猪皮、尸体皮在-80℃冰箱降温-LN2冻存中细菌学的动态观察

目的探讨猪皮、尸体皮在冷冻保存过程中,消毒剂、冷冻及抗冻剂对皮肤细菌的影响.方法将新鲜消毒的中厚猪皮、尸体皮和经过-80℃降温,LN2冻存的猪皮、尸体皮各取6块行需氧菌和厌氧菌培养,而后做细菌学检测.结果猪皮冷冻前后三组各时间点均检出细菌,尸体皮仅冷冻前和冷冻后对照组及10%D-KR组检出细菌,余未检出细菌.所检出的需氧菌为表皮葡萄球菌和棒状杆菌,厌氧菌为丙酸杆菌和贪婪丙酸杆菌.猪皮所检细菌量3-5CFu log/g,尸体皮＜4CFu log/g.结论猪皮细菌检出率明显高于尸体皮,冷冻对细菌检出率有一定影响,温度越低影响越大,但与冷冻时间长短无关.抗冻剂对皮肤细菌无影响.常规清洗消毒方法不能完全清除皮肤细菌.     

尸体皮在-80℃冰箱降温-LN2冻存活力变化的实验研究

通过对 - 80℃、- 196℃冷冻尸体皮氧耗和SDH活力测定 ,探讨超低温冷冻对皮肤活力的影响程度和抗冻剂的保护作用。方法 :切取中厚尸体皮 12块 ,分成三组 ,一组为对照组 ,两组为不同抗冻剂处理的实验组。三组均经 - 80℃降温和 - 196℃冻存 ,分别检测皮片的氧耗和SDH活力。每组以平均数和标准差表示结果 ,用t检验进行显著性差异的统计学分析。结果 :未经抗冻剂处理的皮片经冷冻贮存后氧耗和SDH活力下降 6 9.8%和 6 9%。而经二种抗冻剂处理的皮片氧耗和SDH活力分别下降 4 2 .1%和 4 5 .1%。与对照组比较有显著差异 (P <0 .0 1) ,两实验组间及各冻存时间段间无显著差异 (P >0 .0 5 ) ,- 80℃与 - 196℃间无明显差异 (P >0 .0 5 )。结论 :冷冻对皮肤活力影响明显 ,抗冻剂对皮片活力具有显著保护作用 ,不同抗冻剂间无明显显著保护作用 ,- 80℃和 - 196℃及各时间段皮片活力无明显差异     

贴壁培养细胞直接用培养瓶置-80℃冻存

目的：探讨贴壁培养细胞直接用培养瓶置4℃、-20℃,最后置-80℃低温冰箱冻存的可行性.方法：采用培养瓶常规培养贴壁细胞L929,去上清后,加冻存液覆盖细胞.-80℃低温冰箱冻存,然后,每2个月复苏1次,计数活细胞,观察细胞传代效果.结果：L929细胞置-80℃低温冰箱冻存1年,复苏良好,随着冻存时间延长,存活细胞逐渐减少,复苏耗时延长.结论：贴壁培养细胞直接用培养瓶置-80℃低温冰箱冻存1年,复苏良好.     

-80℃冰箱非程控降温冻存脐血造血干细胞

目的:为脐血造血干细胞(CBHSC)的冻存建立简便、经济且有效的方法。方法:采用5％二甲基亚砜(DMSO)加6％羟乙基淀粉(HES)为冷冻保护剂,不用程控降温装置,直接置CBHSC于-80℃冰箱中冻存1～6个月。结果:冻存6个月后,单个核细胞(MNC)、粒-单系造血祖细胞(CFU-GM)和CD_(34)~+细胞的回收率及台盼兰拒染率分别为(91.6±1.8)％,(83.1±15.6)％,(88.2±1.8)％,(77.7±2.0)％。结论:这种简便、经济的方法能很好地保存CBHSC的造血潜能,因此,能为脐血移植冻存CBHSC。     

-80 ℃冰箱冷冻保存恶性血液病患者自体外周血造血干细胞的临床应用

自体干细胞移植(autologous peripheral blood stem cell trans-plantation,APBSCT)是治愈某些恶性血液病的有效手段之一.     

-80℃简易冻存外周造血干细胞临床应用观察

目的:探索一种简便易行、安全有效、成本低的干细胞的冻存方法。方法:6份外周造血干细胞以1640培养液和二甲基亚砜、10%白蛋白作保护剂在-80℃条件下直接冻存,检测冻存前后外周血干细胞的活性、单个核细胞(MNC)数和CD34+细胞数及回收率。结果:冻存前后外周血干细胞活性、MNC和CD34+细胞的数量及回收率满足移植要求,输注后造血均重建。结论:1640培养液和二甲基亚砜、10%白蛋白作保护剂在-80℃条件下直接冻存干细胞是一种简便、可靠、安全、成本低的外周血干细胞冻存方法。     

不同冻存液对人羊膜间充质干细胞-80 ℃冻存与复苏效果的影响

目的:观察不同冻存液对人羊膜间充质干细胞冻存复苏后的存活率及再培养情况的影响,并探索简单有效的冻存与复苏方法.方法:将含有血清培养基短期体外培养的人羊膜间充质干细胞分为4组,分别加入不同冻存液(体积分数):A组10%二甲基亚砜 40%胎牛血清 50%DMEM/F12,B组10%二甲基亚砜 90%胎牛血清,C组5%二甲基亚砜 4.5%羟乙基淀粉 20%胎牛血清 70.5%DMEM/F12,D组10%胎牛血清 90%DMEM/F12.以相同方法冻存并复苏细胞,比较4组细胞回收率及再培养情况.结果:A、C 2组细胞复苏后回收率高于另外2组(P均<0.05),且于复苏后再培养24 h内出现较多贴壁细胞.结论:以5%二甲基亚砜 4.5%羟乙基淀粉 20%胎牛血清 70.5%DMEM/F12作冻存液冻存羊膜间充质干细胞效果好.     

-80℃冻存外周血造血干细胞的应用研究

目的:探求一种操作简便实用、造血干细胞回收率和存活率高、成本低的外周血造血干细胞的冻存方法。方法:CP-1和5%白蛋白作保护剂在?80℃条件下直接冻存,并检测冻存前后外周血干细胞的活性,单个核细胞(MNC)和CFU-GM、CD34 细胞的回收率。结果:冻存前后外周血干细胞活性,单个核细胞(MNC)和CFU-GM、CD34 细胞的回收率无明显差异(P>0.05),输注后造血均重建。结论:CP-1和5%白蛋白作保护剂在?80℃条件下直接冻存干细胞是一种简便、可靠、安全、成本低的外周血干细胞冻存方法,具有广泛的临床推广价值。     

机采浓缩血小板-80℃长期冻存的动态的体外黏附、聚集功能和Ⅲ因子活性变化

目的 跟踪观察机采浓缩血小板(platelet apheresis concentrates,PCs)在5%DMSO条件下于-80℃冻存1～5年的体外功能变化.方法 玻璃珠柱检测血小板黏附功能,花生四烯酸诱导后检测血小板聚集功能,蝰蛇毒检测血小板Ⅲ因子活性.结果 对深低温保存的冻存血小板的动态观察发现:PCs冻存期为1～5年融化复苏后的黏附和聚集功能未发现有统计学意义(P＞0.05);冻存至第4年的血小板复苏时4/10样品发生凝集,第5年的有3/11发生凝集;冻存至第5年时,多数样品血小板Ⅲ因子失活.对22℃常温保存的液体血小板的观察发现:血小板的黏附功能和最大聚集能力随保存时间的延长逐渐下降,72 h有差异(P＜0.05),96 h有显著性差异(P＜0.01);5 d之内血小板Ⅲ因子活性无明显改变(P＞0.05).结论 22℃保存的液体血小板发生渐进的代谢损伤,而-80℃保存期在3年内的冻存血小板未见明显异常.     

机采浓缩血小板-80 ℃长期冻存条件下CD62p表达与ADP诱导的再表达

目的 通过对冻存损伤关键因素的了解评估冻存血小板潜在的冻存期限.方法 采用流式细胞技术观察冻存1～6年复苏后血小板CD62p表达和ADP诱导后CD62p再表达能力.结果 在-80℃保存12～48个月,冻存血小板CD62p的表达受得良好抑制,可与22℃保存28 h的液体血小板质量相近;而ADP-CD62p再表达能力充分,36个月时为(70.2±10.3)%,与常温24 h的液体血小板的(70.4±21.5)%相比无显著性差异(P＞0.05);但48个月时下降至(35.2±18.2)%,与冻存36个月比较有非常显著性差异(P＜0.01).作为对照,液体血小板在采集后1 h的CD62p表达率为(2.2±1.5)%,在22℃条件下随保存时间的延长迅速升高,24 h有显著性差异(P＜0.05),48 h和72 h有极显著性差异(P＜0.01);而采集后1 h的ADP-CD62p再表达率为(83.5±14.7)%,其后迅速下降,48 h后有极显著性差异(P＜0.01).结论 新鲜血小板常温条件下待冻期间发生的代谢损伤是影响冻存血小板质量的关键因素,选择≤24 h的新鲜血小板用于-80℃冻存至少可以保存3年.     

安定、654-2、利多卡因在产程中联合应用效果观察

目的:探讨在产程中应用安定、654-2、利多卡因的临床效果。方法:200例孕妇随机分为试验组与对照组各100例,实验组于宫口近3cm时静推安定10mg及654-210mg,宫颈湿敷2%利多卡应10ml,观察总产程的时间。结果:试验组产程较对照组缩短(180±9)min。结论:在产程中联合应用安定、654-2、利多卡因能有效加速产程进展,减轻孕妇痛苦,是一种安全、简便的促产程方法。     

甲亢患者血、尿中β_2-微球蛋白的临床观察

本文观察82例甲亢疾病患者的血、尿β_2-m 的变化。发现甲亢病者在治疗前血、尿β_2-m 水平较治疗后缓解期及正常人组为高。服药治疗后缓解组与正常对照组比较无显著差异。随着病情缓解,血及尿β_2-m 含量相应下降,并与血中 T_3 T_4,rT_3呈正相关。初步认为血、尿β_2-m 可作为了解甲亢疾病中免疫状态及观察药物疗效的指标。     

肝癌发生、发展过程中血管生成素-2的动态表达与改变

目的:观察肝癌发生发展过程中血管生成素-2(Ang-2)的动态改变及其与血管内皮生长因子(VEGF)表达的关系。方法:以2-乙酰氨基芴诱发雄性SD大鼠肝细胞癌变,观察癌变过程中肝组织的病理学变化,以免疫组织化学法或酶联免疫吸附法(ELISA)观察Ang-2和VEGF动态表达及相互关系。结果:诱癌过程中鼠肝细胞出现颗粒样变性、不典型增生、癌前病变及肝癌形成的动态变化;血Ang-2水平,在正常对照组为105.23±19.23ng/L、肝细胞变性组为140.17±25.16ng/L、癌前病变组为203.75±23.83ng/L和癌变组为222.39±23.31ng/L,随着病理组织学的改变呈梯度增加,肝癌组明显高于对照组和变性组(P<0.001);癌变过程中Ang-2与VEGF的动态改变呈显著正相关(r=0.785,t=8.00,P=0.000)。结论:肝细胞癌变过程中Ang-2及VEGF呈过表达状态,肝癌的发生发展与新血管生成密切相关。     

基质金属蛋白酶-2、基质金属蛋白酶-9在卵巢癌中表达及对肿瘤侵袭能力的影响

目的：分析基质金属蛋白酶-2(MMP-2)、基质金属蛋白酶-9(MMP-9)在卵巢癌中的表达及对肿瘤侵袭能力的影响。方法：分别选取正常卵巢组织35例、卵巢良性肿瘤45例以及卵巢癌60例;选择免疫组化SABC三步法对MMP-2表达、MMP-9表达进行检测。结果：MMP-2及MMP-9一般在细胞浆内表达,表现为棕黄色或者明显黄色颗粒;卵巢癌组中的MMP-2阳性表达、MMP-9阳性表达均明显高于正常组、卵巢良性组(P<0.05);而正常组中的MMP-2阳性表达、MMP-9阳性表达与卵巢良性组比较,差异无统计学意义(P>0.05)。MMP-2、MMP-9表达与卵巢癌患者的临床分期存在显著相关性(P<0.05),与肿瘤直径、糖类抗原-125(Ca-125)值、组织分化、病理类型、年龄无关(P>0.05)。结论：在卵巢癌中MMP-2、MMP-9表现为高表达,对MMP-2、MMP-9表达进行早期联合筛查,不但能判断病情演变情况,而且还能评估患者预后。     

β-防御素-2、 IFN-γ和NF-κB p65在寻常型银屑病皮损中表达的研究

目的研究β-防御素-2(HBD-2)、IFN-γ、NF-κB p65在寻常型银屑病患者皮损中的表达及其与银屑病严重程度的关系。方法采用SP免疫组化法检测45例银屑病患者皮损组织、45例银屑病患者非皮损组织及15例正常皮肤组织石蜡标本中HBD-2、IFN-γ、NF-κB p65的表达,对其在皮损中的表达进行相关性分析,并将结果与PASI评分进行相关性分析。结果与正常人皮肤组织和银屑病患者非皮损区相比,银屑病患者皮损区中HBD-2、IFN-γ、NF-κB p65的表达明显上调,而非皮损区HBD-2、IFN-γ的表达也高于正常人皮肤组织,差异均有统计学意义(P<0.05)。银屑病患者皮损区HBD-2、IFN-γ、NF-κB p65的表达水平与PASI评分之间均存在正相关(P<0.05)。银屑病患者皮损区HBD-2与IFN-γ,IFN-γ与NF-κB p65,HBD-2与NF-κB p65表达水平之间均存在正相关(P<0.05)。结论 HBD-2,IFN-γ,NF-κB p65在寻常型银屑病病中的表达水平均升高,可能共同参与了银屑病的发病过程。     

细胞凋亡调控因子-2、p53基因、细胞增殖因子-67、细胞角蛋白-7在腺性膀胱炎与膀胱上皮癌组织中表达的研究

目的：探讨细胞凋亡调控因子-2（bcl-2）、p53基因（p53）、细胞增殖因子-67（ki-67）、细胞角蛋白-7（ck-7）在腺性膀胱炎与膀胱上皮癌组织中表达的相关性。方法用免疫组化法检测46例腺性膀胱炎、21例膀胱上皮癌组织以及11例正常膀胱黏膜组织中bcl-2、p53、ki-67、ck-7的表达情况,并进行相关性分析。结果在膀胱上皮癌、腺性膀胱炎、正常膀胱黏膜组织中,bcl-2表达阳性率分别为4．76％、69．57％、90．91％;p53表达阴性率分别为9．52％、84．78％、81．82％;ki-67表达阴性率分别为23．81％、71．74％、72．73％;ck-7表达阴性率分别为9．52％、21．74％、9．09％。 bcl-2在腺性膀胱炎中表达明显低于膀胱上皮癌组织,但明显高于正常膀胱黏膜;p53、Ki-67在腺性膀胱炎中表达明显高于正常膀胱黏膜,但明显低于膀胱上皮癌组织;ck-7在膀胱上皮癌、腺性膀胱炎与正常膀胱黏膜组织中表达差异不明显（P＞0．05）。结论 bcl-2、p53、ki-67在腺性膀胱炎的生物转归中占有重要地位,对临床诊断与治疗具有指导意义。     

环氧化酶-2、表皮生长因子受体与Ki-67在鼻咽癌中表达的临床病理意义

目的 探讨环氧化酶-2(COX-2)、表皮生长因子受体(EGFR)及Ki-67 的表达在鼻咽癌发展过程中的联系,为鼻咽癌的个体化治疗提供研究的线索.方法 随机抽取86例鼻咽癌病例进行EGFR、COX-2及Ki-67的免疫组化染色,观察其组织学形态改变.结果 COX-2及EGFR在鼻咽癌的表达率分别为 70.9%(61/86)和72.1%(62/86);且均在T分期(T1、T2、T3)中差异有统计学意义(COX-2:P=0.012,EGFR:P=0.016).COX-2及EGFR的表达得分之间呈正相关(r=0.213,P=0.049).COX-2与EGFR的共表达率为53.5%(46/86),在T分期中的差异也有统计学意义(2=9.801,P=0.007).另外,Ki-67 的表达在T分期中差异有统计学意义(P=0.002).COX-2与Ki-67、EGFR与 Ki-67之间的关系无统计学意义(均P>0.05).结论 COX-2与EGFR在鼻咽癌中的表达和共表达与T分期相关.COX-2与EGFR的免疫表达强度之间存在密切联系,两者在鼻咽癌发展过程的作用及其相互联系的机制值得深入研究,从而为鼻咽癌的个体化治疗提供进一步研究的基础.     

中性粒细胞淋巴细胞比、环氧合酶-2及核转录因子-κB在食管鳞状细胞癌中表达的意义

目的探讨中性粒细胞淋巴细胞比(NLR)、环氧化酶-2(COX-2)、核转录因子-κB(NF-κB)在食管鳞状细胞癌中的表达及相互之间的关系。方法选取新乡医学院第一附属医院经病理诊断为食管鳞状细胞癌的患者60例(鳞癌组),另选择同期健康体检者42例(对照组),分别检测2组受试者外周血常规并计算NLR,比较2组受试者NLR的差异,并进一步分析NLR与食管鳞状细胞癌病理特点的关系。采用免疫组织化学方法检测食管鳞状细胞癌患者癌组织及癌旁组织中COX-2、NF-κB的表达。鳞癌组患者以NLR中位值3.0为节点分为低NLR组(NLR<3.0)和高NLR组(NLR≥3.0),分析2组患者癌组织中COX-2、NF-κB表达的差异。采用Spearman等级相关分析COX-2与NF-κB表达的相关性。结果鳞癌组和对照组受试者NLR分别为1.79±0.77、3.75±2.22,鳞癌组受试者NLR显著高于对照组(P<0.05)。NLR与患者的性别、年龄、肿瘤大小、肿瘤位置无明显相关性(P>0.05),与浸润深度、淋巴结转移、远处转移、病理分级、临床分期有相关性(P<0.05)。COX-2和NF-κB在食管鳞状细胞癌组织中的阳性表达率分别为81.7%(49/60)和56.7%(34/60),在癌旁组织中的阳性表达率分别为58.9%(35/60)和36.7%(22/60),COX-2和NF-κB在食管鳞状细胞癌组织中的阳性表达率均显著高于癌旁组织(P<0.05)。COX-2表达与肿瘤大小及浸润深度相关(P<0.05),与年龄、肿瘤部位、淋巴结转移、远处转移及病理分级无关(P>0.05)。NF-κB表达与肿瘤浸润深度、淋巴结转移、远处转移有关(P<0.05),与年龄、肿瘤大小、肿瘤部位、病理分级无关(P>0.05)。COX-2和NF-κB在食管鳞状细胞癌组织中表达呈正相关(P<0.05)。高NLR组患者癌组织中COX-2和NF-κB阳性表达率分别为94.1%(32/34)和73.5%(25/34),显著高于低NLR组的65.4%(17/26)和34.6%(9/26)(P<0.05)。结论NLR可能是评价食管鳞状细胞癌恶性生物学行为的指标;COX-2、NF-κB可能通过促进慢性炎症的过程参与食管鳞状细胞癌的发生、发展。