DC-CIK细胞辅助治疗黑色素瘤的临床疗效及预后分析

目的回顾性分析树突状细胞(dendritic cell,DC)联合细胞因子诱导的杀伤(cytokine-induced killer,CIK)细胞治疗50例黑色素瘤患者的临床疗效和安全性,并对影响DC-CIK治疗黑色素瘤患者预后的危险因素进行分析,为临床研究提供依据。方法采集2011年10月至2017年10月解放军第81医院肿瘤生物治疗中心收治的50例黑色素瘤患者的外周血单个核细胞(peripheral blood mononuclear cell,PBMC),经实验室体外诱导培养DC和CIK细胞,DC通过多肽组合致敏后与CIK细胞回输给患者,观察DC-CIK细胞治疗黑色素瘤患者的临床疗效和安全性。结果 50例黑色素瘤患者经DC-CIK细胞免疫治疗后,1年生存率为67%,2年生存率为58%,3年生存率为52%,5年生存率为41%,中位总生存期(overall survival,OS)为28个月,中位无进展生存期(progress free survival,PFS)为23个月。细胞治疗后患者外周血CD4^+CD25+Treg细胞比例显著下降(P=0.026 3),CD3+细胞比例明显上升(P=0.012 3),CD3+CD4^+、CD3+CD8+细胞比例及CD4^+/CD8+比值无显著变化(P>0.05)。单因素分析显示KPS评分、细胞治疗疗程、TNM分期、是否发生远处转移、是否发生淋巴结转移以及血清LDH水平为DC-CIK辅助治疗黑色素瘤预后的影响因素(P<0.05);多因素分析显示年龄、血清LDH水平与DC-CIK辅助治疗黑色素瘤患者的预后相关(P<0.05)。结论DC-CIK细胞治疗可以延长黑色素瘤术后患者的生存期,改善生活质量,是一种有效的辅助治疗方式,无严重不良反应,安全可行。     

具有透明细胞乳头状肾细胞癌形态特征的透明细胞性肾细胞癌的临床病理特征

目的探讨具有透明细胞乳头状肾细胞癌形态特征的透明细胞性肾细胞癌(clear cell papillary renal cell carcinoma-like clear cell renal carcinoma, CCPRCC-like CCRCC)的临床和病理特征, 旨在提高对该类肿瘤的认识。方法回顾性分析浙江大学医学院附属第一医院诊断的3例CCPRCC-like CCRCC的临床资料、组织学形态及免疫表型, 随访患者预后并复习相关文献。结果男性2例, 女性1例, 平均年龄43岁。肿块最大径9 cm。镜下观察3例病例均包含透明细胞乳头状肾细胞癌样(CCPRCC-like)及透明细胞性肾细胞癌样(CCRCC-like)两种区域, 前者在整个瘤体所占比例为20%～90%。CCPRCC-like区域含有囊、乳头、腺管状结构。细胞核远离基底膜, 细胞核WHO/国际泌尿病理协会(ISUP)分级1级。在CCPRCC-like区域, 细胞角蛋白(CK)7表达范围10%～80%, 中等及以上强度表达。CD10表达均为100%, 主要为顶端胞膜表达。在CCRCC-like区域, 1例CK7阴性, 其余...     

树突状细胞疫苗的研究进展

树突状细胞(dendritic cell,DC)是体内最强大的抗原呈递细胞(antigen presenting cell,APC),可在体内外向T细胞提呈肿瘤细胞的抗原,并诱发细胞毒性T淋巴细胞(CTL)反应,发挥抗肿瘤作用。在体内外用现代分子生物学技术,将肿瘤细胞、裂解的肿瘤细胞成分或肿瘤细胞的凋亡产物、肿瘤mRNA或DNA等修饰DC制成瘤苗,或者提取肿瘤患者DC中的Dexosomes制成疫苗等基于DCs的免疫疗法,为肿瘤患者的治疗开辟了一种新的途径,具有极其广阔的前景。     

透明细胞（管状）乳头状肾细胞癌临床病理学分析

目的：探讨透明细胞（管状）乳头状肾细胞癌（clear cell tubulopapillary renal cell carcinoma,CCTPRCC）临床病理学特征。方法：复习2012年至2014年肾细胞癌病理学切片,筛选CCTP-RCC病例。观察CCTP-RCC巨检及镜检特征,行免疫组化染色以及分子遗传学检测。结果：肾细胞癌中CCTP-RCC占2.0%（4/201）。肿瘤平均直径2.8 cm（范围1.2~4.5 cm）。囊性、乳头状、管状以及实性生长方式出现频率分别是100%（4/4）、100%（4/4）、100%（4/4）以及75%（3/4）。4例（100%）细胞轻度异型性。Fuhrman细胞核分级2级3例（75%）,1级1例（25%）。细胞核远离基底膜的细胞占17.5%（范围10%~20%）,其他位置占82.5%（范围80%~90%）。4例（100%）见平滑肌组织,3例（75%）见发育不全血管。3例（75%）T1a,1例（25%）T1b,所有病例均为I期肿瘤。免疫组化CK7 4例（100%）弥漫强阳性;CD10 3例（75%）阴性反应,1例（25%）局灶弱阳性。分子遗传学4例FISH检测17号染色体为二倍体。平均随访时间15.5（3~23）个月,所有病例没有局部复发、淋巴结转移以及远处转移。结论：CCTP-RCC是一种少见的RCC亚型;病理诊断应结合生长方式、细胞学以及间质表现三方面综合分析;典型免疫表型是CK7弥漫强阳性,CD10阴性或局灶阳性。     

子宫血管周上皮样细胞肿瘤3例临床病理分析

目的探讨子宫血管周上皮样细胞肿瘤(perivascular epithelioid cell tumor,PEComa)的临床病理特征、诊断及鉴别诊断等。方法采用免疫组化EnVision两步法对3例子宫PEComa进行检测,并复习相关文献。结果3例肿瘤由梭形细胞和上皮样细胞构成,胞质透明至嗜酸性,间质血管丰富,其中1例肿瘤细胞异型性显著,并见出血、坏死。免疫表型:3例HMB-45阳性,2例SMA、Caldesmon阳性,Melan-A、TFE-3、desmin、CD10、CD117和S-100蛋白均阴性,Ki-67增殖指数5%~30%。随访4~55个月,患者均存活。结论子宫PEComa是一种少见的间叶源性肿瘤,结合组织学形态及免疫表型可辅助诊断。     

肾脏肉瘤样肾细胞癌伴透明细胞肾细胞癌1例并文献复习

目的探讨肉瘤样肾细胞癌(sarcomatoid renal cell carcinoma, SRCC)的临床病理学特征。方法回顾性分析1例同侧肾脏SRCC伴透明细胞肾细胞癌(clear cell renal cell carcinoma, CCRCC)的临床表现、病理学及免疫表型特征,并复习相关文献。结果患者女性,65岁。因3天前无明显诱因出现肉眼全程血尿入院,术后病理学诊断为肾脏SRCC伴CCRCC,镜下见SRCC肿瘤含大量梭形细胞,呈束状、编织状排列,瘤细胞多形性明显,胞质丰富淡染,少量红染,核呈粗颗粒状,略呈空泡状,核分裂象多见,可见少量透明细胞,还可见异型性明显的瘤巨细胞,间质可见玻璃样变,血管丰富。免疫表型:CK、vimentin和CA9均阳性,GATA-3、SMMHC、HMB-45、Melan-A、TFE-3和CD34均阴性,Ki-67增殖指数40%～50%。结论同侧肾脏SRCC伴CCRCC病例尚未见报道,需与肾脏其他肿瘤鉴别;手术切除及术后放、化疗效果不佳,预后差。     

细胞毒性T细胞、巨噬细胞和调节性T细胞在复发性宫颈癌患者中的免疫特征分析

目的探讨毒性T细胞(CTL)、巨噬细胞(TAMs)和调节性T细胞(Tregs)在复发性宫颈癌患者中的免疫特征。方法收集复发性宫颈癌细胞及癌旁细胞,利用白细胞分化抗原8(CD8)、簇分化抗原68(CD68)、叉头翼状螺旋转录因子(FoxP3)分别表示CTL、TAMs和Tregs在复发性宫颈癌中的免疫特性,程序性细胞死亡蛋白1(PD-1)和程序性死亡配体1(PD-L1)表示癌细胞自身免疫,通过多重免疫荧光板检测细胞中CD8~+、CD68~+、FoxP3~+表达量,RNA免疫共沉淀法分析其在复发性宫颈癌细胞中的免疫特性。结果在肿瘤及肿周组织中CD8~+、CD68~+、FoxP3~+表达均较高,但肿周组织中FoxP3~+更高;高表达的FoxP3~+与CD8~+、CD68~+有显著相关性,可促进CD8~+、CD68~+凋亡而上调PD-L1、PD1表达。结论 Tregs可对肿瘤组织中的CTL和TAM进行调节,可提高宫颈癌细胞的免疫应答。     

梭形细胞淋巴瘤

梭形细胞淋巴瘤是一种具显著梭形细胞特征的罕见的弥漫性大B细胞淋巴瘤（diffuse large B—cell lymphoma,DLBCL）形态学类型。形态学高度提示非淋巴起源的梭形细胞肿瘤、包括软组织肉瘤、梭形细胞癌,梭形细胞黑色素瘤和树突状细胞肿瘤。为了进一步认识梭形细胞淋巴瘤及提高诊断率,作者对5例梭形细胞淋巴瘤的临床病理学、免疫表型、免疫基因型进行了分析。5例中女性4例,男性1例,年龄21—71岁,患者一般状况较好,但有4例肿瘤分期已为Ⅳ期。病变均累及结外,常见于阴道,3例淋巴结同时受累。血清LDH只有1例升高。患者均接受6个疗程的足量化疗,2例还进行了放疗,随访4—57个月患者均完全缓解。     

胰腺转移性透明细胞性肾细胞癌6例并文献复习

目的探讨胰腺转移性透明细胞性肾细胞癌(clear cell renal cell carcinoma,CCRCC)的临床病理学特征、诊断、鉴别诊断。方法分析6例胰腺转移性CCRCC的临床病理特征并复习相关文献。结果 6例胰腺转移性CCRCC中男性2例,女性4例;发病年龄61~79岁,中位年龄68.8岁;肿瘤位于胰头1例,胰体尾5例;转移病变距肾癌切除术后时间1~10年不等,平均6.2年。术前患者均表现为胰腺占位,无特异性临床表现。术前影像学示3例胰腺单发占位,3例胰腺多发占位,其中1例伴肝转移。6例患者均行胰腺肿瘤根治切除手术,常规病理检查示肿瘤边界清楚,直径1.3~4 cm不等。形态学观察大部分肿瘤组织呈巢状、腺泡状、乳头状排列,肿瘤细胞圆形、卵圆形,核偏小居中,核仁隐约可见;胞质丰富,胞质透明,部分嗜酸性,间质血窦丰富。免疫表型:ABC、CD10、Pax-8、CA9、CAM5.2、CK8/18、EMA、vimentin均阳性,CA-199、CgA、TFE-3均阴性,Ki-67增殖指数2%~50%。结合既往肾癌病史,均诊断为胰腺转移性CCRCC。3例患者分别于胰腺肿瘤根治切除后1、6、17个月死亡;其余3例术后随访9、15、23个月均存活,未见肿瘤复发和转移。结论胰腺转移性CCRCC临床表现无特异性,术前诊断困难。既往病史对诊断有提示作用,最终确诊仍依赖术后病理诊断,手术完整切除为最佳治疗方案。     

肿瘤抗原特异性T细胞受体改造的T细胞研究现状及应用前景

近年来,肿瘤免疫治疗在临床取得了令人振奋的疗效,给肿瘤治疗带来了新的希望。T细胞受体改造的T细胞(T cell receptor engineered T cells,TCR-T)过继疗法是将肿瘤抗原特异性TCR基因导入患者T细胞中,在体外扩增后回输到患者体内进行靶向抗肿瘤治疗的技术。一些临床试验已经证实了该疗法具有一定的可行性和发展潜力。随着基因测序和基因编辑等技术的发展,TCR-T细胞疗法也在抗肿瘤治疗中取得了一些新的进展。本文将对TCR-T细胞免疫治疗的研究现状、进展、临床试验效果及存在的问题和发展前景进行综述。     

树突状细胞分化发育及功能的表观遗传学调控机制的研究进展

树突状细胞（DCs）是体内功能最强的专职抗原提呈细胞,具有摄取、加工、处理和呈递抗原以及激活初始T淋巴细胞的功能。近年来研究发现,DNA甲基化、组蛋白修饰、染色质重塑、基因组印记以及非编码RNA等表观遗传学修饰能调控相关基因的表达,同时树突状细胞的分化发育及功能也受到表观遗传学调控。研究从DNA甲基化修饰、组蛋白修饰和非编码RNA,了解近年来很有必要树突状细胞的分化发育及功能的表观遗传学调控机制很有意义。     

透明细胞肾细胞癌组织中DNMT3B异构体表达及其整体甲基化的分析

目的检测透明细胞肾细胞癌组织中DNA甲基转移酶3B(DNA methyltransferase 3B,DNMT3B)异构体表达及其整体甲基化的变化,探讨这些变化与透明细胞肾细胞癌的关系。方法选取15例透明细胞肾细胞癌及其癌旁组织,应用Real-time PCR技术检测DNMT1、DNMT3A、DNMT3B与DNMT3B六种主要异构体的mRNA表达,应用Western blot法检验DNMT3B4蛋白表达;应用联合亚硫酸氢钠的限制性内切酶分析法(COBRA)分析重复序列Alu和LINE-1的甲基化水平。结果透明细胞肾细胞癌组织中DNMT3B4 mRNA和蛋白表达水平比癌旁组织高;重复序列Alu和LINE-1的甲基化水平在透明细胞肾细胞癌组织中比癌旁组织低。结论 DNMT3B4表达增加可能与整体甲基化降低及透明细胞肾细胞癌的发生有密切关系。     

The epigenetics of adult (somatic) stem cells

While genetic studies have provided a wealth of information about health and disease, there is a growing awareness that individual characteristics are also determined by factors other than genetic sequences. These "epigenetic" changes broadly encompass the influence of the environment on gene regulation and expression and in a more narrow sense, describe the mechanisms controlling DNA methylation, histone modification and genetic imprinting. In this review, we focus on the epigenetic mechanisms that regulate adult (somatic) stem cell differentiation, beginning with the metabolic pathways and factors regulating chromatin structure and DNA methylation and the molecular biological tools that are currently available to study these processes. The role of these epigenetic mechanisms in manipulating adult stem cells is followed by a discussion of the challenges and opportunities facing this emerging field.     

DNA甲基化和组蛋白乙酰化与胃癌的研究进展

胃癌是我国最常见的恶性肿瘤，但其具体发病机制还不是很清楚。表遗传学改变，如DNA甲基化和组蛋白修饰改变可以调节基因的表达，在肿瘤的发生和发展中可能起关键作用。近年来一些胃癌相关基因的DNA甲基化和组蛋白乙酰化改变已经得到证实，这些基因改变涉及细胞凋亡、细胞周期阻滞、分化和增殖等。     

Epigenetic regulation of B cell fate and function during an immune response

The humoral immune response requires coordination of molecular programs to mediate differentiation into unique B cell subsets that help clear the infection and form immune memory. Epigenetic modifications are crucial for ensuring that the appropriate genes are transcribed or repressed during B cell differentiation. Recent studies have illuminated the changes in DNA methylation and histone post‐translational modifications that accompany the formation of germinal center and antibody‐secreting cells during an immune response. In particular, the B cell subset‐specific expression and function of DNA methyltransferases and histone‐modifying complexes that mediate epigenome changes have begun to be unravelled. This review will discuss the recent advances in this field, as well as highlight critical questions about the relationship between epigenetic regulation and B cell fate and function that are yet to be answered.     

DNA methylation is required for the control of stem cell differentiation in the small intestine

The mammalian intestinal epithelium has a unique organization in which crypts harboring stem cells produce progenitors and finally clonal populations of differentiated cells. Remarkably, the epithelium is replaced every 3–5 d throughout adult life. Disrupted maintenance of the intricate balance of proliferation and differentiation leads to loss of epithelial integrity or barrier function or to cancer. There is a tight correlation between the epigenetic status of genes and expression changes during differentiation; however, the mechanism of how changes in DNA methylation direct gene expression and the progression from stem cells to their differentiated descendants is unclear. Using conditional gene ablation of the maintenance methyltransferase Dnmt1, we demonstrate that reducing DNA methylation causes intestinal crypt expansion in vivo. Determination of the base-resolution DNA methylome in intestinal stem cells and their differentiated descendants shows that DNA methylation is dynamic at enhancers, which are often associated with genes important for both stem cell maintenance and differentiation. We establish that the loss of DNA methylation at intestinal stem cell gene enhancers causes inappropriate gene expression and delayed differentiation.     

DNA 修复基因与肾透明细胞癌相关性的研究进展

肾细胞癌 (renal cell carcinoma, RCC) 深刻且广泛地影响全人类, 肾透明细胞癌 ( clear cell renal cell carcinoma, ccRCC) 是其最主要病理亚型。 在过去 30 年, 肾细胞癌的生物分子机制被不断挖掘, 随 着 DNA 修复途径及相关基因研究深入, 逐渐发现了他们之间的联系。 细胞总是暴露在各种损伤因素下, 导 致基因组损伤, 若 DNA 修复系统功能缺陷, 导致基因组不稳定, 最终细胞凋亡或转变为癌细胞。 DNA 修 复基因 (DNA repair gene, DRG) 与 ccRCC 在易感性, 预后及治疗方面具有显著的生物学相关性, 为进一 步探索 ccRCC 与 DNA 损伤修复之间的分子机制, 确定 ccRCC 新的分子标志物, 寻找合适免疫抑制物治疗 靶点奠定了一定的基础。     

小鼠不同细胞间表观遗传修饰的变化对Pdx-1基因转录表达的影响

目的:通过比较小鼠不同细胞类型之间Pdx-1基因转录起始区的表观遗传修饰差异,探讨表观遗传修饰对Pdx-1基因转录表达的作用。方法:采用免疫共沉淀-实时定量PCR法检测小鼠胚胎干细胞(mES)、小鼠成纤维细胞株NIH3T3细胞和小鼠β细胞株NIT-1细胞Pdx-1和MLH1基因转录起始区DNA甲基化和组蛋白修饰(H3K4m3、H3K9m3和H3乙酰化)的状况。同时采用实时定量RT-PCR检测上述3种细胞各基因mRNA表达水平。分析基因的DNA甲基化水平、H3K4m3、H3K9m3和H3乙酰化修饰与基因表达之间的相互关系。结果:(1)以mES细胞为对照,NIT-1细胞的Pdx-1基因转录起始区呈低DNA甲基化和高H3K4m3修饰(P0.05),NIH3T3细胞的Pdx-1基因的转录起始区的DNA甲基化、H3乙酰化、H3K4m3和H3K9m3修饰水平明显增高(P0.05);(2)Pdx-1基因仅在NIT-1细胞表达,其表达与DNA甲基化存在等级负相关(r=-0.802,P0.01),与H3K4m3修饰存在直线相关(r=0.997,P0.01),与H3K9m3修饰存在等级负相关(r=-0.879,P0.01);(3)管家基因MLH1的表达与所检测的表观遗传修饰无相关性。结论:DNA甲基化、H3K9m3与H3K4m3修饰能相互协调,共同调控Pdx-1基因的表达,对胚胎干细胞向β细胞分化具有重要意义。