miR-146a通过靶向调控TLR4减轻脊髓缺血再灌注大鼠损伤

目的 检测miR-146a在脊髓缺血再灌注(IR)大鼠脊髓组织的表达情况,探索miR-146a对IR大鼠炎症蛋白表达和神经功能影响的潜在机制.方法 SD大鼠通过主动脉弓夹闭14min建立IR模型,通过鞘内注射miR-146a的mimics质粒构建miR-146a过表达模型,随机分为Sham组(假手术组),IR组(缺血组...     

钙卫蛋白在肾脏缺血再灌注损伤大鼠中的表达及其作用

目的:探讨钙卫蛋白(CALP)在肾脏缺血再灌注损伤(IRI)大鼠中的表达及其在炎症反应中的作用。方法:50只雄性SD大鼠随机分为IRI组和假手术组(sham组),每组25只。各组分别于缺血再灌注后6 h、12h、24 h、48 h和72 h观察肾脏病理改变,检测大鼠血清尿素氮(BUN)和肌酐(SCr)水平,ELISA法检测大鼠血清CALP、肿瘤坏死因子(TNF)-α和白细胞介素(IL)-6的含量,免疫组织化学法和Western blot法分别检测大鼠肾脏CALP、Toll样受体4(TLR4)和NF-κB p65蛋白表达水平。结果:IRI组大鼠肾脏呈现不同程度的肾小管上皮细胞和间质损伤,伴炎细胞浸润。血清BUN、SCr、CALP及促炎细胞因子TNF-α、IL-6的含量在各时点均显著高于sham组(P0.05)。CALP、TLR4和NF-κB p65主要表达于肾小管上皮细胞胞质中,在IRI组呈高表达,在各时点各因子的表达与sham组相比均显著增强(P0.05)。结论:肾脏IRI大鼠的血清CALP、TNF-α和IL-6水平升高,CALP、TLR4和NF-κB p65在肾组织中表达增强。CALP在大鼠肾脏IRI的炎症反应中可能起重要作用。     

Toll样受体4在肺缺血再灌注损伤免疫机制调控中作用

肺缺血再灌注损伤(LIRI)是肺移植术后一种严重威胁生命安全的并发症,并且与随后的闭塞性细支气管炎综合征的发展密切关联.当细胞受损时,其通过Toll样受体家族(TLRs)尤其是Toll样受体4(TLR4)来识别所释放的内源性配体,这一过程即为损伤关联分子模式(DAMPs).研究表明,TLR4在肺缺血再灌注损伤的病理生理过程中担任重要角色.     

TLR4及内源性配体对缺血-再灌注损伤的作用

Toll样受体4(TLR4)在内源性配体参与下介导缺血再灌注损伤,两者的结合对组织损伤和固有免疫应答起重要作用。肝、肾、肺、脑等发生缺血再灌注损伤早期，细胞释放各种内源性配体，被TLR4 识别并结合。Toll样受体4与内源性配体(如HMGB1)的结合可能是缺血再灌注损伤中最主要的炎症应答的触发器，并引起一系列导致炎症和免疫应答的级联反应。阻断两者的结合可能对各种缺血-再灌注损伤引起的炎症反应和细胞损伤有保护作用。     

TLR4在心肌缺血再灌注损伤中作用的研究进展

急性心肌梗死(acute myocardial infarction, AMI)是全球范围内导致高致残率和高死亡率的主要疾病。对于AMI患者,及时、有效的再灌注治疗对减少心肌梗死面积、挽救生命至关重要,目前临床上采用的再灌注治疗方法主要是溶栓治疗和经皮冠状动脉介入治疗(percutaneous coronary intervention, PCI)。但是,心肌再灌注可以导致其缺血再灌注(ischemia/reperfusion, I/R)损伤,包括心肌细胞死亡、梗死面积增大、左室收缩功能障碍等,该损伤的发生机制和治疗策略仍在研究中。越来越多的实验研究表明,固有免疫的成员之一TLR可能通过多条信号通路在I/R损伤中起关键作用。文章主要针对TLR4在心肌I/R损伤中作用的研究进展作一综述。     

Notch通路在大鼠肾脏缺血再灌注损伤TLR4介导的炎症反应中的作用

 目的: 探讨Notch通路对大鼠肾脏缺血再灌注损伤(IRI)中Toll样受体4(TLR4)介导的炎症反应的作用。方法: 雄性SD大鼠75只随机分为假手术组(sham组)、缺血再灌注组(IRI组)和γ-分泌酶抑制剂DAPT干预组(DAPT组)。分别于再灌注6 h、12 h、24 h、48 h、72 h时点观察各组肾脏病理改变,检测血尿素氮(BUN)和血清肌酐(Scr)水平,ELISA检测血清肿瘤坏死因子-α(TNF-α)和白细胞介素-6(IL-6)水平,免疫组化和Western blot分别检测大鼠肾脏Notch1、TLR4和NF-κB p65蛋白表达水平。结果: 在IRI组,呈现不同程度的以肾小管上皮细胞和间质损伤为主的肾脏病理改变,BUN、Scr及血清炎性因子TNF-α、IL-6含量在各时点均显著高于sham组(P<0.05),而在DAPT干预组,在各时点肾脏病理损伤明显减轻,BUN、Scr和血清TNF-α、IL-6水平均显著低于IRI组(P<0.05)。Notch1、TLR4和NF-κB p65主要表达于肾小管上皮细胞胞质中,在sham组仅有微量表达,在IRI组则有高表达,在各时点表达与sham组相比均显著增强(P<0.05),而在DAPT组,各因子的表达水平在各时点均较IRI组显著降低(P<0.05)。结论: 大鼠肾脏IRI出现显著的肾功能及肾脏病理改变,血清炎性因子TNF-α和IL-6水平升高,Notch1、TLR4及NF-κB p65在肾组织中表达增强;而DAPT可通过抑制Notch1活化和TLR4/NF-κB通路,抑制TLR4所介导的炎症反应,从而发挥肾脏保护作用。     

三氯化钆对移植肝缺血再灌注损伤的保护作用

背景：三氯化钆能抑制枯否细胞的活化,降低其吞噬活性,并减少枯否细胞激活后的肿瘤坏死因子α及白细胞介素1 释放,从而减轻肝脏缺血再灌注损伤。 目的：观察三氯化钆对大鼠移植肝缺血再灌注损伤的影响并探讨其作用机制。 方法：供、受体均采用雄性SD大鼠,将实验动物随机分为3组。采用改良连续缝合进行肝上下腔静脉重建的Kamada’s“两袖套法”建立大鼠肝移植模型。①假手术组：不行肝移植,游离肝脏、结扎静脉后关腹,不处理及用药。②生理盐水组：热缺血时间0-5 min,供肝冷保存时间为2 h,移植前连续3 d 经尾静脉向受鼠注射生理盐水,移植后再经尾静脉注射生理盐水1次。③三氯化钆组：热缺血时间为0-5 min,冷保存时间为2 h,移植前连续3 d 经尾静脉向受鼠注射0.5%三氯化钆,移植后再经尾静脉注射0.5%三氯化钆1次。24 h后处死大鼠进行相应指标检测。 结果与结论：与假手术组比较,三氯化钆组、生理盐水组血清丙氨酸转氨酶、谷氨酸转氨酶、碱性磷酸酶、γ-谷氨酰转移酶水平明显升高(P < 0.05);三氯化钆组各指标较生理盐水组有所减轻(P < 0.05)。病理组织学检查发现生理盐水组、三氯化钆组病变范围及缺血再灌注损伤程度均较假手术组明显增加。与生理盐水组比较,三氯化钆组血清白细胞介素1、肿瘤坏死因子α及凋亡指数明显降低(P < 0.05),淤血、空泡变性及坏死Suzuki’s评分均较低(P < 0.05)。提示三氯化钆在一定程度上是通过封闭枯否细胞吞噬并抑制细胞因子的释放实现对移植肝缺血再灌注损伤的保护机制。     

蛇床子素对大鼠肾缺血再灌注损伤的影响

目的 探讨蛇床子素对大鼠肾缺血再灌注损伤、 炎性因子水平、TLR4信号通路的影响.方法 构建肾缺血再灌注大鼠模型并给予蛇床子素干预,观察血流恢复24 h后肾功能变化,HE染色、TUNEL法、ELISA法、 流式细胞法和蛋白免疫印迹法分别检测肾组织病理、 凋亡、 炎性因子和TLR4信号通路蛋白水平.结果 蛇床子素(20、...     

SMAC类似物Birinapant对大鼠肝脏缺血再灌注损伤的保护作用及机制研究

目的:探讨SMAC类似物Birinapant预处理对大鼠肝脏缺血再灌注损伤(I/RI)的保护作用及分子机制。方法:将大鼠分为空白对照组(Blank)、对照组(Control)和Birinapant预处理组(Birinapant)。Blank组不做任何处理,Control组腹腔注射30 mg/kg体重的生理盐水,1 h后构建大鼠肝脏I/RI模型,Birinapant组腹腔注射30 mg/kg体重的Birinapant,1 h后构建大鼠肝脏I/RI模型。各组在模型建立4 h后取下肝脏组织,HE染色检测各组肝脏大体形态及炎症反应;收集大鼠外周血,ELISA检测血清中TNF-α、IL-6及IL-1β炎症因子水平;提取肝脏库普弗细胞(KCs),免疫荧光检测KCs中cIAP1和TRAF3的表达;Western blot检测cIAP1和TRAF3与MAPK信号通路密切相关的JNK、p-JNK、p38及p-p38的蛋白表达。结果:与Control组相比,Birinapant预处理可以显著抑制肝脏I/RI诱导的肝组织损伤和炎症反应;Birinapant预处理也可显著降低血清中TNF-α、IL-6及IL-...     

羰基硫对肢体缺血再灌注致急性肺损伤大鼠模型的作用

BACKGROUND: Previous studies have found that endogenous gaseous signaling molecules such as NO, CO, H₂S and SO₂ play an important role in acute lung injury; there also have other gases participation, such as carbonyl sulfide.     

MicroRNA-146在糖尿病心肌病中的调控作用

目的:探讨微小RNA-146 (miR-146)在糖尿病心肌病(DCM)发病机制中的作用,观察miR-146及其下游靶基因表达水平的变化。方法:60只雄性C57BL/6小鼠随机分为实验(DCM)组和对照(control)组,每组30只,实验组采用低剂量(50 mg/kg链脲佐菌素(STZ)腹腔注射诱导建立糖尿病心肌病模型,对照组给予等量枸橼酸钠缓冲液腹腔注射,建模12周后取心脏做HE和Masson染色观察心脏病理改变,RT-qPCR检测miR-146 a和miR-146b及其下游靶基因白细胞介素-1受体相关激酶1(IRAK1)和TNF受体相关因子6(TRAF6)的mRNA表达,Western blot检测IRAK1和TRAF6的蛋白表达。结果:12周末HE染色显示,DCM组心肌肥大,结构紊乱;Masson染色显示,DCM组心肌内胶原纤维增多;RT-qPCR检测结果显示,DCM组中miR-146a及miR-146b较control组表达明显减少(P 0. 01),IRAK1的mRNA水平明显增高(P 0. 01),而TRAF6的mRNA水平下降(P 0. 01);Western blot检测结果显示DCM组的IRAK1蛋白表达增加,TRAF6的蛋白表达降低(P 0. 01)。结论:miR-146可能通过调节IRAK1介导的炎症反应参与糖尿病心肌损伤的发生发展。     

大鼠肝脏缺血再灌注损伤后水通道蛋白4表达的变化

目的: 通过建立大鼠肝脏缺血再灌注损伤(IRI)模型,观察水通道蛋白 4(AQP4)在肝内胆管细胞的表达变化,并同时检测肝脏功能变化,探讨肝脏IRI 与AQP4表达变化的关系。方法: 建立大鼠肝脏30 min IRI模型。随机将配对动物分为对照和缺血再灌注2 h、1 d、3 d、7 d组,留取血清标本行间接胆红素(IB)、直接胆红素(DB)及丙氨酸氨基转移酶(ALT)指标检测;留取肝脏标本用于HE染色光镜下观察肝脏病理形态学变化、免疫组化染色观察AQP4表达变化, RT-PCR 方法测定 AQP4 mRNA表达变化。结果: (1)肝功能变化:缺血再灌注损伤2 h、1 d、3 d组IB、DB及ALT明显升高,与对照组间比较有显著差异(P<0.05),并于术后第1 d达到最高(P<0.05);以后逐渐降低,术后第7 d恢复正常。(2) 肝脏病理学变化:术后HE染色可见缺血再灌注可造成大鼠肝组织变性、坏死。(3) 免疫组织化学检测肝脏AQP4的变化:缺血再灌注损伤2 h、1 d、3 d组AQP4的表达量较对照组降低(P<0.05),于术后第1 d最低(P<0.05),以后逐渐增高,于术后第7 d恢复正常。(4) 肝脏AQP4 mRNA表达变化:缺血再灌注损伤组2 h、1 d、3 d组AQP4 mRNA表达水平较对照组明显降低(P<0.05),于术后第1 d最低,以后又逐渐升高,于术后第7 d恢复正常。结论: 大鼠肝脏缺血再灌注损伤后可明显引起肝内胆管上皮细胞AQP4的表达降低,术后第1 d最明显,至术后7 d逐渐恢复正常,此种损害与包括胆红素在内的肝功能损害相对应。     

miR-214-5p靶向PAK4对缺血再灌注大鼠的心肌损伤和免疫反应的调节作用

目的:探讨微小RNA-214-5p(miR-214-5p)靶向p21活化蛋白激酶4(PAK4)对缺血再灌注(I/R)大鼠的心肌损伤和免疫反应的作用。方法:将健康雄性SD大鼠随机分为假手术(sham)组、I/R组、Ad-Scramble组和Ad-miR-214组(n=9)。在大鼠左心室前壁6个不同的位点注入腺病毒;4 d后,缝合左前部下行冠状动脉构建I/R模型。RT-qPCR检测miR-214的表达水平,HE染色观察心肌损伤,ELISA检测心肌损伤标志物(CK-MB、Mb和cTnI)和炎症因子(IL-6、IL-1β和TNF-α)的水平,流式细胞术检测心肌细胞凋亡率,试剂盒检测MDA含量和SOD活性,基因软件预测靶基因并通过双萤光素酶报告验证,Western blot检测caspase-3、caspase-9、Bcl-2、Bax、PAK4、p-Akt和p-mTOR表达水平。结果:miR-214在I/R大鼠心肌细胞中低表达(P<0.01);miR-214-5p过表达减轻I/R大鼠心肌损伤程度,下调CK-MB、Mb和cTnI表达,降低心肌细胞凋亡率,上调Bcl-2表达,下调Bax、cas...     

慢性血小板减少性紫癜患者microRNA-146a的表达及其意义

目的 研究microRNA-146a(miR-146a)在慢性免疫性血小板减少性紫癜(immune thrombocytopenic purpura,ITP)患者外周血单个核细胞(PBMC)的表达及其临床意义.方法 28例慢性ITP患者和28例健康对照者,荧光定量PCR(fluorescent quantitative PCR,FQ-PCR)检测PBMC中miR-146a的表达,ELISA检测血清中TNF-α、IL-2、IL-lβ和IFN-γ的表达水平;采用电转染技术将miR-146a前体(mimics)/抑制体(inhibitor)转染至ITP患者PBMC中,CCK-8法检测其对血小板诱导的细胞增殖反应的影响.结果 ITP患者PBMC的miR-146a表达较健康对照组显著降低,且与血小板计数呈正相关,与患者血浆TNF-α、IL-2和IFN-γ浓度呈负相关.转染miR-146a前体至ITP患者PBMC可抑制血小板诱导的IL-2合成以及PBMC增殖,转染miR-146a抑制体则可以促进IL-2的合成以及PBMC的增殖.结论 miR-146a参与了慢性ITP的发病机制,调控IL-2的表达,并介导了ITP患者PBMC的增殖,是慢性ITP潜在的治疗靶点.

Abstract：

Objective To investigate the increased expression of microRNA-146a(miR-146a) in peripheral blood mononuclear cells (PBMC) of patients with chronic immune thrombocytopenic purpura (ITP) and its clinical significance. Methods Twenty-eight patients with chronic ITP and 28 healthy controls matched with age and gender were enrolled in this study. Fluorescent quantitative PCR reaction was used to detect the relative expression of miR-146a in their PBMC. The serum concentration of TNF-α, IL-2,IL-1 β and IFN-γ were measured by ELISA. CCK-8 method was used to detect the proliferation ability of PBMC , which transfected with miR-146a mimics or inhibitor and then stimulated with platelet . Results The relative expression of miR-146a in ITP patients was higher than that of healthy controls. The increased expression of miR-146a was negatively correlated with the serum TNF-α, IL-2 and IFN-γ. The PBMC transfected with miR-146a mimics had reduced expression of IL-2 and proliferation when stimulated with platelet.In contrast, the opposite effect was observed with the miR-146a inhibitors transfection. Conclusion MiR146a was involved in the pathogenesis of chronic ITP by controlling IL-2 production and PBMC proliferation.Thus, it may be a potential therapy target for chronic ITP.     

miR-146a在大鼠神经病理性疼痛模型中的表达及其作用机制

目的 研究miR-146a对神经病理性疼痛的调控机制.方法 将大鼠随机分为:1)na(i)vve组(n=12);2)假手术组(n=12):进行大鼠双侧假手术;3)双侧慢性压迫损伤(bCCI)组(n=12):建立大鼠双侧坐骨神经结扎模型.在建模前1d及后第1、3、7和14天监测机械刺激诱发痛、热刺激诱发痛行为学指标;实时定量PCR法检测背根神经节(L4-L6) miR-146a及TNF-α受体相关因子6(TRAF6)、白介素1受体相关激酶(IRAK1)的mRNA表达水平;Western blot法检测TRAF6及IRAK1蛋白表达.结果 bCCI大鼠双足热刺激诱发痛痛阈、机械刺激诱发痛痛阈较na(i)ve组、假手术组显著降低(P＜0.05).术后第14天bCCI组miR-146a表达水平较na(i)ve组显著下降(P＜0.05).bCCI组TRAF6、IRAK1的mRNA表达水平较na(i)ve组升高(P ＜0.05);TRAF6、IRAKI蛋白表达水平较假手术组和na(i)ve组均显著增加(P＜0.05).结论 神经病理性疼痛大鼠背根神经节miR-146a表达水平下调,miR-146a可能通过过度激活其靶基因TRAF6和IRAK1发挥作用.     

虫草素预处理减轻SD大鼠心肌缺血再灌注损伤

目的:研究大鼠心肌缺血再灌注(IR)损伤中,虫草素(cordycepin,Cordy)能否通过调节微小RNA-455(miR-455)的表达和减少内质网应激(endoplasmic reticulum stress,ERS)引起的凋亡发挥心肌保护作用。方法:体重250~300 g的SD大鼠随机分为3组:对照(control)组,大鼠只进行开胸手术;IR组,大鼠心肌缺血30 min,再灌注120 min;虫草素治疗组(IR+Cordy组):大鼠缺血再灌注前给予虫草素(10 mg/kg)股静脉注射,每天1次,共注射1周。全自动化学分析法检测大鼠血清中乳酸脱氢酶(LDH)和肌酸激酶同工酶MB(CK-MB)活性。TUNEL试剂盒检测心肌内皮细胞(endothelial cells,EC)凋亡率,电镜观察EC超微结构的改变。RT-q PCR法检测心肌组织miR-455及ERS介导的细胞凋亡信号通路的标志物葡萄糖调节蛋白78(glucose-regulated protein 78,Grp78)和caspase-12的mRNA表达。结果:与control组比较,IR组EC的凋亡率明显升高(P0.05);与IR组比较,虫草素组EC的凋亡率明显下降(P0.05)。与control组比较,IR组的EC线粒体肿胀,膜不规整,内皱疏松有空泡,基粒消失,核膜不规整,染色质浓集、边集,核仁消失,甚至出现凋亡小体;IR+Cordy组与IR组比较症状大为改善。与control组比较,IR组心肌组织Grp78和caspase-12的mRNA及miR-455含量均升高(P0.05);与IR组比较,IR+Cordy组Grp78和caspase-12的mRNA及miR-455的含量均降低(P0.05)。结论:虫草素可有效减轻心肌IR后大鼠心肌EC凋亡,降低心肌组织miR-455表达,抑制内质网应激。