环孢霉素A诱导大鼠心肌纤维化和对基质金属蛋白酶及其抑制剂表达的影响

目的:研究环孢霉素A(CsA)诱导的大鼠心肌损伤及心肌纤维化的程度,检测基质金属蛋白酶(MMP) 2和MMP9及其组织抑制物(TIMP) 2和TIMP1表达的变化,为探寻CsA诱导心肌纤维化的发生机制提供理论依据。方法:64只健康雌性6～8周龄Wistar大鼠随机分为4组:对照组、低剂量CsA组、中剂量CsA组和高剂量CsA组,分别腹腔注射生理盐水、5 mg·kg~(-1)·d~(-1)CsA、12. 5 mg·kg~(-1)·d~(-1)CsA和25 mg·kg~(-1)·d~(-1)CsA,分别在第1、2、3周时处死大鼠。利用HE染色观察心肌组织形态结构,Masson染色观察心肌胶原沉积情况,免疫组织化学和Western blot法检测MMP2、MMP9、TIMP2和TIMP1蛋白的表达情况。结果:HE染色可见,随着CsA作用时间的延长和剂量的增加,心肌组织形态结构损伤严重,逐渐出现心肌灶状坏死及纤维化。Masson染色结果亦可见心肌纤维化程度随着时间和剂量的增加逐渐加重。免疫组织化学及Western blot检测结果显示,在CsA导致大鼠心肌纤维化的过程中,同一时点MMP2和TIMP2随CsA剂量增加表达显著增高(P 0. 05)。第1周MMP2高表达,随着时间的延长表达逐渐减低; TIMP2则随时间延长表达逐渐增高(P 0. 05)。与对照组相比MMP9和TIMP1表达则减低。各用药组MMP9第1周低表达,第2周表达增高,第3周表达减低(P 0. 05);同一时点,CsA对于MMP9表达变化的差异无统计学显著性。TIMP1随CsA剂量增加表达增高(P 0. 05)。结论:CsA可引起大鼠心肌损伤及间质纤维化,随着用药时间的延长和剂量的增加,纤维化程度逐渐加重。CsA诱导的大鼠心肌纤维化与MMPs/TIMPs表达的改变及MMPs/TIMPs的失衡有关。     

基质金属蛋白酶MMP—2，MMP—9与肺癌的侵袭和转移

基质金属蛋白酶MMP 2和MMP 9是降解Ⅳ型胶原最主要的酶 ,在肺癌的侵袭转移中起重要作用。MMPs在各型肺癌中的表达均有明显增加 ,MMP 2 ,MMP 9的表达水平与肺癌预后具相关性。目前开发合成的数种MMP抑制剂已进入临床实验阶段     

糖尿病大鼠肾组织中NF-κB和MMP-9及TIMP-1表达关系的研究

目的 :研究糖尿病大鼠肾组织中核因子 κB(NF κB)和基质金属蛋白酶 9(MMP 9)及组织基质蛋白酶抑制因子 1(TIMP 1)表达之间的关系方法 :将 3 0只雄性Wistar大鼠随机分为正常对照组 (C组 )、糖尿病未治疗组 (D组 )和糖尿病苯那普利治疗组 (B组 ) ,每组10只 ,利用链脲佐菌素 (STZ)诱导糖尿病模型 ,应用免疫组化方法研究大鼠肾组织中NF κB、MMP 9和TIMP 1的表达 ,并利用HPIAS 10 0 0型医学彩色图像分析系统进行图像分析。结果 :各组间的差异均有显著性意义 (P <0 .0 1)。NF κB与MMP 9成明显负相关 (r =-0 .882 67,P <0 .0 1) ,NF κB与TIMP 1无明显相关 (r =0 .5 2 981,P >0 .0 5 ) ,NF κB与MMP 9/TIMP 1的比值亦成明显负相关 (r =-0 .8685 0 ,P <0 .0 1)。结论 :NF κB对糖尿病大鼠肾组织中MMP 9的表达起重要作用 ,可能参与了糖尿病肾病的发生和发展     

DDR2与MMP2在酒精性肝病肝窦毛细血管化中的协同表达

目的:探讨盘状区域受体2(DDR2)与基质金属蛋白酶(MMP2)在酒精性肝纤维化大鼠肝窦毛细血管化病理进程中的表达及可能发挥的作用。方法:橄榄油拌平衡饲料喂养大鼠的基础上给予60%(V/V)白酒胃内灌注制备酒精性肝纤维化模型,分别于4周、8周、12周和16周末观察肝组织网状纤维染色、免疫组化染色(Ⅰ、Ⅳ型胶原及层黏连蛋白),荧光定量-PCR和Western blotting检测肝组织DDR2及MMP2基因和蛋白表达并与肝窦毛细血管化各项评价指标进行相关性分析。结果:大鼠白酒灌胃4周出现肝脏脂肪变性,随灌胃时间延长逐渐加重为肝脏坏死、炎症及纤维化。酒精性肝病模型组大鼠DDR2 mRNA和蛋白表达量显著高于对照组,且随造模时间延长表达增加(P0.01)。MMP2 mRNA和蛋白表达自造模4周开始升高,于12周达峰值,造模16周下降,各模型组MMP2 mRNA和蛋白表达较正常对照组明显升高(P0.05)。相关性分析显示DDR2与MMP2、网状纤维、Ⅰ、Ⅳ型胶原及层黏连蛋白表达均呈显著正相关。结论:在酒精性肝病肝窦毛细血管化病程中DDR2表达呈时间依赖性,其可能通过效应蛋白MMP2在肝窦毛细血管化的发生和进展中发挥重要作用。     

螺内脂降低大鼠心肌非梗死区MMP/TIMP基因转录及表达

目的观察螺内脂对大鼠心肌非梗死区组织中MMP/TIMP活性和基因表达的影响,为心肌梗死的防治提供理论依据和新思路。方法建立大鼠药物干预的心肌梗死模型。用HE染色观察心肌梗死,用免疫组化及RT-PCR方法测定非梗死区心肌组织中MMP-2、MMP-9和TIMP-2的活性及表达。结果心肌梗死后48 h心肌梗死组非梗死区MMP-2、MMP-9和TIMP的表达明显升高,至第4周时仍维持在一个较高的水平(P<0.01)。螺内脂干预使MMP-2和MMP-9表达显著回降(P<0.01),而TIMP-2无明显下降。结论螺内酯可以降低大鼠非梗死区组织MMP-2、MMP-9/TIMP-2的活性及转录和表达。     

MMP9、TIMP1及VEGF在子宫内膜异位症患者在位内膜的表达

研究基质金属蛋白酶 9(matrixmetalloproteinase 9,MMP9)及其抑制剂 (tissueinhibitorofmetalloproteinase 1,TIMP1)和血管内皮生长因子 (vascularendothelialgrowthfactor,VEGF)在子宫内膜异位症 (endometriosis,EM)患者的在位内膜中的表达。采用免疫组化SP法分别检测 4 5例EM(研究组 )在位内膜及 32例子宫肌瘤 (对照组 )的在位内膜中MMP9、TIMP1及VEGF的表达。MMP9、TIMP1、MMP9 TIMP1和VEGF在研究组和对照组的表达分别为 0 336 ,0 2 76 ;0 2 5 3,0 2 6 7和 1 2 93,1 0 34;0 372 ,0 2 88。其中MMP9、MMP9 TIMP1和VEGF在研究组中的表达显著高于对照组内膜 (P <0 0 1)。EM患者的在位内膜中MMP9、VEGF高表达可能是EM发生发展的重要原因。诊刮筛选出高MMP9、VEGF表达的在位内膜可望成为预测和诊断EM的方法之一。     

风湿性心脏病心房颤动患者心房组织基质金属蛋白酶表达的研究

目的:检测风湿性心脏病心房颤动(房颤)患者心房组织中基质金属蛋白酶（MMP1，MMP9）及其组织抑制因子（TIMP1）表达的变化及血浆MMP1，MMP9、TIMP1水平的变化，并作相关分析。 方法:56例风湿性心脏病二尖瓣病变患者分为3组，窦性心律组、阵发性房颤组和持续性房颤组，于心脏外科手术时取右心耳组织，采用逆转录-聚合酶链反应（RT-PCR）检测MMP1，MMP9及TIMP1 mRNA的含量，同时取静脉血检测外周血MMP1，MMP9和TIMP1水平。 结果:阵发性房颤组、持续性房颤组MMP9、TIMP1表达显著大于窦性心律组(P<0.05 or P<0.01)，TIMP1/MMP1比值明显升高(P<0.05 or P<0.01)，持续性房颤组TIMP1/MMP1比值明显高于阵发性房颤组(P<0.05 )；阵发性房颤组、持续性房颤组外周血MMP9、TIMP1水平及TIMP1/MMP1明显升高(P<0.05 or P<0.01)，与心肌组织表达水平相一致。相关分析显示，血浆MMP1，MMP9、TIMP1与心肌组织MMP1，MMP9、TIMP1显著正相关（r=0.71, P<0.01），MMP9、TIMP1与房颤时间正相关(r=0.68, P<0.01)。 结论:风湿性心脏病患者心肌组织MMP9、TIMP1表达改变及TIMP1/MMP1比值改变可能是心房纤维化发生的分子机制之一，检测外周血MMP1，MMP9及TIMP1变化可了解其在心肌组织的表达情况。     

microRNA-25 通过HMGB1 途径降低缺氧/ 复氧H9C2 心肌细胞纤维化

目的:探讨microRNA-25(miR-25)对缺氧/复氧诱导的H9C2细胞纤维化的作用及机制。方法:建立miR-25过表达/沉默的H9C2细胞株,行缺氧/复氧损伤处理,Real-time PCR检测miR-25的表达,Western blot检测TIMP2、MMP2、CollagenⅠ、CollagenⅢ、Fibronectin及HMGB1蛋白表达水平。构建转染HMGB1 shRNA的H9C2稳定细胞系,行缺氧/复氧损伤处理,Western blot检测HMGB1、TIMP2、MMP2、CollagenⅠ、CollagenⅢ蛋白表达水平。双荧光素酶试验验证miR-25与HMGB1的靶向关系。结果:miR-25高表达组,HMGB1表达减少,TIMP2、MMP2、CollagenⅠ、CollagenⅢ、Fibronectin蛋白表达减少,细胞纤维化程度降低,与对照组相比,差异具有统计学意义(P0. 01)。转染HMGB1-shRNA组H9C2细胞,缺氧/复氧处理后,HMGB1、TIMP2、MMP2、CollagenⅠ、CollagenⅢ蛋白表达减少,与对照组相比,差异具有统计学意义(P0. 01)。双荧光素报告基因显示,转染miR-25mimic+野生型HMGB1-3'UTR报告基因载体组荧光素酶信号强度明显下降;对照组荧光素酶没有变化,差异具有统计学意义(P0. 05)。结论:miR-25通过靶向调控HMGB1表达降低缺氧/复氧诱导的H9C2细胞纤维化。     

哮喘豚鼠MMP-9、TIMP-1免疫反应的变化及与气道重塑的关系

目的　观察实验性哮喘豚鼠气道平滑肌基质金属蛋白酶 9(MMP 9)及其抑制剂 (TIMP 1)的表达以及气道平滑肌厚度的变化。方法　用免疫组织化学结合显微图像分析测定气道平滑肌MMP 9、TIMP 1免疫反应的变化及气道平滑肌厚度。结果　MMP 9、TIMP 1广泛分布于气道平滑肌。哮喘组MMP 9平均灰度值(10 5 94± 6 0 9)明显低于对照组 (12 0 2 5± 3 6 6 ) (P <0 0 1) ;哮喘组TIMP 1平均灰度值 (99 36± 5 71)明显低于对照组 (12 3 4 5 7) (P <0 0 1) ;哮喘组气道平滑肌厚度 (6 45± 1 83μm2 / μm)明显高于对照组 (3 17± 0 85 )(P <0 0 5 )。结论　MMP 9、TIMP 1可能参与哮喘时气道重塑。     

MMP 2、MMP 9在非小细胞肺癌中的表达及其与临床病理特征的关系

目的 探讨MMP2、MMP9在非小细胞肺癌组织中的表达及其与临床病理特征的关系方法用链菌素生物素蛋白-过氧化物酶免疫组织化学法（SP法）检测83例手术切除，的NSCLC组织及其交界区组织和24例正常肺组织中MMP2、MMP9的表达，分析二者在肿瘤组织中的过表达与NSCLC的临床病理特征的关系，结果 MMP2、MMP9主要表达于肿瘤细胞的胞浆，在癌旁交界区组织也有表达，肿瘤组织的过表达率显著高于交界区（P〈0．005），在正常组织中无过表达；二者的过表达与肿瘤类型、病理分级、性别、年龄、吸烟史无明显关系；MMP2在肿瘤组织的过表达率与淋巴结转移状态及临床分期有关（P〈0．05）．结论 MMP2、MMP9都参与了NSCLC发生发展过程，并且可能对肿瘤的发生发展有促进作用，MMP2与淋巴结转移和临床分期密切相关。     

Expression of MT-1 MMP, MMP2, MMP9 and TIMP2 mRNAs in ductal carcinoma in situ and invasive ductal carcinoma of the breast

We investigated the expression of membrane type-1 (MT1)-MMP, MMP2, MMP9 and TIMP2 mRNAs and their roles in ductal carcinoma in situ (DCIS) and T1 and T2 invasive ductal carcinoma of the breast. We further compared these two types of carcinomas for differences in microvessel density, and expression of angiogenic factors and CD44std. MT1-MMP, MMP2, MMP9 and TIMP2 mRNA were expressed in both DCIS and invasive ductal carcinomas. Expression rates of MT1-MMP, MMP2, MMP9 and TIMP2 mRNAs were not statistically different between DCIS and invasive ductal carcinomas, nor did they differ statistically when grouped by tumor size, histologic grade or nuclear grade of invasive ductal carcinoma. Microvessel density and expression of VEGF and TGF-beta1 were not statistically different between DCIS and invasive ductal carcinoma. CD44std expression was significantly increased in DCIS compared to invasive ductal carcinoma (p < 0.05) and it was also significantly increased in lower clinical stage, histologic grade and nuclear grade of invasive ductal carcinoma (p < 0.05). Axillary node metastasis was significantly correlated with MT1-MMP mRNA, VEGF and TGF-beta1 expression (p < 0.05) and MT1-MMP mRNA was positively correlated with VEGF expression and TIMP2 mRNA (p < 0.05). In summary, patterns of MMP mRNA expression in DCIS and invasive ductal carcinoma suggest that the invasive potential of breast carcinoma is already achieved before morphologically overt invasive growth is observed. As MT1-MMP mRNA expression is significantly correlated with axillary nodal metastasis, it may be useful as a prognostic indicator of invasive ductal carcinoma. Considering the positive correlation of MT1-MMP mRNA and TIMP2mRNA expression, our finding supports a role for TIMP2 in tumor growth, as well as the utility of CD44std as a prognostic indicator of breast cancer.     

葛根素保护大鼠颈椎间盘纤维环细胞的最佳浓度

背景：葛根素能抑制椎间盘纤维环细胞凋亡,在一定程度上延缓椎间盘退变。 目的：观察最佳浓度葛根素对大鼠颈椎间盘纤维环细胞的保护作用。 方法：用不同质量浓度Fas配体(5,20,50 μg/L)诱导大鼠颈椎间盘纤维环细胞凋亡,用流式细胞仪Annexin V–FITC-PI双染法检测纤维环细胞凋亡情况,通过MTT法和流式细胞仪观察不同质量浓度葛根素(0.01,0.1,1 g/L)对纤维环细胞的保护作用。 结果与结论：5 μg/L Fas配体诱导的纤维环细胞存活率及早期凋亡率与胎牛血清对照组比较差异无显著性意义(P > 0.05),20 μg/L及50 μg/L Fas配体组纤维环细胞存活率及早期凋亡率高于胎牛血清对照组 (P < 0.01),且随着Fas配体质量浓度的增加,大鼠成熟纤维环细胞活性比例逐渐降低,而早期凋亡率逐渐增加。3种浓度的葛根素作用20 μg/L Fas配体诱导的纤维环细胞,随着葛根素质量浓度的增加,纤维环细胞存活比例逐渐增加,而早期凋亡率逐渐减少(P < 0.01)。结果提示：①Fas配体能够诱导大鼠颈椎间盘纤维环细胞凋亡,增加大鼠成熟颈椎间盘纤维环细胞的凋亡率。②3种质量浓度葛根素均有抑制椎间盘纤维环细胞死亡作用,且呈剂量依赖型。③葛根素对大鼠颈椎间盘纤维环细胞有明显保护作用。     

芍药苷促椎间盘纤维环细胞增殖的作用

背景：芍药在颈椎病治疗中使用频率超过30%,其主要单体之一芍药苷具有抗炎、抗凋亡等作用,芍药苷对椎间盘纤维环细胞是否有保护作用,国内外未见报道。 目的：探讨芍药苷对椎间盘纤维环细胞的增殖和保护作用。 方法：采用酶消化法体外培养椎间盘纤维环细胞。取第3代纤维环细胞,培养过程中加入20 μg/L Fas配体诱导建立纤维环细胞凋亡模型,通过MTT法测定芍药苷干预纤维环细胞的最适宜浓度,Annexin V/FITC-PI法观察芍药苷对椎间盘纤维环细胞的保护作用。 结果与结论：芍药苷浓度20.8和2.08 μmol/L对椎间盘纤维环细胞具有明显的促增殖作用。20 μg/L Fas配体能诱导细胞凋亡,20.8 μmol/L芍药苷对Fas配体诱导椎间盘纤维环细胞有保护作用。     

颈椎不稳对邻近节段椎间盘蛋白多糖及Ⅱ型胶原的影响

背景：颈椎行减压融合内固定术后邻近节段椎间盘加速退变,单个节段不稳是否也会加速邻近节段椎间盘退变还不清楚。 目的：研究颈椎不稳动物模型邻近节段椎间盘形态学、蛋白多糖及Ⅱ型胶原的变化。 方法：16只新西兰大白兔,随机分为实验组及对照组,每组8只。实验组通过颈椎前路穿刺破坏纤维环及抽吸C5/6髓核组织建立兔颈椎不稳动物模型,12周X射线证实退变后处死动物取材,切取C4/5椎间盘组织,从矢状面切开,取其髓核组织10 mg,间苯三酚法测定髓核中蛋白多糖的量,另取椎间盘组织制作石蜡切片后进行苏木精-伊红染色和SABC免疫组化染色观察。 结果与结论：实验组C4/5椎间盘髓核脊索细胞减少,被成纤维细胞样细胞取代,偶见圆形的软骨细胞,且椎间盘纤维环变得粗糙,排列紊乱,玻璃样变性及色素沉着,可见纤维软骨细胞,内外层纤维环之间形成裂隙。髓核中蛋白多糖的含量降低,与对照组相比差异有显著性意义。退变椎间盘髓核及纤维环中Ⅱ型胶原也较对照组明显减少。结果表明颈椎不稳可诱发邻近节段颈椎退变,表现为椎间盘发生形态学变化,蛋白多糖、Ⅱ型胶原含量下降。     

经皮纤维环穿刺与经肌间隙纤维环刀刺建立兔椎间盘退变模型

背景：有研究表明椎间盘退变模型的建立可为椎间盘退变治疗提供实验载体,但目前尚缺乏公认的最佳实验动物模型。 目的：比较经皮纤维环穿刺法和经肌间隙纤维环刀刺法建立兔椎间盘退变模型的差异。 方法：将新西兰大白兔分别采用经皮纤维环穿刺法和经肌间隙纤维环刀刺法建立兔椎间盘退变模型,穿刺后4,8,16周通过磁共振和组织病理学检查观察腰椎间盘髓核变性及组织病理情况。 结果与结论：穿刺后4周,两组兔椎间盘髓核内T2加权像信号降低、变暗,椎间隙高度下降,但经皮纤维环穿刺组T2信号强度评分较经肌间隙纤维环刀刺组低(P < 0.05);穿刺后8周,两组T2信号强度评分均增高,经皮纤维环穿刺组T2信号强度评分较经肌间隙纤维环刀刺组低(P < 0.05);穿刺后16周,两组兔椎间盘髓核内T2信号强度评分达最高且差异无显著性意义,两组椎间隙均明显变窄,椎间盘均亮度变黑,两组差异不明显;经皮纤维环穿刺组手术时间少于经肌间隙纤维环刀刺组(P < 0.05),经肌间隙纤维环刀刺组感染率为5.6%,而经皮纤维环穿刺组无感染。结果证实,经皮纤维环穿刺法建立兔椎间盘退变模型建模时间短,感染率低,效果优于经肌间隙纤维环刀刺法造模。中国组织工程研究杂志出版内容重点：人工关节;骨植入物;脊柱;骨折;内固定;数字化骨科;组织工程全文链接：     

基质金属蛋白酶MMP-2、MMP-9及其抑制因子TIMP-1、TIMP-2在子宫内膜异位症血清中的表达及临床意义

目的探讨基质金属蛋白酶MMP-2、MMP-9及其抑制因子TIMP-1、TIMP-2在子宫内膜异位症（EMs）血清中的表达及临床意义。方法采用双抗体夹心酶联免疫吸附法（ELISA）检测55例EMs患者和30例对照组血清中删P-2,MMP-9、TIMP-1和TIMP-2水平。结果BMs组血清中MMP-2和MMP-9水平显著高于对照组,TIMP-1和TIMP-2水平显著低于时照组（P〈0．05）。Ⅲ-Ⅳ期血清MMP-2和MMP-9水平显著高于Ⅰ-Ⅱ期和对照组,TIMP-1和TIMP-2水平显著低于Ⅰ-Ⅱ期和对照组（P〈0．05）。结论MMP-2、MMP-9与Elds发生和发展相关,TIMP-1、TIMP-2对MMP-2、MMP-9水平调节有重要作用。     

六味地黄丸含药血清对椎间盘Ⅰ型和Ⅱ型胶原表达的影响

背景：胶原纤维是维持椎间盘正常结构与功能的重要物质,椎间盘中胶原的类型及含量的变化,影响整个椎间盘的生理和病理状态,Ⅰ型及Ⅱ型胶原是椎间盘胶原的主要组分。 目的：观察六味地黄丸含药血清对肿瘤坏死因子α致伤兔椎间盘Ⅰ型、Ⅱ型胶原蛋白和基因表达的影响。 方法：将15只新西兰白兔带终板的45个L2-L5椎间盘随机分为空白第1天组、空白第14天组、肿瘤坏死因子α组、中药血清组、肿瘤坏死因子α+中药血清组。后两种培养液中分别含5 μg/L肿瘤坏死因子α和体积分数10%六味地黄丸血清,培养14 d后收集髓核和纤维环观察。 结果与结论：RT-PCR和Western Blot检测结果表明,随着培养时间的延长,纤维环中Ⅰ型胶原及髓核中Ⅱ型胶原蛋白和基因表达明显降低;加入肿瘤坏死因子α可加速这种变化,而含药血清可延缓Ⅰ,Ⅱ型胶原蛋白和基因表达变化。提示六味地黄丸可通过稳定Ⅰ,Ⅱ型胶原蛋白和基因表达,对椎间盘细胞外基质具有保护作用。     

Matrix metalloproteinase-26, a novel MMP, is constitutively expressed in the human intervertebral disc in vivo and in vitro

Matrix metalloproteinase (MMP) regulation and expression is important in the aging/degenerating human intervertebral disc. MMP-26 (also known as matrilysin-2 or endometase) is a newly discovered MMP which degrades type IV collagen, fibronectin, fibrinogen, vitronectin, denatured collagen types I-IV, insulin-like growth factor binding protein 1, and activated pro-MMP-9. Our objective here was to determine if it is present in human disc tissue and cultured disc cells. Immunohistochemistry and microarray gene expression analyses were used to evaluate the presence of MMP-26 in human disc tissue from healthy and degenerated discs. Immunohistochemistry was also applied to human annulus cells cultured in a collagen sponge. Cellular and matrix localization of MMP-26 was identified in the outer and inner annulus and in the nucleus pulposus. Fewer cells showed localization in the inner vs. outer annulus, and localization was sparse in the nucleus. During in vitro culture of annulus cells, MMP-26 was also expressed. Molecular analyses showed significant downregulation of expression of MMP-26 (p=0.03), and significant 9.8-fold upregulation of TGF-beta (p=0.01) in more degenerated discs vs. healthier discs. Findings document the first identification of MMP-26 in the disc at the molecular and protein levels. Results point to the potentially important role of MMP-26 in matrix modulation during disc health and degeneration.