双去甲氧基姜黄素通过降低线粒体膜电位诱导人白血病K562细胞凋亡

目的:探讨双去甲氧基姜黄素对K562细胞增殖的影响及其机制。方法:以1,10,30,50,100μmol·L~(~(-1))的双去甲氧基姜黄素对K562细胞作用48 h或72 h后MTT法检测细胞增殖;以10,30,50μmol·L~(-1)的双去甲氧基姜黄素对K562细胞作用24 h或48 h实验,另设空白组,AO/EB双染法倒置荧光显微镜观察凋亡形态,Rh123染色流式细胞仪检测线粒体膜电位,Annxin V/PI染色流式细胞仪检测凋亡率,Westren blot方法检测Bcl-2,Bax的表达活性。结果:与空白组比较,双去甲氧基姜黄素可剂量依赖性抑制K562细胞的增殖,在30,50μmol·L~(-1)浓度下,双去甲氧基姜黄素可诱导细胞凋亡,下调Bcl-2/Bax,并可降低线粒体的膜电位(P0.01)。结论:双去甲氧基姜黄素可抑制K562细胞的增殖,作用机制可能与改变线粒体膜电位诱导的细胞凋亡有关。     

17-羟-岩大戟内酯B对K562细胞增殖及凋亡的影响

目的:探讨17-羟-岩大戟内酯B(HJB)对人白血病K562细胞增殖及凋亡的影响.方法:将K562细胞分为3组,分别为:空白对照组,5-氟脲嘧啶组(浓度为100μmol·L-1),HJB组(浓度为6.25,12.5,25,50,100,200,400μmol·L-1).用不同浓度的药物作用24 h和200 μmol·L-1的HJB浓度作用不同时间(12,24,48 h),四甲基偶氮唑蓝(MTT)法检测细胞活性,并与空白对照组和5-氟脲嘧啶组作对比;流式细胞仪Annexin V-FITC/PI检测细胞凋亡率;分光光度法检测半胱氨酸蛋白酶-3(Caspase-3)和半胱氨酸蛋白酶-8(Caspase-8)的相对活性.结果:与空白对照组相比,HJB对K562细胞的增殖有显著性抑制作用,并呈浓度依赖关系及时间依赖关系(P＜0.05),作用24 h后IC50为158.7μmol·L-1.HJB可诱导K562细胞凋亡,用50,100,200 μmol·L-药物分别处理细胞24h后,早期凋亡率较空白组明显升高(P＜0.05),且呈浓度依赖关系;Caspase-3及Caspase8的相对活性均较空白对照组升高(P＜0.05),并呈浓度依赖关系.结论:HJB明显抑制体外K562细胞生长并诱导其发生凋亡,且死亡受体途径可能是诱导其凋亡的一个机制.     

丹酚酸B对HaCaT细胞增殖、凋亡及细胞周期的影响

目的通过考察丹酚酸B(Salvianolic acid B,Sal B)对人永生化细胞(HaCaT)增殖、凋亡及细胞周期的影响,探讨丹酚酸B治疗皮肤疣可能的作用机制。方法丹酚酸B给药不同浓度(3.125、6.25、12.5μmol·L~(-1))后,CCK-8法检测细胞增殖,流式细胞术分析细胞周期并量化凋亡细胞,Hoechst 33258 DNA染色,Western Blot检测Caspase3、Caspase9、Bcl-2、Bax蛋白表达。结果与对照组相比,6.25、12.5μmol·L~(-1)Sal B组给药24、48 h能明显抑制细胞增殖(P0.01);6.25、12.5μmol·L~(-1)Sal B组给药24 h,能阻滞细胞停留于G0/G1期,且能诱导细胞凋亡(P0.01);3.125、6.25、12.5μmol·L~(-1)Sal B组明显上调Caspase3、Caspase9、Bax蛋白表达量、下调Bcl-2蛋白表达量(P0.05,P0.01)。结论丹酚酸B治疗皮肤疣的机制之一可能是抑制异常增生细胞增殖并诱导其凋亡,其作用可能与影响凋亡蛋白表达有关。     

茅莓总皂苷和高三尖杉酯碱、阿糖胞苷体外协同诱导白血病细胞凋亡的机制研究

目的:探讨茅莓总皂苷(TSRP)抑制K562和人原代白血病细胞及分别与化疗药高三尖杉酯碱(Hom)、阿糖胞苷(Ara-c)的协同作用,并探讨其协同作用的可能机制。方法:MTT法和PHA-LCM液相-半固体二步培养法检测不同浓度的TSRP对K562和人原代白血病细胞增殖及其与化疗药联用后的影响;观察TSRP分别和Hom、Ara-c联用的抑制作用,用药物相互作用指数评价药物协同作用;DAPI染色法观察一定浓度下TSRP协同化疗药诱导K562细胞凋亡;Western blot检测促凋亡蛋白Cleaved caspase-3、Cleaved caspase-9和Cleaved PARP以及抗凋亡蛋白Survivin的表达。结果:TSRP能够抑制K562和人原代白血病细胞的增殖,呈浓度依赖性,在一定浓度范围内TSRP和化疗药有显著的协同作用;DAPI染色法观察TSRP和化疗药协同较单用化疗药出现明显凋亡现象,诱导细胞发生凋亡;Western blot检测TSRP联合Hom较单用Hom显著提高了K562细胞内PARP、Cleaved caspase-3和Cleaved caspase-9的活性;TSRP联合Ara-c较单用Ara-c显著提高了K562细胞内PARP和Cleaved caspase-3的活性,但是对Cleaved caspase-9的活性影响差别不大;TSRP联合Hom或Arac对Survivin的活性影响均未见明显差别。结论:TSRP分别和化疗药Hom或Ara-c联用对K562和人原代白血病细胞有明显的增殖抑制和诱导凋亡作用,且主要是通过线粒体途径增强凋亡效应,从而增加化疗药物的敏感性,具有良好的临床应用前景。     

姜黄素对人肝癌细胞SNU475增殖及凋亡的影响

目的:探讨姜黄素对人肝癌细胞SNU475增殖及凋亡的影响机制。方法:MTT法测定姜黄素对肝癌肿瘤细胞SNU475的增殖抑制率,进一步的利用Western blot法检测相关蛋白的表达,并利用荧光染色法检测姜黄素存在下,肝癌细胞SNU475形态的变化,最后对肝癌细胞凋亡蛋白Caspase 3活性进行了探讨。结果:姜黄素(0.5~1.5μmol/L)能够诱导了肝癌细胞SNU475的凋亡,且存在时间和剂量依赖性;Western blot法检测相关蛋白的表达结果表明,姜黄素(0.5、1.0μmol/L)能够诱导肝癌细胞SNU475中Akt、Bcl-2、组蛋白H3、H4和Cyclin D1的表达下降,有显著性差别,p21WAF1/CIP1蛋白表达水平显著上调;荧光染色法检测结果显示,在姜黄素(1.0μmol/L)药物作用后24h、48h、72h,肝癌细胞SNU475的形态均可见明显改变;Caspase 3活性检测结果表明,姜黄素(0.5、1.0μmol/L)能显著提高肝癌细胞SNU475中凋亡蛋白Caspase 3活性。结论:姜黄素作为组蛋白去乙酰化酶抑制剂能够诱导肝癌细胞SNU475的凋亡,并对相关蛋白的表达和Caspase 3活性造成影响,最终对肝癌细胞SNU475的凋亡起到重要作用。     

番茄红素诱导K562细胞凋亡及机制的探讨

目的:研究番茄红素(lycopene)对人慢性髓系白血病K562细胞凋亡的影响,探讨其凋亡的作用机制。方法:用不同浓度(0,20,40,60μmol·L-1)的番茄红素作用K562细胞24,48,72 h,0μmol·L-1番茄红素为空白组。采用MTT法检测不同浓度的番茄红素作用24,48,72 h时K562细胞增殖抑制率;Annexin V/PI双染色法检测不同浓度的番茄红素作用48 h时K562细胞凋亡率;RT-PCR法及Western blot法检测不同浓度的番茄红素作用48 h时K562细胞中B细胞淋巴瘤-2(Bcl-2),半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶-3(Caspase-3)mRNA及蛋白的表达。结果:与空白组比较,细胞增殖抑制率随番茄红素浓度升高而明显升高,细胞凋亡率逐渐明显增加,随番茄红素浓度明显升高,Bcl-2 mRNA及蛋白的表达明显降低,Caspase-3mRNA及蛋白的表达明显升高,均具有统计学差异(P0.05)。结论:番茄红素诱导人慢性髓系白血病K562细胞凋亡,其凋亡机制与下调Bcl-2及上调Caspase-3表达有关。     

小白菊内酯对白血病K562细胞及其干细胞的作用

目的:研究小白菊内酯(parthenolide,PTL)对白血病K562细胞及其白血病干细胞(leukemia stem cells,LSC)的作用.方法:以白血病K562细胞为靶细胞,四氮唑蓝(MTT)比色法测定细胞增殖活性,Annexin V/PI染色法测定细胞凋亡;流式细胞术检测LSC相对含量,甲基纤维素集落形成法检测细胞的自我更新和增殖能力.结果:PTL显著抑制K562细胞的增殖,24,48,72 h的IC_(50)分别为17.1,8.67,9.42μmol·L~(-1).5,10 μmol·L~(-1)PTL处理48 h,K562细胞的凋亡率分别为(49.56±5.11)%,(71.88±2.12)%.结合干细胞免疫标志分析,K562细胞中LSC样(CD34~+ CD38~-)细胞的凋亡率分别为(52.63±4.14)%,(57.50±4.47)%.K562细胞中LSC的相对含量仅轻度增高,但高浓度(15 μmol·L~(-1))PTL处理,LSC含量则增高15倍.0.5～4.0 μmol·L~(-1)PTL显著抑制K562细胞的集落形成能力,集落数降低24.1%～89.2%;5～15 μmol·L~(-1)PTL预处理,存活K562细胞的集落形成数增高5.0%～50.0%.结论:小白菊内酯可抑制K562细胞及其干细胞的增殖活性,并诱导其凋亡.     

吴茱萸碱抑制HDAC6促进人白血病K562细胞周期阻滞和凋亡的机制研究

目的探讨吴茱萸碱通过抑制组蛋白去乙酰化酶6(HDAC6)促进人白血病K562细胞周期阻滞以及凋亡的机制。方法采用CCK-8法检测吴茱萸碱对K562细胞增殖的影响;流式细胞术检测K562细胞周期和凋亡;化学比色法检测K562细胞HDAC6活性;Western blotting法检测K562细胞中HDAC6、Cyclin D1、CDK4、Bcl-2、Bax、Cleaved Caspase-3、ERK、p-ERK、p38和p-p38蛋白的表达。结果 CCK-8法结果提示,吴茱萸碱在一定浓度范围内(1~16μmol/L)可以有效抑制K562细胞增殖,并呈时间和浓度依赖性;流式细胞术结果显示,吴茱萸碱可将K562的细胞周期阻滞于G0/G1期;2、4、8μmol/L吴茱萸碱诱导K562细胞48 h后,其凋亡率分别为(11.47±1.05)%、(12.77±0.79)%和(18.58±1.37)%,与对照组(2.79±1.01)%相比差异显著(P0.01);化学比色法结果显示,吴茱萸碱能有效抑制HDAC6的活性;Western blotting结果显示,吴茱萸碱能上调Bax、Cleaved Caspase-3、p38和p-p38蛋白的表达,下调CDK4、Cyclin D1、Bcl-2、HDAC6、ERK和p-ERK蛋白的表达。结论吴茱萸碱可能是通过抑制HDAC6的活性,激活MAPK信号通路,进而上调促凋亡蛋白的表达,下调周期蛋白的表达,从而抑制K562细胞的增殖,诱导细胞周期阻滞和凋亡。     

自噬在蝙蝠葛碱诱导宫颈癌Hela细胞凋亡中的作用

目的探讨自噬在蝙蝠葛碱诱导宫颈癌Hela细胞凋亡中的作用。方法采用MTT法检测蝙蝠葛碱(3.2,6.4,12.8,25.6μmol·L~(-1))以及蝙蝠葛碱与3-MA联合用药对宫颈癌Hela细胞增殖的影响,应用流式细胞术观察自噬在蝙蝠葛碱诱导宫颈癌Hela细胞凋亡中的作用;Western blot检测蝙蝠葛碱和3-MA对宫颈癌Hela细胞Cleaved caspase-3、Bcl-2、Bax和Beclin-1表达的影响。结果蝙蝠葛碱显著抑制宫颈癌Hela细胞增殖,其抑制作用随着药物浓度的增加和作用时间的延长而增加;而3-MA与蝙蝠葛碱联合应用后,HeLa细胞凋亡率明显减少;蝙蝠葛碱上调Hela细胞Cleaved caspase-3、Bax和Beclin-1的表达(P0.05),下调Bcl-2蛋白表达(P0.05);与蝙蝠葛碱组比较,3-MA与蝙蝠葛碱联合应用组Cleaved caspase-3、Beclin-1、Bax表达均明显降低(P0.05),而Bcl-2蛋白的表达明显升高(P0.05)。结论蝙蝠葛碱能够抑制宫颈癌HeLa细胞的增殖,上调凋亡相关蛋白Cleaved caspase-3、Bax和自噬相关蛋白Beclin-1的表达、下调抗凋亡蛋白Bcl-2表达,从而诱导宫颈癌HeLa细胞凋亡和自噬性死亡。     

姜黄素诱导食管癌Eca-109细胞凋亡机制的研究

目的 观察姜黄素诱导食管癌Eca-109细胞凋亡,并初步探讨其作用机制.方法 通过CCK-8法检测姜黄素不同浓度、不同时间点作用于Eca-109细胞的增殖抑制率.应用Caspase-3活性检测试剂盒检测Caspase-3活性.流式细胞技术检测细胞早期凋亡.免疫细胞化学法检测凋亡相关基因Bax和Bcl-2的表达情况.结果 随浓度增加时间延长各组细胞生长抑制率有明显增高,且呈剂量浓度依赖性,组间差异有显著性(P＜0.01).Caspase-3活性检测发现:姜黄素20μmol·L-1、40μmol·L-1作用24 h后OD值与对照组比较,差异具有统计学意义(P＜0.05).流式细胞术检测到姜黄素作用后,细胞凋亡率明显升高.免疫细胞化学染色显示,随着姜黄素浓度的增高和作用时间的增长,Bcl-2蛋白表达减弱,Bax蛋白表达增强.结论 姜黄素可能是通过诱导caspase-3表达活性增高,上调促凋亡基因Bax及下调抗凋亡基因Bcl-2的表达,诱导Eca-109发生凋亡.     

二苯乙烯苷联合PDTC抗H2O2诱导的人脐静脉内皮细胞凋亡

目的:研究二苯乙烯苷(2,3,5,4’-tetrahydroxystilbene-2-O-β-D-glucoside,TSG)联合吡咯烷二硫代氨基甲酸盐(pyrrolidine dithiocarbamate,PDTC)对过氧化氢诱导的人脐静脉内皮细胞凋亡的作用及机制.方法:体外培养人脐静脉内皮细胞,实验分为正常对照组、模型组(300 μmol·L-1H2O2)、TSG组(10 μmol·L-1TSG+300μmol·L-1H2O2)、联合预处理组(75μmol·L-1PDTC+10 μmol·L-1TSG+300 μmol·L-1H2O2)、PDTC组(75 μmol·L-1 PDTC+300 μmol·L-1H2O2),采用MTT法检测细胞增殖率,Hoechst 33258染色观察凋亡细胞形态,流式细胞术检测细胞凋亡率,Western blot检测Caspase-3,核因子-κB(NF-κB)蛋白的表达.结果:与正常对照组比较,模型组细胞凋亡率增加,细胞增殖率降低;Caspase-3,NF-κB蛋白表达增加,差异均有显著性(P＜0.01).与模型组相比,经TSG或PDTC预处理后,细胞的增殖率增加,细胞凋亡率降低;Caspase-3,NF-κB蛋白表达显著减少(P＜0.01).联合预处理组与PDTC组或TSG组相比,细胞活力增加,细胞凋亡率下降;Caspase-3,NF-κB蛋白表达进一步减少(P＜0.01).结论:PDTC或TSG预处理可抑制H2O2诱导的人脐静脉内皮细胞凋亡,PDTC可联合TSG协同发挥抗H2O2诱导的内皮细胞凋亡,其机制与抑制NF-κB、Caspase-3的表达有关.     

自噬对双去甲氧基姜黄素诱导肝癌HepG2细胞凋亡作用的影响

目的:探讨自噬对双去甲氧基姜黄素诱导肝癌HepG2细胞凋亡作用的影响。方法:以24 mg·L~(-1)双去甲氧基姜黄素或联合5 mol·L~(-1)自噬抑制剂3-甲基腺嘌呤(3-methyladenine,3-MA)对HepG2细胞作用24,48 h,以四甲基偶氮唑盐(methye thiazolye telrazlium,MTT)比色法检测细胞活力;以24 mg·L~(-1)双去甲氧基姜黄素单用或联合3-MA对HepG2细胞作用48 h,Hoechst 33342染色倒置荧光显微镜观察细胞凋亡形态,磷脂结合蛋白V/碘化丙啶(Annxin V/propidium iodide,PI)双染检测细胞凋亡率,罗丹明123(Rhodamine 123,Rh123)染色检测线粒体膜电位,蛋白免疫印迹法(Western blot)检测自噬相关蛋白Beclin-1,LC3,半胱氨酸蛋白酶-3(Caspase-3),活化型Caspase-3(cleaved Caspase-3),B淋巴细胞瘤-2(Bcl-2),Bcl-2相关X蛋白(Bax)的活性表达。结果:与空白组比较,双去甲氧基姜黄素可抑制HepG2细胞增殖,诱导细胞凋亡,降低线粒体膜电位,使pro-Caspase-3,Bcl-2,LC3-Ⅰ蛋白表达降低(P0.01),升高cleaved Caspase-3,Bax,Beclin-1,LC3-Ⅱ蛋白的表达(P0.01);3-MA可增强双去甲氧基姜黄素所诱导的HepG2细胞凋亡,提高凋亡率(P0.01),增加其降低线粒体膜电位作用(P0.01),明显下调pro-Caspase-3,Bcl-2蛋白的表达(P0.01),并上调Beclin-1,LC3,cleaved Caspase-3蛋白的表达(P0.01)。结论:双去甲氧基姜黄素可经线粒体机制诱导HepG2细胞凋亡,并诱导细胞自噬,自噬对凋亡有抑制作用。     

线粒体膜电位在三氧化二砷诱导K562细胞凋亡中的作用

目的探讨三氧化二砷(As2O3)诱导K562细胞凋亡的发生机制。方法分别以1、2、4、8、16μmol/LAs2O3诱导K562细胞凋亡,MTT法检测不同时间点细胞增殖抑制率,DNA Ladder法检测细胞凋亡,Annexin V/PI染色结合流式细胞术检测细胞凋亡率,Rhodamine123染色流式细胞术检测线粒体膜电位(ΔΨm)变化,ELISA法检测胞浆细胞色素C(CYTC)水平,分光光度法检测Caspase-3活性,流式细胞术检测Bcl-2和Bax表达。结果MTT结果显示As2O3能抑制K562细胞生长,且呈现时间剂量依赖性;4~16μmol/L的As2O3作用24h均可诱导K562细胞凋亡,同时伴有ΔΨm下降,胞浆内CYTC蛋白浓度及Caspase-3活性增高,胞浆Bcl-2/Bax值下降,且均呈剂量依赖性。结论As2O3诱导K562细胞凋亡可能是通过降低ΔΨm,激活线粒体凋亡途径实现的,Bcl-2/Bax值下降可能与其有关。     

竹节香附素A对人结肠癌细胞HCT-116增殖、凋亡、迁移及侵袭活性的影响

目的研究竹节香附素A(Raddeanin A,RA)对人结肠癌细胞HCT-116增殖、凋亡、迁移及侵袭活性的影响,并初步探讨其作用机制。方法采用不同浓度的RA(0.125~50.0μmol·L~(-1))处理HCT-116细胞24,48 h,四甲基偶氮唑蓝(MTT)法检测细胞的增殖能力。RA(1.0,2.0,4.0μmol·L~(-1))干预后,采用Annexin V/PI双染法检测细胞凋亡率;JC-1染色法检测线粒体膜电位变化;DCFH-DA法检测细胞内活性氧簇(ROS)水平;采用Western Blot法检测细胞中Cleaved caspase-3蛋白表达。选择低于凋亡浓度的RA(0.25,0.5,1.0μmol·L~(-1))作用于HCT-116细胞,采用细胞划痕实验和Transwell穿膜实验观察不同浓度RA对HCT-116细胞迁移的影响;采用铺有Matrigel胶的Transwell实验检测RA对HCT-116细胞侵袭能力的影响;采用RT-PCR法和Western Blot法检测RA对HCT-116细胞中MMP-2、MMP-9 m RNA及蛋白表达的影响。结果 RA干预24,48 h后的IC50值分别为5.967μmol·L~(-1)和4.797μmol·L~(-1),且呈现浓度与时间依赖性。与空白对照组比较,RA1.0,2.0,4.0μmol·L~(-1)浓度组凋亡、坏死的HCT-116细胞明显增多(P0.05,P0.01);线粒体膜电位坍塌率分别为70.2%,74.4%和91.6%,差异均有统计学意义(P0.01);细胞内ROS含量均显著增加(P0.01),且呈现浓度依赖性;Cleaved caspase-3蛋白的表达水平随RA浓度的增加而显著提高(P0.01)。RA干预后与空白对照组比较,0.5,1.0μmol·L~(-1)浓度组的细胞愈合率显著降低(P0.01);RA 0.25,0.5,1.0μmol·L~(-1)浓度组均能显著抑制HCT-116细胞的迁徙能力(P0.01),均能显著抑制HCT-116细胞体外侵袭能力(P0.05,P0.01);RA 0.5,1.0μmol·L~(-1)浓度组MMP-2、MMP-9 m RNA及蛋白相对表达水平均显著降低(P0.05,P0.01)。结论 RA既能够有效抑制人结肠癌HCT-116细胞增殖,又能诱导该细胞的凋亡,可能与诱导细胞内ROS产生,导致线粒体膜电位坍塌,激活caspase信号通路有关。低于凋亡浓度的RA(0.25,0.5,1.0μmol·L~(-1))能明显抑制HCT-116细胞的迁移与侵袭活性,可能与通过下调HCT-116细胞MMP-2、MMP-9m RNA及蛋白表达有关。     

丹参酮Ⅱ_A对白血病K562细胞的体外诱导凋亡作用研究

目的研究丹参酮ⅡA对人急性白血病K562细胞的诱导凋亡作用及其作用机制。方法以不同浓度的丹参酮ⅡA(10~50μmol/L)作用于体外培养的K562细胞24、48、72 h,应用MTT法检测细胞生长抑制率,流式细胞术(FCM)检测细胞凋亡率,并对50μmol/L的药物作用不同时间后亚G1期细胞进行检测。应用免疫印迹法(Western blotting)检测Caspase-3及其裂解底物多聚ADP-核糖聚合酶(PARP)的表达水平,并对凋亡调节蛋白Fas、Bax、Bcl-2、Bak、Bid的表达水平进行检测。结果 20μmol/L以上的丹参酮ⅡA可显著抑制K562细胞的生长、诱导细胞发生凋亡,并呈现出明显的量-效与时-效关系;FCM检测结果表明50μmol/L丹参酮ⅡA作用不同时间后,亚G1期细胞(凋亡细胞)逐渐增多。20μmol/L以上的丹参酮ⅡA作用48 h后Caspase-3逐渐被活化出现17 000的亚单位,Caspase-3的作用底物PARP被活化裂解出现89 000的亚单位片段,而且Caspase-3的激活以及PARP的裂解可被Caspase-3的特异性抑制剂z-DEVD-FMK所阻断,促凋亡蛋白Fas以及Bax的表达水平明显升高,而凋亡抑制蛋白Bcl-2及其他促凋亡蛋白Bak和Bid的表达水平则无明显变化。结论丹参酮ⅡA可以通过诱导白血病K562细胞凋亡而发挥体外抗白血病作用,上调促凋亡蛋白Fas和Bax的表达水平及激活Caspase-3可能是丹参酮ⅡA诱导白血病K562细胞发生凋亡的重要作用机制之一。     

硒化壳聚糖通过下调核因子КB途径增强ST1571对耐药K562/ADM细胞敏感性

目的研究硒化壳聚糖增强ST1571对多药耐药白血病K562/ADM细胞敏感性的作用,并进一步探讨其耐药逆转机制。方法应用MTT法检测ST1571单独和联合硒化壳聚糖对K562/ADM细胞增殖的影响,计算逆转倍数;应用流式细胞法检测细胞凋亡;应用免疫印迹法检测核因子КB(NF-КB)蛋白的改变。结果单独应用1μmol·L-1ST1571作用12,24,36 h,对K562/ADM细胞增殖抑制率分别为(19.15±1.64)%、(24.35±2.37)%和(26.37±2.39)。1μmol·L-1ST1571联合25~400 mg·L-1硒化壳聚糖作用K562/ADM细胞,随着硒化壳聚糖浓度和作用时间的增加,对细胞增殖抑制率也相应增加,呈剂量时间效应关系。硒化壳聚糖能够对K562/ADM细胞耐ST1571产生一定的逆转作用,明显增强ST1571对K562/ADM细胞的诱导凋亡作用(P0.05,P0.01),下调NF-КB蛋白表达(P0.01)。结论硒化壳聚糖能够增强K562/ADM细胞对ST1571的敏感性,其部分机制可能是通过诱导细胞凋亡,抑制细胞mdr-1基因表达,阻断细胞NF-КB信号通路来实现的。     

姜黄素抗食管癌Eca-109细胞增殖及诱导凋亡机制的研究

目的 探讨姜黄素抗食管癌Eca-109细胞增殖及诱导凋亡机制.方法 CCK-8法检测姜黄素对Eca-109细胞的抑制作用;琼脂糖凝胶技术检测有无Ladder状条带形成、电镜技术观察细胞超微结构及全自动荧光酶标仪观察姜黄素对Eca-109细胞的杀伤作用.结果 随浓度增加时间延长各组生长抑制率有明显增高,且呈剂量浓度依赖性,组间差异有显著性(P＜0.01).Caspase-3活性检测发现:姜黄素20 μmol·L-1、40μmol·L-1作用24 h后OD值与对照组比较,差异具有统计学意义(P＜0.05).电镜观察显示姜黄素可破坏细胞的超微结构.结论 姜黄素可破坏细胞超微结构,抑制食管癌Eca-109细胞增殖并诱导其凋亡.     

川楝素提取物诱导K562细胞凋亡的实验研究

目的探讨川楝素提取物对人白血病K562细胞的增殖抑制和诱导凋亡作用及其机制。方法采用MTT法检测川楝素提取物对K562细胞增殖的影响;Wright′s染色观察细胞的形态学改变;流式细胞技术检测细胞周期与凋亡率的变化;Annexin V/PI双标记法检测细胞的早期凋亡变化;DNA琼脂糖凝胶电泳观察DNA片段化;比色法检测Caspase-3、Caspase-8、Caspase-9相对活性的改变;RT-PCR检测凋亡相关基因p21、bcr/abl、H-rasmRNA表达水平的改变。结果川楝素提取物显著抑制K562细胞的增殖,并呈剂量-时间依赖性,作用72h的IC50值为20nmol/L;处理组细胞可见典型的凋亡形态学改变;细胞周期和Annexin V/PI双标记检测表明川楝素提取物可诱导K562细胞凋亡,并呈剂量-时间依赖性;处理组细胞DNA琼脂糖凝胶电泳出现明显的DNAladder;处理组细胞Caspase-3、Caspase-8、Caspase-9的活性均显著增加;p21、H-ras mRNA表达上调,bcr/abl mRNA表达下调。结论川楝素提取物对K562细胞具有增殖抑制和诱导凋亡的作用,其机制与Caspase信号途径的活化有关。     

高良姜素诱导人乳腺癌细胞MCF-7凋亡的研究

目的研究高良姜素促进人乳腺癌细胞株MCF-7的凋亡作用。方法采用CCK-8法检测高良姜素对MCF-7细胞的增殖抑制作用;以流式细胞术检测细胞凋亡;Western blot法检测Bax、Bcl-2、cleavedcaspase-3和cleaved-PARP等相关蛋白的表达水平。结果高良姜素对MCF-7细胞增殖有明显的抑制作用,24 h和48 h的IC50分别为43.71μmol·L~(-1)和20.68μmol·L~(-1);高良姜素能够诱导MCF-7细胞凋亡,呈浓度依赖关系;高良姜素能上调Bax、cleaved-caspase-3和cleaved-PARP蛋白的表达,下调Bcl-2蛋白的表达。结论高良姜素对MCF-7细胞增殖有明显的抑制作用,通过线粒体途径调节凋亡相关蛋白的表达水平诱导MCF-7细胞凋亡。     

苦参碱诱导人白血病耐药细胞K562/IM自噬和凋亡的研究

目的观察苦参碱对人白血病耐药细胞K562/IM自噬和凋亡的影响。方法 (1)苦参碱及伊马替尼对细胞增殖及自噬情况检测:分别设空白对照组、不同浓度(0.25、0.50、1.00、2.00、5.00mg/mL)苦参碱组和(0.05、0.25、0.50、5.00、20.00μmol/L)伊马替尼组,MTT检测K562细胞和K562/IM细胞抑制率。分别设置空白对照组、0.4 mg/mL苦参碱组和0.5μmol/L伊马替尼组,免疫荧光激光共聚焦检测K562细胞和K562/IM细胞自噬现象,Western Blot检测细胞中自噬标志蛋白Beclin-1、LC3-Ⅱ/Ⅰ、P62的表达。(2)苦参碱联合3-甲基腺嘌呤(3-MA)或雷帕霉素(rapamycin,Rapa)诱导K562/IM细胞自噬及凋亡情况变化的检测:实验分6组,空白对照组、苦参碱组(0.4mg/mL苦参碱处理)、3-MA组(5mmol/L 3-MA处理)、Rapa组(0.5μmol/L Rapa处理)、苦参碱+3-MA组(0.4mg/mL苦参碱+5mmol/L3-MA处理)、苦参碱+Rapa组(0.4mg/mL苦参碱+0.5μmol/L Rapa处理),采用MTT检测细胞的抑制率,流式细胞仪检测细胞凋亡水平;Western Blot检测细胞自噬标志蛋白Beclin-1、LC3-Ⅱ/Ⅰ、P62及凋亡相关蛋白Caspase-3表达。结果 (1)苦参碱和伊马替尼作用K562、K562/IM细胞,细胞增殖受抑制明显(P0.05),LC3-Ⅱ/Ⅰ的聚集明显增加,Beclin-1及LC3-Ⅱ/Ⅰ蛋白表达升高,P62蛋白表达减少(P0.05),以K562/IM细胞更明显(P0.05)。(2)苦参碱组K562/IM细胞增殖抑制率(36.32±2.21)%,凋亡率(15.35±0.39)%。苦参碱+3-MA组K562/IM细胞增殖抑制率升高[(65.25±2.06)%,P0.01)],凋亡率升高[(21.70±0.48)%,P0.05],同时Beclin-1及LC3-Ⅱ/Ⅰ蛋白表达下降,P62蛋白表达增强,Caspase-3表达增强(P0.05);而苦参碱+Rapa组作用则相反。结论苦参碱和伊马替尼均可抑制K562、K562/IM细胞增殖的同时可诱导自噬,以耐药K562/IM细胞株自噬明显。通过3-MA抑制自噬可增强苦参碱对细胞K562/IM作用的敏感性,而雷帕霉素减弱苦参碱作用。