去甲肾上腺素对巨噬细胞极化的调节作用研究北大核心CSCD

目的:研究去甲肾上腺素(NE)在巨噬细胞极化中的功能。方法:获取并培养小鼠腿骨巨噬细胞(BMMs)。BMMs以1×10^(4)个/孔接种于96孔板,待细胞贴壁后给予0、100 ng/ml LPS或20 ng/ml IL-4,再分别给予浓度梯度的NE处理,药物处理48 h后行SRB分析。BMMs以1×10^(5)个/孔接种于12孔板,待细胞贴壁后给予100μmol/L NE处理24 h,同时按照时间梯度再分别给予100 ng/ml LPS或20 ng/ml IL-4,完成M1、M2培养后进行RNA抽提,并进行qPCR检测。流式细胞术分析巨噬细胞纯度及巨噬细胞表面标志物。结果:实验剂量的NE总体对巨噬细胞的毒性较小。NE促进巨噬细胞向M1极化,NE有助维持M2极化的巨噬细胞功能,且NE可能通过调控巨噬细胞代谢状态调控M1及M2的极化与功能。结论:高浓度NE对M1及M2存活及功能具有调节作用,提示NE在适当剂量与合适时间窗口对脓毒症患者的治疗较为关键。     

肺血管内皮细胞对交感神经末梢去甲肾上腺素释放的影响

ｃＧＭＰ升高抑制肾上腺能神经末梢释放去甲肾上腺素（ＮＥ），内皮细胞释放的舒张因子（ＥＤＲＦ）增加ｃＧＭＰ，故其对交感神经ＮＥ的释放可能有调节作用。本文观察去内皮细胞或抑制ＥＤＲＦ合成后肺血管对跨膜交感神经刺激（ＴＮＳ）的反应及对２－〔１４Ｃ〕－ＮＥ的摄取和释放。利用磨擦损伤内皮细胞后或使用ＬＮＭＭＡ抑制ＥＤＲＦ合成后，肺血管对ＴＮＳ刺激的反应明显增加，尤以低频率刺激为甚。肺血管对２－〔１４Ｃ〕－Ｎ     

脂多糖对人脐静脉血管内皮细胞的直接损伤作用

血管内皮细胞 (ｅｎｄｏｔｈｅｌｉａｌｃｅｌｌｓ,ＥＣ)炎症反应是感染性休克向不良方向演变的重要原因 ,有关激活剂 (ＬＰＳ、ＩＬ 1)导致ＥＣ活化的研究是败血症病理反应的中心课题。内毒素引起微循环ＥＣ损伤是内毒素性组织损伤的重要环节之一。本实验探讨了ＬＰＳ对体外培养脐静脉ＥＣ的直接损伤作用。1　材料与方法1 1　材料 :ＲＭＰＩ 16 40培养基、ＬＰＳ(Ｓｉｇｍａ产品 )1 2　细胞培养及鉴定 :内皮细胞传 4代。ＰＭＮ的分离采用Ｐｅｒｃｏｌｌ’ｓ分离液 5 0 0ｇ离心 2 0ｍｉｎ取白细胞层用培养基稀释成2× 10 6 ｍＬ备用。1 3　…     

高效毛细管电泳法分离肾上腺素和去甲肾上腺素

利用毛细管电泳法分离肾上腺素，去甲肾上腺素，采用自由区带电泳法(CZE)，40mmol／L硼砂缓冲液20PSI气压进样5s,等电压20KV分离12min，应用200nm波长检测，分离温度25℃。结果显示两种物质完全分离。     

肾上腺素、去甲肾上腺素对小鼠胸腺的影响

目的探讨肾上腺素、去甲肾上腺素对小鼠胸腺的影响。方法取5-6周雄性小鼠,随机分为4组,每组15只,腹腔注射生理盐水（对照组）、肾上腺索和去甲肾上腺素（NE＋E）,分别于5、7、9天后取胸腺,HE染色观察胸腺组织学变化,免疫组织化学法检测胸腺组织中相关凋亡基因Bcl-2和Bax产物的表达,原位末端标记法（TUNEL）计算胸腺组织凋亡细胞数。结果药物处理组的胸腺细胞凋亡均高于对照组（P〈0．05）,而各药物组无显著性差异（P2〉0．05）。结论肾上腺素和去甲肾上腺素可促进小鼠胸腺组织退化,诱导小鼠朐腺细胞凋亡。     

高效毛细管电泳法分离肾上腺素和去甲肾上腺素

利用毛细管电泳法分离肾上腺素，去甲肾上腺素，采用自由区带电泳法(CZE)，40mmol/L硼砂缓冲液20PSI气压进样5s，等电压20KV分离12min，应用200nm波长检测，分离温度25℃。结果显示两种物质完全分离。     

心肌缺血—再灌注损伤与心肌去甲肾上腺素的释放

家兔急性开胸实验,结扎冠状动脉左室支35分钟后,去除结扎(再灌注)10分钟,发现心脏功能较单纯结扎组明显降低,再灌注区心肌去甲肾上腺素(NA)含量显著降低,同时伴有组织Ca~( )含量显著升高。测定血钙和组织含水量结果提示,再灌注后心肌Ca~( )含量的升高系由Ca~( )在细胞内的堆积所致。再灌注损伤可能与再灌注过程中心肌组织内源性儿茶酚胺大量释放有关。     

胚胎期缺氧后肾脏内肾上腺素与去甲肾上腺素的含量变化

本文用高效液相色谱电化学检测方法(HPLC-EC)研究胎儿期缺氧后,在新生鼠肾脏内肾上腺素(E)和去甲肾上腺索(NA)含量的变化。发现块氧组肾脏内E的含量生后第一天高于对照组,以后逐渐下降与对照组相接近。NA含量在生后第一天低于对照组,五天后显著上升。.肾重与体重之比值缺氧组高于对照组,有统计学意义。     

去甲肾上腺素诱导严重烧伤大鼠脑组织VEGF表达的实验研究

目的：观察去甲肾上腺素（NE）诱导严重烧 伤后24h大鼠脑组织血管内皮细胞生长因子(VEGF)的表达变化。方法:(1 )采用40%全身总体表面积（TBSA）Ⅲ°烧伤大鼠模型，用干、湿重法检测NE刺激烧伤24h大 鼠脑组织含水量；(2)用高效液相色谱法，检测烧伤大鼠脑组织去甲肾上腺素活性水平的变 化;(3) 用免疫蛋白印迹法（Western blotting）检测NE诱导脑组织VEGF蛋白表达变化。 结果：(1) 烧伤大鼠和NE刺激后的烧伤大鼠脑组织水肿明显；(2)烧伤后2 4 h大鼠脑组织NE活性增加，而NE刺激后的烧伤大鼠，脑组织NE的活性增加显著;(3) NE刺 激剂量增大时，脑组织VEGF的蛋白表达逐渐增加，烧伤后VEGF的蛋白表达增加明显，随NE刺 激剂量增大，烧伤后VEGF的蛋白表达明显增强。结论:NE可诱导严重烧 伤大鼠脑组织VEGF的蛋白表达，提示烧伤后NE水平增高是脑水肿形成的一个重要因素。     

蝮蛇毒血小板抑制因子减轻LPS诱导的内皮细胞损伤

目的:探讨蝮蛇毒血小板抑制因子(AHV-PI)对体外脂多糖(LPS)诱导的人脐静脉血管内皮细胞(HUVECs)损伤的影响及其作用机制。方法:体外培养HUVECs,运用LPS(1 mg/L)诱导HUVECs炎症损伤模型,实验分为空白对照组、LPS组、AHV-PI组和AHV-PI+LPS组。MTT比色法检测HUVECs的活力,倒置显微镜观察HUVECs的形态变化,筛选出AHV-PI最适浓度为5 mg/L。流式细胞术检测细胞凋亡;免疫组化法观察胞内组织型纤溶酶原激活物(T-PA)以及纤溶酶原激活物抑制剂-1(PAI-1)表达情况;ELISA法检测HUVECs上清液中细胞间黏附分子-1(ICAM-1)和组织因子(TF)含量;免疫荧光染色检测胞核内NF-κB亚基p65激活转位情况。结果:LPS组细胞明显梭形化,长宽比增大,呈成纤维细胞状,胞浆出现颗粒样物质。AHV-PI浓度低于5 mg/L时对HUVECs的活性和形态没有明显影响,但可减轻LPS引起的HUVECs的活力抑制和形态改变。与对照组比较,LPS组上清液中TF和ICAM-1含量升高,胞内T-PA和PAI-1表达减少;与LPS组相比,AHV-PI+LPS组上清液中TF和ICAM-1的含量显著降低,细胞内T-PA和PAI-1表达增多,细胞核内NF-κB p65表达减少。结论:AHV-PI能减轻HUVECs损伤,其保护机制与抑制细胞因子分泌及NF-κB活化有关。     

青蒿素减轻LPS诱导的肠上皮细胞屏障功能损伤的实验研究

目的:探究青蒿素对脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)诱导的大鼠肠上皮IEC-6细胞屏障功能损伤的影响。方法:体外培养IEC-6细胞,随机分为5组:对照组、LPS(100 mg/L)组和LPS+青蒿素(30、50和100μmol/L)组,MTT法检测各组细胞毒性变化,ELISA检测各组细胞分泌炎性因子TNF-α、IL-1β和IL-6水平的变化,电阻仪检测肠上皮细胞跨上皮电阻(TER),酶标仪检测单层细胞对辣根过氧化物酶(HRP)的通透性,RT-qPCR和Western blot检测各组细胞紧密连接蛋白(ZO-1、claudin-1和occludin)以及TLR4/My D88/NF-κB mRNA和蛋白表达的变化。结果:LPS与青蒿素在本实验浓度范围对IEC-6细胞均无毒性。与对照组相比,LPS处理下,细胞分泌TNF-α、IL-1β和IL-6水平以及TLR4/My D88/NF-κB的mRNA和蛋白表达明显增加,ZO-1、claudin-1和occludin的mRNA和蛋白表达降低。而青蒿素干预下,细胞分泌TNF-α、IL-1β和IL-6水平以及TLR4/My D88/NF-κB mRNA和蛋白表达明显降低,ZO-1、claudin-1和occludin的mRNA和蛋白表达升高(P0.05),均呈现浓度依赖性。结论:青蒿素可能通过抑制TLR4/My D88/NF-κB通路减轻LPS诱导的肠上皮细胞屏障功能损伤。     

卡托普利对LPS致血管内皮细胞活化及损伤的拮抗作用

目的:探讨血管紧张素转换酶抑制剂对脂多糖(LPS)诱导的人脐静脉内皮细胞(HUVEC)活化及损伤的拮抗作用及可能机制。方法:建立体外人脐静脉内皮细胞培养。细胞生长至融合状态后分别加入LPS(1mg/L)及不同浓度的卡托普利(Cap)(10^-7mol/L、10^-5mol/L及10^-3mol/L)孵育18h。ELISA方法检测培养上清中血管假性血友病因子(vWF)含量,流式细胞仪间接免疫荧光法检测细胞膜表面细胞间粘附分子(ICAM)-1蛋白表达。同时利用原位杂交方法检测肿瘤坏死因子-α(TNFα)mRNA表达。结果:ELISA及间接免疫荧光法检测的结果提示暴露于1mg/LLPS后,HUVEC的vWF及ICAM-1表达明显强于对照组,加入Cap后,随Cap浓度增加明显下调LPS升高的vWF及ICAM-1表达,至Cap为10^-3mol/L时,其vWF与ICAM-1表达与LPS组有明显差别(P＜0.05)。Cap抑制LPS升高的vWF及ICAM-1表达呈一定的浓度依赖方式。原位杂交显示Cap10^-5mol/L及10^-3mol/L时表现明显下调TNFαmRNA表达,与LPS组比较差异明显(P＜0.05,P＜0.01)。结论:Cap对脂多糖诱导的HUVEC的活化及损伤有拮抗作用。     

白藜芦醇抑制叔丁基过氧化物诱导的外周血内皮祖细胞损伤

目的:观察白藜芦醇对叔丁基过氧化物诱导的人外周血内皮祖细胞(EPC)凋亡的影响,探讨其可能机制。方法:密度梯度离心法获取人外周血单个核细胞,培养4 d后,收集贴壁细胞。实验分为对照组、叔丁基过氧化物诱导组和白藜芦醇+叔丁基过氧化物组。采用二苯基四氮唑溴盐(MTT)比色法和5-溴脱氧尿嘧啶核苷(Brd U)ELISA法检测EPC增殖能力;采用改良Boyden小室法检测EPC增殖及迁移能力;Annexin V-FITC/PI染色及流式细胞术检测EPC凋亡率;比色法检测caspase-3活性;荧光探针H_2DCF-DA法检测细胞内活性氧簇(ROS)水平;Western blot检测cleaved caspase-3、Bax及Bcl-2蛋白的表达。结果:白藜芦醇能抑制叔丁基过氧化物诱导的EPC凋亡,并增加EPC增殖及迁移能力;白藜芦醇降低EPC细胞内ROS水平,抑制caspase-3的活性及cleaved caspase-3的蛋白水平,同时能促进Bcl-2及抑制Bax蛋白表达。结论:白藜芦醇对叔丁基过氧化物诱导的EPC凋亡有抑制作用,其机制可能与抗氧化应激有关。     

炎性细胞因子及脂多糖诱导产生的一氧化氮对人血管内皮细胞的损伤作用

目的:探讨炎症过程诱生的一氧化氮(NO)对内皮细胞的损伤及其作用机制。方法:黄递酶法及Griess法检测可诱导性NO合酶(iNOS)活性、NO₂^-/NO₃^-水平,RT-PCR技术分析iNOSmRNA的表达;同时观察NO产生后对内皮细胞的损伤作用。结果:IL-1β2×10⁵U/L、TNF-α5×10⁵U/L、γ-INF2×10⁵U/L联用LPS(10mg/L)可诱导出高浓度NOS合成及NO产生,比单用这些细胞因子或LPS诱导的量高两倍多,iNOSmRNA的表达水平也显著增加;同时MDA及LDH释放率明显增加,细胞存活率下降,并伴随细胞受损的形态学改变。而单用上述细胞因子或LPS,以及降低剂量或缩短处理时间,其诱生的NOS及NO与正常对照相比P＞0.05;但MDA及LDH释放率仍增加明显。使用2倍剂量的这些炎性细胞因子或延长处理时间到48h,与标准剂量及24h组相比NOS和NO的增加虽不显著,但细胞生长受限更明显。NOS抑制剂能阻止NO的产生及其对细胞的损伤作用。结论:炎性细胞因子及脂多糖可激活iNOS大量表达诱生高浓度的NO,对内皮细胞具有明显的氧化损伤作用。     

Morphine attenuates endothelial cell adhesion molecules induced by the supernatant of LPS-stimulated colon cancer cells

A large reservoir of bacterial lipopolysaccharide (LPS) is available in the colon and this could promote colon cancer metastasis by enhancing tumor cell adhesion, intravasation, and extravasation. Furthermore, adhesion molecules like ICAM-1, VCAM-1, and E-selectin play important roles in the adhesion of tumor cells to endothelium. This study was designed to determine whether morphine can attenuate the expressions of adhesion molecules up-regulated by the supernatant of LPS-stimulated HCT 116 colon cancer cells (LPS-Sup). In this study, we divided to three groups by cell-growth medium of human umbilical vascular endothelial cells (HUVECs): the control group was incubated in growth factor-free endothelial medium, the Sup group was incubated in the supernatant of HCT 116 cells (Sup), and the LPS-Sup group was incubated in LPS-Sup. To observe effect of morphine to the adhesion molecules expressions in the LPS-Sup group, we co-treated morphine with LPS or added it to LPS-Sup. Adhesion molecule expressions on HUVECs in all three groups were measured during incubation period. Consquentially, ICAM-1, VCAM-1, and E-selectin expressions on HUVECs were significantly lower when morphine was co-treated with LPS than not co-treated. Thus, we suggest that morphine affects the expressions of adhesion molecules primarily by attenuating LPS stimuli on tumor cells.     

白藜芦醇通过影响炎症因子保护LPS刺激后HUVEC细胞

摘要目的：观察白藜芦醇对脂多糖（LPS）刺激人脐静脉血管内皮细胞（HUVEc）后细胞活力及释放炎症因子的影响。方法：体外培养HUVEC,LPS0．1μg·ml^-1刺激,并以不同浓度白藜芦醇干预,采用CCK-8法检测细胞活性,ELISA法检测培养上清液中炎症因子IL-6和PGE2含量。结果：与模型组比较,白藜芦醇5μmol·L^-1以上可提高LPS刺激后HUVEC细胞活力,抑制炎症因子IL-6和PGE2释放（P〈0．05）,并呈一定的量效关系。结论：白藜芦醇对LPS刺激HUVEC细胞有保护作用,此作用可能与抑制炎症因子释放有关。     

LPS预处理减轻CCl4诱导的慢性肝损伤

目的:探讨脂多糖(LPS)预处理对四氯化碳(CCl4)诱导的肝损伤的影响及相关的信号转导分子的变化。方法:雄性Wistar大鼠随机分为正常对照组、肝损伤组和LPS预处理组。肝损伤组和LPS预处理组经皮下注射CCl4并同时饲以高脂饮食造模,于实验第4周末处死动物,取血浆测定内毒素水平和ALT活性;取肝组织测定TNF-α水平;Western blotting测定肝组织中TLR4、p38、p-p38、IκΒ、NF-κΒp65表达;制备肝脏切片,观察肝脏病理改变。结果:LPS预处理可明显减轻CCl4所致肝损伤,经LPS预处理动物血浆ALT活性显著低于肝损伤组（P<0.01）;肝匀浆的TNF-α测定结果表明,LPS预处理组TNF-α含量明显低于肝损伤组（P<0.01）。LPS预处理组TLR4、p-p38、NF-κΒ的表达显著低于肝损伤组,而IκΒ表达显著高于肝损伤组。结论:LPS预处理可以减轻CCl4诱导的肝损伤, LPS预处理引起相关信号转导通路发生了改变,致使致炎因子分泌减少可能是其作用机制。     

ELAVL1 promotes LPS-induced endothelial cells injury through modulation of cytokine storm

Sepsis is a life-threatening systemic organ dysfunction caused by the host's unregulated response to a widespread bacterial infection. Endothelial injury is a major pathophysiologic symptom of sepsis and is considered a critical factor in promoting the progression of disease severity. ELAV like RNA binding protein 1(ELAVL1) is a ubiquitously expressed RNA-binding protein that may play an important role during sepsis. Nonetheless, the molecular mechanisms of ELAVL1 on endothelial cell damage in sepsis have not been well defined. Here, we aimed to confirm the role of ELAVL1 in sepsis-induced endothelial cell damage using lipopolysaccharide (LPS)-induced zebrafish and endothelial cells (ECs) models. We found that zebrafish larvae treated with LPS exhibited systemic endothelial cell damage, mostly manifested as pericardial edema, curved tail, and impaired angiogenesis. LPS treatments also significantly induced the expression levels of inflammatory cytokines (interleukin-6 (IL-6), IL-8, and tumor necrosis factor (TNF)-α) in vivo. In vitro, we observed the increase of ELAVL1 cytoplasmic translocation with LPS treatment. Mechanistically, targeted disruption of the ELAVL1 gene decreased the expression of TNF-α, IL-6, and IL-8 during induction of sepsis and alleviated LPS-induced blood vessel injury in zebrafish. Taken together, our study indicates that ELAVL1 knockdown may alleviate sepsis-induced endothelial cells injury by suppressing cytokine storm. Our research suggests that inhibition of ELAVL1 could reduce the level of inflammatory cytokine production induced by LPS and protect against endothelial cell injury. ELAVL1 might be a potential therapeutic target to block endothelial cells injury associated with sepsis.     

肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体参与雷帕霉素诱导血管内皮细胞功能损伤的体外研究

目的: 探讨雷帕霉素对内皮细胞凋亡和增殖、迁移能力的影响,以及肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体(TRAIL)表达水平的变化。方法: 用浓度为0、1、10、100 μg/L 的雷帕霉素孵育内皮细胞24 h,应用CCK8法检测血管内皮细胞的增殖能力,Transwell小室和划痕试验检测细胞迁移能力,DAPI染色观察凋亡细胞核形态改变,Western blotting法检测caspase-3活性以显示血管内皮细胞的凋亡,并用 Western blotting检测TRAIL在凋亡的内皮细胞中的表达。结果: 雷帕霉素(1-100 μg/L)能诱导血管内皮细胞凋亡并抑制其迁移能力(P<0.01)。除雷帕霉素1 μg/L外, 10 μg/L和100 μg/L雷帕霉素均能抑制内皮细胞增殖能力(P<0.01),同时雷帕霉素(10-100 μg/L)使TRAIL蛋白表达增加,两者作用均呈浓度依赖性(P<0.01)。结论: 雷帕霉素能诱导内皮细胞发生凋亡并抑制其增殖和迁移能力。TRAIL表达上调与雷帕霉素诱导血管内皮细胞损伤有一定的相关性。