二氢杨梅素对高脂诱导ApoE~(-/-)小鼠肝脏损伤的保护作用及机制

目的本研究探讨二氢杨梅素对高脂诱导的非酒精性脂肪肝小鼠的保护作用及作用机制。方法取健康雄性ApoE~(-/-)小鼠40只,随机分为4组,即模型组,二氢杨梅素低、高剂量组,双环醇组,每组10只;另取10只C57小鼠作为对照组。对照组与模型组予以0.5%羧甲基纤维素钠溶液灌胃0.2 m L/10 g,二氢杨梅素分别以50、100 mg/(kg·d)混悬液灌胃,双环醇组以140 mg/(kg·d)混悬液灌胃。高脂饲料(0.3%胆固醇,20%脂肪)持续饲养12周后,测量各组小鼠的体质量,眼眶取血,分离血清。生化仪检测血脂四项、AST、ALT水平。HE染色观察肝脏病理学改变,油红O染色观察肝细胞内脂质沉积状况;试剂盒检测氧化酶的表达;TUNEL实验检测肝脏细胞凋亡情况,应用免疫组化检测肝脏Bcl-2和Caspase-3的表达。Western评价肝脏腺苷酸活化蛋白激酶(AMPK)磷酸化水平。结果连续灌胃12周后,与对照组相比,模型组小鼠表现出肝脏脂肪变性并伴肝脏氧化损伤;同时TUNEL阳性细胞数增多,肝脏中Caspase-3表达升高且Bcl-2含有量减少;肝组织内AMPK磷酸化水平显著升高。与模型组比较,二氢杨梅素高、低剂量组和双环醇组可改善AST和ALT水平,减轻各治疗组小鼠肝脏脂肪变性,调控氧化酶的表达,降低TUNEL阳性细胞数,提高肝脏中Bcl-2和减少Caspase-3的表达,降低肝组织内AMPK磷酸化水平。结论二氢杨梅素能够降低肝脏脂质沉积,保护肝损伤从而改善高脂饲料诱导的ApoE~(-/-)小鼠非酒精性脂肪肝,其机制可能与其通过下调AMPK磷酸化水平进而抑制肝细胞凋亡有关。     

散结通脉方对ApoE-/-小鼠动脉粥样硬化主动脉钙库操纵性钙通道信号分子及血清炎症因子的影响

目的研究散结通脉方对ApoE~(-/-)小鼠动脉粥样硬化模型血清中炎症因子含量及主动脉根部Orai1、STIM1蛋白表达的影响。方法采用高脂饲料(2%胆固醇、0.4%胆酸盐、10%脂肪、69.6%普通饲料)喂养ApoE~(-/-)小鼠12周建立动脉粥样硬化斑块模型,造模同时灌胃给予供试药品混悬液治疗。给药周期结束,检测各组动物血清TC、TG、HDL-cho、LDL-cho含量及TC/HDL-cho比值;血清hs-CRP、E-selectin、IL-6含量;主动脉根部STIM1、Orai1蛋白表达。结果散结通脉方13.5、6.75和3.40 g/kg 3个给药组具有明显降低模型动物血清TC、TG和LDL-cho的作用,与动脉粥样硬化模型组比较,分别为P0.01或P0.05;13.5 g/kg剂量组血清E-selectin、IL-6水平明显低于模型组,具有统计学差异(P0.05);13.5、6.75 g/kg 2个剂量组主动脉根部Orai1、STIM1蛋白表达及血清中hs-CRP水平均明显低于模型组,具有统计学差异(P0.01或P0.05);3.40 g/kg剂量组主动脉根部Orai1蛋白表达明显低于模型组,具有统计学差异(P0.05)。结论散结通脉方可以通过下调钙离子信号蛋白的表达抑制血管平滑肌细胞增殖迁移,并通过发挥调脂、抗炎等多种效应,对动脉粥样硬化发生发展过程中多因素多环节起到调节作用,进而延缓甚或逆转不稳定斑块的病理进程。     

散结通脉方对ApoE-/-小鼠AS斑块逆转和消退的作用机制研究

目的探讨散结通脉方对动脉粥样硬化模型小鼠主动脉斑块逆转、消退及血清中炎症因子含量的影响。方法以ApoE~(-/-)小鼠为实验对象,高脂饮食诱导建立AS模型,灌胃予散结通脉方混悬液治疗12周。测量计算小鼠主动脉斑块面积、血管横截面面积、脂质空泡面积、斑块相对面积;检测血清中TNF-α、ox-LDL、ET-1和IL-10含量。结果散结通脉方13.5 g·kg~(-1)、6.75 g·kg~(-1)和3.40 g·kg~(-1) 3个给药组具有明显降低模型动物主动脉斑块面积和血清TNF-α、IL-10含量的作用(P0.01或P0.05);13.5 g·kg~(-1)、6.75 g·kg~(-1) 2个剂量组主动脉脂质空泡面积、斑块相对面积及血清中ET-1含量均明显低于模型组(P0.01或P0.05);13.5 g·kg~(-1)给药组血清ox-LDL水平明显低于模型组(P0.05)。结论散结通脉方可以通过逆转、消退AS斑块,下调异常升高的血清炎性因子TNF-α、ox-LDL、ET-1和IL-10水平。     

基于“肠道菌群-炎症”通路探讨丹蒌片防治ApoE~(-/-)小鼠动脉粥样硬化的作用及机制

目的观察丹蒌片对高脂喂养动脉粥样硬化模型ApoE~(-/-)小鼠的影响,从菌群失调诱发炎症角度探讨丹蒌片抗动脉粥样硬化的作用机制。方法采用C57BL/6J野生型小鼠作为对照,高脂喂养ApoE~(-/-)小鼠24周后随机分为模型组、丹蒌片组,连续ig给药8周后取血测定血脂水平;ELISA法检测血清中脂多糖(LPS)水平;动脉大体油红O及主动脉窦HE染色观察斑块形成;粪便16 SrRNA扩增子测序检测肠道菌群;GC-MS法检测短链脂肪酸;实时荧光定量PCR法检测炎症因子肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、细胞间黏附分子-1(ICAM-1)和白细胞介素-1β(IL-1β)mRNA的表达。结果与对照组比较,模型组小鼠血脂水平升高,肠道菌群失调,有害菌增加,有益菌减少,血清LPS水平升高,主动脉周围炎症水平升高;与模型组比较,丹蒌片干预可明显降低小鼠总胆固醇(TC)、三酰甘油(TG)及低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)水平(P0.01),有效减少斑块面积;调节肠道菌群,进而降低血清LPS及主动脉周围炎症因子TNF-α、ICAM-1和IL-1β水平(P0.01)。结论丹蒌片通过改善菌群结构,降低菌群失调诱发的炎症反应发挥抗动脉粥样硬化作用。     

补肾降脂方通过PPARγ-LXRα-ABCA1通路干预ApoE-/-小鼠动脉粥样硬化的效应机制

目的探讨补肾降脂方通过PPARγ-LXRα-ABCA1通路干预ApoE~(-/-)小鼠动脉粥样硬化(AS)的效应机制。方法采用高脂饮食喂饲ApoE~(-/-)小鼠复制AS模型,随机分为ApoE~(-/-)小鼠+高脂饮食喂饲组(模型组)、ApoE~(-/-)小鼠+高脂饮食喂饲+补肾降脂方组(补肾组)、ApoE~(-/-)小鼠+高脂饮食喂饲+阿托伐他汀组(他汀组),同品系、同周龄雄性C57BL/6小鼠为正常对照组(正常组),每组25只。各组给予相应干预12周。HE、油红O染色法分别检测小鼠主动脉窦、肝脏组织病理形态及脂质蓄积,Filipin染色法检测小鼠主动脉窦游离胆固醇;ELISA法检测小鼠外周血血清脂质(TC、TG、LDL-C、HDL-C)含量;Western blot法检测小鼠主动脉、肝脏组织PPARγ、LXRα及ABCA1蛋白表达。结果高脂饮食喂饲的ApoE~(-/-)小鼠呈典型的AS病变,主动脉窦可见大面积AS斑块及红染脂质,游离胆固醇增多;肝脏组织可见肝细胞结构紊乱,红染脂质蓄积;血清TC、LDL-C含量升高,HDL-C含量降低;主动脉及肝脏组织PPARγ、LXRα、ABCA1蛋白表达降低。与模型组比较,补肾组小鼠主动脉窦AS斑块面积、红染脂质、游离胆固醇均减少;肝脏组织肝细胞结构大部分清晰可见,红染脂质减少;血清TC、LDL-C含量降低;主动脉及肝脏组织PPARγ、LXRα、ABCA1蛋白表达上调。结论补肾降脂方可能通过调控PPARγ-LXRα-ABCA1通路进而有效干预治疗动脉粥样硬化。     

基于代谢组学探究清血消脂方对ApoE-/-小鼠动脉粥样硬化模型的干预作用

目的采用基于氢谱的核磁共振代谢组学(~1H-nuclear magnetic resonance,~1H-NMR)技术,从整体代谢网络调控角度阐释化痰活血复方清血消脂方干预ApoE~(-/-)小鼠动脉粥样硬化模型的作用机制。方法高脂饮食9周建立ApoE~(-/-)小鼠动脉粥样硬化模型,将造模成功的小鼠随机分为3组:模型组、清血消脂方组(4.541 g/kg)、阿托伐他汀钙组(0.003 g/kg),每组15只,另取正常饮食同周龄小鼠15只作为空白对照组。于第9～18周连续给药,给药组每日2次灌胃给药,空白对照组及模型组分别给予等体积的蒸馏水。给药9周后,观察各组小鼠主动脉组织结构及病理改变;采用酶直接法微量测定血脂水平、化学发光微粒子免疫检测法测定血清同型半胱氨酸(homocysteine,Hcy)含量;采用~1H-NMR代谢组学技术对小鼠血浆样本中的内源性物质进行了相对含量测定。结果清血消脂方对高脂饮食诱导的ApoE~(-/-)小鼠动脉粥样硬化模型糖脂、氨基酸等代谢紊乱有明确的治疗作用,通过代谢组学及主成分分析可得出,空白对照组与模型组显著分离,清血消脂方组与阿托伐他汀组处于模型组与空白对照组之间,并且向空白对照组靠近。数据分析处理发现其改善ApoE~(-/-)小鼠动脉粥样硬化模型的糖脂代谢紊乱以及氨基酸代谢异常与同型半胱氨酸、胆碱/磷脂酰胆碱、氧化三甲胺(trimethylamine-n-oxide,TMAO)、胆汁酸、短链脂肪酸等28个代谢物有关。结论化痰活血复方清血消脂方通过改善ApoE~(-/-)小鼠动脉粥样硬化模型体内的糖脂代谢、TMAO、同型半胱氨酸及胆碱/磷脂酰胆碱、胆汁酸、丁酸等代谢产物水平延缓动脉粥样硬化的进展。     

虎杖苷在ApoE~(-/-)动脉粥样硬化模型小鼠中的抗氧化作用

目的研究虎杖苷在ApoE~(-/-)小鼠动脉粥样硬化治疗中的作用,并探讨其对氧化还原信号通路的影响。方法利用ApoE~(-/-)小鼠建立高脂饲料诱导的动脉粥样硬化动物模型,将已经形成动脉粥样硬化的ApoE~(-/-)小鼠随机分为模型组、虎杖苷组和阳性药(辛伐他汀)对照组,以普通饲料喂养的同遗传背景C57BL/6J小鼠为正常对照,阳性药(辛伐他汀)以0.05 g/(kg·d)剂量灌胃,虎杖苷0.2 g/(kg·d)剂量灌胃,正常对照组及模型对照组分别给予同体积的蒸馏水。连续灌胃28 d后,利用HE染色对小鼠腹主动脉的进行形态学观察,检测血清中活性氧自由基和超氧化物歧化酶的含有量。结果病理切片显示,虎杖苷组的血管组织形态较模型组有明显的改善,显示出虎杖苷对动脉粥样硬化具有较好的的治疗效果。与模型组比较,虎杖苷可以显著抑制活性氧自由基的水平,增加超氧化物歧化酶的活性。结论虎杖苷对高脂诱导的动脉粥样硬化ApoE~(-/-)小鼠具有抗氧化作用,可改善动脉粥样硬化血管组织的形态,并减少脂质沉积。     

丹参酮ⅡA对动脉粥样硬化小鼠脂质运载蛋白-2表达的干预研究

目的:探讨丹参酮ⅡA对动脉粥样硬化(AS)小鼠脂质运载蛋白-2(LCN-2)表达的干预作用。方法:将50只载脂蛋白E基因敲除(ApoE~(-/-))小鼠喂食高脂饲料并随机分为5组:丹参酮ⅡA低、中、高剂量组分别给予丹参酮ⅡA灌胃(7.5,15,30 mg·kg~(-1)·d~(-1));辛伐他汀组予辛伐他汀5 mg·kg~(-1)·d~(-1)灌胃;模型组予等剂量生理盐水。另设10只C57BL/6J小鼠喂食普通饲料为对照组。14周后测小鼠血清LCN-2、白细胞介素-6(IL-6)、单核细胞趋化蛋白-1(MCP-1)及肿瘤坏死因子-α(TNF-α)水平;HE染色观察主动脉组织病理形态学改变;Western blot检测主动脉LCN-2蛋白表达。结果:各给药组小鼠血清LCN-2、IL-6、MCP-1及TNF-α水平、主动脉LCN-2蛋白表达均显著低于模型组(P<0.05),辛伐他汀组、丹参酮ⅡA中、高剂量组小鼠主动脉AS斑块面积显著低于模型组(P<0.05)。结论:丹参酮ⅡA可通过降低LCN-2表达,抑制炎症反应,显著减轻ApoE~(-/-)小鼠AS病变。     

基于血脂代谢紊乱探讨益气调脂八味汤对CD40-CD40L系统的调控作用

目的:通过观察中药复方益气调脂八味汤对载脂蛋白E基因敲除(ApoE~(-/-))小鼠主动脉粥样硬化斑块病理形态和CD40-CD40L系统信号的影响,探讨益气调脂八味汤抗动脉粥样硬化的作用机制。方法:40只8周龄雄性ApoE~(-/-)小鼠予高脂饲料喂养建立实验性动脉粥样硬化小鼠模型,至第12周龄时,ApoE~(-/-)小鼠随机分为模型对照组、氯吡格雷组、中药高剂量组和低剂量组。取10只8周龄近交系C57BL/6小鼠作为正常对照组给予普通饲料喂养。各组于第24周取材检测血脂、外周血血小板表面PAC-1、CD40L表达;观察主动脉组织病理形态学改变;检测主动脉组织CD40L表达水平。结果:与模型对照组比较,中药2个剂量组小鼠血清TC、TAG和LDL-C水平均降低,HDL-C水平均升高,差异有统计学意义;与高剂量组比较,低剂量组小鼠血清TC、TAG、LDL-C和HDL-C水平比较差异均无统计学意义。中药组病变程度明显轻于模型对照组,并较氯吡格雷组轻。与模型对照组比较,中药个剂量组小鼠血清PAC-1、CD40L表达的百分比均明显降低,差异有统计学意义;与高剂量组比较,低剂量组小鼠血清PAC-1、CD40L表达百分比差异均无统计学意义。模型组动脉组织CD40L表达光密度值明显高于正常对照组;与高剂量组相比,低剂量组CD40L平均光密度值比较差异无统计学意义。结论:中药复方益气调脂八味汤能够调节血脂,调控CD40-CD40L系统的信号表达而抑制血小板活化,具有明显的抗动脉粥样硬化作用,且不存在剂量差异。     

四妙勇安汤对ApoE~(-/-)动脉粥样硬化小鼠IL-6和MCP-1的影响

目的:研究四妙勇安汤对高脂饲料喂养的ApoE基因敲除小鼠动脉粥样硬化炎症反应的干预作用。方法:采用高脂饲料喂养ApoE~(-/-)小鼠14周制备动脉粥样硬化模型,成模后随机分为5组:模型组,阳性药组(阿托伐他汀,2.57 mg·kg~(-1)),四妙勇安汤高剂量组(34.9 g·kg~(-1))、四妙勇安汤中剂量组(23.14 g·kg~(-1))和四妙勇安汤低剂量组(11.61 g·kg~(-1)),分别灌胃给药12周,同时以C57BL/6小鼠为正常对照组,给予去离子水灌胃12周。采用生化仪检测三酰甘油(TG)、总胆固醇(TC)、高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)和低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)含量;HE染色观察主动脉血管形态,并测量主动脉内膜厚度(IT)、中膜厚度(MT)、血管管腔面积(LA)、粥样斑块面积(PA)、内中膜厚度比(IT/MT)、管腔狭窄率(PA/LA);采用流式高通量多因子检测技术检测血清中白介素-6(IL-6)、单核细胞趋化蛋白-1(MCP-1)炎症细胞因子表达。结果:与对照组相比,模型组小鼠血清TC、TG、LDL-C明显提高,HDL-C明显降低,PA、IT及IT/MT明显升高(P0.01)。与模型组比较,四妙勇安汤能够明显降低ApoE~(-/-)小鼠主动脉PA、IT及IT/MT(P0.01),并明显降低IL-6及MCP-1表达(P0.01、P0.05),但对血脂水平无明显的影响。结论:四妙勇安汤可以通过抑制炎症反应防治动脉粥样硬化,而不依赖血脂水平的变化。     

敖必德森古日古木-13质量标准的研究

目的：制定敖必德森古日古木-13质量控制方法。方法：采用薄层色谱法及显微鉴别法对方中的旋复花、红花进行定性鉴别。结果：旋复花、红花可用薄层色谱鉴别，旋覆花、红花、草乌叶可用显微鉴别。结论：所建立的方法可用于该药的质量控制。     

高效液相色谱法测定乌圆补血口服液中二苯乙烯苷含量分析

目的比较高效液相色谱法和紫外分光光度法测定保存不同时间的乌圆补血口服液中有效成分二苯乙烯苷含量的灵敏度。方法利用高效液相色谱仪和紫外分光光度计测定保存多年的样品中二苯乙烯苷含量,并进行统计分析。结果高效液相色谱法和紫外分光光度法测定样品中二苯乙烯苷含量分别为(0.549±0.226)g/L和(0.250±0.150)g/L,二者比较有显著性差异(P<0.01),各年度样品中二苯乙烯苷含量也有明显差异(P<0.05或P<0.01)。结论高效液相色谱法测定二苯乙烯苷灵敏度高于紫外分光光度法。     

RP—HPLC法测定脂降宁片中葛根素、二苯乙烯苷的含量

目的：建立高效液相色谱法测定脂降宁片中葛根素、二苯乙烯苷的含量。方法：采用kromasilC18柱（4．6mm×250mm,5μm）;流动相为甲醇（A）-水（B）,梯度洗脱;流速1．0mlMmin;检测波长为250nm及320nm;枉温：30℃。结果：葛根素进样量在232—29μg范围内（r=0．9998）,二苯乙烯苷进样量在220—19．5μg范围内（r=0．9997）线性关系良好,平均回收率葛根素为97．2％（RSD：0．8％）,二苯乙烯苷为97．6％（RSD=0．7％）。结论：该方法操作简便,分离度高,重复性好,可同时测定脂降宁片中葛根素、二苯乙烯苷的含量。     

“三通四联”疗法治疗颈性眩晕临床疗效观察

目的：观察我科独创＂三通四联＂疗法与口服西比灵胶囊治疗颈性眩晕的疗效。方法：将60例确诊为颈性眩晕的病人随机分为三通四联组与西比灵组,每组各30例,治疗一疗程后对两组病人进行疗效对比。结果：观察两组患者的有效率,三通四联组的有效率高于西比灵组（P〈0.01）。结论：三通四联疗法治疗颈性眩晕疗效优于口服西比灵胶囊。     

凉营清透除热瘀

在邪热深入营分的阶段,器官、组织等实质性损害成为病理变化的重心,邪毒炽盛,阴伤液耗,脏损络伤气滞成为其基本病理特点,热毒与瘀血交结成为重要的病变特征之一,治法以凉营清透为主。通过对古今文献的研究及临床与实验观察认为,以该治法为主的方药能有效改变热瘀交结的病变基础,减轻病理损害。而这一治法在临床中也可推广应用于一些出现类似病机的内伤杂病中,可扩大适用范围。     

葶苈降血脂片治疗高血脂症临床疗效观察

目的:观察葶苈降血脂片对高脂血症患者TC、HDL-C、TG的影响.方法:选择高脂血症患者共130人,随机分为治疗组和对照组,其中治疗组100例,男61例,女39例,平均年龄47.5岁,对照组30例,男19例,女11例,平均年龄48.3岁,观察组口服葶苈降血脂片,每次3片,每日3次,30天为1个疗程.对照组口服血脂宁丸,1次2丸,每日3次,30天为1个疗程.结果:两组药物对降低胆固醇和甘油三酯,提高高密度脂蛋白含量的疗效,组内有明显差异(P＜0.01),但组间比较无明显差异.两组观察未出现明显的不良反应及毒副作用.结论:葶苈降脂片可有效降低胆固醇和甘油三酯,提高高密度脂蛋白,且依从性好,服用安全.     

益气脱敏煎的实验研究

益气脱敏煎治疗过敏性鼻炎 6 9例[1 ] ,有效率95.6 % ,近期又治疗 5例 ,疗效满意 ,现将动物实验结果报告如下。1　淋巴细胞脂酶染色率影响　　用ＡＮＡＥ染色法 ,取小鼠 2 0只 ,随机分为对照实验组 ,两组每天分别灌胃生理盐水、益气脱敏煎液 0 .2ｍｌ(2 ｇ生药 /ｍｌ) ,连续 10天 ,末次给药后4ｈ ,眶静脉丛穿刺取血 0 .5ｍｌ,置干净的载玻片上 ,迅速呈均匀的血涂片 ,并将片子用电吹风 (冷风 )迅速吹干。将片子浸入已预热 30ｍｉｎ的孵育液中37℃孵育 3ｈ ,用自来水冲洗 4ｍｉｎ ,去掉沉渣 ,用滤纸吸干水珠。再将片子置入 1/ 15ｍｏｌ/Ｌ、ｐ…     

自我保健推拿术对原发性轻、中度高血压病的疗效观察

目的:观察自我保健推拿术对原发性轻、中度高血压病的疗效。方法:将60例原发性轻、中度高血压患者,采取治疗前后自身对照,并经统计学处理。结果:治疗前后收缩压和舒张压均有显著性差异(P<0.05)。结论:自我保健推拿术对原发性轻、中度高血压有肯定的降压效果,可作为其非药物治疗的一个较好的方法。     

4-羟基苯并恶唑-2-酮对HSC-T6细胞增殖的影响

目的研究4-羟基苯并恶唑-2-酮(HBOA)对HSC-T6细胞增殖的影响。方法 HSC-T6细胞分别在药物处理组(HBOA浓度分别为0.008,0.04,0.2,1,5 mg/ml)及对照组(单纯培养液)中体外培养32 h。应用四甲基偶氮唑盐法(MTT法)检测细胞增殖情况;荧光倒置显微镜下观察对照组和药物处理组HSC-T6细胞的形态学变化。结果药物处理组HSC-T6细胞的增殖率均低于对照组,浓度为0.008 mg/ml的药物处理组与对照组相比无显著性差别(P>0.05);其他药物处理组分别与对照组比较能显著地抑制细胞增值(P<0.05或P<0.01)。HBOA对HSC细胞的增殖抑制率均随着药物作用浓度的升高而逐渐升高;经吖啶橙染色后,在荧光倒置显微镜下观察,均可见细胞数量减少、体积缩小、核破裂、核浓缩等变化,且随着作用浓度的增加变化更加明显。结论 HBOA对HSC-T6细胞具有抑制增殖的功效。     

痔瘘熏洗颗粒对肛门溃疡的作用研究

目的观察痔瘘熏洗颗粒对动物实验性肛门溃疡愈合与抗炎、镇痛、抗菌的作用。方法在大鼠肛门外周粘膜注射冰醋酸制备大鼠肛门溃疡模型,采用小鼠耳肿胀、热板法和扭体法,外用给药观察药物促溃疡愈合、抗炎、镇痛作用,采用试管稀释法观察该药的体外抗菌作用。结果痔瘘熏洗颗粒外用能明显缩小大鼠肛门溃疡面积和缩短肛门溃疡平均愈合天数,此外还具有对抗二甲苯致小鼠耳肿胀、提高小鼠热痛阈值、减少冰醋酸致小鼠的扭体数及体外抗金黄色葡萄球菌的作用。结论痔瘘熏洗颗粒具有促进大鼠肛门溃疡愈合、抗炎、镇痛和抗菌作用。