TNF-α和PGP9.5在椎体后缘离断症软骨终板的表达及意义

目的:观察TNF-α、PGP 9.5在椎体后缘离断症软骨终板中的表达、分布,探讨其与椎体后缘离断发生、发展的关系。方法:选取手术治疗的12例椎体后缘离断症患者的病椎软骨终板与4例椎体骨折伤椎软骨终板作对照研究。病椎标本包括离断缘及远离离断缘软骨终板组织。切片行TNF-α和PGP 9.5免疫组织化学染色,应用病理图像分析系统测量光密度值(OD值),观测其在椎体软骨终板的表达与分布。结果:骨折椎体的软骨终板内未见TNF-α和PGP 9.5免疫组化阳性染色。椎体离断缘软骨终板组织中,TNF-α和PGP 9.5表达均高于远离离断缘的软骨终板组织(P﹤0.05)。结论:TNF-α和PGP 9.5在椎体后缘离断症的软骨终板中均有表达,终板不同区域其表达存在差异性,局部高表达与椎体后缘离断有密切关系。     

血府逐瘀汤对大鼠颈椎间盘退变中软骨终板IL-1β影响

目的:观察血府逐瘀汤对大鼠颈椎间盘退变中软骨终板IL-1β的影响。方法:选取健康SPF级6周龄SD大鼠36只,随机分为假手术组、模型对照组、血府逐瘀汤实验组,每组各大鼠12只。模型组和实验组建立大鼠颈椎动力平衡失衡模型,诱导颈椎间盘退变;假手术组仅作颈背后正中皮肤切开缝合。造模1周后实验组予以血府逐瘀汤中药灌胃1月,余组灌胃等量生理盐水。在术后第9周、18周、36周随机处死每组4只老鼠,用酶联免疫吸附试验(ELisa)检测椎间盘软骨终板中白细胞介素-1β含量;HE染色观察大鼠颈椎间盘组织形态学改变;TUNEL法检测大鼠颈椎间盘软骨终板细胞凋亡。结果:Elisa检测结果显示,与假手术组相比,模型组和血府逐瘀汤实验组3个时间点软骨终板IL-1β含量均明显高于假手术组(P0.01),其中,模型组软骨终板IL-1β的含量高于血府逐瘀汤实验组(P0.05);HE染色显示软骨终板软骨细胞数量、密度模型组和实验组低于假手术组,并随着时间延长逐渐降低,其中模型组软骨细胞数量减少更加明显;TUNEL法检测结果显示模型组椎间盘软骨终板细胞凋亡数量明显增加,且随着时间的延长而逐渐增多,血府逐瘀汤能延缓椎间盘软骨终板细胞凋亡的速度。结论:血府逐瘀汤可抑制椎间盘软骨终板炎性因子白介素-1β含量的增加,保护椎间盘软骨终板软骨细胞,抑制软骨终板细胞的凋亡,对椎间盘具有保护作用。     

椎间盘终板软骨组织总RNA的提取

高质量的RNA分离是进行基因表达研究的基础。成熟动物的一些组织，如韧带、肌腱、软骨、椎间盘以及半月板，主要是由坚韧的基质（胶原、蛋白多糖多而细胞少）组成。从细胞量少、难于裂解的致密结缔组织中提取RNA较难，限制了对此类组织进行分子生物学研究。笔者采用TRIspin[１]     

软骨终板干细胞及骨髓间充质干细胞对软骨终板细胞增殖分化的影响

背景 组织工程作为一项年轻的技术获得了越来越多脊柱医学研究者的关注.但组织工程种子细胞的选择仍无明确标准.目的 获取并鉴定软骨终板干细胞(cartilage endplate stem cell,CESC)和骨髓间充质干细胞(bone marrow mesenchymal stem cell,BMSC),通过对比探明C...     

细胞因子IL-1β和TNF-α在骨关节炎软骨中mRNA表达的变化及意义

目的探讨IL-1β和TNF-α mRNA在大鼠实验性骨关节炎软骨表达的变化和意义。方法采用Hulth法制作大鼠膝关节0A动物模型，于术后8周取标本并观察关节软骨形态，RT—PCR技术检测mRNA表达。结果0A模型侧关节软骨的IL-1β和TNF-α mRNA表达均高于对照侧。结论OA软骨中存在IL-1β和TNF-α mRNA表达的上调，可能是OA的发病机制之一。     

经皮穿刺兔腰椎椎体内注射平阳霉素对腰椎软骨终板 及椎间盘的影响

 【目的】 评价经皮穿刺兔腰椎终板椎体侧,注射平阳霉素对腰椎终板及椎间盘的影响&#65377;【方法】 选取36只新西兰大白兔,每兔设第5腰椎(L5)为实验组&#65380;第4腰椎(L4)为对照组&#65377;穿刺腰椎终板椎体侧,L5注射平阳霉素(2 mg/mL) 1 mL,L4注射生理盐水1 mL&#65377;术后第1&#65380;2&#65380;3&#65380;4&#65380;5周及3月随机选取6只行MRI检查,并取病理送检&#65377;测量对比第4周实验组MRI与病理切片的椎体病变面积&#65377;【结果】 对照组MRI和病理学检查均无特异性变化,实验组MRI及病理第1 ~ 2周变化不明显,第3周MRI出现FST1WI低信号,T2WI及FST2WI呈稍高信号,第4周信号变化更明显;第3 ~ 4周病理终板椎体侧骨结构紊乱,软骨终板细胞减少&#65380;结构紊乱,纤维环及髓核无明显变化;第5周出现软骨终板和椎间盘退变表现,第3月退变表现更加明显&#65377;实验组第4周MRI与病理切片病变区面积有明显正相关性(r = 0.965,P < 0.001)&#65377; 【结论】 采用经皮穿刺兔腰椎终板椎体侧注射平阳霉素的方法可诱发腰椎终板及椎间盘退变&#65377;     

阻断软骨终板营养对终板软骨细胞影响的实验研究

目的:观察阻断新西兰白兔椎体软骨终板营养途径对终板内软骨细胞的影响。方法:30只新西兰白兔平均分为实验组、假手术组和对照组。实验组采用颈前路显露椎体,使用0.5mm钻头分别在C4、C5椎体上、下缘,C3椎体下缘,C6椎体上缘靠近软骨终板处钻孔,孔外缘位于终板软骨下缘,深度至椎体后缘(术中X线机透视确定),孔中用Stryker骨水泥填塞(0.5ml),假手术组仅切开皮肤后缝合,对照组不做处理。术后4周及8周切取软骨终板标本,用HE染色和原位脱氧核糖核苷酸末端转移酶介导的缺口末端标记法(TUNEL),观察终板软骨细胞密度和软骨细胞凋亡。结果:术后4周,实验组终板软骨细胞密度较假手术组及对照组下降明显,细胞凋亡增加(P<0.05);术后8周,实验组细胞密度下降及细胞凋亡增加较术后4周更为明显(P<0.05);实验组4周及8周细胞密度和细胞凋亡数比较,差别有显著意义(P<0.05)。结论:阻断软骨终板营养途径可导致终板软骨细胞密度下降,细胞凋亡增加。     

Caspase-9抑制剂对SD大鼠椎间盘软骨终板细胞凋亡的影响

目的 探讨caspase-9抑制剂对低胎牛血清培养诱导的大鼠椎间盘软骨终板细胞凋亡影响的研究。方法 取3月龄SD大鼠椎间盘软骨终板,序贯消化法获取细胞原代培养,以1％FBS培养48h为诱导凋亡条件。实验分为1％FBS凋亡组、caspase-9抑制剂组（Z-LEHD-FMK）及DMSO对照组,分别处理细胞48h,后经流式细胞仪检测细胞凋亡率、western blot检测procaspase-9,active caspase-9及active caspase-3的表达。结果 流式细胞仪检测显示,caspases-9抑制剂组细胞凋亡率（26．3±2．56）％与1％FBS组（40．8±0．84）％及DMSO组（40．2±1．56）％相比凋亡率较低,有显著统计学差异（P＜0．05）;western blot检测caspases-9抑制剂组active caspase-9及active caspase-3较1％FBS凋亡组及DMSO对照组表达均明显减少,有显著统计学意义（P＜0．05）。结论 caspase-9抑制剂能明显抑制低胎牛血清培养诱导的大鼠椎间盘软骨终板细胞凋亡,有望成为治疗椎间盘退变的新型药物。     

芪丹颗粒剂对大鼠肺间质纤维化时TGF-β和TNF-α表达的影响

为探讨芪丹颗粒剂对平阳霉素所致大鼠肺间质纤维化的治疗作用及机制 ,采用平阳霉素〔5mg/ (kg·d)〕气管内注入建立大鼠肺间质纤维化模型 ,观察芪丹组〔2 50mg/ (kg·d)〕与氢化可的松腹腔注射组〔2 5mg/ (kg·d)〕治疗后肺组织病理学、胶原蛋白沉积、TGF β和TNF α的表达。发现 :芪丹组肺泡炎及肺纤维化程度、胶原纤维沉积均明显低于模型组和激素组。正常组TGF β、TNF α弱表达 ,模型组强表达 ,芪丹组的表达显著少于模型组和激素组 (P <0 .0 1)。提示 :芪丹颗粒剂可明显减轻大鼠肺泡炎和肺纤维化的程度 ,而且明显优于激素组     

软骨终板细胞凋亡与颈椎间盘退变关系的研究

目的：探讨脊柱软骨终板细胞凋亡与颈椎间盘退变之间的关系。方法：24只清洁型wista大鼠,随机分为实验组和对照组。实验组沿C1-C7棘突做正中切口,剥离椎旁肌,切除C1-C7的棘上、棘间韧带及两侧关节突关节后外1/2,诱发加速脊柱退变;对照组仅切开皮肤后缝合。分别于第9周、18周、36周对两组动物施行过度麻醉处死,完整取下包含上下椎体的椎间盘。对颈椎标本行矢状位切片,分离软骨终板和椎间盘。颈椎间盘按Thompson椎间盘退变病理分级标准进行分级评定;将软骨终板石蜡包埋,切片。HE染色和Tunnel染色后,计数椎间盘软骨终板凋亡数量,评估软骨终板消失状况。结果：两组软骨终板细胞凋亡随时间进展而加速。与对照组相比,18周实验组软骨终板细胞凋亡率明显增高（P〈0.05）;在9周和27周时,实验组与对照组软骨终板细胞凋亡率无统计学差异。结论：脊柱退变模型显著增加了软骨终板细胞凋亡数量,加速了脊柱退变;随年龄增加,软骨终板凋亡细胞数量逐渐增加,软骨终板破坏程度增加,颈椎间盘退变过程加速;年龄是颈椎间盘退变的重要因素;软骨终板细胞凋亡是椎间盘发生退行性变的重要原因。     

TNF-α、TNF-β在弥漫性大B细胞淋巴瘤中的表达及其意义

目的 探讨肿瘤坏死因子α(Tumor necrosis factorα,TNF-α)、肿瘤坏死因子β(Tumor necrosis factorβ,TNF-β)在弥漫性大B细胞淋巴瘤(Diffuse large B-cell lymphoma,DLBCL)中的表达情况及其意义.方法 采用免疫组化方法检测61例DLBCL和5例淋巴结反应性增生中TNF-α、TNF-β的表达情况.结果 TNF-α和TNF-β在DLBCL有不同程度的表达.TNF-α、TNF-β在61例DLBCL的阳性表达率分别为85.25%(52/61)和59.02%(36/61).TNF-α、TNF-β在DLBCL亚型中表达的差异具有统计学意义(P<0.05),TNF-α、TNF-β在DLBCL中non-GCB(非生发中心型)中表达高于GCB(生发中心型).TNF-α、TNF-β在性别、民族、年龄、部位方面的差异均无统计学意义(P>0.05).TNF-α和TNF-β在DLBCL中的表达无相关性(P>0.05).TNF-α、TNF-β在淋巴结反应性增生中表达于滤泡生发中心细胞,副皮质区的免疫母细胞,毛细血管内皮细胞.结论 TNF-α和TNF-β在DLBCL中的高表达,可能与DLBCL的发生、发展有关,且有助于DLBCL不同亚型的诊断和分型.     

Lgr5和β-catenin蛋白在胃癌组织中的表达

目的探究胃癌组织中Lgr5和β-catenin蛋白表达的差别及相关性。方法选择2012年1月～2017年12月间嘉兴市第一医院80例胃癌患者组织病理标本作为观察组,30例浅表性胃炎患者组织病理标本和30例萎缩性胃炎患者组织病理标本分别作为对照组,采用免疫组化法检测Lgr5和β-catenin蛋白的表达。结果 Lgr5和β-catenin蛋白在观察组中的表达率高于对照组,三者之间存在显著差异(χ2=12.937、13.654,P均0.05)。Lgr5蛋白在胃癌中的表达与患者的组织分化程度及患者的肿瘤TNM分期存在明显相关性(P均0.05);β-catenin蛋白在胃癌中的表达与患者是否存在淋巴结转移以及患者的肿瘤TNM分期存在明显相关性(P均0.05)。同时,在胃癌组织中,Lgr5和β-catenin蛋白的表达呈明显相关性(rp=0.226,P=0.038)。结论在胃癌的发生发展过程中,Lgr5和β-catenin蛋白发挥着重要作用,二者的检测对于胃癌的靶向诊疗意义重大。     

椎间盘软骨终板的退变机理及其相关的实验研究进展

目的:探讨椎间盘软骨终板的退变机理及其相关的实验研究进展.方法:查阅国内外相关的文献资料.结果:软骨终板退变较椎间盘退变为早,异常应力尤其是累积性损伤是软骨终板退变的主要原因,进行脊柱的稳定性重建以消除或减轻软骨终板的异常应力是缓解软骨终板退变及其修复转归的关键.结论:对于软骨终板退变的阻止、修复及逆转,首先应进行脊柱的稳定性重建,在此基础上才可能进行有效的各种因子的干预和有效的基因治疗.     

rhEPO对早产儿肺泡灌洗液IL-1βTNF-α表达的影响

目的:探讨重组人促红细胞生成素(Recombinant human erythropoietin,rh EPO)对早产儿肺泡灌洗液人白介素1β(Interleukin-1β,IL-1β)、肿瘤坏死因子α(Tumor necrosis factorα,TNF-α)表达的影响。方法:随机选取2014年1月至2014年12月收治的80例早产儿,依据随机数字表法将这些患儿分为rh EPO组及非rh EPO组两组,每组40例。给予观察组患儿皮下注射500IU/kgrh EPO,不给予对照组患儿rh EPO治疗。结果:观察组患儿的平均用氧时间和机械通气时间均明显比对照组长(P<0.05),吸氧1h、3d、7d的IL-1β、TNF-α均明显比对照组低(P<0.05)。结论:rh EPO防治早产儿支气管肺发育不良,减少支气管肺发育不良的发生,提高早产儿生存质量、降低围产儿死亡率、降低医疗费用均有重要意义。     

大鼠椎间盘软骨终板退变与细胞凋亡的形态计量学研究

 目的 观察研究增龄和负重对椎间盘软骨终板（cartilage endplate,CEP）形态与细胞凋亡的影响。方法 通过手术截肢及特殊饲养建立双后肢大鼠模型（n=45）,取同龄正常大鼠作为对照组（n=40）。在3、6、9、12月龄时实验组和对照组分别随机选取8只处死观察,取出L4-5椎间盘及相邻上下椎体组织。椎间盘取材后,行苏木精-伊红染色以及TUNEL染色。计数软骨终板区活细胞以及凋亡细胞数目,并且测量软骨终板厚度,计算软骨终板缺损程度。结果凋亡首先显著出现于软骨终板中,随着年龄的增加凋亡逐渐加剧,并直接导致细胞密度的显著降低。实验组软骨终板内软骨细胞的凋亡率在6月龄时较对照组明显增加,实验组6、9月龄组间比较差异有统计学意义（P<0.05）。相关分析显示,软骨终板活细胞数目与椎间盘软骨终板破损程度具有相关性,相关系数为-0.97（P<0.05）,呈高度相关。实验组的软骨终板结构较对照组发生更严重的退变,软骨终板钙化层明显增厚、非钙化层变薄并出现裂隙。结论除增龄因素外,负重是增加细胞凋亡、加重椎间盘软骨终板破损和退变的重要因素。     

大鼠椎间盘软骨终板软骨细胞体外自然退变模型的建立

目的：建立大鼠椎间盘软骨终板软骨细胞体外自然退变模型，为椎间盘退变的机制研究提供载体。方法：酶消化及自然传代法分离培养大鼠椎间盘软骨终板软骨细胞，观察其形态学变化。采用MTT法测定第Ⅲ代软骨细胞的生长曲线。采用免疫细胞化学法检测其特征性Ⅱ型胶原的表达情况，对该模型进行鉴定。结果：大鼠椎间盘软骨终板软骨细胞表达特征性Ⅱ型胶原。第Ⅲ代细胞培养在生长第13天后，细胞分裂能力明显下降，核仁不清，细胞变形明显，以梭形为主，折、旋光性弱，细胞间隙变大，轮廓增强，胞浆内可见空泡、脂滴；Ⅱ型胶原合成明显下降，细胞增殖率显著降低；呈现自然退变过程。结论：建立椎间盘软骨终板软骨细胞体外自然退变模型，为椎间盘退变机制研究提供较好的细胞学基础。     

阿托伐他汀对大鼠心肌梗死后TNF-α、PDCD5表达的影响

目的:探讨心肌梗死后凋亡基因PDCD5表达的变化及阿托伐他汀对其表达的影响.方法:结扎雄性Wistar大鼠左冠状动脉前降支造成心肌梗死(MI)模型.取大鼠45只,其中30只MI后24 h随机分为MI组(n=15)和阿托伐他汀组(n=15);余15只作为假手术组.阿托伐他汀组术后每d灌胃阿托伐他汀1 mg/kg,余2组灌胃等量生理盐水.6周后检测左心室非梗死区心肌组织中肿瘤坏死因子α(TNF-α)的含量、凋亡基因PDCD5 mRNA及其蛋白产物的表达.结果:6周后MI组、阿托伐他汀组和假手术组存活大鼠分别为10只、11只和14只.MI组非梗死区心肌组织TNF-α含量和PDCD5 mRNA及PDCD5蛋白表达高于假手术组(P均＜0.05);阿托伐他汀组上述指标的表达高于假手术组(P均＜0.05),但均低于MI组(P＜0.05).结论:阿托伐他汀可能通过降低大鼠MI后非梗死区心肌组织TNF-α的含量而降低非梗死区心肌组织中PDCD5 mRNA及其蛋白的表达.     

小鼠放射性肺损伤过程中TGF-β1和TNF-α的表达变化

目的 观察放射前后肺组织中两种炎症细胞因子的表达,明确放射性肺损伤的发生发展机制.方法 35只Balb/c健康雄性小鼠,随机分为照射组(全肺单次照射12 Gy)和对照组.各组于照射后15、30和90 d终止实验.肺组织行组织病理学检查及Masson染色、免疫组织化学粢色观察TGF-β1、TNF-α表达情况.结果 照射组照射野脱毛、皮肤可见湿疹,部分有糜烂.30 d时即出现广泛胶原纤维沉积.照射后肺组织TGF-β1、TNF-α表达强度均较对照组增高,且随时间延长表达增多(P＜0.05).结论 TGF-β1和TNF-α参与了放射性肺损伤的发生发展.     

TNF-α、TNF-β和NF-κBp50在不同类型淋巴瘤的表达及其意义

目的 探讨肿瘤坏死因子α(Tumor necrosis factorα,TNF-α) 、肿瘤坏死因子β(Tumor necrosis factorβ,TNF-β)与核因子κBp50(Nuclear factor of κappa Bp50,NF-κBp50) 在不同类型淋巴瘤中的表达及其意义.方法 收集97例不同类型淋巴瘤患者石蜡组织和5例反应性增生淋巴结组织标本,应用免疫组织化学方法观察组织中TNF-α、TNF-β与NF-κBp50表达情况.结果 TNF-α、TNF-β与NF-κBp50在霍奇金淋巴瘤(HL)和非霍奇金淋巴瘤(NHL)中均有不同程度的表达.TNF-α在淋巴母细胞淋巴瘤(LBL)与周围T细胞淋巴瘤(PTL)、LBL与浆细胞肿瘤(PCN)组间表达差异有统计学意义(P<0.05),其它各亚型组间的差异无统计学意义(P>0.05);TNF-β与NF-κBp50在淋巴瘤各亚型之间的表达差异无统计学意义(P＞0.05);TNF-α表达和淋巴瘤临床病理特征差异均无统计学意义(P＞0.05);TNF-β表达在国际预后指数(IPI)评分的中-高危组高于低危组,组间差异有统计学意义(P＜0.05),其余各组之间的差异无统计学意义(P＞0.05);NF-κBp50表达在汉族和少数民族之间差异有统计学意义(P＜0.05),其余各组之间的差异无统计学意义(P＞0.05);TNF-α、TNF-β及NF-KBp50蛋白表达无相关性(P＞0.05).结论 TNF-α、TNF-β与NF-κBp50在不同类型淋巴瘤组织中均有不同程度的表达,在淋巴瘤的发生、发展中可能起着一定作用;TNF-β表达与IPI评分的中-高危组有关,提示其对淋巴瘤预后判断有一定的参考价值.