CXCR4在胶质瘤血管内皮细胞和ECV304细胞中的表达及其意义

目的检测人胶质瘤血管内皮细胞以及体外培养的血管内皮样细胞系ECV304趋化因子受体CXCR4的表达,观察其配体SDF-1对血管内皮样细胞迁移的影响,以探讨趋化因子受体CXCR4在肿瘤血管生成中的可能作用及其机制.方法通过免疫组化方法检测人胶质瘤血管内皮细胞CXCR4蛋白的表达,采用RT-PCR、免疫细胞化学方法检测血管内皮样细胞系ECV304上CXCR4 mRNA和CXCR4蛋白的表达,并采用48孔趋化板观察SDF-1诱导体外培养血管内皮样细胞的迁移作用.结果在胶质瘤血管内皮细胞和血管内皮样细胞系ECV304上均检测到趋化因子受体CXCR4的表达,体外实验显示SDF-1能诱导血管内皮样细胞发生明显的迁移.在30、50 ng/ml的实验浓度范围内,诱导血管内皮样细胞的迁移作用呈明显量效关系.结论胶质瘤血管内皮细胞和血管内皮样细胞系ECV304上存在CXCR4表达,CXCR4激活能诱导内皮细胞的迁移.     

脂多糖对人肺微血管内皮细胞骨架及TNF-α和IFN-γ表达的影响

目的 探讨脂多糖 (LPS) 直接诱导人肺微血管内皮细胞 (HPMVEC)后细胞骨架的改变,肿瘤坏死因子α(TNF-α)、γ干扰素(IFN-γ)mRNA的表达及细胞培养上清液中TNF-α、IFN-γ的表达水平的改变.方法 HPMVEC生长至80 %以上融合时,加入LPS 以 500 ng/mL浓度刺激细胞分别至 0、4、6、8 h,经鬼笔环肽染色后采用激光共聚焦显微镜观察HPMVEC细胞骨架的变化.至预定时相点离心收集培养液上清液,利用实时荧光定量RT-PCR法检测TNF-α、IFN-γ mRNA的表达,采用 ELISA方法测定细胞培养上清液中TNF-α、IFN-γ的表达水平,并进行统计学分析.结果 LPS 刺激培养后,8 h组细胞开始出现细胞骨架改变;4 h组TNF-α、IFN-γ mRNA表达与0 h组差异无统计学意义(P>0.05),6 h组TNF-α、IFN-γ mRNA表达高于0 h组(P<0.05),8 h组TNF-α、IFN-γ表达高于0 h组(P<0.05);4 h 组细胞培养上清液TNF-α、IFN-γ的表达水平与0 h组比较差异无统计学意义(P>0.05),6 h 组细胞培养上清液TNF-α、IFN-γ的表达水平高于0 h组(P<0.05),8 h组细胞培养上清液TNF-α、IFN-γ的表达水平高于0 h组(P<0.05).结论 细菌致病因子LPS能直接刺激HPMVEC使细胞结构发生改变,同时影响细胞因子的分泌,使促炎因子TNF-α和IFN-γ分泌升高,参与肺损伤.这可能是LPS发挥其毒性作用诱发急性肺损伤/急性呼吸窘迫综合征的一个重要途径.     

同种异体单核细胞活化血管内皮细胞产生IP-10、I-TAC的体外研究

目的  研究单核细胞对异体血管内皮细胞（VEC）的活化作用以及产生干扰素诱导蛋白10（IP-10）、干扰素诱导的T细胞α型趋化因子（I-TAC）的效果。方法  人外周血中分离单核细胞，酶消化法分离人主动脉内皮细胞，建立单核细胞与VEC共培养系统。用流式细胞仪（FACS）检测VEC表面粘附分子CD54、CD62E表达的情况，用RT-PCR检测VEC内I-TAC和IP 10 mRNA的表达情况。结果  RT-PCR 检测结果表明，VEC与同种异体单核细胞共培养24h后，细胞内IP-10和I-TAC mRNA表达水平显著增加（P<0.05），且在48、72h的表达维持在较高的水平。 FACS检测结果表明，正常培养的VEC少量表达CD54分子，不表达CD62E分子。与同种异体单核细胞共培养24h后，VEC表面CD62E和CD54的表达水平明显上调（P<0.05）。结论  在同种异体单核细胞 血管内皮细胞免疫反应中，单核细胞能活化血管内皮细胞，使内皮细胞表达IP-10、I-TAC等趋化因子和CD54、CD62E等粘附分子，参与对移植器官的排斥反应。     

人参多糖和猪苓多糖对大鼠肠道黏膜淋巴细胞功能的影响

目的观察人参多糖和猪苓多糖对大鼠肠道黏膜淋巴细胞功能的影响。方法分离SD大鼠外周血单个核细胞(PBMC)、派伊尔结淋巴细胞(PPL)、肠道上皮内淋巴细胞(IEL)和黏膜固有层淋巴细胞(LPL),分别与不同质量浓度的人参多糖和猪苓多糖共同培养,检测上清液中肿瘤坏死因子-α(TNF-α)和γ-干扰素(IFN-γ)水平变化。结果人参多糖和猪苓多糖均可以使PBMC和PPL培养上清液中TNF-α和IFN-γ水平升高;2mg/mL猪苓多糖可以使IEL培养上清液中TNF-α和IFN-γ水平升高;人参多糖和猪苓多糖可以使LPL培养上清液中TNF-α和IFN-γ水平降低。结论人参多糖和猪苓多糖对大鼠肠道黏膜淋巴细胞功能具有调节作用。     

芦荟多糖联合Anti-CD3 McAb、rhIL-2干预的PBMC对HepG2生长的影响

目的探讨芦荟多糖(AP)的抗肿瘤作用机制。方法采用AP单独及联合Anti-CD3McAbr、hIL-2诱导干预外周血单个核细胞(PBMC)的方法建立效应细胞;采用MTT法测定效应细胞及其上清液对靶细胞HepG2生长的影响;ELISA法测定干预后各组PBMC分泌IFN-γ、TNF-α的水平,测定效应细胞及其上清液对靶细胞上清液中IFN-γ、TNF-α和AKP水平的影响。结果AP单独及其联合Anti-CD3McAbr、hIL-2可提高PBMC分泌IFN-γ水平,对TNF-α水平没有明显影响;效应细胞的上清液对HepG2的生长无明显抑制作用,而效应细胞细胞悬液对HepG2的生长有抑制作用,可升高混合培养后上清液中TNF-α、IFN-γ水平,降低AKP水平。结论AP体外抗肿瘤作用与提高免疫和促进肿瘤坏死因子释放有关。     

TNF-α和IL-1β对人脐静脉内皮细胞 蛋白C受体mRNA表达的影响

目的：观察肿瘤坏死因子α（TNF-α）和白细胞介素 1β（IL-1β）对人脐静脉内皮细胞 （ECV304）蛋白C受体（EPCR）mRNA表达的影响。方法：通过体外培养ECV304细胞,分别以含 TNF-α和IL-1β的培养基孵育ECV304细胞,行剂量和时间依赖性实验。采用实时定量聚合酶链反 应（quantitative real-time PCR ）技术测定 ECV304 细胞 EPCR mRNA 的表达。结果：TNF-α和 IL-1β均能显著下调 ECV304 EPCR mRNA 的表达,并呈剂量和时间依赖性（P<0.05）。结论： TNF-α和IL-1β可能通过显著下调ECV304上EPCR mRNA的表达而成为损伤内皮细胞功能的一 个新作用机制。     

系统性红斑狼疮患者骨髓基质细胞对造血干(祖)细胞的作用

[目的]探讨系统性红斑狼疮(SLE)患者骨髓基质细胞上清液对造血干(祖)细胞的作用及其机制.[方法]半固体集落培养法观察28例活动期SLE骨髓基质细胞生长及其上清液对正常细胞、自身骨髓干/祖细胞的抑制作用;检测SLE其骨髓基质细胞上清液中TNF-α、IFN-γ的水平;RT-PCR法检测骨髓基质细胞IFN-γmR-NA的表达.[结果]①29%活动期SLE患者骨髓基质细胞的集落数较正常人明显减少(P＜0.05).②体积分数为15%的活动期SLE骨髓基质上清液对正常人骨髓、自身SLE造血干/祖细胞混合集落(CFU-Mix)的形成较对照组具有明显抑制作用(P＜0.05).③活动期SLE患者骨髓基质细胞的上清液TNF-α、IFN-γ的水平高于稳定期SLE组、正常对照组(P＜0.05).④70%活动期SLE患者骨髓基质细胞有IFN-γ mRNA的表达,而正常对照则未见有IFN-γmRNA的表达.[结论]活动期SLE患者骨髓基质细胞上清液对正常、自身骨髓造血干(祖)细胞的有抑制作用,这与其基质细胞存在高表达TNF-α、IFN-γ有关.     

CXC趋化因子受体3对甲状腺细胞自噬与炎症的影响及机制

目的 探讨CXC趋化因子受体3(CXCR3)对干扰素-γ(IFN-γ)诱导的甲状腺滤泡上皮细胞（Nthy-ori3-1）自噬及炎症的影响及相关机制。方法 Nthy-ori3-1细胞分为正常组（不做任何处理）、IFN-γ组（500 U/mLIFN-γ处理24 h）、si-NC组[转染小干扰RNA(siRNA)]、si-CXCR3组（转染CXCR3 siRNA）、si-CXCR3+si-NC组（转染CXCR3 siRNA+转染siRNA）、si-CXCR3+si-Beclin1组（转染CXCR3 siRNA+转染Beclin1 siRNA）和si-CXCR3+3MA组（转染CXCR3 siRNA+3-MA自噬抑制剂）。实时荧光定量PCR检测各组CXCR3、CXC趋化因子配体9(CXCL9)的mRNA表达情况,免疫印迹法检测各组CXCR3、CXCL9、微管相关蛋白1轻链3-I(LC3I)、LC3II、囊泡转运蛋白34(Vps34)及Beclin1蛋白表达情况,免疫荧光染色观察各组细胞内自噬标志物LC3斑点数;酶联免疫吸附法试剂盒检测各组白细胞介素-6(IL-6)、肿瘤坏死因子α(TNF-α)...     

硼替佐米对混合淋巴细胞培养体系细胞因子的影响

目的 探讨蛋白酶体抑制剂硼替佐米(bortezomib)对混合淋巴细胞培养体系中细胞凋亡、细胞因子水平的影响.方法 体外建立单向混合淋巴细胞培养(MLC)体系,分别用2、4、8 nmol/L的硼替佐米干预反应体系,在不同的时间点收集细胞,流式细胞仪检测细胞凋亡率、ELISA法检测培养上清液中白细胞介素2(IL-2)、γ干扰素(IFN-γ)、肿瘤坏死因子α(TNF-α)的含量.结果 硼替佐米作用于细胞12、24、36 h后细胞凋亡率逐渐增加,8 nmol/L硼替佐米作用36 h细胞凋亡率为(61.67±3.21)% ;硼替佐米作用24 h后上清液中IL-2、IFN-γ、TNF-α浓度减小,8 nmol/L组的IL-2、IFN-γ、TNF-α浓度分别为(88.27±2.76 )ng/L、(57.36±2.08)ng/L、(22.19±0.88)ng/L.结论 硼替佐米能诱导细胞凋亡,使混合淋巴细胞培养体系细胞分泌的Th1型细胞因子减少.