肿瘤抑制基因WWOX转染MDA-MB-231细胞系的实验研究

目的探讨肿瘤抑制基因WWOX与乳腺癌疾病相关性,为进一步研究WWOX基因的作用机制及功能奠定基础。方法构建真核表达载体pcDNA4．0／Myc—His-WWOX,并转染至MDA．MB．231细胞中,采用RT-PCR及Westernblot方法,检测WWOXmRNA及融合蛋白在MDA-MB-231细胞中的表达。结果测序结果显示,RT-PCR法获得的WWOX序列与GenBank中报道的一致。真核表达载体pcDNA4．0／Myc．His—WWOX转染MDA—MB-231细胞48h后,从RT-PCR及Westernblot结果中观察到WWOX基因的有效转录。结论成功构建了肿瘤抑制基因WWOX真核表达载体pcDNA4．0／Myc．His—WWOX,为进一步研究WWOX在乳腺癌发生和进展中的作用及其靶向基因治疗奠定了实验基础。     

青蒿琥酯对生存素在乳腺癌细胞株MDA-MB-231表达的影响

目的 探讨青蒿琥酯对生存素(survivin)在乳腺癌细胞株MDA-MB-231中表达的影响.方法 以不同浓度(0、25、50 μg/mL)的青蒿琥酯处理MDA-MB-231细胞,分别于药物处理后24、48和72 h收集细胞及培养上清液,用RT-PCR检测不同组别、不同时间点的细胞中survivin的基因表达情况,酶联免疫吸附试验(ELISA)检测各组、各时间点培养上清液中survivin的蛋白质表达水平.结果 PCR结果和ELISA结果均显示,随着药物浓度的增加和处理时间的延长,survivin基因水平和蛋白质水平的表达也逐渐降低,同一时间点各组间survivin的表达量进行单因素方差分析,差异有统计学意义(P＜0.05);对照组(0 μg/mL)在24 h和48 h survivin的表达量变化不大,经t检验分析,差异无统计学意义(P＞0.05),而各浓度经药物处理48 h后survivin的表达量明显低于24 h的表达,差异有统计学意义(P＜0.05).结论 青蒿琥酯可通过抑制survivin的表达促进乳腺癌MDA-MB-231细胞凋亡.     

苦瓜多糖对人乳腺癌MDA-MB-231细胞生物学行为的影响

目的探讨苦瓜多糖对人乳腺癌MDA-MB-231细胞生物学行为的影响及其机制。方法采取体外培养MDA-MB-231细胞进行分组,苦瓜多糖组给予不同浓度苦瓜多糖(0μg/ml、30μg/ml、60μg/ml、120μg/ml),空白组(苦瓜多糖0μg/ml)培养基中含有与苦瓜多糖组等浓度的DMSO,将各组细胞孵育分别培养至12 h、24 h、48 h处理。MTT法检测细胞增殖率,FMC法检测后细胞周期分布与细胞凋亡率,Hoechst 33342观察凋亡小体变化,Trans well法检测细胞迁移率,免疫组化检测Ki67与Caspase-3阳性率,Western-blot检测MMP-9、Bcl-2、Bax表达水平,RT-PCR检测细胞周期蛋白(CyclinD1)、血管内皮生长因子(VEGF)表达量;体内建立移植瘤裸鼠模型,试验组裸鼠采用苦瓜多糖(120μg/ml)灌胃治疗,早晚一次,1 ml/次,对照组裸鼠灌胃等体积的生理盐水,两组裸鼠治疗6周后测量肿瘤质量、观察肿瘤体积变化。结果与空白组相比,苦瓜多糖组癌细胞增值率与迁移能力随苦瓜多糖剂量增加而降低(P 0. 05),细胞凋亡率、凋亡小体数量随着药用剂量增加而升高(P 0. 05); Western-blot检测结果显示苦瓜多糖组MMP-9、Bcl-2表达水平低于空白组(P 0. 05),Bax表达水平高于空白组(P 0. 05); RT-PCR结果显示苦瓜多糖组CyclinD1、VEGF表达量显著低于空白组(P 0. 05)。试验组肿瘤组织中的Ki67蛋白水平、肿瘤体积、肿瘤质量显著低于对照组(P 0. 05),而试验组肿瘤组织中Casppase-3蛋白水平显著高于对照组(P 0. 05)。结论苦瓜多糖可以通过调控细胞周期、凋亡、迁移侵袭相关蛋白及基因表达,进而调控人乳腺癌MDA-MB-231细胞生物学行为。     

非甾体类抗炎药对乳腺癌细胞MDA-MB-231增殖影响的实验室研究

目的 通过研究阿司匹林、塞来昔布及两者分别联合阿那曲唑对乳腺癌细胞MDA-MB-231的抑制作用,探讨并比较阿司匹林和塞来昔布的抗肿瘤作用.方法 采用MTT法检测不同浓度的阿司匹林、塞来昔布及两者分别联合阿那曲唑对乳腺癌细胞MDA-MB-231增殖的影响.结果 阿司匹林、塞来昔布单药对MDA-MB-231细胞生长均有抑制作用,表现为浓度、时间依赖性,统计学差异具有统计学意义(P<0.05);不同浓度的阿司匹林、塞来昔布分别联合阿那曲唑后对MDA-MB-231细胞的抑制作用较单用阿那曲唑增强,亦表现为浓度依赖性,差别具有统计学意义(P<0.05).结论 阿司匹林和塞来昔布均有抑制乳腺癌MDA-MB-231细胞的作用,两者分别联合阿那曲唑后有协同抗肿瘤的作用.     

IVIG对乳腺癌细胞株MDA-MB-453体外增殖抑制作用的实验研究

静脉注射丙种球蛋白(IVIG), 来源于健康志愿者捐献的血浆经灭菌、分离得到,因此是一种源自人体的安全的生物制品.IVIg主要适用于血小板减少性紫癜(ITP)、自体免疫疾病以及免疫介导的疾病的治疗[1-2].近年来,有文献报道IVIG还可用于治疗各种肿瘤,有一定的临床效果[3-4].乳腺癌是严重威胁人类健康的常见病和多发病,乳腺癌新发病人数每年有增加的趋势.本实验是利用目前较为先进的ATP-荧光发光法检测抑瘤率并结合流式细胞仪检测肿瘤细胞周期、凋亡指数,来探索IVIG体外对乳腺癌细胞增殖的影响.     

沉默DNMT1基因对骨髓瘤细胞SOCS-1基因甲基化的影响

目的:探讨DNA甲基化转移酶1(DNA methyltransferase,DNMT1)基因沉默对多发性骨髓瘤RPMI8226细胞内细胞因子信号转导抑制分子1(suppressor of cytokine signaling,SOCS-1)甲基化的影响。方法:应用靶向沉默DNMT1基因的短发卡RNA(RNA-Short hairpin RNA,shRNA)通过脂质体(lipofectamineTM2000)介导转染骨髓瘤细胞RPMI8226,应用RT-PCR和Western blot方法分别检测转染前后DNMT1基因和蛋白表达,应用甲基化特异性PCR检测转染前后骨髓瘤细胞SOCS-1基因甲基化水平的变化。结果:转染后骨髓瘤细胞DNMT1 mRNA表达水平(0.176±0.004)和蛋白表达水平(0.065±0.014)均明显低于阴性对照组(0.956±0.033,0.415±0.027),其差异具有统计学意义(P0.01)。转染后SOCS-1基因甲基化水平较转染前明显降低。结论:利用shRNA能靶向沉默DNMT1基因的表达,并可以有效逆转SOCS-1基因高甲基化状态。     

TRAIL联合Res对乳腺癌MDA-MB-231细胞DR和Caspase表达的影响

目的研究TRAIL联合白藜芦醇（Res）对乳腺癌MDA-MB-231细胞DR和caspase表达的影响。方法MTT法检测细胞增殖;流式细胞术检测细胞凋亡及细胞表面DR4、DR5蛋白的表达;分光光度法检测caspase-3、caspase-8相对活性;荧光定量PCR检测DR4、DR5及caspase-3、caspase-8 mRNA的表达。结果50μmol／L和100μmo/L,Res分别与50ng／mL TRAIL联合作用后,对MDA-MB-231细胞增殖的抑制率及细胞凋亡率分别与单独应用相应浓度的Res和TRAIL比较,均存在显著差异（P〈0．01）。50μmol／L和100μmol／LRes分别与50ng／mLT RAIL联合作用后,caspase-3、caspase-8的相对活性与对照组及单用TRAIL、Res比较均明显增强,差异显著（P〈0．01）。Res作用后,细胞表面DR4、DR5荧光指数与对照组比较明显增强。荧光定量PCR结果显示与对照组比较．Res作用后DR4、DR5mRNA表达上调;与单独用药比较,TRAIL联合Resetcagpase-3、easpase-8 mRNA表达上调。结论TRAIL和Res联合应用对诱导乳腺癌MDA-MB-231细胞凋亡具有明显的协同效果,其作用机制可能与增加DR和caspase活性有关。     

宫颈脱落细胞中PAX1 和SOX1 基因甲基化对宫颈癌实验诊断的临床研究

目的 检测宫颈脱落细胞中配对盒家族基因1(paired box 1,PAX1)和性别决定区域Y 盒蛋白1(sexdetermining region Y box 1,SOX1)甲基化的状态及表达水平,并分析其对宫颈病变及宫颈癌(cervical cancer, CC)的诊断价值。方法 前瞻性选取2019 年1 月~ 2021 年12 月在阜阳市临泉县人民医院经病理检查确诊的58 例宫颈癌患者为宫颈癌(CC)组,35 例高级别鳞状上皮内病变(high-grade squamous intraepithelial lesions, H-SIL)患者为H-SIL组,33 例低级别鳞状上皮内病变(low-grade squamous intraepithelial lesions, L-SIL)患者为L-SIL 组,50 例同期行健康体检的正常人群为Control 组。分别取其宫颈脱落细胞,采用甲基化特异性实时定量PCR 检测所有研究对象宫颈细胞中PAX1 和SOX1 甲基化状态和甲基化水平,并分析其甲基化状态与宫颈癌患者临床病理参数之间的关系。根据甲基化水平绘制受试者工作特征(ROC)曲线,根据曲线下面积(area under curve,AUC)分析PAX1 和SOX1 甲基化水平对宫颈病变及宫颈癌的诊断价值。结果 L-SIL 组患者PAX1 和SOX1 基因甲基化发生率分别为27.3% 和21.2%,H-SIL组患者PAX1 和SOX1 基因甲基化发生率分别为34.3% 和25.7%,CC 组患者PAX1 和SOX1 基因甲基化发生率分别为82.8% 和77.6%,显著高于Control 组(0.0%, 4.0%),差异均有统计学意义(F=53.805,46.228,均P ＜ 0.001)。Control 组、L-SIL 组、H-SIL 组和CC组患者PAX1基因甲基化水平分别为1.86±0.64,1.55±0.28,1.46±0.30 和0.98±0.21,SOX1 基因甲基化水平分别为1.57±0.35,1.22±0.39,1.13±0.22 和0.82±0.17,各组间差异均有统计学意义(F=5.230,4.764,均P ＜ 0.05)。PAX1 和SOX1 基因甲基化状态均与淋巴结转移有明显相关性,差异有统计学意义(χ2=4.125,5.428,均P ＜ 0.05),与年龄、肿瘤大小、临床分期、组织学类型、分化程度及WHO 病理分级等无相关性,差异均无统计学意义(χ2=0.168~2.968,均P ＞ 0.05)。PAX1 甲基化水平诊断L-SIL,H-SIL 和CC 时对应AUC分别为0.645,0.703和0.917,SOX1 甲基化水平诊断L-SIL,H-SIL 和CC 时对应AUC 分别为0.604,0.689 和0.850。结论 宫颈脱落细胞中PAX1 和SOX1 基因甲基化状态与宫颈癌患者淋巴结转移有关,且其甲基化水平对宫颈癌具有较高的诊断价值。     

肿瘤转移抑制基因nm23-H1基因对人膀胱癌T-24细胞株的转染及表达

目的:探讨nm23-H1基因对人膀胱癌T-24细胞株的转染及表达.方法:采用已经通过基因工程技术构建的nm23-H1基因的真核表达载体,利用电穿孔基因转染技术将nm23-H1基因导入人膀胱癌T-24细胞,利用G418筛选、免疫组织化学、流式细胞方法检测nm23-H1基因的转录和表达情况.结果:以电穿孔转染技术将nm23-H1基因转染T-24细胞后,经400ml/L的G418筛选后可形成抗性克隆;免疫组织化学和流式细胞结果显示转基因细胞中有nm23-H1蛋白的阳性高表达.结论:nm23-H1基因可被成功转染入人膀胱癌T-24细胞并能有效表达.     

Apoptotic effect of tolfenamic acid on MDA-MB-231 breast cancer cells and xenograft tumors

Recent studies have indicated that non-steroidal anti-inflammatory drug (NSAID), particularly tolfenamic acid, can inhibit proliferation and induce apoptosis invarious cancer cells. Breast cancer represents one-third of all cancers diagnosed in women and is the second leading cause of cancer death in Western European and North American women. In the present study, we investigated the apoptotic effect of tolfenamic acid in MDA-MB-231 estrogen receptor-negative human breast carcinoma cells and in a xenograft tumor model. Treatment of cells with tolfenamic acid significantly decreased cell viability in a concentration-dependent manner. Notably, tolfenamic acid increased apoptosis-related proteins, such as p53 and p21, within 48 h. Furthermore, in vivo experiments showed that tolfenamic acid treatment resulted in a significant reduction in tumor volume over 5 weeks. Immunohistochemistry results showed that apoptosis-related protein induction by tolfenamic acid was significantly higher in the 50 mg/kg-treated group compared to the control group. Together, these results indicate that tolfenamic acid induces apoptosis in MDA-MB-231 breast cancer cells and tumor xenograft model and it may be a potential chemotherapeutic agent against breast cancer.     

miR-203调控NEDD9抑制乳腺癌细胞MDA-MB-231侵袭及迁移作用机制研究

目的 :研究mi R-203抑制乳腺癌MDA-MB-231细胞NEDD9蛋白的作用对细胞侵袭和迁移的影响。方法:mi R-203脂质体转染MDA-MB-231细胞,通过细胞划痕实验和Transwell实验观察细胞侵袭和迁移能力的变化;通过蛋白印迹检测mi R-203对NEDD9表达的调控作用,并用sensor reporter确定mi R-203的靶标位点;最后,通过细胞"拯救"实验研究相关蛋白表达量的变化,用免疫荧光-激光共聚焦显微镜观察细胞片状伪足和黏着斑的改变,探究mi R-203对MDA-MB-231细胞侵袭和迁移能力的调节机制。结果:细胞划痕实验和Transwell实验显示,mi R-203抑制了MDA-MB-231细胞的侵袭和迁移能力;通过生物信息学网站预测mi R-203的靶基因是NEDD9;蛋白印迹和sensor reporter检测结果显示,mi R-203通过与NEDD9 3′-UTR结合,下调NEDD9;共转染si NEDD9和mi R-203的"拯救"实验后的细胞划痕实验、蛋白印迹和免疫荧光-激光共聚焦结果显示,mi R-203抑制NEDD9表达导致激活态Rac1-GTP减少,致使细胞运动状态改变,侵袭迁移能力减弱,而si NEDD9干涉作用能"拯救"mi R-203对MDA-MB-231细胞迁移能力的抑制。结论 :mi R-203通过降解NEDD9,下调激活的Rac1水平,导致乳腺癌细胞MDA-MB-231片状伪足和黏着斑的减少或消失,从而抑制细胞的侵袭及迁移。     

The apoptotic effect of ozone therapy on mitochondrial activity of highly metastatic breast cancer cell line MDA-MB-231 using in vitro approaches

Ozone (O₃) gas is the triatomic state of oxygen and it is used as a disinfection agent due to its strong oxidizing effect, since its discovery in the mid-nineteenth century. Ozone therapy is also an alternative therapeutic approach for some diseases like circulatory disorders, AIDS, asthma, cardiovascular diseases, and certain types of cancer by increasing the oxygen levels in the blood by external addition of ozone to the body. In this study, the therapeutic potential of ozone therapy was examined by inhibiting the growth of breast cancer cells in a dose-dependent procedure. Ozone concentrations varying from 5 to 20 ​μg/ml were applied to the MDA-MB-231, human breast adenocarcinoma and HUVEC, human umbilical vein endothelium, cell lines, and MDA cells demonstrated an increased rate of death while its migration potential decreases. RT-PCR analysis showed mRNA expression levels of pro-apoptotic genes demonstrated higher folds in MDA cells after 10 ​μg/ml treatment. In the same context, Annexin V/PI and cell cycle analysis also concluded that ozone therapy causes apoptotic cell death on breast tumor cells. The use of ozone therapy for cancer treatment requires further and extensive research. However, this research has shown that ozone therapy is a promising source for cancer treatment in a way by inhibiting the proliferation of breast tumor cells.     

survivin基因沉默对“三阴”乳腺癌细胞株中caspase3和caspase7基因的影响

目的 探讨“三阴”乳腺癌细胞中沉默survivin基因对抑癌基因caspase3和caspase7的影响.方法 针对survivin基因设计干扰片段并与真核表达载体pGCsilencerTMU6/Neo/GFP进行连接,之后转染“三阴”乳腺癌细胞MDA-MB-231;通过RT-PCR鉴定survivin基因mRNA水平沉默效果;用RT-PCR检测沉默survivin基因对caspase3和caspase7表达及细胞凋亡的影响.结果 survivin基因沉默可引起MDA-MB-231细胞凋亡;caspase3和caspase7表达升高,灰度分析结果显示差异具有统计学意义（P =0.008）.结论 （1）RNAi技术沉默MDA-MB-231细胞中survivin基因,达到了对其表达的抑制效果;（2）survivin基因沉默可上调caspase3和caspase7的表达;（3） survivin基因沉默可引起细胞凋亡;（4） survivin基因可作为“三阴”乳腺癌基因治疗的新靶点.     

PI3K抑制剂对三阴性人乳腺癌细胞株MBA-MB-231/ADR的多药耐药逆转作用

目的探讨PI3K抑制剂对三阴性人乳腺癌细胞多药耐药的逆转作用及其与PI3K/Akt信号转导关系。方法采用MTT法测定三阴性乳腺癌细胞系MBA-MB-231及其多药耐药细胞株MBA-MB-231/ADR对经典化疗药物阿霉素的半数抑制浓度(IC50),以及MBA-MB-231/ADR细胞株在PI3K抑制剂LY294002给药前后对阿霉素的敏感性差异。Western Blot检测MDA-MB-231/ADR细胞株LY294002给药前后,P-Akt、Akt、IκBα、NF-κB、P-gp和cleaved-caspase-3表达水平差异。结果 1MBA-MB-231和耐药细胞株MBA-MB-231/ADR对阿霉素的IC50分别为(0.36±0.03)μmol/L和(16.77±1.57)μmol/L,耐药倍数为46.58倍。2LY294002给药后,耐药细胞株MBAMB-231/ADR对阿霉素的IC50降至(2.59±0.07)μmol/L,耐药倍数降至6.475,对药物敏感性显著增加。3耐药细胞株MBA-MB-231/ADR中PI3K/Akt和NF-κB通路被激活,细胞耐药相关蛋白P-gp处于高表达水平;LY294002处理之后,MBA-MB-231/ADR细胞中PI3K/Akt和NF-κB通路被抑制,P-gp表达水平下调,细胞凋亡相关的cleaved-caspase-3表达上调。结论 PI3K抑制剂LY294002能有效逆转耐药细胞株MBA-MB-231/ADR的耐药性,从而增强耐药细胞MBA-MB-231/ADR对化疗药物阿霉素的敏感性。该研究结果提示LY294002通过阻断PI3K/Akt通路抑制下游NF-κB通路的活化和P-gp表达上调,从而参与MBA-MB-231/ADR耐药性的逆转。     

Hsa-miR-145对人三阴性乳腺癌细胞侵袭和迁移的影响

目的 探讨Hsa-miR-145对人三阴性乳腺癌细胞增殖、侵袭及迁移的影响,并初步分析其影响三阴性乳腺癌细胞增殖、侵袭及迁移的可能机制.方法 运用脂质体介导的转染方法将miR-145阻遏物(miR-145 inhibitors)转染人三阴性乳腺癌细胞株MDA-MB-231,以inhibitor negative control(inhibitor NC)作为阴性对照,通过MTT法和Transwell侵袭实验检测细胞的增殖能力和侵袭力;采用Transwell迁移实验及划痕试验检测细胞的迁移能力;利用生物信息学方法预测miR-145的靶基因,并对其靶基因进行基因功能分析.结果 (1)miR-145 inhibitors组细胞增殖活性明显高于inhibitor NC组(P<0.05);(2)划痕后miR-145 inhibitors组细胞迁移能力比inhibitor NC组明显增强(P<0.05);(3)Transwell侵袭及迁移实验均显示转染miR-145 inhibitors后,MDA-MB-231细胞的侵袭及迁移能力明显增强(P<0.01,P<0.05);(4)生物信息学方法预测miR-145的靶基因中,部分发挥了促进细胞增殖、侵袭及迁移的生物学功能.结论 (1)miR-145对人三阴性乳腺癌细胞的增殖、侵袭及迁移能力可能存在负性调控作用;(2)miR-145可能通过多种靶基因发挥其对肿瘤的调控作用.     

Silencing of miRNA-218 promotes migration and invasion of breast cancer via Slit2-Robo1 pathway

MiRNAs play an important role in regulating tumor migration and invasion, and abnormal expression of miRNAs occurs in various kinds of human cancers. In this essay, it is reported that the level of miRNA-218 decreases in metastatic breast cancer cells, moreover, miRNA-218 suppresses breast cancer cells migration and invasion through binding Robo1 (one of Slit receptors) to its 3′UTR. MiRNA-218 restoration suppresses Robo1 expression and inhibits breast cancer cells invasion and migration. What the results describe is that the function of Robo1 regulated by miRNA-218 may provide a new strategy for inhibiting migration and invasion of breast cancer cells.     

Clinical significance of breast cancer susceptibility gene 1 expression in resected non-small cell lung cancer: A meta-analysis

BACKGROUNDThe clinical significance of breast cancer susceptibility gene 1 (BRCA1) in non-small cell lung cancer (NSCLC) patients undergoing surgery remains unclear up to now.AIMTo explore the relation of BRCA1 expression with clinicopathological characteristics and survival in patients with resected NSCLC. METHODSEMBASE, PubMed, Web of Science, and The Cochrane Library databases were searched to identify the relevant articles. To assess the correlation between the expression of BRCA1 and clinicopathological characteristics and prognosis of patients with resected NSCLC patients, the combined relative risks or hazard ratios (HRs) with their corresponding 95% confidence intervals [CIs] were estimated. RESULTSTotally, 11 articles involving 1041 patients were included in the meta-analysis. The results indicated that the expression of BRCA1 was significantly correlated with prognosis of resected NSCLC. Positive BRCA1 expression signified a shorter overall survival (HR = 1.60, 95%CI: 1.25-2.05; P < 0.001) and disease-free survival (HR = 1.78, 95%CI: 1.42-2.23; P < 0.001). However, no significant association of BRCA1 expression with any clinicopathological parameters was observed.CONCLUSIONBRCA1 expression indicates a poor prognosis in resected NSCLC patients. BRCA1 might serve as an independent biomarker to predict clinical outcomes and help to customize optimal adjuvant chemotherapy for NSCLC patients who had received surgical therapy.     

着丝粒蛋白CENP-H对乳腺癌细胞株MCF7增殖能力的影响

目的 研究CENP-H对乳腺癌细胞增殖能力的影响,初步探讨CENP-H与乳腺癌发生、发展的关系.方法 将反转录病毒质粒pMSCV和pMSCV-CENP-H经脂质体转染至293FT细胞制备病毒,并感染MCF7细胞,用嘌呤霉素筛选及Western blot鉴定,建立CENP-H基因稳定表达的MCF7细胞株;应用噻唑盐(MTT)法、平板集落形成实验、5-溴-2-脱氧尿苷(BrdU)掺入法检测CENP-H对MCF7细胞增殖的影响.结果 成功建立稳定表达CENP-H的MCF7细胞株,并发现CENP-H过表达可上调细胞增殖相关分子cyclin D1的表达;MTT、平板克隆实验及Brdu掺入实验结果显示CENP-H过表达后,MCF7的增殖能力模型增强.结论 CENP-H可上调cyclin D1的表达,增强MCF7的增殖能力,提示CENP-H可能在乳腺癌发生、发展中起重要作用.