枸杞多糖减轻过氧化氢诱导的人内皮样细胞EA.hy926氧化损伤

目的:研究枸杞多糖(LBP)对过氧化氢(H_2O_2)诱导人内皮样细胞EA.hy926氧化损伤的作用及机制。方法:用H_2O_2建立EA.hy926细胞氧化损伤模型,细胞共分为5个组:正常对照(control)组、模型(damage)组(H_2O_2,50 mmol/L)、LBP(100 mg/L)组、抗损伤(anti-damage)组(50 mg/L、100 mg/L和200 mg/L LBP+50 mmol/L H_2O_2)和LY294002(20μmol/L)组。采用CCK-8法检测细胞的活力;用Annexin V/PI双染法流式细胞术检测不同处理后EA.hy926细胞的凋亡;吖啶橙(AO)/溴乙啶(EB)染色法观察细胞凋亡的形态特征;划痕法测定细胞的迁移能力;一氧化氮(NO)试剂盒检测细胞培养上清中NO的水平;用ELISA法测定血管内皮生长因子(VEGF)的水平;Western blot检测cleaved caspase-3、Bax、Bcl-2、内皮型NO合酶(eNOS)、p-eNOS和p-Akt的蛋白水平。结果:量效结果显示浓度为100 mg/L的LBP预处理EA.hy926细胞1 h,然后加入H_2O_2(50 mmol/L)处理24 h对减轻H_2O_2诱导的EA.hy926细胞损伤的作用最显著。与damage组比较,LBP预处理可提高EA.hy926细胞的活力(P0.05),减少细胞凋亡(P0.05),并促进细胞迁移;上清液中VEGF和NO水平升高;Bcl-2/Bax比率明显升高,下调cleaved caspase-3蛋白水平,并上调eNOS和p-eNOS蛋白水平。此外,加入PI3K抑制剂LY294002后,LBP对H_2O_2损伤的EA.hy926细胞的保护作用减弱,表现为NO水平和p-Akt蛋白水平降低。结论:LBP能减轻H_2O_2对EA.hy926细胞的损伤作用,缓解H_2O_2诱导的凋亡,其机制与激活PI3K/Akt/eNOS信号通路密切相关。     

丹参多酚酸盐对过氧化氢诱导人内皮细胞EA.hy926氧化应激损伤的保护作用及机制

目的:探讨丹参多酚酸盐(salvianolate)对过氧化氢诱导人脐静脉内皮细胞EA.hy926氧化损伤的保护作用及机制。方法:体外培养EA.hy926细胞,随机分为:正常对照组、损伤组和抗损伤(丹参多酚酸盐+过氧化氢)组。采用CCK-8法检测细胞活性,Transwell实验检测内皮细胞迁移能力;一氧化氮(nitric oxide,NO)试剂盒和ELISA法分别检测细胞培养液中NO和血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)的水平;流式细胞术检测细胞内超氧化物阴离子水平、线粒体跨膜电位和细胞凋亡情况;采用Western blot法检测caspase-3、cleaved-caspase3、Bcl-2、Bax、NF-κB和p53蛋白表达水平。结果:与损伤组比较,不同剂量的丹参多酚酸盐预处理可提高EA.hy926细胞的活性、降低内皮细胞的凋亡,并促进细胞的迁移(P0.05);细胞上清液中VEGF和NO含量及细胞内线粒体膜电位水平显著升高(P0.05);细胞内ROS水平显著下降;NF-κB、p53、Bax和cleaved caspase-3蛋白水平显著降低(P0.05);Bcl-2蛋白水平显著升高(P0.05)。结论:丹参多酚酸盐能减轻过氧化氢对EA.hy926细胞氧化应激的损伤作用,其机制可能与NF-κB通路的阻滞相关。     

肝X受体对血管内皮细胞EA.hy926内皮素1表达的调节作用

目的 研究肝X受体(liver X receptor,LXR)对血管内皮细胞珠EA.hy926中内皮素1(endo-thelin-1,ET-1)表达的影响,并初步探讨LXR调节ET-1表达的分子机制.方法 在培养的EA.hy926中加入LXR的特异性配体GW3965,作用28 h后收集细胞及培养上清液.细胞经Trizol法提取总RNA,以RT-PCR检测ET-1 mRNA水平的变化,以放射免疫法测定细胞上清液ET-1含量的变化;将克隆有ET-1启动子区的荧光素酶报告基因质粒phET1-Luc(克隆于pGL3-Basic)、pCMX-LXRα、pCMX-RXRα和内参照质粒psv-β-gal共同转染于EA.hy926细胞,经荧光素酶报告基因检测研究LXR对ET-1启动子活性的影响,从而初步了解LXR调节血管内皮细胞ET-1表达的分子机制.结果 LXR特异性配体GW3965能够抑制血管内皮细胞EA.hy926中ET-1的mRNA和蛋白表达水平,并且抑制ET-1启动子的转录活性.结论 活化血管内皮细胞LXR可下调ET-1的表达,且该作用与LXR抑制ET-1基因启动子的活性有关.     

miR-126对EA.hy926细胞血管内皮生长因子表达的调控作用

 目的：探讨miR-126对EA.hy926细胞血管内皮生长因子（VEGF）表达的影响。方法：选用EA.hy926细胞株作为研究对象,采用阳离子介导的转染方式,将miR-126 inhibitor 和miR-126 mimics 进行细胞转染,分析miR-126对血管内皮细胞功能的影响。采用转染negative control作为阴性对照,转染36 h后提取细胞总RNA,利用 real-time PCR和Western blotting分别检测EA.hy926细胞 VEGF  mRNA 和蛋白水平的表达。结果：转染miR-126 inhibitor 50 nmol/L 36 h后,EA.hy926细胞的VEGF mRNA及蛋白水平各组间差异有统计学意义（P<001）,与阴性对照组相比,miR-126 inhibitor 使EA.hy926细胞的VEGF mRNA及蛋白水平显著上调（P<001）;转染miR-126 mimics 50 nmol/L 36 h后,EA.hy926细胞的VEGF mRNA及蛋白水平各组间有显著差异（P<001）,与阴性对照组相比,miR-126 mimics 使EA.hy926细胞的VEGF 在mRNA及蛋白水平显著下调（P<001）。结论：miR-126 能够抑制VEGF的表达,VEGF有可能是其调节的靶基因之一。     

褐藻糖胶对RPMI8226细胞血管生成的影响

 目的: 探讨褐藻糖胶对多发性骨髓瘤RPMI 8226细胞血管生成的影响及可能的作用机制。方法: 体外培养多发性骨髓瘤RPMI 8226细胞及人血管内皮细胞EA.hy 926细胞,采用MTT法检测褐藻糖胶对RPMI 8226细胞活力的影响;流式细胞术检测细胞周期及凋亡率;ELISA法检测褐藻糖胶处理RPMI 8226细胞后的培养液上清中VEGF的含量;小管形成实验观察褐藻糖胶处理RPMI 8226细胞后的培养液上清对EA.hy 926细胞诱导小管形成能力的影响;Western blot检测HIF-1α、VEGF、p-AKT和p-ERK1/2的蛋白水平。结果: 褐藻糖胶对RPMI 8226细胞活力的抑制作用呈浓度及时间依赖性;褐藻糖胶作用RPMI 8226细胞72 h后,细胞周期被阻滞于G₁期,细胞凋亡率呈浓度依赖性明显增高,各组均高于对照组(P<0.05);ELISA法结果显示褐藻糖胶处理72 h后的细胞培养液上清中VEGF的含量明显减少,与对照组相比,处理组上清中VEGF的含量下降(P<0.05);内皮细胞形成小管数目与面积随着褐藻糖胶的浓度升高而减小,100 mg/L 组差异显著(P<0.05);Western blot结果显示HIF-1α、VEGF、p-AKT和p-ERK1/2的蛋白水平与褐藻糖胶浓度呈负相关(P<0.05)。结论: 褐藻糖胶减少骨髓瘤细胞自分泌VEGF,减弱血管内皮细胞形成小管的能力,降低HIF-1α和VEGF的蛋白水平,这可能与抑制AKT和ERK1/2的磷酸化有关。     

肝癌肿瘤微环境对血管内皮细胞增殖及血管生成能力的影响

研究间接共培养条件下肝癌细胞培养基对血管内皮细胞增殖及血管生成能力的影响,初步探讨肿瘤微环境下血管新生的分子机制。体外培养人脐静脉内皮细胞株EA.hy926,与肝癌细胞株HepG2条件培养基进行共培养;四甲基偶氮唑盐(MTT)法检测肝癌细胞条件培养基对血管内皮细胞增殖的影响;血管管腔形成实验检测血管内皮细胞的血管生成能力。Western blot测定肝癌细胞条件培养基对血管内皮EA.hy926细胞血管内皮生长因子(VEGF)及其受体Flk-1表达的影响。结果表明,EA.hy926细胞经HepG2条件培养基处理后,其增殖能力明显增加。接种于Matrigel胶的EA.hy926细胞经HepG2条件培养基刺激后,形成管腔数目增加,成血管能力明显增强;同时,其胞内VEGF及其受体Flk-1的表达呈时间依赖性上调。肿瘤微环境下肝癌细胞作用于血管内皮细胞,可促进血管内皮细胞的增殖并提高其血管生成能力。     

丹参酮Ⅱ A对LPS诱导EA.hy926细胞TLR4和TNF-α的影响

目的:观察丹参酮ⅡA对脂多糖(LPS)诱导人脐静脉内皮细胞EA.hy926炎症反应Toll样受体4(TLR4)和TNFα表达的影响,探讨丹参酮ⅡA抗动脉粥样硬化(AS)的作用机制.方法:体外培养EA.hy926细胞;RT-PCR和免疫细胞化学法检测TLR4 mRNA和蛋白的表达;RT-PCR和ELISA法检测TNF-αmRNA和蛋白的表达.结果:经LPS刺激后TLR4和TNF-α的表达与正常组比较均明显升高(P＜0.05),丹参酮ⅡA组TLR4和TNF-α的表达与刺激组相比明显受抑制(P＜0.05).结论:抑制TLR4和TNF-α的表达是丹参酮ⅡA抗AS作用的可能机制之一.     

Nox1/4抑制剂减轻脂多糖致人脐静脉融合细胞的损伤

目的研究Nox1/4抑制剂对脂多糖致人脐静脉融合细胞EA.hy926损伤的保护作用及相关机制。方法将EA.hy926细胞分为对照组、LPS(脂多糖)组、Nox1/4抑制剂(GKT137831)+LPS组。CCK8法检测细胞活力;试剂盒检测培养液中乳酸脱氢酶(LDH)与一氧化氮(NO)的含量;免疫荧光法检测细胞内活性氧(ROS)的水平;ELISA检测细胞IL-1β、IL-6的分泌情况;Western blot检测细胞内内质网应激标志性蛋白表达水平。结果 LPS组较对照组比较,NO的释放量、ROS生成量以及炎性因子IL-1β和IL-6释放量明显增加(P0.05);使用Nox1/4抑制剂干预后,ROS产生以及NO、IL-1β和IL-6的释放量明显降低(P0.05)。与对照组相比,LPS组细胞内GRP78、p-PERK、ATF6和IREα蛋白表达上调,提示内质网应激被激活;Nox1/4抑制剂干预后,内质网应激标志性蛋白表达下降。结论 Nox1/4抑制剂减轻了LPS诱导的EA.hy926细胞内质网应激损伤。其作用机制可能是通过减少细胞内Nox1/4来源的ROS的生成,抑制内质网应激,进而减轻炎性反应,改善内皮功能。     

苦荞麦总黄酮对软脂酸诱导EA.hy926细胞NO合成的影响

目的:研究苦荞麦总黄酮对软脂酸诱导EA.hy926细胞NO合成的影响。方法:将体外培养的EA.hy926细胞分为正常对照组、软脂酸诱导的胰岛素抵抗细胞模型组、苦荞麦总黄酮组、二甲双胍组。采用硝酸盐还原酶法检测各组细胞上清液中NO含量,逆转录聚合酶链式反应(RT-PCR)及Western blot法检测各组细胞eNOS mRNA和蛋白的表达。结果:胰岛素抵抗细胞模型组细胞上清液NO含量,细胞eNOS mRNA及蛋白表达与正常对照组相比明显下降(P<0.05)。苦荞麦总黄酮组与二甲双胍组细胞上清液NO含量,细胞eNOS mRNA及蛋白表达与模型组相比,明显增多(P<0.05)。苦荞麦总黄酮组和二甲双胍组相比,以上指标均无明显差异(P>0.05)。结论:苦荞麦总黄酮可有效促进软脂酸刺激下血管内皮细胞eNOS mRNA和蛋白的表达,从而增加NO的合成。     

敲低金属蛋白酶组织抑制物1(TIMP-1)抑制TGF-β1诱导的MRC-5人胚肺成纤维细胞增殖和胶原蛋白合成

目的探讨敲低金属蛋白酶组织抑制物1(TIMP-1)对转化生长因子β1(TGF-β1)诱导的MRC-5人胚肺成纤维细胞生长的影响。方法将MRC-5细胞分为空白组、 TGF-β1组、转染阴性对照小干涉RNA的TGF-β1组和转染TIMP-1小干涉RNA(siTIMP-1)的TGF-β1组。噻唑蓝(MTT)法检测细胞活力,流式细胞术检测细胞周期分布, ELISA检测上清液肿瘤坏死因子α(TNF-α)含量, Western blot法检测TIMP-1、α平滑肌肌动蛋白(α-SMA)、 1型胶原蛋白(Col1)和β联蛋白(β-catenin)的蛋白水平。结果转染siTIMP-1组的MRC-5细胞TIMP-1蛋白水平明显降低。与空白组相比, TGF-β1组细胞活力明显升高、 G0/G1期细胞百分比明显降低、 S期和G2/M期细胞百分比明显升高, TNF-α含量明显升高,α-SMA、 Col1和β-catenin的蛋白水平均明显升高。与TGF-β1组相比,敲低TIMP-1水平后,细胞活力明显降低、 G0/G1期细胞百分比明显升高、 S期和G2/M期细胞百分比明显降低, TNF-α含量明显降低,α-SMA、 Col1和β-catenin蛋白表达均明显降低。转染阴性对照小干涉RNA的细胞与TGF-β1组各项指标均无明显差异。结论敲低TIMP-1水平可抑制MRC-5细胞增殖活性、减少胶原蛋白合成及TNF-α释放,可能与抑制Wnt/β-catenin信号通路有关。     

丹参酮IIA通过抑制p38 MAPK通路减轻PM2.5对血管内皮细胞的损伤

 目的: 探讨PM2.5对EA.hy926型人脐静脉内皮细胞损伤的影响及丹参酮ⅡA在这一过程中的作用及机制。方法: 采集广州城区大气PM2.5并以不同质量浓度(0、20、200、400 mg/L)染毒EA.hy926细胞24 h,MTT法测细胞存活率,流式细胞术测细胞凋亡,Western blot法测p-p38 MAPK、Bax和Bcl-2的蛋白水平,ELISA法测白细胞介素-6(IL-6)及肿瘤坏死因子-α(TNF-α)含量,并测定细胞丙二醛(MDA)含量、超氧化物歧化酶(SOD)及乳酸脱氢酶(LDH)活性;分别加入丹参酮ⅡA(5、10、20μ mol/L)和p38 MAPK通路特异性阻滞剂SB20358020μ mol/L检测丹参酮ⅡA的干预作用及机制。结果: 与对照组比较,PM2.5染毒后呈剂量依赖性降低EA.hy926细胞的存活率,上调p-p38 MAPK蛋白水平及Bax/Bcl-2蛋白比率以促进细胞凋亡,诱导分泌IL-6及TNF-α,降低SOD活性,增加MDA含量及LDH活性,差异均有统计学显著性(P<0.05);丹参酮ⅡA呈剂量依赖性增加EA.hy926细胞的存活率,下调p-p38 MAPK蛋白水平及Bax/Bcl-2蛋白比率以抑制细胞凋亡,降低IL-6及TNF-α含量,增加SOD活性,降低MDA含量及LDH活性,差异均有统计学显著性(P<0.05)。结论: 丹参酮ⅡA可通过抑制p38 MAPK通路,减轻PM2.5对EA.hy926细胞的损伤。     

梓醇抑制AGEs诱导的EA.hy926细胞炎症反应及RAGE表达

目的:研究梓醇对晚期糖基化终产物(AGEs)诱导的EA.hy926内皮细胞炎症反应的抑制作用并探讨其可能机制。方法:将常规培养的EA.hy926细胞随机分为对照组、梓醇对照组、AGEs组以及梓醇高剂量(0.5 mmol/L)、中剂量(0.25 mmol/L)和低剂量(0.05 mmol/L)保护组。激光共聚焦显微镜观察细胞内活性氧簇(ROS)的生成;RT-PCR和Western blot检测细胞中单核细胞趋化蛋白1(MCP-1)、肿瘤坏死因子α(TNF-α)、血管细胞黏附分子1(VCAM-1)及晚期糖基化终产物受体(RAGE)的mRNA及蛋白的表达。结果:梓醇保护组ROS生成均明显减少,MCP-1、TNF-α和VCAM-1的mRNA及蛋白表达均显著降低,RAGE蛋白表达明显受抑制,且呈剂量依赖性(P0.05)。结论:梓醇能够有效抑制AGEs诱导的EA.hy926细胞内氧化应激,减轻炎症反应,其机制可能与其降低RAGE表达有关。     

类风湿关节炎滑膜血管内皮细胞中Smoothened的表达及其意义

 目的:初步观察Sonic Hedgehog信号通路分子Smoothened（Smo）在类风湿关节炎（rheumatoid arthritis, RA）滑膜血管内皮细胞的表达及其生物学意义。方法:收集4例病情中度活动的RA患者的滑膜组织,同时收集4例外伤或半月板损伤（无关节炎）者滑膜组织作为对照组,免疫组化检测滑膜组织Smo蛋白表达情况。采用人脐静脉内皮细胞系EA.hy926作为滑膜血管内皮细胞的模型,予不同浓度肿瘤坏死因子α（TNF-α）处理,Western blotting检测Smo蛋白表达;采用RNAi技术转染体外合成的特异性Smo-siRNA,应用Western blotting检测沉默效果;转染siRNA 24 h后,经TNF-α/放线菌素D（actinomycin D, ActD）诱导细胞凋亡,CCK-8法检测细胞存活率,流式细胞术检测细胞凋亡情况。结果:RA患者滑膜组织Smo表达高于对照组,以血管内皮细胞表达尤为明显。EA.hy926细胞经TNF-α刺激后,Smo蛋白表达上调（P<0.05）。RNA干扰EA.hy926细胞Smo表达后,细胞存活率为（24.30±0.45）%,低于阴性对照组的（36.86±0.62）%（P<0.05）,细胞凋亡率为（48.00±1.96）%,高于阴性对照组的（31.70±0.82）%（P<0.05）。结论: Smo可能参与了RA患者滑膜组织血管内皮细胞凋亡的调控。     

调节性T细胞促进球囊损伤颈动脉内皮化的作用及机制

目的 探讨调节性T细胞（Treg细胞）促进球囊损伤颈动脉内皮化的作用及机制。 方法 使用Treg细胞分选试剂盒分选大鼠脾脏Treg细胞;构建大鼠颈动脉损伤模型;模型制作成功后分为对照组（尾静脉注射相同体积的生理盐水）、血管内皮生长因子（VEGF）组（尾静脉注射VEGF, 20 μmol/kg）和Treg细胞组（尾静脉注射1×105个Treg细胞）。HE染色检测内皮化情况;ELISA和免疫组织化学法检测血清中白细胞介素（IL）-10、转化生长因子-β（TGF-β）、IL-1β和肿瘤坏死因子α（TNF-α）的含量;流式细胞术检测单核细胞、T细胞和内皮祖细胞（EPC）的比例。 结果 组织学染色结果显示,对照组未见内皮细胞层的形成,Treg细胞组可见较多内皮细胞覆盖在颈动脉内层;免疫组织化学结果显示,对照组与Treg细胞组IL-10、TGF-β、IL-1β和TNF-α蛋白表达差异均有统计学意义（t=8.252,P<0.01;t=3.254,P<0.05;t=6.237,P<0.01;t=7.529,P<0.01）。ELISA结果显示,对照组IL-10、TGF-β、IL-1β和TNF-α的含量分别为（17.38±2.595）μg/L、（4.750±1.549）μg/L、（11.65±1.908）μg/L和（1.163±0.3333）μg/L;Treg细胞组的含量分别为（58.43±6.060）μg/L、（14.17±2.250）μg/L、（1.550±0.3819）μg/L和（0.2100±0.06938）μg/L,差异有显著性（t=6.170,P<0.01;t=3.558,P<0.01;t=5.191,P<0.01;t=2.800,P<0.05）;流式细胞术的结果显示,对照组CD34+VEGFR-2+EPC比例为（0.2838±0.01975）%,Treg细胞组为（0.5667±0.05993）%,差异有显著性（t=4.483,P<0.01）;IL-10阻断组EPC比例为（0.4807±0.03067）%,相对于Treg细胞组,差异不具有统计学意义（t=1.278,P>0.05）;TGF-β阻断组EPC比例为(0.3082±0.02291)%,相对于Treg细胞组,差异有显著性（t=4.029,P<0.01）。 结论 Treg细胞通过诱导EPC动员,促进球囊损伤颈动脉的快速内皮化。     

磷脂酰肌醇3激酶／蛋白激酶B通路在缺氧血管内皮细胞凋亡中的作用

目的：探讨磷脂酰肌醇3激酶／蛋白激酶B（PI3 K／Akt）通路在缺氧血管内皮细胞凋亡中的作用。方法（1）常规培养人血管内皮细胞株EA．hy926细胞,取部分人血管内皮细胞株EA．hy926按照随机数字表法分为两组：正常对照组：置于气体成分体积分数5％二氧化碳培养箱中常规培养;缺氧组：置于气体成分体积分数1％氧气、5％二氧化碳和94％氮气的三气培养箱中进行缺氧培养。采用蛋白质印迹法检测正常对照组内皮细胞和缺氧处理3、6、24 h的内皮细胞中Akt活化状态（以pAkt／Akt值表示）,流式细胞仪检测细胞凋亡率。（2）另取部分人血管内皮细胞株EA．hy926按照随机数字表法分为4组：正常对照组,缺氧组：培养方法同前,正常对照＋阻断剂组：用含50μmol／L的LY294002（PI3 K／Akt阻断剂）的培养液常规培养内皮细胞;缺氧＋阻断剂组：用含50μmol／L 的LY294002的培养液缺氧处理内皮细胞。均于培养3 h后收集内皮细胞,采用流式细胞仪检测细胞凋亡率。对Akt活化状态与细胞凋亡率行单因素方差分析和LSD-t检验。结果（1）正常对照组细胞和缺氧处理3、6、24 h的内皮细胞pAkt／Akt值分别为0．67、0．79、0．34和0．35;正常内皮细胞和缺氧处理3、6、24 h 的内皮细胞凋亡率分别为（3．11±0．21）％、（4．57±0．85）％、（6．93±0．58）％、（9．96±2．62）％,组间比较差异有统计学意义（F＝8．96,P＝0．030）。与正常对照组细胞比较,缺氧处理3、6 h的内皮细胞凋亡率升高,差异无统计学意义（t＝1．03、2．70,P＝0．360、0．054）;缺氧处理24 h的内皮细胞凋亡率显著升高,差异有统计学意义（t＝4．99,P＝0．008）。（2）正常对照组、正常对照＋阻断剂组、缺氧组、缺氧＋阻断剂组培养3 h后细胞凋亡率为（2．39±0．50）％、（5．77±1．21）％、（3．76±1．05）％     

Expression of VEGF and VEGF-R3 receptor by placental endothelial cells in health and gestosis

We carried out a comparative analysis of changes in VEGF secretion and expression of VEGF-R3 receptor by placental endothelial cells in health and gestosis and of changes in VEGF-R3 expression by EA.hy926 human endothelial cells during culturing with supernatants conditioned by placental explants from women with normal pregnancy and patients with gestosis. Reduced secretion of VEGF and expression of VEGF-R3 by placental endothelial cells in gestosis can be caused by functional deficiency of the endothelial cells and low viability of endothelial cells. __________ Translated from Byulleten’ Eksperimental’noi Biologii i Meditsiny, Vol. 145, No. 3, pp. 321–325, March, 2008     

血管紧张素Ⅱ升高血管内皮细胞中ROS水平并激活自噬通路

目的: 研究血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)对血管内皮细胞自噬的影响及其可能机制。方法: 以EA.hy926血管内皮细胞为研究对象,荧光酶标仪检测AngⅡ(10^-7mol/L)、AngⅡ联合N-乙酰半胱氨酸(NAC,50 μmol/L)作用24 h后细胞中活性氧簇(ROS)水平;用不同浓度(10^-8、10^-7、10^-6mol/L)AngⅡ作用24 h或10^-7mol/L AngⅡ作用不同时间(0 h、6 h、12 h、24 h、36 h)后,通过Western blotting分析微管相关蛋白轻链3-Ⅱ(LC3-Ⅱ)蛋白变化、吖啶橙染色结合荧光显微镜观察自噬体形成情况来判断细胞中自噬发生情况;AngⅡ(10^-7mol/L)联合自噬抑制剂3-甲基腺嘌呤(3-MA,2 mmol/L)或NAC(50 μmol/L)处理24 h后用同样方法检测细胞中自噬的发生情况。结果: 细胞经AngⅡ刺激后细胞内ROS的水平显著升高(P<0.05),LC3-Ⅱ蛋白表达明显增强(P<0.05),自噬体形成明显增加;3-MA或NAC可显著抑制内皮细胞中AngⅡ诱导的LC3-Ⅱ蛋白表达(P<0.05)与自噬体形成。结论: AngⅡ可以通过升高血管内皮细胞内ROS的水平从而诱导自噬的发生。     

香烟尘粒对人脐静脉内皮EA.hy926细胞的损伤作用

目的:选用人脐静脉内皮EA.hy926细胞株作为研究对象,观察二甲基亚砜溶解的香烟尘粒(DSP)对人脐静脉内皮EA.hy926细胞生长的影响。方法:以(1、2、4、8)mL/L剂量DSP作量效实验,小剂量DSP(2mL/L)作时效实验,采用MTT比色法和96孔板细胞蛋白测定方法来评价DSP对该细胞株增殖和活性的影响。透射电镜(TEM)观察不同处理因素作用后细胞超微结构变化。结果:DSP能抑制人脐静脉内皮EA.hy926细胞增殖(P<0.05),且对该细胞株具有明显毒性,它能减少细胞蛋白合成(P<0.05)、增加细胞死亡(主要为坏死),作用呈剂量和时间依赖。结论:DSP能损伤血管内皮细胞(VEC)。