小鼠乳腺癌生长与肺转移关系研究

目的：小鼠转移性乳腺癌的发展与肺转移的关系。方法：应用流式细胞仪（Flow cytometry,FCM)动态检测小鼠移植性乳腺癌细胞DNA 数（DNA index,DI),S期细胞百分率（S-phase fraction,SPF),DNA倍体，并分析上述3种指标与移植天数及肺转移的关系。结果：（1）SPF随移植天数增加而减少，二者间呈负的直线关系（r=-0.611,P=0.014)。（2）肺转移前后DI有显著性差异，肺转移前DI高于肺转移后DI。（3）小鼠移植瘤的DI与移植在数间无直线关系，但存在一个趋势即自移植后第10日起DI于上升趋势直至第36天，而后逐渐下降至实验结束。（4）肺转移前后SPF无显著性差异。（5）DNA倍体在肺转移前多表现为二倍体，在肺转移后表现为异倍体，后期又表现为二倍体。结论：用流式细胞仪分析小鼠移植性乳腺癌生长与肺转移的关系对临床研究有重要的意义。     

桔梗联合阿霉素治疗乳腺癌肺转移小鼠的药代动力学研究

目的:观察桔梗联合阿霉素对乳腺癌肺转移小鼠心脏功能及体内药代动力学的影响,探讨桔梗联合阿霉素治疗乳腺癌肺转移的作用机制。方法:建立乳腺癌肺转移小鼠模型。取模型小鼠100只,随机分为阿霉素组和阿霉素+桔梗组,每组各50只。从肿瘤接种第15天起,阿霉素+桔梗组小鼠灌胃给予1 g·kg~(-1)·d~(-1)桔梗醇提物溶液,阿霉素组小鼠灌胃给予等体积纯水,连续14 d。分别于接种第21天和第28天,两组小鼠均腹腔注射10 mg·kg~(-1)·d~(-1)阿霉素。末次给药后,采用小动物超声成像系统检测各组小鼠的心脏结构和功能参数;于0、0.083、0.5、1、2、4、6、12、24、36 h,随机选取每组5只小鼠,采集血浆及心脏、肺脏、肿瘤组织样本,LC-MS/MS检测不同时间点小鼠血浆及组织样本中阿霉素的浓度,并计算药动学参数。结果:①与阿霉素组相比,阿霉素+桔梗组小鼠的心脏超声图像波起伏增大,左心室射血分数(LVEF)和左心室短轴缩短率(LVFS)升高,其中LVEF增幅为40%。②阿霉素的体内代谢呈快速吸收与分布、缓慢消除的特点,符合非房室开放模型。与阿霉素组相比,阿霉素+桔梗组给药后0.5、6、24 h的血浆阿霉素浓度显著升高(P0.05,P0.01)。两组主要药动学参数比较,差异均无统计学意义(P0.05)。与阿霉素组相比,阿霉素+桔梗组的药物-时间曲线下面积(AUC_(0-t))增加30%,峰浓度(C_(max))升高10%,清除率(CL)降低20%。③与阿霉素组相比,阿霉素+桔梗组给药后1、2、24 h的心脏阿霉素浓度显著降低(P0.05,P0.01),给药后0.5、12 h的肺脏阿霉素浓度显著升高(P0.05),给药后0.083 h肿瘤组织阿霉素浓度显著降低(P0.05)。阿霉素在心脏组织的达峰时间延迟,在肺脏组织的达峰时间提前。结论:桔梗与阿霉素联合应用可在一定程度上提升乳腺癌肺转移小鼠LVEF和LVFS水平,增强心脏泵血功能。桔梗能促进阿霉素在肺部的聚集,降低其在心脏的分布,进而发挥增效减毒的作用。     

小鼠乳腺癌细胞系高肺转移亚系（Ca761－P93）的筛选及其生物学特性

本文在原有工作的基础上，对具有血道与淋巴道双向转移特性的小鼠乳腺癌Ｃａ７６１－８６细胞系进行了高转移潜能癌细胞亚系的筛选，使其自发肺转移率由未筛选时的２０％稳定地提高到１００％，定名为Ｃａ７６１－Ｐ９３，并对其生物学特性进行了研究，为肿瘤血道转移的实验研究提供了一个较好的高肺转移模型。     

转录因子HOXA5在乳腺癌细胞中的下游信号通路研究

目的:探究转录因子HOXA5在乳腺癌进展中的作用。方法:构建过表达HOXA5的稳定转染BT549和SUM159细胞系,在稳转BT549细胞系中利用Transwell检测细胞的转移能力;Western blotting检测上皮-间质转化(EMT)相关蛋白表达水平的变化;平板克隆实验检测细胞的增殖能力;转录组测序技术(RNA-seq)进一步分析HOXA5的调控基因,利用软件Cluster 3.0,treeview和DAVID生物信息数据库(DAVID Bioinformatics Resources)以及Enrichr分析KEGG信号通路,绘制热图(heatmap)。结果:BT549细胞系中,稳定转染HOXA5后的实验组细胞迁移能力显著降低(P<0.001),且上皮标志物E-cadherin蛋白表达水平显著上调,间质标志物N-cadherin,Twist1,Slug蛋白表达水平显著下调;平板克隆结果表明,实验组形成的克隆数目明显减少(P<0.05),克隆大小明显降低。结论:HOXA5通过促进细胞由间质向上皮转化,抑制乳腺癌细胞迁移,并且抑制细胞增殖;HOXA5通过调节糖脂代谢途径调节癌细胞增殖,并且还通过调节细胞运动和粘附相关的基因抑制肿瘤细胞的迁移,通过肿瘤坏死因子(TNF)信号通路发挥抗肿瘤作用。总之,转录因子HOXA5对乳腺癌的发展和恶化起着显著的抑制作用。     

EMT与骨肉瘤转移相关性的研究进展

上皮-间质转化(EMT)是指上皮细胞转化为间充质细胞的过程,EMT可增强肿瘤细胞的侵袭和转移能力。既往研究发现,EMT可以通过影响多种基因及通路来影响多种肿瘤的侵袭和转移,除此之外,EMT也会与细胞周期中的某些酶具有一定的相关性。骨肉瘤细胞作为骨肿瘤中转移性较强的一种,其转移性与EMT的关系尚未明确。该文旨在阐明EMT与骨肉瘤细胞转移性的相互关系,希望可以为抑制骨肉瘤转移提供新的思路。     

不同性别PyMT自发性乳腺癌小鼠成瘤特点和不同时间肺转移观察

[目的]研究不同性别自发性乳腺癌小鼠乳腺肿瘤病毒启动子(mouse mammary tumor virus, MMTV)控制下表达多瘤中间T抗原(polyoma middle T-antigen, Py MT)的转基因小鼠的致瘤特性,再以雌性小鼠为观察对象进一步研究血常规指标变化及肺转移情况等。[方法]准备同为8周龄的Py MT雌性小鼠和Py MT雄性小鼠,观察比较雌性与雄性小鼠肿瘤发病时间、生存时间与生存率;另取同为8周龄的雌性Py MT和雌性FVB小鼠,观察8周后取血进行血常规检测,并通过病理切片观察小鼠12周龄及16周龄时肺组织的病理变化。[结果]每周观测小鼠的形态学特征可发现雌鼠第8周可扪及肿瘤,而雄鼠则在第18周可扪及肿瘤;雌鼠最长生存时间是19周,雄鼠则为46周,即雌性小鼠肿瘤发病时间早于雄性小鼠,生存时间明显短于雄性小鼠。血常规指标检测显示,雌性Py MT小鼠白细胞及亚群(除单核外)数量明显高于FVB小鼠(P0.05,P0.001);雌性Py MT小鼠在12周龄开始出现肺转移,肺部大量炎症细胞浸润,16周时肺组织伊红染色法(hematoxylin-eosin staining,HE)染色发现明显的肺转移,出现弥漫性分布、大小不等、质实、染色深的癌巢,细胞间推挤或重叠,细胞大小形态不同。[结论] MMTV-PyMT自发性乳腺癌小鼠雌鼠发病比雄鼠早,生存时间短,具有实验周期短、便于观察肿瘤发生的优势,12周龄开始出现肺转移,16周龄肺转移明显,是适合用于筛选抑制肿瘤细胞浸润、转移等药物的乳腺癌动物模型。本实验还通过血常规结果、肺转移情况数据为实验动物性别的选择提供参考。     

人工牛黄对小鼠乳腺癌肺转移的影响

目的 研究人工牛黄单用或与环磷酰胺合用对小鼠乳腺癌肺转移的影响。方法 采用BALB/c小鼠乳腺癌细胞系4T1,制备稳定表达荧光素酶基因的小鼠乳腺癌细胞系4T1-Luc,每只小鼠尾iv 2×10⁵ 4T1-Luc细胞,制备小鼠乳腺癌肺转移模型。注射后将小鼠随机分为模型组、环磷酰胺组、人工牛黄组、人工牛黄与环磷酰胺联合用药组,每组9只。人工牛黄组每天ig人工牛黄120 mg/kg 1次,连续给药4周;环磷酰胺组每天ip环磷酰胺30 mg/kg 1次,连续给药1周;每组选取3只小鼠监测肿瘤转移情况。4周后将小鼠断颈处死,肺脏经Bowin氏液固定,计数肺部转移瘤数目;HE染色观察肺内转移灶大小。结果 与模型组相比,肿瘤细胞接种21 d后,人工牛黄与环磷酰胺联合用药组小鼠肺部发光强度降低,但差异不显著;接种肿瘤细胞28 d后,人工牛黄组、人工牛黄与环磷酰胺联合用药组肺部转移瘤数目均显著减少（P＜0.05、0.01）,且联合用药组小鼠肺部转移灶数目明显少于模型组。结论 人工牛黄具有抑制小鼠乳腺癌细胞肺转移的潜在作用,并与环磷酰胺有一定协同作用。     

rhIL-11通过激活JAK/STAT3/HIF-1α/EMT通路促进肺腺癌A549细胞转移机制

【摘要】 目的 探讨重组人白细胞介素11（rhIL-11）通过激活JAK/STAT3/HIF-1α/EMT通路促进肺腺癌A549细胞侵袭转移的机制。方法 将人肺腺癌A549细胞分为rhIL-11 0μg/L组（对照组）、rhIL-11 10μg/L组、rhIL-11 40μg/L组、rhIL-11 80μg/L组、rhIL-11 0μg/L+AG490（JAK抑制剂）组、rhIL-11 10μg/L+AG490组、rhIL-11 40μg/L+AG490组和rhIL-11 80μg/L+AG490组共8组,采用划痕试验和Transwell侵袭试验了解rhIL-11对细胞迁移和侵袭能力的影响。用qRT PCR和Western Blot法检测肿瘤细胞中STAT3、HIF-1α、Twist和E Cadherin等基因的mRNA和蛋白表达。 结果 rhIL-11促进肺癌A549细胞迁移和侵袭能力增强,且随着rhIL-11浓度的增高而增强,各组间比较,差异均有统计学意义(P＜0.05)。与对照组比较,rhIL-11 80μg/L组的STAT3、HIF-1α和Twist等基因的mRNA和蛋白表达量均明显增加（P＜0.05）,而E Cadherin基因的mRNA和蛋白表达量均明显减低（P＜0.05）。与rhIL-11 80μg/L 组比较,rhIL-11 80μg/L+AG490组的STAT3、HIF 1α和Twist的mRNA和蛋白表达均显著降低（P＜0.01）。结论 rhIL-11促进肺癌A549细胞侵袭转移,其机制可能是通过激活JAK/STAT3/HIF-1α/EMT信号通路促进转移。     

TGF-β、内质网应激cross-talk在肺癌细胞上皮间质转化机制中的作用

目的:探讨转移生长因子β(TGF-β)和内质网应激(ER stress)cross-talk在肺癌细胞上皮间质转化(EMT)中的关系.方法:采用TGF-β1(0、2.5、5、10 ng/mL)作用肺癌细胞A549,观察A549细胞EMT发生情况;另将细胞A549分为对照组、TGF-β1组(10 ng/mL)、4-PBA...     

乳腺癌肺转移的X线诊断问题

乳腺癌是妇女最常见的恶性肿瘤之一，发病率目前已占女性恶性肿瘤的第二位。患者的生存期决定于是否发生远处转移。其重要性在于乳癌的转移或复发为晚期病变，危害甚至可超过原发癌。文献报道15％～20％的患者术后虽无局部复发，但由于远处转移而死亡。乳癌常发生淋巴转移及血行转移，后者为病人致死的主要原因。     

男性乳腺癌肺转移3例报告

男性乳腺癌临床上少见，在男性恶性肿瘤中所占比例极低，临床上虽与女性乳腺癌有相似之处，但预后较女性差。现将近年来收治的3例男性乳腺癌肺转移患者临床资料结合有关文献分析报告如下。     

IL-33通过TGF-β1/Smad3信号通路调控CES诱导细胞上皮-间质转化的机制研究

目的 探讨IL-33在烟草提取物(CSE)诱导细胞上皮-间质转化(EMT)形成过程中的作用机制。方法 将人支气管上皮细胞(16HBE)分为对照组、CSE组、CSE+Anti-IL-33组、CSE+IL-33组,按照实验分组分别给予PBS、5%CSE、5%CSE+Anti-IL-33(3μg/mL)、5%CSE+IL-33(40 ng/mL)刺激72 h。免疫荧光检测细胞E-钙黏蛋白(E-cadherin)、波形蛋白(Vimentin)荧光强度,Western blot检测细胞E-cadherin、Vimentin、肿瘤发生抑制蛋白2(ST2)、转化生长因子-β1(TGF-β1)、母亲信号蛋白同源物(Smad3)、磷酸化Smad3(p-Smad3)蛋白表达。结果 与对照组比较,CSE暴露后干预各组细胞E-cadherin蛋白表达降低,Vimentin、ST2、TGF-β1、p-Smad3蛋白表达升高,差异有统计学意义(P<0.05)。与CSE组比较,CSE+Anti-IL-33组E-cadherin蛋白表达升高,Vimentin、ST2、TGF-β1、p-Smad3蛋白表达降低,C...     

TM4 SF1对乳腺癌MDA-MB-231细胞侵袭转移及EMT的影响

目的:探讨四次跨膜蛋白1(TM4SF1)在乳腺癌细胞侵袭转移中的作用和可能机制.方法:合成靶向TM4SF1的siRNA并转染MDA-MB-231细胞(TM4SF1 siRNA组),以转染阴性对照siRNA细胞和未转染细胞为对照.用CCK-8实验、Transwell实验检测3组细胞增殖和侵袭转移能力;采用Western ...     

哨兵淋巴结活检在判断乳腺癌腋窝淋巴结转移中的临床意义

目的：研究哨兵淋巴结（sentinel lymph node,SLN)活检术（SLNbiopsy,SLNB)在判断乳腺癌腋窝淋巴结转移中的可行性及准确性,以指导cN0期乳腺癌淋巴结清扫范围。方法：本组选择临床检测腋窝淋巴结阴性的原发性乳腺癌患者64例,术中在原发肿瘤周围注射美蓝进行腋窝前哨淋巴结定位及前哨淋巴结活检,随后行腋窝淋巴结清扫（axillary lymph node dissection,ALND)。术后对全部淋巴结行常规病理检查。结果：64例患者有53例检测到前哨淋巴结,成功率82.8%,53例检测到前哨淋巴结中49例准确地判断了腋窝淋巴结转移状况（92.5%)。假阴性率13.8%,敏感性86.2%,特异性100%,阳性预测值100%,阴性预测值85.7%。结论：SLNB基本能准确地判断乳腺癌腋窝淋巴结转移状况。故能指导cN0期乳腺癌腋窝淋巴结清扫范围。     

LPA在小鼠矽肺模型的表达及其对小鼠肺上皮细胞EMT影响

目的 探究溶血磷脂酸(LPA)在小鼠矽肺模型中的表达及其对小鼠肺上皮(MLE-12)细胞上皮-间质转化(EMT)的影响。方法 20只C57BL/6雄性小鼠随机分为对照组和模型组,对照组每天给予0.9%氯化钠溶液,模型组采用鼻腔滴注100 mg/L二氧化硅(SiO₂)悬浊液50μl,连续7 d,在第28天时处死,取部分肺组织,免疫组化观察溶血磷脂酸1型受体(LPAR1)的表达,Western blot检测平滑机动蛋白α(α-SMA)、Ⅰ型胶原(COLⅠ)和LPAR1的蛋白表达;细胞增殖实验检测SiO₂对MLE-12细胞的增殖能力;细胞划痕实验检测SiO₂对MLE-12细胞的迁移能力;将MLE-12细胞分为对照组、SiO₂刺激组和抑制剂组,Western blot检测LPAR1和EMT相关蛋白的表达水平。结果 Western blot检测显示模型组小鼠肺组织内α-SMA和COLⅠ表达增高,模型建立成功;免疫组化显示在模型组小鼠气管支气管周围上皮细胞内LPAR1表达阳性,呈现亮棕色;Western blo...     

瘦素激活PI3K/Akt信号通路 分泌白介素8促进乳腺癌MCF-7细胞上皮间质转化

目的 探讨瘦素(Leptin)对人乳腺癌MCF-7细胞上皮间质转化(EMT)过程的影响,并探讨其机制.方法 免疫荧光法检测MCF-7细胞Leptin受体(Ob-R)的表达;前期实验分为PBS组和Leptin组,显微镜检查Leptin对MCF-7细胞形态的影响;Western blot法检测Leptin对MCF-7细胞E...     

外源性TGF-β1诱导人乳腺癌MCF-7细胞的乙醛脱氢酶1 mRNA及蛋白表达

 目的 本研究旨在探讨外源性TGF β1诱导人乳腺癌MCF 7细胞对乙醛脱氢酶1(aldehyde dehydrogenase 1,ALDH1)mRNA及蛋白表达的影响。方法 用不同浓度(1、5 ng/mL)的TGF β1诱导体外培养的MCF 7细胞48 h后,RT PCR 检测ALDH1 mRNA的表达变化,Western blot检测ALDH1蛋白的表达变化。结果 TGF β1(1、5 ng/mL)诱导的MCF 7细胞的ALDH1 mRNA及蛋白表达均高于未诱导的MCF 7亲本细胞,差异有统计学意义(P均<0.001);高浓度(5 ng/mL)TGF β1诱导的MCF 7细胞的ALDH1 mRNA及蛋白表达均高于低浓度(1 ng/mL)TGF β1诱导的MCF 7细胞,差异有统计学意义(P均<0.001)。结论 外源性TGF β1可诱导人乳腺癌MCF 7细胞上调ALDH1 mRNA及蛋白的表达,可能诱导ALDH1+乳腺癌肿瘤干细胞(cancer stem cell,CSC)的转化,并有一定的浓度依赖性。     

乳腺癌中ZNF217通过激活上皮间质转化通路分子对骨转移的促进作用

目的:ZNF217是否通过激活上皮间质转化(EMT)的分子,参与促进恶性肿瘤细胞的迁徙,导致骨转移。方法:培养不同生物学行为的SUM-159和MDA-MB231乳腺癌细胞,以及移植瘤小鼠。检测ZNF217过表达与EMT相关基因(Snail1和Twist)表达的关系,探索ZNF217过表达癌细胞骨转移的发生率,随访49例Ⅳ期(或复发)乳腺癌中发生骨转移患者,进一步验证ZNF217过表达与骨转移的关系。结果:乳腺癌SUM-159细胞较MDA-MB231细胞的ZNF217表达水平高,并对阿霉素耐药,且高表达ZNF217的SUM-159侵袭性更高。SUM-159和MDA-MB231移植瘤小鼠中,前者的骨转移发生率更高,骨转移组织检测显示ZNF217过表达,而且EMT相关基因表达(Snail1和Twist)也存在明显上调。随访乳腺癌患者中,ZNF217过表达患者骨转移发生率更高(31%vs 18%,χ2=4. 3,P=0. 038),而且生存时间更短,无进展生存时间(PFS)为10. 7个月(9. 5～11. 8月),ZNF217低表达患者PFS为12. 7个月(11. 7～13. 6月)(Log Rank=4. 8,P=0. 029)。结论:ZNF217可能通过促进EMT通路相关基因的激活,增加细胞迁徙能力,导致乳腺癌骨转移,可能是预测乳腺癌患者骨转移和预后的生物标志物。