基于多指标成分含量与抗氧化活性的葛根类药材质量评价研究

目的通过测定葛根类药材中3′-羟基葛根素、葛根素、大豆苷、大豆苷元、染料木苷、染料木素6种成分含量,结合抗氧化活性评价,综合评价葛根类药材质量。方法采用UPLC-DAD法测定样品的主要成分含量,Agi Lent Zorbax SB-C18(5 mm×2.1 mm,1.8μm),以乙腈-0.1%乙酸水溶液作为流动相洗脱,柱温30℃,体积流量0.4 mL/min;采用紫外分光光度法,以DPPH清除活性进行抗氧化活性评价;以样品中3′-羟基葛根素、葛根素、大豆苷、大豆苷元、染料木苷、染料木素6种成分含量,结合其半数抑制浓度(IC_(50)),进行7个指标的综合加权评分,并进行聚类分析。结果粉葛以8、9、50、51号样品综合加权评分较高,质量较好,产自四川简阳、江油地区;19、20、29~31号人工种植峨眉葛样品质量较差;葛根以33~37、65~69号样品综合加权评分较高,质量较好,产自平武、北川、青川地区。结论 UPLC波长切换技术多成分同时测定方法操作简单、简便快捷、重复性好,专属性强;综合加权评价法能够较全面地分析药材质量,为葛根类药材质量综合评价提供参考依据。     

星点设计效应面法优化染料木苷的酶解工艺

目的: 优选染料木苷的酶解工艺。 方法: 利用超微粉碎技术过筛制备不同粒径的染料木苷原料,采用纤维素酶将其水解,制备染料木素。以染料木素转化率为指标,通过单因素试验考察粉酶解时间、温度、粒径及pH对酶解工艺的影响,响应面法优化染料木苷超微粉酶解制备染料木素的工艺。 结果: 染料木苷超微粉酶解反应最佳条件为反应介质pH 5.5乙酸-乙酸钠缓冲液,温度49 ℃,反应时间11 h,酶与底物比1:1。转化率(96.47±1.12)%,比普通粉染料木苷转化率高了1.84倍。 结论: 采用纤维素酶水解染料木苷超微粉制备染料木素的方法简单、酶解时间显著缩短,适用于规模化生产。     

葛根药材HPLC指纹图谱与6种成分含量测定研究

目的 建立葛根Pueraria lobate药材HPLC指纹图谱，并测定不同产地葛根中6种成分(3’-羟基葛根素、葛根素、3’-甲氧基葛根素、葛根素芹菜糖苷、大豆苷、大豆苷元)的含量，为葛根优质药材产地与质量控制提供参考。方法 采用HPLC法，葛根药材30%乙醇提取液的分析采用Hypersil BDS C₁₈色谱柱(250 mm×4.6 mm,5μm);0.1%甲酸水-乙腈为流动相，梯度洗脱；体积流量1.0 mL/min；检测波长250 nm；柱温25℃。建立32批葛根药材指纹图谱，并测定不同产地葛根药材6种成分的含量。结果 建立了葛根药材HPLC指纹图谱，共提取出10个共有峰，指认6个共有峰；建立了含量测定方法，并对不同产地来源的32批葛根药材中6种成分含量测定，不同产地葛根质量对比综合评分结果显示河南最高，其次为陕西。结论 建立了葛根HPLC指纹图谱方法，通过对比，各样品与对照图谱相似度均大于0.9，为葛根道地药材质量标准提供整体质量控制依据。结合产地调研信息，可将葛根优质原料药材产地优选为陕西、河南秦岭山脉。     

HPLC测定脑得生固体分散体胶囊中葛根异黄酮类成分的含量

目的:建立脑得生固体分散体胶囊中葛根异黄酮类成分(葛根素、大豆苷、大豆苷元、染料木素)的含量测定方法。方法:采用高效液相色谱法,Hyspersil ODS-2色谱柱(5μm,250 mm×4.6 mm),柱温25℃,流动相甲醇-水系统梯度洗脱,流速0.8 mL·min~(-1),检测波长250 nm。结果:葛根素在0.540 8~3.244 8μg(r=0.999 9)范围,大豆苷在0.130 0~0.780 0μg(r=0.999 9)范围,大豆苷元在0.073 2~0.439 2μg(r=0.999 9)范围,染料木素在0.044 8~0.268 8μg(r=0.999 9)范围均呈良好的线性关系;平均回收率分别为99.08%,98.10%,97.91%,99.26%;RSD分别为1.67%,1.57%,2.43%,2.92%。结论:所建立方法简便、准确、重复性好,可有效控制该制剂质量。     

六经头痛片HPLC指纹图谱建立及多指标成分定量测定研究

目的建立六经头痛片(LTT)HPLC指纹图谱,并采用波长切换技术同时定量测定3′-羟基葛根素、葛根素、大豆苷、特女贞苷和大豆苷元,为评价LTT质量提供依据。方法采用HPLC法,以Diamonsil C_(18)(250 mm×4.6 mm,5μm)为色谱柱,乙腈-0.1%磷酸水为流动相,分别建立LTT高极性和低极性部分指纹图谱,并采用波长切换技术同时测定LTT中3′-羟基葛根素、葛根素、大豆苷、特女贞苷和大豆苷元5种指标性成分量。结果分别建立了11批LTT高、低极性部分指纹图谱,其相似度均大于0.90;低极性指纹谱确定了16个共有峰,对其中12个共有峰进行了归属,11、12、13号峰来源于白芷,1、2、3、7号峰来源于葛根,8号峰来源于女贞子,5、6号峰来源于川芎,15号峰来源于藁本,4号峰为川芎和藁本的共有峰,对其中7个共有峰经对照品指认,分别为葛根素(1号峰)、3′-甲氧基葛根素(2号峰)、大豆苷(3号峰)、阿魏酸(4号峰)、大豆苷元(7号峰)、欧前胡素(11号峰)和异欧前胡素(13号峰);高极性指纹图谱确定了10个共有峰,其中2~9号峰来源于葛根,1、10号峰来源于女贞子,对其中5个共有峰经对照品指认,分别为3′-羟基葛根素(2号峰)、葛根素(3号峰)、3′-甲氧基葛根素(4号峰)、大豆苷(7号峰)和特女贞苷(10号峰)。多成分定量测定中,3′-羟基葛根素在71.60~716.00 ng(r=0.999 1)、葛根素在407.78~4 077.80 ng(r=0.999 4)、大豆苷在90.72~907.20 ng(r=0.999 9)、特女贞苷在95.80~958.00 ng(r=0.999 1)、大豆苷元在21.98~219.80 ng(r=0.999 9)线性关系良好,平均加样回收率和相应的RSD分别为101.1%、1.38%,97.8%、0.72%,99.1%、0.75%,97.8%、2.75%,98.7%、0.70%;10批样品中3′-羟基葛根素量为3.08~3.84 mg/m L、葛根素17.71~21.24 mg/m L、大豆苷3.51~4.71 mg/m L、特女贞苷1.40~5.69 mg/m L、大豆苷元0.66~0.86 mg/m L。结论该法稳定可靠、重复性好,通过HPLC指纹图谱结合多指标定量测定方法较全面地反映了LTT内在质量,为其质量控制提供了可靠的科学依据。     

RP-HPLC法测定大豆提取物中大豆苷元、染料木素、大豆苷、染料木苷的含量

目的：建立ＲＰ－ＨＰＬＣ法分离检测大豆提取物大豆苷元,染料木素、大豆苷、染料木苷４成分含量的方法,方法：用ＺorbaxSB-C18色谱柱,以甲醇－乙腈－０．１％,磷酸（３０：８：６２）和甲醇－乙腈－０．１％磷酸（１６：２４：６０）为流动相分别测定大豆苷元,染料木素和大豆苷、染料木苷、检测波长为２５４nm.结果：大豆苷元、染料木素、大豆苷、染料木苷４成分的平均回 分别为９８．７％,９９．５％,９８．４％,９８．６５,ＲＳＤ分别为１．４％,０．９％,０．９％,１．７％（n=４）。结论方法简便、准确、重复性好。     

基于“自洽调节”的葛根异黄酮类成分对葛根素溶解性及渗透性影响研究

目的 基于中药整体观,以葛根Puerariae Lobatae Radix自身作为整体,考察葛根异黄酮类成分对葛根素溶解度及渗透性的调节作用,探讨单味中药所含成分发挥作用时的“自洽性”。方法 选取葛根中3种高含量黄酮类成分3''-羟基葛根素、大豆苷元和染料木苷,设计人工多成分环境,采用平衡溶解度的研究方法考察pH 7.4磷酸盐缓冲液中多成分环境下葛根素溶解度的变化;采用在体单向肠灌流模型考察葛根异黄酮类成分对葛根素肠吸收的调节作用。结果 实验结果表明,不同成分背景、不同成分组合及其不同比例的3''-羟基葛根素、大豆苷元、大豆苷和染料木苷对葛根素溶解度与渗透性均有一定的影响。采用递进式进行2成分及3成分背景的溶解度研究,表明葛根素溶解度和渗透性变化均存在“叠加性”和“饱和性”的特点,溶解性方面：以葛根自身成分为整体,在水溶液体系中各异黄酮类成分对葛根素溶解度提高了42.60%,在pH 7.4缓冲液体系中提高了18.62%。渗透性方面：葛根素的肠渗透性具有“叠加效应”。以葛根自身成分为整体,主要异黄酮类成分3''-羟基葛根素、染料木苷及大豆苷元对葛根素的肠渗透系数表观渗透系数（apparent permeability coefficients,P_app）、肠吸收速率常数（absorptive promoter,K_a）、肠吸收分数（intestinal absorption fraction,F_a）分别提高220%、236%、213%,即对葛根素的肠渗透性提升了约220%。结论 以上研究表明,葛根异黄酮类成分在人体作用时可能存在“叠加效应”,葛根素在葛根自身多组分环境中具有部分“自洽性”,从而改善了葛根素生物利用度。     

黄豆苷元、染料木素对葛根素小肠吸收影响

目的 通过黄豆苷元、染料木素对葛根素小肠吸收影响,研究中药葛根成分间的相互作用.方法 利用雄性SD大鼠小肠作为透析膜,采用扩散池法研究观察葛根素小肠吸收行为以及表观渗透系数.以及黄豆苷元和染料木素存在时对吸收的影响.结果 黄豆苷元、染料木素均能促进葛根素吸收、抑制外排,随着黄豆苷元、染料木素浓度增加效果增强.结论 黄豆苷元、染料木素能够影响葛根素小肠吸收.     

西洋参DNA导入大豆实现遗传转化的研究Ⅱ.导入后代异黄酮类成分的含量测定

用高效液相色谱法测定了西洋参 DNA导入大豆后代的异黄酮类成分、大豆苷 (daidzin)、大豆黄素(daidzein)、染料木苷 (genistin)、染料木素 (genistein)的含量 ,采用 U nisil Q C1 8柱 ,4.6 mm× 2 5 0 m m,流动相乙腈 - 0 .0 0 3mol/L 磷酸氢二钠 (17∶ 83) ,流速 1.0 m L/min,检测波长 2 5 4nm,结果表明 ,4种成分分离效果好 ,成分含量发生了广泛变异 ,从中可筛选出有效成分含量较高的新材料     

HPLC同时测定不同产地葛根中6种主要异黄酮类成分的含量

目的:建立同时测定葛根药材中6种主要异黄酮类成分含量的HPLC方法.方法:采用RP-HPLC法,Kromasil C18(4.6 mm×250 mm,5μm)柱;流动相:甲醇-0.1％枸橼酸溶液,梯度洗脱;流速1.0 mL· min-1,柱温30℃,检测波长250 nm.结果:3’-羟基葛根素、葛根素、大豆苷、染料木苷、芒柄花苷、大豆苷元的线性范围分别为76.2～1 016,65.8 ～1 316,85.6 ～1712,49.98 ～499.8,21.94 ～219.4,48.5 ～485 ng,相关系数(R2)均大于0.999 6,6种成分的平均加样回收率分别为99.73％(RSD 0.6％),100.48％ (RSD 1.11％),100.37％ (RSD 0.79％),100.28％(RSD 1.07％),99.96％ (RSD 1.22％),97.36％(RSD 1.59％).结论:方法简便快速,重复性良好,结果准确可靠,可用于葛根药材中6种主要异黄酮类成分的含量测定.     

基于一测多评法含量测定及薄层鉴别的经典名方竹茹汤颗粒剂的质量评价研究

目的 建立经典名方竹茹汤颗粒（Zhuru Decoction Granules,ZDG）特征图谱及一测多评（quantitative analysis multicomponents by single marker,QAMS）法测定其主要成分，优化薄层色谱条件，建立同时鉴别葛根素和甘草苷的方法。方法优化并确定HPLC最佳色谱条件并建立特征图谱，以葛根素作为参照物，建立葛根素、3′-羟基葛根素、3′-甲氧基葛根素、葛根素芹菜糖苷、大豆苷、甘草苷、甘草酸的QAMS法，建立主要药效成分葛根素及甘草苷同时鉴别的薄层条件。结果 得到15批样品特征图谱与其对照图谱的相似度均大于0.95;15批制剂运用QAMS法和外标法得到的各成分含量无显著性差异，7种成分相对误差均低于5%；通过稳定性考察证明薄层检测条件稳定可行。结论 该方法科学可行，稳定可控，有助于经典名方ZDG质量控制方法的完善和提高，为经典名方的质量控制评价提供参考。     

博落回中1个新的6,6a-断苯菲啶生物碱

研究博落回的化学成分。采用硅胶柱色谱以及制备液相色谱法进行分离纯化,并根据波谱数据鉴定化合物结构。从博落回叶95%的乙醇提取物中分离鉴定1个生物碱,鉴定为6'-羟基-2',3'-二甲氧基山椒酰胺(1)。化合物1为新化合物。     

基于斑马鱼模型和分子对接技术的心可舒片促血管生成活性成分研究

目的 基于斑马鱼模型和分子对接技术研究心可舒片的促血管生成活性成分.方法 以人脐静脉内皮细胞HUVECs为模型,采用CCK-8与EdU-488细胞增殖检测试剂盒检测细胞活性与增殖能力,采用划痕实验与Transwell实验评价细胞迁移能力,采用成管实验检测各组细胞成管腔能力,评价心可舒片对HUVECs的促血管生成活性.以...     

桂枝茯苓胶囊化学成分研究（VII）

目的 对桂枝茯苓胶囊内容物正丁醇萃取部位进行化学成分研究和活性筛选。方法 采用多种色谱方法进行分离纯化,应用波谱数据解析鉴定化合物结构;对分离得到化合物进行原代小鼠子宫平滑肌细胞的钙离子内流作用的活性筛选。结果 从桂枝茯苓胶囊内容物正丁醇层分离得到5个没食子酰苷类化合物,分别鉴定为3''-O-没食子酰蔗糖苷（1）、4''-O-没食子酰蔗糖苷（2）、6''-O-没食子酰蔗糖苷（3）、1''-O-没食子酰蔗糖苷（4）、1,2,3,4,6-五没食子酰葡萄糖（5）。结论 化合物1～5为首次从该复方中分离得到,其中化合物1为新化合物;化合物1～5均有抑制原代小鼠子宫平滑肌细胞的钙离子内流作用。     

蜈蚣草乙酸乙酯部位化学成分分离鉴定

目的:对蜈蚣草Pteris vittata乙酸乙酯部位进行系统的化学成分研究。方法:蜈蚣草用95%乙醇回流提取3次,提取液减压浓缩成浸膏后分散于水中,然后依次用石油醚、乙酸乙酯和正丁醇进行萃取,回收溶剂后得到其石油醚、乙酸乙酯和正丁醇部位萃取物。对乙酸乙酯部位萃取物综合应用硅胶柱色谱,Sephadex LH-20凝胶柱色谱,ODS柱色谱和重结晶等技术分离纯化,得到单体化合物,并结合理化性质、核磁共振谱、质谱数据和相关文献鉴定单体化合物的结构。结果:从蜈蚣草乙酸乙酯部位萃取物中共分离得到12个化合物,分别鉴定结构为芹菜素(1),木犀草素(2),木犀草素-7,3',4'-三甲醚(3),3'-甲氧基木犀草素(4),7-羟基-8-甲氧基香豆素(5),芹菜素-7-O-β-D-葡萄糖醛酸(6),木犀草素-7-O-β-D-吡喃葡萄糖苷(7),柯伊利素-7-O-β-D-吡喃葡萄糖苷(8),紫云英苷(9),对羟基苯甲酸(10),β-谷甾醇(11),β-胡萝卜苷(12)。结论:化合物2~5和8~12为首次从该植物中分离得到。该化学成分研究为蜈蚣草的临床应用及药理活性研究提供了资料参考。     

昆明山海棠化学成分研究

目的 研究昆明山海棠Tripterygium hypoglaucum根中的化学成分。方法 利用硅胶、Sephadex LH-20柱色谱及半制备HPLC进行分离纯化,采用¹H-NMR、¹³C-NMR、ESI-MS等多种波谱技术鉴定获得的化合物结构。结果 从昆明山海棠根乙醇提取物的二氯甲烷部位分离得到6个化合物,分别鉴定为2-（5'',7''-二甲氧基-2'',2''-二甲基-2H-苯骈吡喃-6''-）-3-甲酰基-5,6-二甲氧基-苯骈呋喃（1）、3（R）-（4'',5''-二羟基）-2'',5,7-三甲氧基-6-（3-甲基-2-丁烯基）-异黄酮（2）、3''-香叶草基-5,7,2'',5''-四羟基异黄酮（3）、β-谷甾醇棕榈酸酯（4）、甘油山嵛酸酯（5）、β-谷甾醇（6）。结论 化合物1为新化合物,命名为毛秔子梢素C;化合物2~5为首次从该植物中分离得到。     

东北岩高兰中查耳酮类化学成分研究

目的研究东北岩高兰Empetrum nigrum var.japonicum全草的查耳酮类化学成分。方法采用硅胶柱色谱和高效液相色谱等方法进行化学成分分离,并经波谱数据分析鉴定化合物的结构。用MTT法测试单体化合物对宫颈癌He La细胞的抑制活性。结果从东北岩高兰甲醇浸泡液正己烷萃取物中分离得到6个化合物,分别鉴定为2′,5′-二羟基-3′-甲氧基-4′,6′-二甲基二氢查耳酮(1)、4′,5′-二羟基-2′-甲氧基-3′,6′-二甲基二氢查耳酮(2)、2′,4′-二羟基二氢查耳酮(3)、2′,4′-二羟基查耳酮(4)、2′-甲氧基-4′-羟基二氢查耳酮(5)、2′,4′,β-三羟基二氢查耳酮(6)。结论化合物1、2为新化合物,命名为岩高兰素A和B,化合物5、6为首次从该植物中分离得到。化合物6具有一定的抗肿瘤活性。