miR-30a在心肌梗死大鼠心肌纤维化中的作用机制及对心功能的影响

目的探讨miR-30a在大鼠心肌梗死后对心肌纤维化的作用机制及对心功能的影响。方法构建携带大鼠miR-30a基因的载体,在HEK293细胞中包装病毒载体r AAV9-miR-30a及阴性对照r AAV9-miR-30a-NC,提取纯化后通过冠脉注射方法分别传导PBS缓冲液、r AAV9-miR-30-NC和r AAV9-miR-30a至大鼠心脏,再建立大鼠心肌梗死模型,分别设为PBS组、miR-30-NC组和miR-30a组,同时设立假手术组(sham组)。用心脏彩色多普勒超声检测心功能指标,包括短轴缩短率(FS)及左室射血分数(LVEF);Masson染色观察心肌胶原容积分数(CVF);免疫组化法检测Ⅰ、Ⅲ型胶原表达;实时荧光定量PCR(real-time PCR)检测心肌miR-30a及TGF-β1和CTGF mRNA表达;蛋白印迹法(Western blot)检测TGF-β1及CTGF蛋白的表达。结果 miR-30a组心功能较PBS组及miR-30-NC组显著改善(P0.05)。miR-30a组的心肌CVF及Ⅰ、Ⅲ胶原表达水平、Ⅰ/Ⅲ型胶原比值较PBS组及miR-30-NC组显著降低(P0.01);miR-30a组心肌TGF-β1 mRNA及蛋白表达水平与PBS组及miR-30-NC组比较显著下降(P0.001);CTGF mRNA及蛋白表达水平较PBS组及miR-30-NC组显著降低(P0.001)。结论 miR-30a过表达能下调心肌梗死后心肌TGF-β1、CTGF mRNA及蛋白水平,从而减少心肌胶原产生,抑制心肌纤维化,进而改善心功能。     

自发性高血压大鼠心肌组织microRNA-133a与TGF-β1蛋白表达的改变及意义

 目的：观察microRNA-133a（miR-133a）与转化生长因子-β1（transforming growth factor β1,TGF-β1）蛋白在自发性高血压大鼠（spontaneously hypertensive rats,SHR）心肌组织中的表达改变和关系。方法：取12只18周龄雄性自发性高血压大鼠为SHR组,12只18周龄雄性Wistar-Kyoto （WKY）大鼠为对照组,通过无创血压测量分析系统测大鼠尾动脉血压,Masson染色检测心肌胶原容积分数（collagen volume fraction,CVF）和血管周围胶原面积比率（perivascular collagen area ratio, PVCA）,实时荧光定量PCR检测miR-133a表达水平,免疫组化和Western blotting法检测心肌TGF-β1蛋白表达。结果：与对照组比较,SHR组的收缩压和舒张压明显升高（P<0.01）,心肌CVF和PVCA明显升高（P<0.01）,TGF-β1蛋白表达水平明显升高（P＜0.01）,miR-133a表达水平明显降低（P<0.01）,SHR组心肌miR-133a表达水平为对照组的（23.9±4.6）%;SHR组心肌组织miR-133a与TGF-β1蛋白表达水平呈负相关（r=-0.791, P<0.01）。结论：SHR心肌组织miR-133a表达下调,伴随TGF-β1蛋白表达升高和胶原合成增加。miR-133a与TGF-β1可能参与SHR大鼠的心肌纤维化。     

安体舒通改善自发性高血压大鼠心肌纤维化

目的：观察安体舒通对自发性高血压大鼠（spontaneously hypertensive rats,SHR）心肌纤维化的影响及可能机制。方法:将16只14周龄雄性SHR随机分为安体舒通组和对照组,每组8只，分别以安体舒通30 mg·kg-1·d-1 及等量生理盐水灌胃12周，同时取8只同龄雄性SD大鼠作为正常对照组，用免疫组化的方法对结缔组织生长因子（connective tissue growth factor,CTGF）、转化生长因子β1（transforming growth factors beta-1,TGFβ1）、 胶原Ⅰ和 Ⅲ（collagenⅠand Ⅲ）在大鼠左室心肌的分布及表达进行半定量分析；用RT-PCR的方法检测TGFβ1、CTGF mRNA在心肌表达水平；用Masson染色法观察左室心肌胶原形态，图像分析测量胶原容积分数（collagen volume fraction,CVF）；用碱水解法测定左室心肌羟脯氨酸(hydroxyproline,Hypro)含量。结果:（1）SHR对照组左室重量指数（left ventricular index,LVI）、CVF、Hypro、collagenⅠ和Ⅲ、CTGF、TGFβ1蛋白及mRNA表达明显高于SD大鼠组（P<0.01）；相对于SHR对照组，安体舒通组则显著降低（P<0.05）；（2）相关分析表明：CTGF与TGFβ1、CVF、Hypro和LVI呈高度正相关（P<0.01）。结论:安体舒通能明显改善SHR心肌纤维化，其作用可能是通过阻断盐皮质激素受体和抑制CTGF的表达而实现的。     

益母草碱对异丙肾上腺素诱导大鼠心肌纤维化和miR-1表达的影响

目的:探讨益母草碱对异丙肾上腺素(ISO)诱导大鼠心肌纤维化和微小RNA-1(miR-1)表达的影响。方法:取10只SD大鼠作正常对照组;取另80只SD大鼠作为实验鼠,连续2周腹腔注射ISO诱导心肌纤维化动物模型。造模成功后将实验鼠随机分为5组:模型组,益母草碱低(7.5 mg·kg~(-1)·d~(-1))、中(15 mg·kg~(-1)·d~(-1))和高(30 mg·kg~(-1)·d~(-1))剂量组,p38丝裂原活化蛋白激酶(p38 MAPK)抑制剂(0.3 mg·kg~(-1)·d~(-1))组。连续给予相应药物腹腔注射2周后,以透射电镜观察左心室肌组织超微结构;Masson染色观察心肌纤维化程度;免疫组织化学法观察I型胶原和III型胶原的表达;酶联免疫吸附法检测左心室肌组织内皮素1(ET-1)和血管紧张素II(Ang II)含量;real-time PCR法检测左心室肌miR-1和ET-1 mRNA的表达水平;Western blot法检测p38 MAPK、β-肌球蛋白重链(β-MHC)及α-肌球蛋白重链(α-MHC)蛋白表达水平。结果:与模型组比较,高剂量益母草碱能明显改善左心室肌超微结构,降低心肌胶原容积分数(CVF)及I型胶原和III型胶原蛋白表达(P0.05),减少左心室肌ET-1和Ang II含量(P0.05),上调miR-1和α-MHC的蛋白表达水平(P0.05),下调ET-1 mRNA及p38MAPK和β-MHC蛋白表达水平(P0.05)。结论:益母草碱可抑制ISO诱导的大鼠心肌纤维化,其机制可能与影响miR-1的表达,抑制ET-1/p38 MAPK信号通路有关。     

Rho激酶抑制剂对压力超负荷大鼠心肌纤维化的影响

目的:观察Rho激酶抑制剂法舒地尔对大鼠心肌纤维化的影响。方法:采用腹主动脉缩窄术制备SD大鼠心肌纤维化模型,动脉夹闭4周后,随机分为4组:假手术组(Sham组)、模型组(Model组)、法舒地尔高剂量(FH,30mg/Kg/天)组和法舒地尔低剂量(FL,10mg/Kg/天)组。术后8周末,计算各组大鼠心脏质量指数(HWI)、左室质量指数(LVWI),观察心肌组织HE染色和Masson染色,碱水解法测定心肌组织羟脯氨酸(HYP)含量,免疫组化分析磷酸化的肌球蛋白磷酸酶靶蛋白亚基1(p-MYPT1)、转化生长因子β1(TGF-β1)和结缔组织生长因子(CTGF)水平。结果:与Sham组相比,Model组大鼠LVWI及HYP含量显著升高(P<0.01),心肌细胞排列紊乱,间质大量胶原纤维沉积,心肌组织p-MYPT1水平升高(P<0.01),TGF-β1、CTGF表达升高(P<0.01);与Model组相比,FH组和FL组大鼠LVWI及HYP含量降低(P<0.05),间质胶原蛋白沉积程度减轻,心肌组织p-MYPT1、TGF-β1、CTGF水平均降低(P<0.05或P<0.01)。结论:Rho激酶参与压力超负荷诱导的大鼠心肌纤维化,法舒地尔抑制心肌纤维化进展的作用与TGF-β1和CTGF水平的降低有关。     

转化生长因子-β1和结缔组织生长因子在慢性心力衰竭大鼠心肌纤维化中的动态表达

目的:探讨慢性心力衰竭心肌内转化生长因子-β1(TGF-β1)及结缔组织生长因子(CTGF)的表达及意义.方法:采用肾上腹主动脉缩窄法制作雄性Wisstar大鼠慢性心衰模型,随机分为心衰1、7、14d组,另取假手术组作为对照.观察和比较成模后心衰各组和假手术组血流动力学参数及左心室肌质量指数,用Masson染色法和透射电镜观察左室心肌组织形态的改变.用免疫组织化学方法检测各组大鼠左室心肌组织中TGF-β1、CTGF的表达水平.结果:心衰模型各组TGF-β1、CTGF的蛋白表达高于假手术组,且随着心力衰竭程度的加重而表达增高.结论:TGF-β1、CTGF可能参与了大鼠压力负荷性心肌纤维化的发生和发展,其水平的高低与慢性心力衰竭的严重程度密切相关.     

葛根素对自发性高血压大鼠心肌纤维化的影响及其机制

 目的：观察葛根素对自发性高血压大鼠（SHR）心肌局部血管紧张素II (Ang II)、巨噬细胞及心肌组织形态学的影响,探讨其保护心肌的可能机制。方法：35只12周龄SHR随机分为葛根素高、中、低剂量组（100 mg/kg、50 mg/kg、25 mg/kg,腹腔注射）、卡托普利组（30 mg/kg灌胃）和SHR对照组（生理盐水腹腔注射）。另设WKY空白对照组（生理盐水腹腔注射）。每组7只,给药6周。给药6周后麻醉下迅速处死取出心脏,称量左心室湿重后,备做Masson染色、组织匀浆和RT-PCR。结果：与WKY大鼠相比,SHR左室质量指数增高（P<0.01）,心肌组织Ang II含量上升（P<0.01）,单核细胞趋化蛋白1 （MCP-1）和蛋白酶激活受体2（PAR2） mRNA表达增加（P<0.01）,巨噬细胞浸润明显（P<0.01）,间质纤维化严重（P<0.01）。高剂量葛根素和卡托普利明显降低左室质量指数（P<0.01）,降低心肌Ang II含量（P<0.01）,下调MCP-1和PAR2 mRNA表达（P<0.01）,减少巨噬细胞浸润（P<0.01或P<0.05）,减轻心肌间质纤维化（P<0.01）。结论:葛根素具有治疗自发性高血压大鼠心肌纤维化作用,其机制可能与降低心肌局部Ang II含量、下调MCP-1和PAR-2 mRNA表达及减少巨噬细胞浸润有关。     

miR-22靶向TGFβR1对宫腔粘连大鼠内膜组织的影响

目的 探究微小RNA-22(miR-22)对转化生长因子β受体1(TGFβR1)的调控作用,及对宫腔粘连（IUA大鼠内膜组织损伤的影响。方法 取2016年8月—2019年6月于我院进行宫腔镜手术的10例IUA患者及非IUA患者子宫内膜组织,用反转录PCR(RT-PCR)法测miR-22、TGFBR1 mRNA、转化生长因子-β1(transforming growth factor-β1,TGF-β1)mRNA表达。将SD大鼠随机分为假手术组、模型组、miR-22激动剂（agomir-miR-22）组、agomir-miR-22阴性对照（agomir-NC）组、TGFBR1基因过表达（ad-TGFBR1）组、ad-TGFBR1阴性对照（ad-pcDNA-NC）组、agomir-miR-22+ad-TGFBR1组,每组10只。用子宫内膜刮除法建立IUA模型,干预miR-22及TGFBR1表达后,取子宫内膜组织,观察子宫内膜粘连情况并进行评分;苏木素-伊红（H-E）染色观察组织病变;马森（Masson）染色观察纤维化程度;免疫组化法检测TGFBR1阳性表达;Western blot法检测T...     

莪术醇通过上调miR-214抑制TGF-β诱导的RL-95细胞生长及纤维化相关蛋白表达

目的:探讨莪术醇对转化生长因子β(TGF-β)诱导的子宫内膜癌RL-95细胞生长及纤维化相关蛋白表达的影响,并探讨其机制是否与调控微小RNA-214(miR-214)表达有关.方法:以TGF-β诱导RL-95细胞纤维化作为子宫内膜异位症细胞模型.设置对照(control)组、TGF-β组、TGF-β+低剂量莪术醇组、T...     

益气活血方对自发性高血压左心室肥厚大鼠心肌纤维化的影响

<正>目的:观察分析益气活血方对自发性高血压大鼠(SHR)左心室肥厚心肌纤维化的作用及机制。方法:SHR32只,按血压随机分为四组,模型对照组、益气活血方高(2.4g/Kg)、低(1.2g/Kg)剂量组、洛汀新组(1mg/Kg),每组8只,同时用Wistar大鼠(8只)作为正常对照组,连续用药12周。实验结束时,采用HE、     

人参皂苷Rh1对UUO大鼠肾纤维化的抑制作用

目的:观察并探讨人参皂苷Rh1(G-Rh1)对单侧输尿管梗阻(UUO)大鼠肾纤维化的抑制作用及其机制。方法:雄性SD大鼠40只,分为假手术组(sham组)、UUO组、G-Rh1低剂量组和G-Rh1高剂量组。手术后第2天开始,G-Rh1低剂量组和G-Rh1高剂量组分别每日灌胃50 mg/kg和100 mg/kg G-Rh1,连续2周。给药2周后,收集24 h尿测定尿蛋白,收集血清测定血清肌酐(SCr)和血尿素氮(BUN)。HE染色观察肾组织病理变化并对肾组织损伤程度评分。利用免疫组化和Western blot法观察肾组织中转化生长因子β_1(TGF-β_1)、α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)、Ⅰ型胶原蛋白和结缔组织生长因子(CTGF)的表达。结果:肾功能检测显示,各组大鼠24 h尿蛋白定量的差异无统计学显著性。UUO组BUN和SCr明显高于sham组(P 0. 05),G-Rh1低剂量组和G-Rh1高剂量组BUN和SCr明显低于UUO组(P 0. 05),同时G-Rh1高剂量组BUN和SCr低于G-Rh1低剂量组(P 0. 05)。光镜下观察,与sham组比较,UUO组病理改变显著,肾组织损伤明显,G-Rh1低剂量组和G-Rh1高剂量组与UUO组比较,肾损伤明显改善,G-Rh1高剂量组改善程度较G-Rh1低剂量组更显著。肾组织免疫组化显示,与sham组比较,UUO组肾小管及肾间质中TGF-β_1表达明显增多,G-Rh1低剂量组和G-Rh1高剂量组与UUO组比较,TGF-β_1表达明显下降,G-Rh1高剂量组较G-Rh1低剂量组降低更明显。Western blot检测显示,与sham组比较,UUO组Ⅰ型胶原蛋白、α-SMA和CTGF蛋白表达明显增多(P 0. 01),G-Rh1低剂量组和G-Rh1高剂量组与UUO组比较,Ⅰ型胶原蛋白、α-SMA表达明显下降(P 0. 05),G-Rh1高剂量组较G-Rh1低剂量组α-SMA和CTGF蛋白表达明显降低(P 0. 05),而Ⅰ型胶原蛋白表达无显著差异。结论:人参皂苷Rh1可缓解UUO大鼠肾组织纤维化,改善肾功能,其主要机制可能是抑制TGF-β_1信号通路中纤维化相关因子的表达。     

结缔组织生长因子在肾间质纤维化中的表达及其调控

CTGF, a member of the CCN family of immediate early genes, is a recently discovered profibrotic growth factor, which is involved in many pathophysiologic procedures. CTGF acts as a downstreame ffector of TGF-β acting on interstitial ceils to enhance the progression of fibrotic renal diseases. It has been shown that CTGF gene expression can be induced or blocked by some kinds of cytokine and drugs. It is an interesting candidate target for future intervention strategies of renal interstitial fibrosis.     

大黄酸通过抑制miR-21而干预TGF-β1/Smad通路并减轻博莱霉素所致大鼠肺纤维化

目的:观察大黄酸(rhein,RH)对博莱霉素所致肺纤维化大鼠微小RNA-21(miR-21)表达以及转化生长因子β1(TGF-β1)/Smad通路的影响。方法:博莱霉素一次性气管内注射复制大鼠肺纤维化模型,随机分为RH低、中、高剂量组及模型(model)组;正常对照组大鼠气管内注射生理盐水。用药28 d后,HE染色观察各组大鼠肺组织形态学的变化;测定肺系数、肺组织羟脯氨酸含量;real-time PCR检测肺组织中miR-21和TGF-β1/Smad7m RNA表达;Western blot法分析TGF-β1和Smad7蛋白的表达。结果:与model组相比,RH用药组大鼠的肺泡炎及肺纤维化程度有明显降低,肺系数及肺组织羟脯氨酸含量也显著减少,肺组织中miR-21表达下降,TGF-β1的m RNA和蛋白表达水平也明显下降,Smad7的mRNA及蛋白表达水平明显增高(P0.05)。结论:RH抗肺纤维化的作用可能与抑制miR-21的表达,从而干预TGF-β1/Smad信号通路,减少细胞外基质沉积有关。     

伊马替尼对醋酸去氧皮质酮诱导的盐敏感性高血压大鼠心肌纤维化的干预作用

目的: 研究血小板源性生长因子受体拮抗剂伊马替尼(IMA)对醋酸去氧皮质酮(DOCA)诱导的盐敏感性高血压大鼠心肌纤维化的干预作用及相关机制。方法: 60只雄性SD大鼠行右肾切除术,术后给予1%NaCl和0.2%KCl饮水4周并随机分为3组:对照组(control组);DOCA组;DOCA+IMA组。尾套法测定大鼠动脉收缩压(SBP),HE染色观察心肌组织炎症反应情况,苦味酸-天狼星红染色观察大鼠心肌间质胶原容积分数(CVF)和血管周围胶原面积比(PVCA),免疫组化法观察心肌组织单核巨噬细胞抗原(ED-1)表达,免疫印迹法检测血小板源性生长因子(PDGF-A和PDGF-C)、血小板源性生长因子受体α(PDGFRα)和磷酸化血小板源性生长因子受体α(p-PDGFRα)表达。结果: (1)DOCA组和DOCA+IMA组大鼠SBP显著升高,两组相比无显著差异(P>0.05),但均显著高于对照组(P<0.01);(2)DOCA组出现严重心肌纤维化,其CVF和PVCA值明显高于对照组(P<0.01),DOCA+IMA组CVF和PVCA值虽高于对照组(P<0.05),但较DOCA组显著减小(P<0.05);(3)与对照组相比,DOCA组及DOCA+IMA组心肌间质可见明显炎症渗出及单核巨噬细胞浸润;(4)DOCA组及DOCA+IMA组PDGF-A、PDGF-C和PDGFRα表达均明显高于对照组(P<0.01),但DOCA+IMA组p-PDGFRα表达较DOCA组明显减少(P<0.05)。结论: 盐皮质激素致心肌纤维化与心肌组织炎症反应、单核巨噬细胞浸润增加及PDGF-A、PDGF-C、PDGFRα表达增多有关,应用伊马替尼可以抑制这一纤维化过程,其机制可能与其抑制成纤维细胞表面PDGFRα活性、中断PDGFs信号途径介导的成纤维细胞分裂增殖相关。     

神经调节蛋白1β与卡托普利对慢性心衰大鼠心肌纤维化及转化生长因子β1的影响

目的:探讨神经调节蛋白1β(neuregulin-1β,NRG-1β)与卡托普利联合应用对慢性心力衰竭大鼠心肌纤维化及转化生长因子β1(transforming growth factor-β1,TGF-β1)表达的影响。方法:将青年雄性SpragueDawley大鼠随机分为假手术组、心衰组、NRG组、卡托普利组和联合用药组,采用腹主动脉-下腔静脉穿刺造瘘法制备心衰模型。通过超声心动图评价大鼠心功能;Masson染色检测心肌纤维化程度,并计算胶原容积分数(collagen volume fraction,CVF);放射免疫法检测血浆中血管紧张素II(Ang II)的浓度;Western blot检测各组大鼠左心室心肌组织中TGF-β1和α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)的蛋白表达水平;透射电镜观察左室心肌的超微结构。结果:与心衰组比较,NRG组、卡托普利组及联合用药组左心室舒张末直径和心肌纤维化程度明显降低,射血分数明显升高(P0.05);TGF-β1和α-SMA蛋白表达明显降低(P0.05);电镜下显示,NRG组、卡托普利组及联合用药组心肌纤维化程度较心衰组明显减轻,而与NRG组和卡托普利组相比,联合用药组效果更加显著(P0.05)。结论:神经调节蛋白1β与卡托普利单用及联合应用均可有效改善心功能、抑制心肌纤维化,且联合用药的疗效优于单独用药。     

急性心肌梗死后早期血浆心肌纤维化相关指标的变化

目的:观察急性心肌梗死早期内源性松弛素(H2RLX)和Ⅰ型前胶原C端末端肽（PICP）、 转化生长因子（TGF-β1）的的表达。方法:入选41名急性心肌梗死患者和冠脉血管正常的对照组10名。心肌梗死后 3 d、7 d分别抽静脉血,用ELISA方法检测H2RLX和PICP、 TGF-β1,对照组在入选后抽静脉血检测H2RLX和PICP、 TGF-β1。结果:(1)心肌梗死后3 d H2RLX与对照组比较,没有显著差异。梗死后3 d和7 d的H2RLX水平没有明显变化。(2) 梗死后3 d PICP 水平显著高于对照组, PICP在梗死后7 d的水平显著低于梗死后3 d的水平。(3) 梗死后3 d TGF-β1与梗死后7 d TGF-β1保持在较高水平,两个时点的TGF-β1水平均明显高于对照组。(4) 梗死后7 d松弛素水平和心肌梗死组的空腹血糖呈正相关。结论:在心肌梗死早期血浆中没有内源性松弛素表达的增加,但心肌胶原形成及前纤维化因子表达增加。     

结缔组织生长因子在单侧输尿管梗阻大鼠肾脏中的表达及其意义

目的： 观察结缔组织生长因子（CTGF）在单侧输尿管梗阻（UUO）大鼠模型中的动态表达，探讨CTGF在肾小管间质纤维化中的作用机制。方法： 将48 只Wistar大鼠随机分为UUO组和假手术（SO）组，采用左输尿管结扎术复制UUO模型，于术后1、3、7、14 d分别处死2组大鼠取左肾。采用Masson染色评定肾小管间质损伤程度；逆转录-聚合酶链式反应(RT-PCR) 方法检测肾组织转化生长因子-β₁（TGF-β₁）、CTGF、Ⅰ型胶原（ColⅠ）和纤溶酶原激活物抑制物-1（PAI-1）mRNA表达；免疫组织化学方法测定TGF-β₁、CTGF、ColⅠ、PAI-1表达；Western blotting方法检测CTGF蛋白表达量的变化。结果: UUO术后1d，梗阻肾TGF-β₁ mRNA表达开始升高，第3-14d时升高更显著（P<0.01），CTGF、ColⅠ、PAI-1 mRNA水平随之逐渐升高。免疫组织化学染色发现，UUO大鼠肾小管和间质区域CTGF表达随病程进展逐渐增强；相关分析显示，UUO术后第7d，CTGF表达量与肾小管间质损伤指数、肾小管间质TGF-β₁、ColⅠ、PAI-1表达强度均呈正相关，相关系数（r）分别为0.62、0.85、0.78和0.76（均P<0.01）。Western blotting结果显示，CTGF蛋白水平在术后第3d开始上升，随病程进展更显著。结论: CTGF可通过促进细胞外基质产生和抑制细胞外基质降解双重途径诱导肾小管间质纤维化的发生和进展。