力基因均为阴性.结论 5种致病性弧菌在蚌埠市水产品中均有不同程度的污染,其中以副溶血弧菌和溶藻弧菌最为严重.     

一起食物中毒患者粪便与可疑食品中副溶血性弧菌血清分型与毒力基因检测分析

目的 进一步了解副溶血弧菌性食物中毒患者粪便与可疑食物中的副溶血弧菌血清型和毒力基因分布.方法 细菌分离改用L棒推涂其余参照GB/T4789.7-2003方法,对鉴定为副溶血性弧菌菌株做血清分型和毒力基因(tdh和trh)检测.结果 从4份粪便样品和2份从可疑食品中共检出副溶血弧菌28株可分15个血清型,来源于粪便样本的17株副溶血弧菌tdh阳性、trh阴性,来源于可疑食品中的11株副溶血弧菌tdh与trh均阴性.结论 该次食物中毒是由一组携带tdh毒力基因多种血清型混合的副溶血弧菌污染引起.     

广州地区70株副溶血性弧菌病原学特征分析

目的 了解广州地区人源性和食源性副溶血性弧菌优势血清型、携带毒力基因和分子分型情况。方法 收集2014 - 2016年广州地区腹泻患者和食源性监测中分离到的副溶血性弧菌进行血清分型、毒力基因鉴定和脉冲场凝胶电泳分型（PFGE）。结果 70株副溶血性弧菌,临床分离株48株,血清型分别为O3∶K6、O4∶K8、O1∶K1、O4∶K9、O1∶K36,其中O3∶K6为主要型别（70.8%）,其次为O4∶K8（20.8%）。食品分离株22株,血清型分散无明显优势。毒力基因检测,临床分离株46株tdh、toxRS/new、orf8全部阳性。食品分离株6株tdh阳性,toxRS/new、orf8全部阴性。所有菌株均未检出trh基因。PFGE分析70株副溶血性弧菌可分为45种带型,2种聚类,菌株间的相似值为45.6 %～100 %。结论 副溶血性弧菌临床分离株与食品分离株在血清型和毒力基因分布上具有分离现象。引起广州地区食源性疾病的副溶血性弧菌株,是主要以携带tdh、toxRS/new、orf8基因的O3:K6型菌株。PFGE图谱显示,本区域70株副溶血弧菌呈现基因多样性。     

武汉市6起食物中毒副溶血弧菌分子特征研究

目的：了解武汉地区6起食物中毒病原菌副溶血弧菌分子特征。方法：对6起食物中毒共16株分离株进行药敏分析,运用PCR技术进行耐热性溶血毒素基因（tdh）和耐热性溶血毒素相关溶血素基因（trh）检测,并进行肠道细菌重复基因间共同序列PCR（ER IC-PCR）分析。结果：16株副溶血弧菌对第三代头孢和喹诺酮类较敏感,tdh阳性,trh阴性,ER IC-PCR结果显示每起食物中毒菌株亲缘关系非常紧密,有3起属于同一个群,另外2起属于一个群。结论：武汉地区流行的主要副溶血弧菌分子特征为tdh阳性,trh阴性,ER IC-PCR技术是分析副溶血弧菌引起食物中毒菌株非常有效的工具。     

副溶血弧菌分子致病机制研究进展

副溶血弧菌易引起食物中毒,研究表明副溶血弧菌的致病性是多种毒力因子共同作用的结果。本文从分子水平对副溶血弧菌的溶血毒素、尿素酶、蛋白酶、侵袭力和黏附力等毒力因子进行综述,为进一步研究该菌的分子致病机理提供参考。     

一起由副溶血弧菌引起食物中毒的调查报告

本文报告一起发生在外国籍船舶上的集体性食物中毒,同餐者22人,发病14例,罹患率63.64%。潜伏期最短为8小时,最长为42小时,中位数为16小时,食后20小时内发病11例,占78.57%。推测此起食物中毒与吃生蚝有关;收集患者粪便样本10份,分离到副溶血弧菌9株。毒力测定表明,所有菌株对小白鼠均有较强的致病力,从而证实副溶血弧菌是此起食物中毒的病原体。     

福建省泉州市水产品中副溶血性弧菌的质谱鉴定和聚类分析

目的 了解福建省泉州市水产品中分离的副溶血性弧菌的毒力基因分布及同源性关系。方法 采用基质辅助激光解析电离飞行时间质谱(MALDI-TOF MS),对2020年分离自福建省泉州市水产品的59株疑似副溶血性弧菌菌株进行鉴定,利用MALDI-Biotyper数据库软件进行同源性聚类分析;采用荧光PCR法对毒力基因进行检测。结果 59株可疑菌株中只有46株鉴定为副溶血性弧菌,经同源性分析46株菌株之间蛋白组分特征差异比较大,可分为6大类别;经毒力基因鉴定,不耐热溶血素基因(tlh)检出率为100%,耐热性溶血素基因(tdh)和耐热性溶血素相关溶血基因(trh)均未检出。结论 MALDI-TOF MS质谱仪可用于副溶血性弧菌属水平的快速鉴定,福建省泉州市水产品存在一定程度的非致病性副溶血性弧菌污染,菌株同源性较低。     

一起O3:K6型副溶血性弧菌引起的食物中毒实验室分析

目的:通过流行病学调查和实验室检测结果分析食物中毒原因。方法:参照GB/T4789-2004方法[1]对病人粪便或肛拭、剩余食物、食物加工环节涂抹物进行病原菌检测,对检出的副溶血性弧菌作血清分型及神奈川溶血试验。结果:19份病人标本中检出14株副溶血性弧菌,并从海虾和加工环节涂抹物中各检出1株副溶血性弧菌,血清型均为O3:K6型,神奈川溶血阳性(KP)。结论:本次食物中毒是由具较强毒力的O3:K6型副溶血性弧菌污染引起的。     

南平市食品中副溶血性弧菌污染及毒力基因携带状况分析

目的了解南平市食品中副溶血性弧菌污染状况及毒力基因携带情况。方法收集南平市2013—2018年6类食品,按GB 4789.7-2013方法对副溶血性弧菌进行检测。结果样品中副溶血性弧菌检出率12.6%(28/223),其中淡水产品检出率(17.2%,26/151)高于海产品(2.8%,2/72);6类食品中有4类食品检出副溶血性弧菌,以两栖及爬行类检出率最高(36.4%);不同来源样品的检出率差异无统计学意义;毒力基因检测结果:28株阳性株中,不耐热溶血毒素(tlh)基因携带率为100%,均未检出副溶血性弧菌耐热直接溶血素(tdh)和耐热直接溶血相关毒素(trh)基因。结论南平市食品存在不同程度的副溶血性弧菌污染,特别是淡水产品,应引起重视、提高防范意识,加强对该菌的食源性监测。     

食品中副溶血弧菌PFGE分子分型及三种毒力基因的测定

目的:了解食品中分离的副溶血弧菌菌株之间及其与病人分离菌株的关系,了解食品中分离菌株的毒素基因携带情况。方法:对食品中分离的副溶血弧菌进行PFGE分子分型;并应用PCR法进行3种毒力基因(tdht、rh和tlh)测定。结果:55株O1～O4群副溶血弧菌的PFGE图谱分为50型别;三种毒力基因检测结果为:12株菌tdh检测阳性、55株菌trh检测均为阴性5、5株菌tlh检测均为阳性。结论:食品中分离的副溶血弧菌PFGE型别多,且相互之间关系分散;所有被检测副溶血弧菌均携带tlh基因,没有检测到携带trh基因的菌株,不同来源的菌株TDH基因携带情况差异较大。     

上海市金山区腹泻患者中分离的副溶血弧菌病原学特征研究

[目的]了解2016—2018年上海市金山区副溶血弧菌的分布和流行特征.[方法]对218株分离自腹泻患者的副溶血弧菌进行血清型分析及不耐热性溶血素(TLH)、耐热性溶血素(TDH)、TDH类似溶血毒(TRH)毒力基因测定和药敏试验并进行脉冲场凝胶电泳(PFGE)分子分型.[结果]218株副溶血弧菌可分为8个血清群,21...     

一起食物中毒事件中副溶血弧菌的分子生物学、血清学和毒力研究

对分离自一起食物中毒事件中的31株副溶血弧菌的tdh和trh毒力基因进行了检测,同时采用血清学分型方法和ERIC-PCR基因分型方法进行克隆分析。分离菌株来自病例肛拭（33份）、食品（59份）和餐具涂抹（12份）标本。生化反应鉴定采用VITEK系统和API20E生化鉴定条。共分离得到31株副溶血弧菌，其中1株来自食品，30株均分离自患者肛拭。     

深圳市龙岗区副溶血性弧菌检出情况及血清型分析

目的了解深圳市龙岗区水产品、外环境水体及食物中毒样品中副溶血性弧菌的污染状况、血清型分布及携带耐热直接溶血素(tdh)毒力基因情况。方法于2009年6—10月间采集深圳市龙岗区水产品、外环境水体及期间发生的5起食物中毒病人粪便样品共548份,通过实时荧光PCR法对副溶血性弧菌初筛后进行常规分离培养,并对分离株进行血清学分型及携带tdh产毒基因情况进行分析。结果 548份样品分离到223株副溶血性弧菌,其中42份食物中毒样品中分离到35株且均携有tdh产毒基因,21株血清型为O3∶K6,其余14株为O4∶K8。506份水产品和外环境水体中分离到副溶血性弧菌188株,其血清群呈多样化,最主要的为O2(25.0%),其次为O3(10.1%)、O1(6.4%)、O10(6.4%)。结论在深圳市龙岗区引起食物中毒的主要病原体是带有tdh基因的O3∶K6或O4∶K8血清型的副溶血性弧菌。该区水产品和外环境水体中副溶血性弧菌的带菌率较高且血清型呈现多样性,并与食物中毒分离株血清型存在差异。     

不同来源副溶血性弧菌血清群和毒力基因及其耐药性

目的了解副溶血性弧菌水产品分离株和食物中毒患者分离株的血清群、毒力基因及其耐药性,为预防控制溶血性弧菌引起的食物中毒提供依据。方法对副溶血性弧菌分离株利用血清凝聚试验进行分群,应用聚合酶链式反应(PCR)方法检测耐热直接溶血素(TDH)和耐热直接溶血素相关毒素(TRH)毒力基因,采用纸片扩散法进行药敏试验。结果 35株水产品分离株分布于O4、O3、O2、O11、O5、O1共6个血清群,无优势菌群,TDH与TRH毒力基因均阴性。22株食品中毒分离株分布于O3、O4、O1共3个血清群,以O3群为主,占81.8%,TDH阳性率77.3%,TRH阳性率13.6%。药敏试验结果显示副溶血性弧菌对青霉素类、头孢类、磺胺类抗生素部分耐药或完全耐药,对其他类抗生素敏感。结论副溶血性弧菌水产品分离株与食物中毒分离株的血清群、毒力基因存在较大的差异,所分离菌株对多种常用药物敏感性高。