青蒿琥酯对人肝癌HepG2细胞增殖和凋亡的影响及联合化疗药物的抗肝癌效应

目的:研究青蒿琥酯对人肝癌HepG2细胞增殖和凋亡的作用,并检测其是否影响HepG2细胞对化疗药物的敏感性。方法:采用CCK-8法观察不同浓度青蒿琥酯对HepG2细胞生长增殖的影响;克隆形成实验检测青蒿琥酯对HepG2细胞克隆形成的影响;Hoechst33258染色观察青蒿琥酯作用HepG2细胞后细胞形态的变化;PI单染流式细胞术检测青蒿琥酯对HepG2细胞周期以及亚二倍体率的影响;AnnexinV-PI双染测定青蒿琥酯对HepG2细胞凋亡的影响;CCK-8法检测青蒿琥酯对HepG2细胞化疗药物敏感性的影响。结果:(1)青蒿琥酯作用于HepG2细胞48h后,能有效抑制其增殖,随着浓度的升高,增殖抑制率越高,IC50值为19.2μmol/L。(2)青蒿琥酯作用HepG2细胞7d后,能有效抑制HepG2细胞形成的克隆数。(3)青蒿琥酯作用于HepG2细胞48h后,Hoechst33258染色可见实验组细胞胞核固缩、边聚和裂解、凋亡小体形成等凋亡形态学变化。(4)青蒿琥酯作用于HepG2细胞48h后,PI单染流式细胞术检测细胞周期发现实验组细胞明显阻滞于G2期。(5)青蒿琥酯作用于HepG2细胞48h后,PI单染实验检测实验组出现明显的亚二倍体凋亡峰;AnnexinV-PI双染实验检测实验组细胞出现明显的早期凋亡细胞群。(6)青蒿琥酯分别联合化疗药物5-氟尿嘧啶、卡铂和表柔比星作用于HepG2细胞48h后,能明显增强化疗药物对肿瘤细胞的抑制作用,增敏倍数分别为3.33、2.02和1.71。结论:(1)青蒿琥酯对人肝癌HepG2细胞有增殖抑制作用,并诱导其凋亡。(2)青蒿琥酯能提高人肝癌HepG2细胞对5-氟尿嘧啶、卡铂和表柔比星的敏感性。     

诱导细胞凋亡青蒿琥酯抗食管癌作用机制研究

 [摘要] 目的 研究青蒿琥酯诱导食管癌细胞凋亡作用及探讨青蒿琥酯抗食管癌作用机制。方法 不同浓度的青蒿琥酯(Artesunate, Art)(0、10、20、40μg/ml) 作用Eca109细胞24h,流式细胞术（Flow cytometry, FCM）方法检测细胞凋亡、周期及细胞中bcl-2和bax蛋白的表达量。结果 青蒿琥酯作用Eca109细胞24h后,与对照组相比,细胞凋亡率显著增高P<0.05,且具有剂量依赖性。青蒿琥酯组与对照组相比,Eca109细胞中bcl-2蛋白表达水平及细胞增殖指数显著降低P<0.05,而bax蛋白表达量显著增高P<0.05,且具有剂量依赖性。结论 青蒿琥酯可以通过调节Eca109细胞中bcl-2、bax蛋白表达水平和细胞增殖,从而诱导Eca109细胞产生凋亡,起到抗食管癌作用。     

青蒿琥酯通过调控PI3K/Akt信号通路抑制肝癌细胞增殖促进凋亡

目的 探讨青蒿琥酯对人肝癌细胞系HepG2的增殖和凋亡的影响及可能机制.方法 体外培养人肝癌细胞系HepG2,分别用浓度为12.5、25、50、100mg/L青蒿琥酯作用不同时间后,采用CCK-8实验检测细胞增殖情况;随后选择最佳浓度的青蒿琥酯作用HepG2细胞24h后,流式细胞术检测细胞凋亡,Western blot检测Bax、Bcl-2、PI3K、p-PI3K、Akt和p-Akt的水平.结果 不同浓度的青蒿琥酯处理细胞24h后,青蒿琥酯均能显著抑制肝癌细胞HepG2的增殖,且该作用呈现剂量依赖性.流式细胞仪检测发现青蒿琥酯能显著促进肝癌细胞HepG2的凋亡,同时Western blot也进一步证实,青蒿琥酯处理后HepG2细胞中的抑凋亡蛋白Bcl-2显著下调,促凋亡蛋白Bax表达显著上调;同时发现青蒿琥酯能够降低p-PI3K和p-Akt的水平,但未磷酸化的PI3K和未磷酸化的Akt含量变化无显著性差异.结论 青蒿琥酯可以抑制肝癌细胞HepG2的增殖,促进细胞凋亡,该作用与调控PI3K和Akt的磷酸化水平密切相关.     

青蒿琥酯对膀胱癌T-24细胞生长的影响

目的：探讨青蒿琥酯(artesunate,Art)对人膀胱癌T-24细胞的抑制作用及机制。方法用不同浓度的Art干预人膀胱癌T-24细胞,采用MTT法检测用药后细胞增殖的改变;划痕实验检测鱼藤素对细胞迁移能力的影响;流式细胞术(FCM)检测细胞周期的改变和凋亡率。结果与对照组比较,Art可显著抑制人膀胱癌T-24细胞株增殖(<0.01);划痕实验结果显示,鱼藤素可降低T-24细胞的迁移能力;FCM结果显示Art可使人膀胱癌T-24细胞周期阻滞在G0/G1期,并可诱导T-24细胞的凋亡(<0.01)。结论 Art可显著抑制T-24细胞的增殖以及降低其迁移能力,其机制可能与Art使T-24细胞生长周期阻滞在G0/G1期并诱导其凋亡相关。     

青蒿酯通过线粒体凋亡途径诱导Y79细胞凋亡

目的 探究青蒿酯对视网膜母细胞瘤细胞的影响及机制.方法 采用CCK-8法检测不同剂量青蒿酯对视网膜母细胞瘤细胞Y79细胞活力的影响,将细胞分为4组:Artesunate 0、30、60和120μmol/L组,分别选用0、30、60、120μmol/L青蒿酯处理Y79细胞.克隆形成实验检测细胞克隆形成率;流式细胞仪检测细...     

青蒿琥酯抗血吸虫病作用研究

青蒿琥酯是一种重要的青蒿素类衍生物,不仅具有抗疟作用,而且能有效杀灭血吸虫童虫,预防血吸虫病。本文综述了青蒿琥酯体内、体外抗血吸虫作用、现场应用以及药物作用机制的研究进展。     

Fas及FasL和Caspase-3在青蒿琥酯诱导人胚肺成纤维细胞凋亡中的表达

背景:青蒿琥酯具有减轻肺纤维化的作用,但相关机制的研究罕见报道。 目的：探讨青蒿琥酯对人胚肺成纤维细胞凋亡的作用及其与Fas,FasL,Caspase-3表达的关系。 方法：用1,10,100 mg/L青蒿琥酯分别干预体外培养的人胚肺成纤维细胞。采用CCK-8法检测青蒿琥酯对人胚肺成纤维细胞增殖的影响,流式细胞术测定细胞凋亡率,RT-PCR法测定Fas,FasL,Caspase-3 的mRNA的表达。 结果与结论：青蒿琥酯呈浓度依赖性抑制人胚肺成纤维细胞增殖,细胞经青蒿琥酯作用后凋亡率明显增加(P  < 0.05或P  < 0.01),Fas,FasL,Caspase-3 mRNA的表达显著高于对照组(P < 0.05)。结果证实,青蒿琥酯可通过上调Fas,FasL,Caspase-3 mRNA的表达抑制人胚肺成纤维细胞增殖、并促进细胞凋亡,发挥抗肺纤维化作用。     

青蒿琥酯治疗小儿脑型疟疾48例

目的探讨青蒿琥酯治疗小儿脑型疟疾的疗效。方法脑型疟疾患儿89例，随机分成治疗组（48例）和对照组（41例）；治疗组给予青蒿琥酯，对照组给予奎宁，观察7d后的疗效。结果7d治愈率治疗组为91．67％，对照组为85．37％，差异无统计学意义（P〉0．05）；两组的退热时间分别为（26．1±10．2）h和（39．5±11．6）h，昏迷苏醒时间分别为（36．2±10．1）h和（59．7±12．5）h，差异均有统计学意义（P〈0．01）。对照组的副作用相对较大。结论青蒿琥酯治疗脑型疟疾疗效好而迅速，副作用少，可以作为首选药。     

青蒿琥酯抑制人食管癌Eca-109细胞系的CDC25A表达

目的观察青蒿琥酯（artesunate，Art）对人食管癌Eca-109细胞系的抑瘤作用，并进一步探讨ATt诱导肿瘤细胞周期阻滞与CDC25A、TGF-β表达的关系。方法体外培养人食管癌Eca-109细胞系及正常人外周血单个核细胞（hPBMC），利用MTT法测定细胞增殖；采用流式细胞术（FCM）测定细胞周期；应用RT．PCR方法检测CDC25AmRNA表达，应用Western blot方法检测蛋白表达。结果Art能显著抑制Eca-109细胞的增殖，ICS0为（68．80±0．76）μmol／L，而对hPBMC的增殖则没有明显抑制作用。低浓度Art可将细胞阻滞于G0／G1期，S期细胞显著减少，当浓度达到100μmol／L时，细胞阻滞于G2／M期。Art可显著抑制Eca-109细胞CDC25AmRNA及蛋白表达，同时显著上调TGF-β的蛋白表达水平。结论Art可抑制肿瘤细胞生长，上调TGF-β表达，抑制CDC25A表达。     

N-diethylnitrosamine mouse hepatotoxicity: Time-related effects on histology and oxidative stress

Animal models, namely mice, have been used to study chemically induced carcinogenesis due to their similarity to the histological and genetic features of human patients. Hepatocellular carcinoma (HCC) is a common malignancy with poor clinical outcome. The high incidence of HCC might be related to exposure to known risk factors, including carcinogenic compounds, such as N-nitrosamines, which cause DNA damage. N-nitrosamines affect cell mitochondrial metabolism, disturbing the balance between reactive oxygen species (ROS) and antioxidants, causing oxidative stress and DNA damage, potentially leading to carcinogenesis. This work addresses the progressive histological changes in the liver of N-diethylnitrosamine (DEN)-exposed mice and its correlation with oxidative stress.Male ICR mice were randomly divided into five DEN-exposed and five matched control groups. DEN was IP administered, once a week, for eight consecutive weeks. Samples were taken 18 h after the last DEN injection (8 weeks post-exposure). The following sampling occurred at weeks 15th, 22nd, 29th and 36th after the first DEN injection.DEN resulted in early toxic lesions and, from week 29 onwards, in progressive proliferative lesions. Between 15 and 29 weeks, DEN-exposed animals showed significant changes in hepatic antioxidant (glutathione, glutathione reductase, and catalase) status (p < 0.05) compared with controls. These results point to an association between increased DEN-induced oxidative stress and the early histopathological alterations, suggesting that DEN disrupted the antioxidant defense mechanism, thereby triggering liver carcinogenesis.     

Membrane oxidative damage and apoptosis in cervical carcinoma cells of patients after radiation therapy

This article describes evaluation of plasma membrane fluidity and intracellular SOD with relation to apoptotic death of cervical carcinoma cells after radiation therapy. Cells from biopsies of cancer patients (stage IIIB) prior to and 24 h after radiation dose of 2 Gy were examined. Plasma membrane fluidity, measured by fluorescence polarization of DPH incorporated into lipid bilayer and superoxide dismutase (SOD) activity, determined by epinephrine method, showed significant decrease but per centapoptotic cells, as determined by annexin-V and TUNEL methods, were found increased by two folds after radiotherapy. It is suggested that decrease in DPH polarization in membrane, reduction in SOD activity and increased apoptosis in cervical cells of cancer patients treated with radiation may be consequent to oxidative damage induced by reactive oxygen species (ROS), which may have implications in developing predictive protocol in cancer radiotherapy.     

顺铂通过ROS介导ClC-3上调诱导鼻咽癌细胞凋亡

目的探讨ClC-3氯通道在顺铂诱导的鼻咽癌细胞凋亡中的作用及机制。方法将不同浓度的顺铂作用于人低分化鼻咽癌细胞（CNE-2Z细胞）;MTT法检测不同浓度的顺铂处理24h和48h后细胞活力;采用ClC-3-siRNA下调ClC-3的表达,AnnexinV-FITC/PI双染法检测细胞凋亡,多功能微孔板检测仪和流式细胞术检测细胞不同状态下的ROS水平。结果（1）顺铂呈时间和浓度依赖性抑制CNE-2Z细胞生长,氯通道阻断剂DIDS显著抑制顺铂引起的细胞凋亡（P<0.01）;（2）顺铂促进CNE-2Z细胞ClC-3表达,下调ClC-3蛋白表达后,顺铂诱导的细胞凋亡率下降（P<0.05）;（3）顺铂促进CNE-2Z细胞ROS产生,用抗氧化剂抑制细胞产生ROS后,顺铂诱导的ClC-3蛋白表达和凋亡被抑制,而下调ClC-3蛋白表达对ROS水平影响不大。结论顺铂可通过提升CNE-2Z细胞ROS水平,上调氯通道ClC-3蛋白水平,从而诱导细胞凋亡。     

顺铂通过p66Shc-线粒体信号通路诱导人肾小管上皮细胞凋亡

目的：探讨p66Shc-线粒体信号通路在顺铂诱导的人肾小管上皮细胞凋亡中的作用。方法：体外培养人肾小管上皮细胞,Westernblotting法检测顺铂对p66Shc及磷酸化p66Shc(Ser36)蛋白表达的影响,然后将细胞分为对照组、顺铂组及顺铂+p66ShcS36A（第36位Ser突变为Ala的p66Shc）组,用激光共聚焦显微镜观察p66Shc对顺铂诱导的细胞活性氧簇、线粒体活性氧簇及细胞凋亡的影响,Westernblotting法检测线粒体凋亡信号通路相关蛋白的表达。结果：顺铂促进p66Shc蛋白磷酸化,对p66Shc蛋白表达无影响;顺铂诱导细胞凋亡,细胞及线粒体活性氧簇产生增加,细胞色素C释放,caspase-9表达增加,p66ShcS36A可以抑制顺铂诱导的细胞氧化损伤及凋亡。结论：顺铂通过p66Shc-线粒体信号通路诱导人肾小管上皮细胞凋亡。     

水飞蓟素对同型半胱氨酸诱导的人脐静脉内皮细胞凋亡的抑制作用

目的：探讨水飞蓟素(SIL)对同型半胱氨酸(HCY)诱导的人脐静脉内皮细胞(HUVECs)凋亡的抑制作用及其作用机制。方法:采用MTT及LDH检测细胞活性,DNA琼脂糖凝胶电泳和流式细胞仪检测细胞凋亡的发生,流式细胞仪检测线粒体膜电位的变化,并用荧光酶标仪测定caspase-3,-6,-9的活性。Westernblotting分析相关蛋白的表达。结果:1mmol/LHCY使HUVECs的存活率比对照组低79.5%(P<0.01),5-20μg/LSIL明显抑制HCY所致的HUVECs死亡(P<0.05,P<0.01),20μg/LSIL可使HUVEC的存活率恢复到对照组的83.7%。HCY刺激后Bcl-2与XIAP的表达显著低于对照组,Bax的表达显著高于对照组,20μg/LSIL可使Bcl-2凋亡蛋白的改变发生逆转。SIL可明显抑制1mmol/LHCY引起的caspase-3、caspase-6、caspase-9的升高。SIL明显抑制1mmol/LHCY引起的Δψm下降和CytoC、Smac及AIF的释放。结论:SIL能抑制HCY诱导的人脐静脉内皮细胞凋亡,其细胞保护作用可能与降低细胞内活性氧水平,抑制caspase-3,-6,-9的活性和维持线粒体膜电位的高能状态有关。     

黄嘌呤氧化酶在激素诱导成骨细胞凋亡过程中的作用及机制

目的探究黄嘌呤氧化酶在糖皮质激素诱导小鼠胚胎成骨细胞前体细胞(MC3T3-E1)细胞凋亡过程中的作用及机制。方法将细胞分为空白组、模型组、5 mol/L组、10 mol/L组和15 mol/L组,接种完成后培养24 h,确认细胞贴壁后换液。空白组加入10%FBS培养基2 mL,模型组加入1 10-6 mol/L DEX培养基2 mL, 5 mol/L组加入5 mol/L别嘌醇DEX培养基2 mL,10 mol/L组加入10 mol/L别嘌醇DEX培养基2 mL,15 mol/L组加入15 mol/L别嘌醇DEX培养基2 mL。培养72 h后检测Caspase-3、STAT-1、Bax、Bcl-2等蛋白表达情况,检测细胞凋亡情况以及活性氧簇含量。检测细胞内黄嘌呤氧化酶活性、丙二醛(MDA)含量及线粒体膜电位。结果模型组中Caspase-3、STAT-1和Bax蛋白表达量明显升高,Bcl-2蛋白表达量降低,细胞凋亡比例增高,细胞内活性氧簇含量增高,细胞内黄嘌呤氧化酶活性、丙二醛含量增高,而线粒体膜电位降低,与空白组、5 mol/L组、10mol/L组和15 mol/L组相比,差异有统计学意义(P 0.05)。结论黄嘌呤氧化酶通过产生过量的活性氧簇从而导致成骨细胞氧化应激损伤,通过激活STAT-1和Bax蛋白来诱导成骨细胞凋亡,同时诱导线粒体膜电位稳态崩溃触发内源性线粒体凋亡途径。别嘌醇可以较好地抑制黄嘌呤氧化酶的活性,减少活性氧簇的产生,通过减少Caspase-3、STAT-1和Bax蛋白表达,稳定线粒体膜电位,从而减少成骨细胞凋亡。     

胡桃醌对卵巢癌SKOV3细胞氧化应激和凋亡的影响

目的:探讨胡桃醌对人卵巢癌SKOV3细胞的毒性作用及机制。方法:采用MTT法检测胡桃醌对卵巢癌SKOV3细胞生长的作用;流式细胞术检测胡桃醌对卵巢癌SKOV3细胞凋亡的影响;采用DCF-DA染色荧光显微镜观察细胞内的活性氧簇(ROS)水平;采用Westernblot检测卵巢癌SKOV3细胞细胞色素C(CytC)和活化caspase-3的水平。结果:与对照组比较,胡桃醌对SKOV3细胞的生长有明显抑制作用,且抑制作用随药物浓度和时间的增加而增强(P<0.05)。流式细胞术检测50μmol/L胡桃醌作用细胞24h和48h后诱导细胞凋亡,早期凋亡率和晚期凋亡率均高于对照组(P<0.01)。胡桃醌显著提高细胞内的ROS水平,上调细胞CytC和活化caspase-3的蛋白水平。结论:胡桃醌通过促进SKOV3细胞ROS的积累诱导细胞凋亡和抑制细胞生长。     

活性氧清除剂 NAC 抑制阴道毛滴虫排泄分泌物诱导的 SiHa 细胞凋亡

本研究旨在探讨活性氧（ ROS）清除剂N－乙酰－L－半胱氨酸（ NAC）能否抑制滴虫排泄分泌物（ Tv ESP）诱导的人子宫颈癌SiHa细胞凋亡。体外培养阴道毛滴虫并制备Tv ESP,分别用100μg／mL Tv ESP和PBS处理SiHa细胞, Tv ESP处理SiHa细胞30 min前加入NAC,进行预处理。使用CellTiter 96 AQueous单溶液细胞增殖检测试剂盒检测细胞存活率;利用2′,7′－二氯荧光黄双乙酸盐（ DCFH－DA）进行荧光探针标记测定胞内ROS水平;免疫印迹法检测cleaved caspase－3和PARP－1蛋白表达。结果显示, NAC预处理可降低Tv ESP的细胞毒性作用。 Tv ESP作用SiHa细胞16 h后,细胞内ROS水平升高,但经过NAC预处理后胞内ROS生成显著降低。此外, NAC预处理后能显著下调Tv ESP诱导的cleaved caspase－3和cleaved PARP－1的表达水平。     

氧化应激在乙醛引起的心肌细胞凋亡中的作用

目的： 探讨活性氧（ROS）的氧化损伤机制在经乙醛诱导心肌细胞凋亡过程中的作用，阐明氧化应激水平增高导致细胞凋亡可能是乙醇性心肌病（AHMD）的主要原因之一。 方法: 体外培养大鼠心肌细胞，分别用乙醇（100 μmol/L）和乙醛（100 μmol/L）干预24 h，比较细胞凋亡程度；检测48 h内细胞胞内ROS水平变化、胞外分泌SOD活性变化；并用Western blotting技术检测ROS介导MAPK信号途径相关蛋白磷酸化水平变化；并与氧化剂H2O2处理组和预先加入抗氧化剂乙酰半胱氨酸（NAC）的乙醛处理组比较。 结果: 乙醇和乙醛分别干预心肌细胞24 h后，凋亡途径激活因子caspase 3均被激活(P<0.05)，乙醛较乙醇具有更强的诱导凋亡作用（P<0.05）。乙醛诱导心肌细胞ROS水平增高呈时间依赖性，相应抗氧自由基SOD酶活性也随之增高，分别于18-24 h达到峰值。同时，ROS通过JNK和ERK磷酸化水平增高而激活MAPK途径，诱导心肌细胞凋亡，这种效应可以被NAC逆转，等浓度乙醛弱于H2O2的诱导作用。结论: 乙醛通过增高胞内ROS水平损伤心肌细胞，激活ROS介导JNK途径诱导细胞凋亡。其作用弱于H2O2等强氧化剂，提示降低细胞ROS 水平，阻断凋亡信号通路可有效抑制乙醛诱导的心肌凋亡，对于AHMD临床预防和治疗具有指导意义。     

23-羟基白桦酸诱导LoVo细胞凋亡与细胞内活性氧的关系

目的：研究23-羟基白桦酸诱导人结肠癌细胞株LoVo细胞凋亡过程中活性氧（ROS）的变化及其作用机制。方法：光学显微镜法观察23-羟基白桦酸作用LoVo细胞后细胞形态学改变,并采用流式细胞仪检测细胞凋亡及细胞内ROS水平。结果：分别以浓度为25、50、100、200μmol/L23-羟基白桦酸作用LoVo细胞48h后,在光学显微镜下观察到明显的凋亡细胞形态学改变;经流式细胞仪检测,细胞凋亡率分别为(7.17±2.31)%、(15.60±4.02)%、(32.47±5.25)%及(52.71±5.93)%,呈现一定的浓度依赖性关系。23-羟基白桦酸可使LoVo细胞内ROS的水平明显高于空白对照组。细胞内ROS含量（MFI,平均荧光强度）分别为2.83±0.80、5.97±1.72、12.53±2.57及16.73±4.58。其中,浓度为100和200μmol/L23-羟基白桦酸的作用较明显,与对照组(2.13±0.32)比有显著差异（P<0.05）。结论：23-羟基白桦酸具有明显的诱导LoVo细胞凋亡作用,其作用机制可能与23-羟基白桦酸引起细胞内ROS水平增加有关。