Wnt/β-catenin通路在糖尿病肾病大鼠的表达及化瘀通络中药的干预作用

目的探讨Wnt/β-catenin通路在糖尿病肾病(DN)大鼠肾脏的表达及化瘀通络中药对其的干预作用。方法 60只大鼠中选取10只为对照组,其余大鼠给予高糖高脂饲料喂养联合ip小剂量链脲佐菌素(STZ)制备DN模型。成模大鼠随机分为模型组、厄贝沙坦组、化瘀通络中药组,各组ig给药,20周末检测24 h尿蛋白定量,RT-PCR法检测Wnt4、β-catenin m RNA表达,免疫组化及Western blotting法检测Wnt4、β-catenin蛋白的表达。结果与对照组比较,模型组大鼠24 h尿蛋白定量及Wnt4、β-catenin m RNA和蛋白的表达量明显升高(P0.01)。与模型组比较,中药组及厄贝沙坦组24 h尿蛋白定量及Wnt4、β-catenin m RNA和蛋白的表达量明显降低(P0.05、0.01)。结论化瘀通络中药可减少DN大鼠尿蛋白,且能够抑制大鼠肾脏存在的Wnt/β-catenin通路高表达,该作用可能是其减少蛋白尿排泄的主要途径之一。     

化瘀通络中药对糖尿病肾病大鼠肾脏足细胞裂孔膜蛋白podocin、CD2AP的调节作用

目的探讨化瘀通络中药对糖尿病肾病大鼠肾脏足细胞裂孔膜蛋白podocin、CD2AP的调节作用。方法 40只大鼠采用高糖高脂饲料联合1%链脲佐菌素(streptozotocin,STZ)35 mg/kg腹腔注射复制糖尿病大鼠模型,将造模成功的36只大鼠按随机数字表法分为模型组、化瘀通络组和厄贝沙坦组,每组12只。另取10只正常大鼠作为正常组。化瘀通络组和厄贝沙坦组分别给予化瘀通络中药和厄贝沙坦灌胃,同时正常组和模型组等量蒸馏水灌胃。采用ELISA法检测不同时间点各组大鼠24 h尿蛋白定量;连续干预16周后分别检测各组大鼠体重(body weight,BW)、肾重(kidney weight,KW)、肾脏指数(kidney index,KI)、空腹血糖(fasting blood glucose,FBG)、血肌酐(serum creatinine,SCr)、血尿素氮(blood urea nitrogen,BUN)和尿酸(uric acid,UA);光镜和电镜下观察肾组织病理形态学变化;采用Western blot和Real-time PCR法检测肾脏足细胞裂孔膜蛋白podocin、CD2AP蛋白和mRNA表达。结果 (1)与正常组比较,模型组大鼠第4、8、12、16周24 h尿蛋白定量明显升高(P0.01),造模后大鼠BW减轻,KI、FBG、SCr、BUN和UA水平均升高(P0.01);与模型组比较,化瘀通络组和厄贝沙坦组第4、8、12、16周24 h尿蛋白定量明显降低,且化瘀通络组24 h尿蛋白定量较厄贝沙坦组减少更明显(P0.05,P0.01);造模后化瘀通络组和厄贝沙坦组BUN水平降低(P0.05,P0.01)。(2)肾脏病理显示:模型组肾脏结构紊乱,基底膜明显增厚,系膜重度增生,足突广泛融合;化瘀通络组和厄贝沙坦组肾脏病理改变均有不同程度减轻。(3)Western blot和Real-Time PCR显示:与正常组比较,模型组大鼠肾组织podocin、CD2AP蛋白和mRNA表达水平均降低(P0.01);与模型组比较,化瘀通络组和厄贝沙坦组podocin、CD2AP蛋白和mRNA表达水平均升高(P0.01);化瘀通络组podocin、CD2AP蛋白和CD2AP mRNA表达均明显高于厄贝沙坦组,差异有统计学意义(P0.05)。结论化瘀通络中药可以降低糖尿病肾病大鼠尿蛋白,保护肾功能,改善肾脏病理改变,其机制可能与上调裂孔膜蛋白podocin、CD2AP表达有关。     

化瘀通络中药对糖尿病肾病大鼠肾脏病理及肾脏TGF-β_1/Smad信号通路的影响

目的分析化瘀通络中药对糖尿病肾病(DN)大鼠肾脏病理及肾脏TGF-β_1/Smad信号通路相关因子表达的影响。方法糖尿病大鼠模型采用高脂饲料联合腹腔注射链脲佐菌素建立,大鼠分为正常对照组、模型组、中药组和厄贝沙坦组,各组相应药物剂量灌胃。灌胃16周检测各组大鼠空腹血糖(FBG)、血肌酐(Scr)、尿素氮(BUN)、24 h尿蛋白定量(24hUTP),肾组织行光镜、电镜观察,Real-time PCR检测肾脏TGF-β_1、Smad2、Smad7mRNA的表达。结果与正常对照组比较,模型组各项指标均有差异(P0.05);与模型组比较,两治疗组Scr、BUN、24hUTP及TGF-β_1、Smad2 mRNA表达水平明显下降(P0.05),Smad7 mRNA表达水平明显上升(P0.05),病理损伤明显减轻;与厄贝沙坦组比较,中药组24hUTP明显降低(P0.05)。结论化瘀通络中药对糖尿病肾病大鼠肾脏有保护作用,其机制可能与调节TGF-β1/Smad信号通路有关。     

化瘀通络中药对糖尿病肾病大鼠肾小球电荷屏障的影响

目的探讨化瘀通络中药治疗糖尿病肾病蛋白尿可能的作用靶点。方法 60只SD大鼠随机选10只做为正常组,其余大鼠采用高糖高脂饲料喂养联合腹腔注射链脲佐菌素建立糖尿病肾病模型。将成模大鼠随机分为模型组15只、厄贝沙坦组14只、中药组15只。厄贝沙坦组给予厄贝沙坦片13.5 mg/(kg·d),中药组给予化瘀通络中药颗粒剂4.41 g/(kg·d),正常组及模型组给予等量饮用水灌胃,每日1次,共16周。分别于造模前(0周)及造模后第2、4、8、12、16周行24 h尿蛋白定量检测;第16周末取肾组织行光镜病理学观察,测量肾小球基底膜厚度并计数阴离子位点,检测肾组织硫酸乙酰肝素蛋白多糖(HSPG)、乙酰肝素酶(HPA)、足盂蛋白(PCX)的表达及尿PCX含量。结果模型组第2、4、8、12、16周24 h尿蛋白定量水平较同时间点正常组升高,厄沙贝坦组和中药组在第2、4、8、12、16周24 h尿蛋白定量水平低于同时间点模型组,并且中药组在12、16周24 h尿蛋白定量水平低于同时间点厄贝沙坦组(P0.05或P0.01)。厄贝沙坦组、中药组较模型组基底膜增厚减轻、阴离子位点数量增多(P0.05),病理损伤得以改善。各组大鼠肾组织HSPG蛋白及mRNA表达差异无统计学意义(P0.05);与模型组比较,厄贝沙坦组、中药组HPA蛋白及mRNA表达减少,PCX蛋白及mRNA表达增加,尿PCX含量下降(P0.05)。结论化瘀通络中药可减少糖尿病肾病尿蛋白,其机制可能是抑制肾组织HPA的过表达,从而减少基底膜阴离子位点丢失,并能上调肾组织PCX的表达,减少尿PCX排泄,维持肾小球电荷屏障的完整性。     

虫草益肾方对单侧输尿管梗阻大鼠Notch信号通路的影响

目的:探讨虫草益肾方对(unilateral ureteral occlusion,UUO)模型大鼠Notch信号通路的调控作用。方法:80只SPF级雄性SD大鼠随机分假手术组10只及造模组30只,造模组采用UUO法进行模型制备,术后随机分为模型组、虫草益肾方组(虫草组)与厄贝沙坦组,每组20只。分别给予虫草益肾方水煎液、厄贝沙坦水溶液及蒸馏水进行灌胃,于第7天及14天收集血清及肾组织。HE染色观察其病理改变,采用Elisa法检测血清Notch1、Jagged1、Hes1蛋白的表达。结果:虫草益肾方可改善UUO大鼠肾脏的病理变化程度;模型组大鼠7天、14天血清中Notch1、Jagged1、Hes1蛋白表达与假手术组相比明显增加(P0.05),虫草组、厄贝沙坦组大鼠7天、14天血清中Notch1、Jagged1、Hes1蛋白表达与模型组相比均减少(P0.05)结论:虫草益肾方可改善因输尿管梗阻所致的肾脏结构病理变化,其作用可能与下调Notch1、Jagged1、Hes1蛋白表达,从而抑制Notch信号通路有关。     

化瘀通络中药对糖尿病肾病大鼠肾脏和AMPK/Nox4信号通路的作用研究

目的探讨化瘀通络中药对糖尿病肾病(diabetic nephropathy,DN)大鼠肾脏的保护作用以及对腺苷酸活化蛋白激酶(AMP-activated protein kinase,AMPK)/烟酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸氧化酶4(nicotinamide adenine dinucleotide phosphatase oxidase 4,Nox4)信号通路的干预作用。方法随机选取7只SD大鼠作为对照组,其余大鼠采用高糖高脂饲料喂养联合ip链脲佐菌素(35 mg/kg)建立DN模型,DN大鼠随机分为模型组、化瘀通络中药(4.41 g/kg)组和厄贝沙坦(13.5 mg/kg)组。给予化瘀通络中药16周后,取尿液检测大鼠24h尿蛋白(urinetotalprotein,UTP)和8-羟基脱氧鸟苷(8-hydroxydeoxyguanosine,8-OHdG)水平;考察各组大鼠肾组织病理变化;考察各组大鼠肾组织超氧化物歧化酶(superoxide dismutase,SOD)活性和丙二醛水平;采用免疫组化法检测各组大鼠肾组织8-OHdG和纤维连接蛋白(fibronectin,FN)蛋白表达;采用qRT-PCR法检测肾组织转化生长因子-β1(transforming growth factor-β1,TGF-β1)m RNA表达;采用Western blotting法检测各组大鼠肾组织TGF-β1、AMPKα、磷酸化AMPKα(p-AMPKα)、Nox4蛋白表达。结果与模型组比较,化瘀通络中药组大鼠尿液24 h UTP和8-OHdG水平明显降低(P0.01);肾脏病理损伤缓解,肾组织细胞外基质(extracellular matrix,ECM)堆积减少,肾组织胶原面积明显降低(P0.01);肾组织SOD活性明显升高(P0.05),肾组织丙二醛水平显著下降(P0.01);肾组织8-OHd G和FN表达减少;肾组织TGF-β1 mRNA和蛋白表达水平显著降低(P0.05、0.01);肾组织p-AMPK/AMPK蛋白表达水平明显升高(P0.05),Nox4蛋白表达水平明显降低(P0.05)。结论化瘀通络中药能够通过作用于AMPK/Nox4信号通路,从而抑制DN大鼠氧化应激、减少ECM大量堆积、降低UTP排泄、保护肾脏。     

清热益气化瘀通络方对糖尿病肾病大鼠足细胞表型转化的作用

目的探讨清热益气化瘀通络方对糖尿病肾病(DN)大鼠足细胞表型转化即上皮-间质细胞转分化的作用。方法将40只健康雄性Wistar大鼠随机分为正常组、糖尿病肾病组、清热益气化瘀通络组、厄贝沙坦组,每组10只。除正常组大鼠外,其余组大鼠均采用腹腔注射链脲佐菌素方法制作DN模型。造模成功后,清热益气化瘀通络组和厄贝沙坦组给予相应药物灌胃,正常组和糖尿病肾病组给予等量生理盐水灌胃,均连续12周。灌胃结束后,检测各组大鼠血糖、血肌酐、尿素氮及24 h尿蛋白定量,应用实时定量RT-PCR法检测肾皮质中Wilms肿瘤抑制因子(WT1)、钙黏蛋白(P-Cadherin)、结蛋白(desmin)mRNA表达情况。结果实验结束时,各造模组的血糖水平均明显高于正常组(P均0.05),但各造模组间血糖水平比较差异均无统计学意义(P均0.05);各造模组的24 h尿蛋白定量也均明显高于正常组(P均0.05),但厄贝沙坦组和清热益气化瘀通络组24 h尿蛋白定量均明显低于糖尿病肾病组(P均0.05),且清热益气化瘀通络组明显低于厄贝沙坦组(P均0.05)。WT1 mRNA表达(2-△Ct)及相对定量(2-△△Ct)结果显示从高到低依次为正常组、厄贝沙坦组、清热益气化瘀通络组、糖尿病肾病组,但4组间比较差异均无统计学意义(P均0.05);正常组、厄贝沙坦组、清热益气化瘀通络组P-Cadherin mRNA表达(2-△Ct)及相对定量(2-△△Ct)均明显高于糖尿病肾病组(P均0.05),desmin mRNA表达(2-△Ct)及相对定量(2-△△Ct)均明显低于糖尿病肾病组(P均0.05),但3组间比较差异均无统计学意义(P均0.05)。结论清热益气化瘀通络方可增加足细胞P-Cadherin表达而降低desmin表达,具有拮抗糖尿病肾病大鼠足细胞表型转化的作用。     

参藤三黄汤对糖尿病肾病大鼠的治疗作用研究

目的:探索参藤三黄汤治疗糖尿病肾病(diabetic nephropathy,DN)的作用机制,为糖尿病肾病的治疗提供科学实验依据。方法:通过腹腔注射链脲佐菌素(STZ),复制糖尿病肾病动物模型,按随机数字表法分为模型组、厄贝沙坦组及参藤三黄汤高、中、低剂量组,连续12周后取检测各组大鼠肾脏病理变化、血糖、血尿素氮及24 h尿蛋白定量以及肾组织Nrf2、ARE表达情况。结果:与正常组比较,模型组大鼠的血糖、血尿素氮及24 h尿蛋白定量显著增加,体质量显著降低,肾脏病理改变明显,差异有统计学意义。与模型组比较,参藤三黄汤组、厄贝沙坦组大鼠血糖及24 h尿蛋白定量显著降低,肾脏功能有所恢复,差异有统计学意义,说明参藤三黄汤具有调节Nrf2/ARE信号通路分子蛋白表达的作用。结论:参藤三黄汤对糖尿病肾病具有明显的治疗作用,其作用机制与调节Nrf2/ARE信号通路分子蛋白表达有关。     

Notch信号通路在慢性肾衰竭中的表达及芪黄补肾泄浊方的肾保护作用

目的 探讨芪黄补肾泄浊方对UUO大鼠模型Notch信号通路表达的影响，探讨其延缓慢性肾衰竭(CRF)肾间质纤维化(RIF)进展的机制。方法 将80只SPF级雄性SD大鼠随机分为假手术组、模型组、芪黄补肾泄浊方组(芪黄补肾组)与厄贝沙坦组，每组20只。采用左侧输尿管完全梗阻法(UUO)建立慢性肾衰竭肾间质纤维化模型，大鼠灌胃，芪黄补肾泄浊方组及厄贝沙坦组给予相应药物水溶液灌胃，假手术组与模型组给予等体积蒸馏水灌胃，每日1次。观察大鼠一般状态；收集大鼠尿液、血清进行尿量、24hUPQ、血清肌酐、血清尿素氮检测；收集各组大鼠梗阻侧肾组织，HE、Masson染色观察肾脏病理改变。免疫组化法观察Notch1、Jagged1和Hes1蛋白表达；Real-Time PCR法检测Notch1 mRNA、Jagged1 mRNA、Hes1 mRNA基因转录；Western blot法检测Notch1、Jagged1、Hes1蛋白表达。结果 与假手术组相比，模型组大鼠状态差，皮毛暗淡，反应迟钝，活动减少，喜蜷卧，饮食量明显减少，芪黄补肾泄浊方可以改善UUO大鼠一般状态，且优于厄贝沙坦组。模型组大鼠24hU...     

活血化瘀中药汤剂对糖尿病肾病大鼠模型肾间质纤维化的影响

目的观察活血化瘀中药汤剂对糖尿病肾病(DN)大鼠模型肾间质纤维化的影响,探讨其可能的作用机制。方法选用健康雄性SD大鼠30只,采用高糖高脂饲料喂养、一次性腹腔注射链脲佐菌素(STZ)诱导建立糖尿病SD大鼠模型,然后平分为DN模型组、活血化瘀组和厄贝沙坦组各10只,活血化瘀组选择活血化瘀中药汤剂灌胃服药,厄贝沙坦组选择厄贝沙坦溶液灌胃服药,模型组灌服等体积0.9%氯化钠注射液,记录三组肾间质纤维化相关指标的变化情况。结果所有大鼠都造模成功,活血化瘀组与厄贝沙坦组大鼠的肾质量都明显低于DN模型组(P0.05)。实验后活血化瘀组与厄贝沙坦组组大鼠BUN、Scr较DN模型组明显降低(P0.05)。实验后DN模型组、活血化瘀组和厄贝沙坦组大鼠尿白蛋白排泄率(UAER)值分别为(16.32±4.29)mg/24 h、(11.50±2.59)mg/24 h和(12.20±3.01)mg/24 h,活血化瘀组和厄贝沙坦组较DN模型组明显降低(P0.05)。TGF-β1主要在肾间质区、肾小管部位及小动脉中表达;FN主要表达在肾小球、细胞外基质和肾小管部位。Western蛋白印迹检测显示活血化瘀组和厄贝沙坦组的FN和TGF-β1蛋白表达水平明显低于DN模型组大鼠(P0.05)。结论活血化瘀中药汤剂能够降低DN大鼠的肾脏肥大,提高肾功能,改善肾组织病变,通过抑制肾组织TGF-βl与FN的表达,延缓肾间质纤维化。     

复方扶芳藤合剂含药血清对大鼠骨髓间充质干细胞Notch信号通路的影响

目的:观察复方扶芳藤合剂含药血清对大鼠骨髓间充质干细胞(BMSCs) Notch信号通路的影响.方法:采用全骨髓贴壁法分离纯化培养大鼠骨髓间充质干细胞;制备复方扶芳藤合剂含药血清,将30只SD大鼠随机分为2组,每组随机15只,分别为ig复方扶芳藤合剂2 g·kg-1 ·d-1 ig的药物干预组和生理盐水2 mL·kg-1·d-1ig的阴性对照组.取10％的含药血清及阴性对照组血清分别干预大鼠BMSCs,采用RT-PCR方法检测Notch1,Jagged1,Hes1 mRNA表达变化;采用免疫细胞化学法检测Notch1,Jagged1表达变化.结果:RT-PCR显示药物干预组Notch1,Jagged1,Hes1的mRNA表达水平均高于阴性对照组(P＜0.05),免疫细胞化学显示药物干预组Notch1,Jagged1蛋白表达均高于阴性对照组(P＜0.05),差异有统计学意义.结论:复方扶芳藤合剂含药血清可以引起大鼠BMSCs Notch信号通路上的关键基因和蛋白表达上调,激活Notch信号通路.     

补肾抑瘤汤含药血清对PC-3细胞Notch1/Jagged1信号通路的影响

目的:通过体外细胞实验研究补肾抑瘤汤对前列腺癌细胞增殖的干预作用及其机制。方法:首先按照血清药理学方法,给予SD大鼠连续灌胃用药7 d,取血制备空白血清和补肾抑瘤汤含药血清;然后以人前列腺癌细胞PC-3为模型研究补肾抑瘤汤含药血清对前列腺癌细胞增殖及Notch1/Jagged1信号通路的影响,噻唑蓝(MTT)比色法检测补肾抑瘤汤含药血清(2.5%,5%,10%,15%)处理PC-3细胞后不同时间点(12,24,36 h)的细胞增殖情况,分别应用逆转录-聚合酶链式反应(RTPCR)及蛋白免疫印迹法(Western blot)分析补肾抑瘤汤含药血清对PC-3细胞Notch1,Jagged1 mRNA和蛋白表达的影响。结果:与空白组比较,经补肾抑瘤汤含药血清处理12,24,36 h后,PC-3细胞增殖受到了不同程度的抑制,其中以36 h的抑制作用最为显著(P0.01);补肾抑瘤汤含药血清对PC-3细胞Notch1,Jagged1 mRNA和蛋白表达均有抑制作用,尤其是补肾抑瘤汤10%,15%含药血清组抑制效果明显(P0.05,P0.01)。结论:补肾抑瘤汤含药血清能明显抑制PC-3细胞增殖,作用可能与调控Notch1/Jagged1表达有一定相关性。     

养阴清肺方调控放射性肺炎大鼠外周血T细胞Notch1,Jagged1信号通路

目的:观察养阴清肺方调控放射性肺炎大鼠T细胞Notch信号受体1(Notch1)及Notch信号配体1(Jagged1)表达规律的影响,探讨其对放射性肺炎防治作用的机制。方法:将40只雌雄各半的SD大鼠以随机数字表法随机分为正常组、模型组、激素组、联合用药组,直线加速器对除正常组外的3组大鼠全胸单次照射,剂量为16 Gy。照射后第1天起各组予相应的药物灌胃。照射后4周,处死大鼠,取全肺称重计算肺系数,取大鼠肺组织进行苏木素-伊红(HE)染色,马松(Masson)染色,Notch1免疫组化染色,取全血标本进行免疫磁珠分选提取T细胞及流式细胞术检测Notch1比率,用提取的T细胞进行实时荧光定量PCR(Real-time PCR),蛋白免疫印迹法(Western blot)测定Notch1,Jagged1 mRNA及蛋白表达,观察各组大鼠在放射后4周肺系数改变及Notch1,Jagged1表达的变化。结果:放射后4周,各组肺系数差异明显,正常组与联合用药组肺系数最为接近;与模型组比较,养阴清肺方联合泼尼松龙可明显降低Notch1 T细胞所占比例(P0.05),可明显降低Notch1,Jagged1mRNA表达(P0.05),明显下调Notch1,Jagged1相关蛋白表达(P0.05)。结论:养阴清肺方能明显下调放射性肺炎大鼠Notch1,Jagged1表达,可能是防治放射性肺炎发生发展的机制之一。     

灯盏花素通过调控LKB1/AMPK和Notch1/Jagged1通路改善高脂血症大鼠血脂水平及肝肾功能的作用机制研究＊

目的 基于LKB1/AMPK和Notch1/Jagged1通路探讨灯盏花素改善高脂血症大鼠血脂水平及肝肾功能的作用机制。方法 60只雄性SD大鼠随机为正常组、模型组、辛伐他汀组（20 mg·kg^-1）和灯盏花素低、中、高剂量组（6、12、24 mg·kg^-1），每组10只。采用先腹腔注射75%蛋黄乳液后饲喂高脂饲料的方式建立高脂血症模型，同时给药干预，1次/天，连续28d。采用ELISA法检测大鼠血清中T-CHO、TG、LDL-C、HDL-C、AST、ALT、Cr、BUN水平；测定大鼠肝脏、肾脏系数；采用HE染色法观察肝肾组织病理学变化；采用免疫组化法检测肝组织p-AMPK、LKB1、HMGCR水平及肾组织Notch1、Jagged1、Hes1水平；采用RT-PCR法检测肝组织p-AMPK、LKB1、HMGCR水平mRNA水平及肾组织Notch1、Jagged1、Hes1 mRNA水平。结果 与正常组比较，模型组大鼠血清TG、T-CHO、LDL-C、ALT、AST、Cr、BUN水平明显升高（P<0.05），HDL-C水平明显降低（P<0.05）；肝脏、肾脏系数明显增加（P<0.05）且出现病理变化；肝组织中p-AMPK、LKB1水平明显降低（P<0.05），HMGCR水平明显升高（P<0.05）；肾组织Notch1、Jagged1、Hes1水平明显升高（P<0.05）。与模型组比较，辛伐他汀组和灯盏花素低、中、高剂量组大鼠血清TG、T-CHO、LDL-C、ALT、AST、Cr、BUN水平明显降低（P<0.05），HDL-C水平明显升高（P<0.05）；肝脏、肾脏系数明显减小（P<0.05）且病变程度减轻；肝组织中p-AMPK、LKB1水平明显升高（P<0.05），HMGCR水平明显降低（P<0.05）；肾组织Notch1、Jagged1、Hes1水平明显降低（P<0.05）。结论 灯盏花素能够改善高脂血症大鼠血脂水平及肝肾功能，其机制与激活LKB1/AMPK通路及抑制Notch/Jagged1通路和HMGCR水平有关。     

清化固肾排毒方对单侧输尿管梗阻大鼠肾组织Notch1和Jagged1表达的影响

目的观察清化固肾排毒方对单侧输尿管梗阻(UUO)大鼠肾组织Notch1和Jagged1表达的影响,探讨其抗肾纤维化的作用机制。方法 72只SPF级SD大鼠随机分为假手术组、UUO模型组、洛丁新组及清化固肾排毒方组。除假手术组外,其余各组大鼠均采用单侧输尿管结扎手术方法(UUO)建立肾纤维化梗阻大鼠模型,术后各组分别予相应药物或0.9%Na Cl溶液灌胃,每日1次。第7、14、21 d后,各组大鼠禁食不禁水1日,处死,取UUO肾组织做病理检测,行Masson染色观察其病理变化,采用免疫组织化学染色方法和实时荧光定量PCR(RT-PCR)法检测Notch1、Jagged1蛋白及mRNA的表达情况。结果随着输尿管梗阻时间延长,肾小管间质纤维化程度逐渐加重。经Masson染色后,与假手术组比较,模型组肾纤维化指数差异有统计学意义(P0.05);与模型组比较,清化固肾排毒方组和洛丁新组大鼠肾纤维化程度相对减轻,差异有统计学意义(P0.05)。免疫组化和PCR结果显示,清化固肾排毒方组和洛丁新组大鼠肾组织Notch1和Jagged1表达显著低于模型组(P0.05)。清化固肾排毒方组与洛丁新组组间比较差异无统计学意义(P0.05)。结论清化固肾排毒方可能通过下调Notch1和Jagged1来抑制Notch信号转导通路,发挥改善肾间质纤维化和保护肾脏的作用。     

Effects of Xinfeng capsule on pulmonary function based on treg-mediated notch pathway in a rat model of adjuvant arthritis

Objective

To observe the impact of xinfeng xapsule (XFC) on pulmonary function in a rat model of adjuvant arthritis (AA) and to investigate the mechanism of action.

Methods

Forty rats were randomly divided into four groups of ten: normal control (NC); model control (MC); tripterygium glycosides tablet (TPT); and xinfeng capsule (XFC). Except for the NC group, AA was induced in all rats by intracutaneous injection of 0.1 mL Freund's complete adjuvant in the right paw on the 19th day. NC and MC groups were given (0.9%) physiological saline. The TPT and XFC groups were given TPT (10 mg/kg) and XFC (1.2 g/kg), respectively. Thirty days after administration, changes in paw edema (E), the arthritis index (AI), pulmonary function, levels of regulatory T-cells (Treg), ultrastructure of lung tissue, and expression of Notch receptors and ligands in lung tissue were observed.

Results

In the MC group, E and the AI were increased and pulmonary function significantly decreased; the structure of alveolar type-II cells was damaged; ratios of Treg in peripheral blood were reduced; and expression of Notch receptors such as Notch3 and Notch4 and ligands such as Delta1 in lung tissue were significantly increased whereas expression of Notch1, Jagged1 and Jagged2 were significantly decreased. After intervention with XFC, E and the AI were decreased; pulmonary function was enhanced; the structure of alveolar type-II cells was improved; and expression of Treg, Notch1, Jagged1, Jagged2 was elevated, whereas that of Notch3, Notch4 and Delta1 was reduced.

Conclusion

XFC can not only inhibit E and the AI and improve joint symptoms, it can also improve pulmonary function and reduce inflammation in lung tissue. These actions could be carried out through increases in the expression of Treg, Notch receptors (Notch1) and ligands (Jagged1, Jagged2), and reductions in the expression of Notch3, Notch4 and Delta1. These phenomena would reduce the deposition of immune complexes and the inflammatory response in lung tissue, thereby improving joint symptoms and pulmonary function.     

参藤三黄汤合葛根芩连汤对糖尿病肾脏疾病大鼠的治疗作用

目的:探讨参藤三黄汤合葛根芩连汤对糖尿病肾脏疾病(DN)的保护机制。方法:通过单侧肾切除术联合注射链脲佐菌素(STZ)复制DN模型大鼠,采用随机数字表法分为空白组、模型组、厄贝沙坦组(15 mg·kg-1)、参藤三黄汤合葛根芩连汤高、中、低剂量(5,10,20 g·kg-1)组。分别予以相应药物灌胃8周,检测各组大鼠体质量、血糖、血尿素氮(BUN),24 h尿量(24 h U-vol),24 h尿蛋白(24 h U-pro),血清肌酐(SCr),肾质量/体质量指数(KW/BW),取各组大鼠肾组织,匀浆取上清,试剂盒检测丙二醛(MDA),超氧化物歧化酶(SOD)及过氧化氢酶(CAT)的含量,蛋白免疫印迹法(Western blot)检测Smad泛素化调节因子2(Smurf2),基质金属蛋白酶-9(MMP-9)及转化生长因子-β1(TGF-β1)的表达情况。结果:与空白组比较,模型组大鼠体质量明显降低(P<0.05),KW/BW增大(P<0.05),各项生化指标明显异常,表现在血糖明显升高(P<0.05),BUN,24 h U-vol,24 h U-pro,SCr及MDA明显升高,SOD及CAT明显降低(P<0.05)。Western blot显示,Smurf2及TGF-β1蛋白表达升高(P<0.05),MMP-9蛋白表达降低(P<0.05)。与模型组比较,厄贝沙坦组和参藤三黄汤合葛根芩连汤各组指标改善明显,体质量增加(P<0.05),KW/BW降低(P<0.05),血糖,BUN,24 h U-vol,24 h U-pro,SCr及MDA明显降低,SOD及CAT明显升高(P<0.05),Smurf2及TGF-β1表达明显降低(P<0.05),MMP-9表达明显升高(P<0.05)。结论:参藤三黄汤合葛根芩连汤能有效改善DN模型大鼠多项生化指标,改善肾脏功能,其作用机制与降低Smurf2及TGF-β1表达,增强及MMP-9的表达密切相关。     

补肾中药对绝经后骨质疏松症大鼠肾组织Notch信号通路的影响

目的：本研究旨在观察去卵巢骨质疏松症大鼠模型肾组织Hes1、Jagged1和Notch1 mRNA及其编码蛋白HES1、Jagged1和Notch1的活性变化,探究补肾中药防治骨质疏松症的分子生物学机制。方法：将75只雌性SD大鼠随机分为正常组、假手术组、模型组、补肾复方组、福善美组,模型组采用切除雌性SD大鼠双侧卵巢的方式建立骨质疏松症模型,补肾复方组运用补肾复方对模型大鼠治疗8周,用福善美作为阳性药物对照组。8周后采用ELISA法检测各组肾组织HES1、Jagged1以及Notch1含量;RT-PCR检测各组Hes1、Jagged1和Notch1相对表达量。结果：与正常组相比,模型组肾组织Hes1、Jagged1和Notch1及其编码蛋白表达明显减少（P<0.01）;与模型组相比,补肾复方组和福善美组肾组织Hes1、Jagged1和Notch1及其编码蛋白的表达均明显增加（P<0.01）;结论：骨质疏松症的发生机制与Notch信号传导通路有关;补肾复方通过激活Notch信号传导通路,可以促进成骨细胞分化,抑制破骨细胞活性,起到防止骨质疏松症的作用。     

新风胶囊对佐剂关节炎大鼠肺功能及Notch信号传导通路的影响

目的：观察新风胶囊对佐剂关节炎（AA）大鼠足跖肿胀度（E）、关节炎指数（AI）、肺系数（LI）、肺功能变化、调节性T细胞（Treg）及肺组织Notch受体、配体表达的影响。方法：将84只大鼠随机分为正常对照（NC）组、模型（Model）组、甲氨喋呤(MTX)组、雷公藤多苷片（TGT）组和新风胶囊低剂量（XFC-L）组、新风胶囊中剂量（XFC-M）组、新风胶囊高剂量（XFC-H）组,每组12只,分别给动物右后足跖皮内注射弗氏完全佐剂（FCA）0.1mL致炎（除NC组外）,致炎后第19d开始给药。NC组及Model组均给予生理盐水,其余5组分别给予MTX、TGT、XFC。观察各组大鼠上述各指标的变化。结果：①与NC组相比,Model组大鼠E、AI、LI在1s内平均呼气流量（FEV1/FVC）、肺泡炎积分、Notch3、Notch4、Delta1表达明显升高（P<0.01）;用力肺活量（FVC）、25%肺活量的最大呼气流量（FEF25）、50%肺活量的最大呼气流量（FEF50）、75%肺活量的最大呼气流量（FEF75）、最大呼气中期流量（MMF）、用力最大呼气流量（PEF）、CD4+ T细胞、CD25+ T细胞、CD4+ CD25+ Treg、Notch1、Jagged1、Jagged2表达明显降低（P<0.01）。②与Model组相比,各治疗组大鼠体重、FVC、FEF25、FEF50、FEF75、MMF、PEF、Notch1、Jagged1、Jagged2及Treg的表达升高;E、AI、LI、FEV/FVC及Notch3、Notch4、Delta1的表达降低（P<0.05或P<0.01）。③与XFC-M组相比,其余各治疗组LI、肺泡炎积分及Notch3、Delta1升高;FVC、FEF25、FEF50、FEF75、MMF、PEF及Notch1、Jagged1、CD4+ T细胞、CD4+ CD25+ Treg降低（P<0.05或P<0.01）。结论：AA大鼠存在关节局部的炎症反应和肺功能的降低,通过相关分析得知肺功能降低与Notch信号传导通路的表达有关;新风胶囊能明显改善AA大鼠关节症状和肺功能,可能通过促进Delta1、Notch3、Notch4的表达、抑制Jagged1、Jagged2、Notch1表达,降低炎症反应和免疫复合物沉积,改善关节和肺部症状。     

地黄饮子对脑缺血再灌注损伤大鼠保护作用及其机制

目的:探讨地黄饮子对脑缺血再灌注损伤大鼠的保护作用及其初步机制。方法:建立大脑中动脉栓塞(MCAO)大鼠模型,随机分为6组,分别为假手术组,模型组,尼莫地平组(0.01 g·kg~(-1)),地黄饮子高、中、低剂量组(38.80,19.40,9.70 g·kg~(-1)),每组20只,连续给药28 d;术后第7,14,28天通过改良神经功能缺损评分(m NSS),第28天行2,3,5-氯化三苯基四氮唑(TTC)染色,苏木素-伊红(HE)染色观察地黄饮子的保护作用,应用免疫荧光技术观察侧脑室室管膜下区(SVZ)的5-溴脱氧尿嘧啶核苷(Brd U)阳性细胞数(第28天)以分析神经干细胞(NSCs)增殖情况,采用实时荧光定量聚合酶链式反应(Real-time PCR)观察Notch1,Jagged1,Hes1 mRNA的表达情况。结果:术后第7,14,28天地黄饮子高、中剂量组,尼莫地平组的m NSS明显低于同时间段的模型组(P0.05,P0.01);术后第28天地黄饮子高、中剂量组和尼莫地平组的脑梗死体积占脑组织体积的百分比均低于模型组(P0.01); HE染色显示地黄饮子高、中剂量组,尼莫地平组大鼠脑组织坏死和软化灶不明显,并可见神经元细胞和神经胶质细胞增生;术后第28天,上述3组SVZ的Brd U阳性细胞数显著高于模型组(P0.05,P0.01),地黄饮子高剂量组Brd U阳性细胞数高于尼莫地平组(P0.05);术后28 d地黄饮子高、中剂量组,尼莫地平组SVZ的Notch1,Jagged1,Hes1 mRNA表达水平明显高于模型组(P0.05,P0.01);尼莫地平组Hes1 mRNA水平高于地黄饮子高、中、低剂量组(P0.05,P0.01)。结论:地黄饮子能改善MCAO大鼠模型的神经功能缺损,减小脑梗死体积,减轻脑组织病理改变,从而对脑缺血再灌注损伤大鼠起到保护作用,可能与激活Notch信号通路,上调Notch1,Jagged1,Hes1 mRNA的表达,从而促进NSCs增殖有关。