解毒祛瘀滋阴方对巨噬细胞吞噬细菌的影响

目的:观察解毒祛瘀滋阴方对糖皮质激素造成的免疫抑制的RAW264.7巨噬细胞吞噬功能的影响。方法:通过构建YFP-PGEX-4T-1载体并转化,制备能够产生荧光的大肠杆菌BL21。应用不同浓度的地塞米松以及解毒祛瘀滋阴方干预后,加入大肠杆菌,观察巨噬细胞吞噬细菌的情况。结果:转化YFP-PGEX-4T-1载体后,大肠杆菌能够发出荧光。经不同浓度的地塞米松作用后,RAW264.7细胞吞噬能力减弱,加用解毒祛瘀滋阴方后,吞噬能力有一定程度的恢复。结论:解毒祛瘀滋阴方可以增强糖皮质激素造成的免疫抑制的RAW264.7巨噬细胞吞噬功能,这可能是解毒祛瘀滋阴方可以减少SLE患者继发感染的原因之一。     

解毒祛瘀滋阴方对佐剂性关节炎大鼠TNF-α的影响

目的：通过观察解毒祛瘀滋阴方对佐剂性关节炎大鼠的治疗作用，进一步评价解毒祛瘀滋阴方治疗系统性红斑狼疮（systemic lupus erythematosus，SLE）的疗效。方法：观察了解毒祛瘀滋阴方对佐剂性关节炎大鼠的影响。结果：解毒祛瘀滋阴方能明显押制大鼠佐剂性关节炎病变，解毒祛瘀滋阴方可明显下调佐剂性关节炎大鼠TNF-α的水平。     

解毒祛瘀滋阴方对MRL/lpr小鼠神经精神症状的保护作用

目的神经精神性狼疮(neuropsychiatric sy stemic lupus erythematosus,NPSLE)是系统性红斑狼疮致残和致死的临床表现之一。本研究拟利用MRL/lpr狼疮小鼠模型研究解毒祛瘀滋阴方对NPSLE的治疗作用。方法采用旷场和强迫游泳行为学实验测定动物NPSLE相关症状,ELISA法测定动物大脑皮层自身抗体滴度,组织免疫荧光染色测定小鼠大脑皮层Ig G表达沉积情况。结果研究发现解毒祛瘀滋阴方可以明显缓解MRL/lpr小鼠的抑郁和抗焦虑样行为,降低脑内抗心磷脂抗体以及抗N-甲基-D-天冬氨酸受体抗体滴度,并减少脑内Ig G表达沉积。结论本研究表明解毒祛瘀滋阴方可以缓解MRL/lpr狼疮小鼠的神经精神症状和改善大脑皮层病理学改变,提示解毒祛瘀滋阴方是NPSLE的潜在治疗方法。     

解毒祛瘀滋肾方对小鼠单核巨噬细胞Toll样受体9信号通路的影响

目的通过研究解毒祛瘀滋肾方对Cp G寡脱氧核苷酸(Cp G oligodeoxynucletide,Cp G ODN)刺激后小鼠单核巨噬细胞Toll样受体9(Toll like receptor 9,TLR9)信号通路的影响,探讨解毒祛瘀滋肾方治疗系统性红斑狼疮(systemic lupus erythematosus,SLE)增效减毒的机制。方法体外培养小鼠单核巨噬细胞,随机分为空白血清组、Cp G ODN刺激组、Cp G ODN加地塞米松组及Cp G ODN加含药血清组。干预24 h后收集细胞,采用RT-PCR法检测TLR9、髓样分化因子88(My D88)、核转录因子-κB(NF-κB)及干扰素-α(IFN-α)mRNA的表达;Western blot法检测TLR9、NF-κB蛋白表达;双荧光素酶报告基因分析NF-κB转录活力的变化。结果与空白血清组比较,Cp G ODN刺激组TLR9、My D88、NF-κB、IFN-αmRNA表达、TLR9、NFκ-B蛋白表达和NF-κB转录活力均升高,差异有统计学意义(P0.05,P0.01);与Cp G ODN刺激组比较,Cp G ODN加地塞米松组My D88、NF-κB、IFN-αmRNA表达、NF-κB蛋白表达和NF-κB转录活力均下降,差异有统计学意义(P0.01),Cp G ODN加含药血清组TLR9、My D88、NF-κB、IFN-αmRNA、TLR9、NFκ-B蛋白表达和NF-κB转录活力均下降,差异有统计学意义(P0.01)。结论解毒祛瘀滋肾方治疗SLE所起到增效减毒的作用可能是通过调控TLR9信号通路来实现的。     

补气解毒滋阴方治疗皮肌炎临床疗效及对血清瘦素的影响

目的:研究补气解毒滋阴方治疗皮肌炎临床疗效及作用机理。探讨中医治疗对缩短多发性肌炎(PM)和皮肌炎(DM)的病程,减轻激素治疗的不良反应,及彻底摆脱药物治疗的积极性。方法:将60例PM/DM患者随机分为两组,对照组30例用西药常规治疗,治疗组30例在对照组的基础上加用补气解毒滋阴方治疗,另选30名健康者作为健康组。治疗前后分别测定健康组和两组PM/DM患者血清瘦素含量;并观察治疗组和对照组的临床疗效。结果:治疗组相对于对照组病情稳定时间短,治疗的不良反应小,复发率低,最终完全撤去激素的人数多,各项指标均优于对照组(P0.05)。PM/DM患者血清瘦素水平较健康组显著增高(P0.01),但PM/DM病情活动期与稳定期血清瘦素水平比较差异无统计学意义(P0.05)。结论:补气解毒滋阴方治疗PM/DM,可以减轻病症和激素治疗的不良反应,降低血清酶,提高机体免疫力,有效地减轻患者对于激素的依赖性,减少病情复发率,缩短病程,最终减停激素。     

高效液相色谱法测定解毒祛瘀滋肾方中芍药苷含量

目的建立测定解毒祛瘀滋肾方中芍药苷含量的方法,为其质量控制提供依据。方法采用高效液相色谱法对解毒祛瘀滋肾方中芍药苷的含量进行测定,色谱柱为C18柱（10 mm×250 mm,5μm）,流动相为乙腈-水（12∶88）,流速1.0 mL/min,柱温25℃,检测波长为230 nm。结果芍药苷含量测定的线性范围为0.78～3.90μg,r=0.9997,加样回收率为99.68%。结论本法快速、简便、准确,能有效控制解毒祛瘀滋肾方的质量。     

蜂王浆冻干粉含药血清对小鼠B16BL6黑色素瘤细胞增殖的影响

目的:观察蜂王浆冻干粉含药血清对小鼠B16BL6黑色素瘤细胞增殖的影响。方法:蜂王浆冻干粉大鼠灌胃1d、3d10d的含药血清与小鼠B16BL6黑色素瘤细胞体外培养,MTT比色法观察对细胞增殖的影响。结果:给药10d组血清能显著抑制B16BL6细胞的增殖,不灭活血清作用强于灭活血清,其抑制效应呈剂量依赖性,40%浓度作用最强。而给药1d、3d组血清抑制效应不明显。结论:蜂王浆冻干粉含药血清能抑制B16BL6细胞的增殖,其效应随大鼠给药时间的延长而增强,提示蜂王浆刺激机体产生自体活性物质在其抑瘤效应中发挥重要作用。     

消癌解毒方含药血清对人肝癌SMMC-7721细胞的抑制作用

目的 观察消癌解毒方的抗肿瘤作用机理.方法 采用人肝癌细胞SMMC-7721,经过细胞培养、MTT 法、流式细胞仪Annexin V-FITC法检测消癌解毒方含药血清对肝癌细胞增殖和凋亡的影响.结果 消癌解毒方具有良好的抑制肝癌细胞生长、促进凋亡的作用,尤其以高剂量组[抑制率为35.8％,凋亡率为(23.0±1.6)％]的效果最佳,作用程度与化疗药物顺铂[抑制率为35.3％,凋亡率为(22.8±4.4)％]相似(P＞0.05).结论 消癌解毒方含药血清能抑制人肝癌细胞SMMC-7721生长,作用机制需要进一步的研究.     

祛瘀解毒益气方对脓毒症患者炎症细胞因子的影响

目的观察祛瘀解毒益气方对脓毒症患者炎症因子的调节作用。方法将80例脓毒症患者随机分为治疗组（祛瘀解毒益气方加常规治疗）和对照组（常规治疗）,各40例,疗程均为14d;观察两组治疗前后急性生理学与慢性健康状况评价（APACHEⅡ评分）和血清TNFα-、IL-10含量的变化。结果治疗后两组APACHEⅡ评分和血清TNF-α、IL-10含量均明显降低（P〈0.05）,且治疗组的降低较对照组显著（P〈0.05）。结论祛瘀解毒益气方能改善脓毒症患者病情,减轻炎症反应。     

扶正解毒方含药血清对人肺癌细胞(A549)增殖和凋亡的影响

目的:研究扶正解毒方含药血清对体外培养的人肺腺癌A549细胞增殖和凋亡的影响。方法:在体外培养的肺癌A549细胞株中加入不同浓度的扶正解毒方含药血清,计算细胞抑制率、观察细胞形态学变化、检测细胞凋亡率。结果:MTT提示扶正解毒方含药血清对肺腺癌A549细胞具有特异性抑制效应并存在效应-剂量依赖关系;肺腺癌A549细胞随药物浓度增加及处理时间的延长细胞凋亡特征越明显;细胞凋亡率随着药物剂量的增加和作用时间的延长而增加,存在效应-剂量、效应-时间依赖关系。结论:扶正解毒方含药血清可抑制肺腺癌A549细胞生长、诱导细胞凋亡。     

解毒祛瘀滋阴法对系统性红斑狼疮发病中CD28/B7表达的影响

目的:探讨CD28/B7在系统性红斑狼疮(SLE)发病中的作用及解毒祛瘀滋阴法治疗SLE的分子免疫学机制。方法:63例SLE患者随机分为两组:西医组(32例)采用强的松、环磷酰胺治疗;中西医结合组(31例)采用解毒祛瘀滋阴法联合强的松、环磷酰胺治疗,均治疗3个月。另选20例健康女性作为正常对照。运用流式细胞仪检测外周血单个核细胞(PBMC)表面CD28、B7-1、B7-2的表达水平。结果:与正常对照组比较,治疗前不同病情SLE患者PBMC表面CD28的表达水平均显著降低(P<0.05或P<0.01),而B7-1和B7-2的表达明显增加(P<0.01)。治疗后中西医结合组能显著降低B7-1、B7-2的表达(P<0.05,P<0.01),升高CD28的表达(P<0.01),且B7-2分子的改善优于治疗后西医组(P<0.05)。同时SLE患者PBMC表面B7-2分子表达水平与SLE病情活动指数呈直线正相关(r=0.76,P<0.01);B7-1及CD28与SLEDAI无明显相关性。结论:CD28/B7共刺激途径在SLE的发生和发展过程中起着重要作用,通过影响CD28/B7共刺激信号传导可能是解毒祛瘀滋阴法治疗SLE的机理之一。     

滋阴解毒祛瘀法对系统性红斑狼疮激素用量影响的随机双盲对照试验

目的系统评价滋阴解毒祛瘀法治疗系统性红斑狼疮对激素治疗用量的影响。方法采用随机、对照、双盲的临床研究设计方案,收集60例肝肾阴虚、热毒血瘀证轻中度活动SLE患者,按随机法分为治疗组和对照组;两组均给予相同西医基础治疗(糖皮质激素+羟氯喹或环磷酰胺),其中治疗组加用滋阴解毒祛瘀方,并根据临床症状随症加减;对照组采用中药安慰剂。结果经过24周治疗后,两组患者在中医证候积分、SLE-DAI积分及糖皮质激素用量均明显降低(P<0.01);治疗组降低中医证候总分与糖皮质激素治疗用量明显优于对照组(P<0.01),治疗组降低SLE-DAI积分优于对照组(P<0.05)。结论滋阴解毒祛瘀法治疗系统性红斑狼疮,在改善临床症状、降低SLE-DAI积分、控制病情的同时,能有效减少糖皮质激素用量,且安全性较好。     

解毒祛瘀方对MCF-7人乳腺癌细胞侵袭能力的影响及机制探讨

目的:研究解毒祛瘀方对人乳腺癌细胞侵袭能力的影响及机制。方法:以人乳腺癌MCF-7细胞为研究对象,预培养后分为空白组,解毒祛瘀方低、中、高剂量组(0.625,1.25,2.50 g·L-1),阳性药组(5-氟尿嘧啶,10 mg·L-1),分别用0.625,1.25,2.50 g·L-1的解毒祛瘀方及5-氟尿嘧啶处理人乳腺癌MCF-7细胞24 h后,MTT法检测细胞黏附率,Transwell小室实验检测细胞侵袭能力,RT-PCR法检测肿瘤细胞CD44,E-钙黏蛋白及N-钙黏蛋白基因的表达,Western blot法检测肿瘤细胞CD44,E-钙黏蛋白,N-钙黏蛋白,磷酸化细胞外信号调节激酶(p-ERK)及磷酸化蛋白激酶B(p-Akt)蛋白的表达。结果:与空白组比较,解毒祛瘀方低、中、高剂量组可明显抑制人乳腺癌MCF-7细胞的黏附和侵袭能力;且使CD44及E-钙黏蛋白基因及蛋白表达上调,N-钙黏蛋白表达下调,并可以抑制PI3K/Akt及MEK/ERK信号通路的激活(P0.05,P0.01)。结论:解毒祛瘀方可抑制人乳腺癌MCF-7细胞体外侵袭能力,其机制可能与抑制相关异质黏附蛋白的表达、抑制上皮间质转化及调节肿瘤相关信号通路有关。     

基于“肾主骨”理论探讨解毒祛瘀滋阴方治疗糖皮质激素性骨质疏松的作用机制

目的 基于“肾主骨”理论从“肾”的功能意义探讨解毒祛瘀滋阴方修复“肾”损伤治疗糖皮质激素性骨质疏松（GIOP）的作用机制。方法 将40只雌性C57BL/6小鼠随机分为对照组（Control）、模型组（Model）、解毒祛瘀滋阴方治疗组（JP）和阿仑膦酸钠治疗组（ALN），每组10只。Model组、JP组及ALN组给予地塞米松（5 mg/kg/d）肌注隔日给药造模，JP组及ALN组分别给予解毒祛瘀滋阴方[5 mg/（kg·d）]及阿仑膦酸钠混悬液[1.3 mg/（kg·d）]灌胃给药，连续12周。小鼠腿骨用MicroCT扫描观察骨状况[骨密度（BMD）及骨体积分数（BV/TV）、平均骨小梁宽度（Tb.Th）、骨小梁数目（Tb.N）、平均骨小梁分离度（Tb.Sp）]指标及建立股骨远端平扫图像；ELISA法检测各组小鼠血促肾上腺皮质激素释放激素（CRH）、促肾上腺皮质激素（ACTH）、皮质醇（CORT）；测量肾脏重量并观察组织形态学变化。结果 与Control组比较，Model组小梁显著减少、结构变薄，BMD、BV/TV、Tb.Th、CRH、ACTH、CORT水平降低、肾脏重量下降（P<...     

滋阴活血解毒方对局灶性脑缺血大鼠凝血酶原mRNA和蛋白酶激活受体-1 mRNA含量的影响

目的观察滋阴活血解毒方对局灶性脑缺血模型大鼠脑组织凝血酶原mRNA和蛋白酶激活受体（PAR一1）mRNA表达的影响,探讨其脑保护机制。方法将24只大鼠随机分为假手术组、模型组、滋阴活血解毒方组、阿加曲班组,每组分1、3d两个时间点。滋阴活血解毒方组灌服中药水煎剂,每日剂量32．4g／kg;阿加曲班组为腹腔注射给药,第1、2日每日剂量为11．16mg／kg,第3日剂量为3．72mg／kg。假手术组和模型组均灌服等容量生理盐水,每目剂量为2mL／100g。均分2次给药。线栓法制备大脑中动脉闭塞模型。采用反转录-聚合酶链反应（RT—PCR）检测脑组织中凝血酶原mRNA及PAR-1mRNA表达水平。结果与假手术组比较,模型组脑组织中凝血酶原mRNA、PAR-1mRNA表达显著升高,差异具有统计学意义（P〈0．01）,滋阴活血解毒方组和阿加曲班组能明显下调凝血酶原mRNA、PAR-1mRNA表达,差异具有统计学意义（P〈0．01）。结论滋阴活血解毒方能抑制脑组织中凝血酶原mRNA和PAR-1mRNA的表达,减轻凝血酶的毒性反应,这可能是其发挥脑保护作用的机制之一。     

黄连解毒汤对脂多糖诱导的小鼠急性肾损伤治疗作用及机制

目的 研究黄连解毒汤对脂多糖诱导的小鼠急性肾损伤的作用及作用机制。方法 雄性C57BL/6小鼠随机分为对照组、模型组和黄连解毒汤低、中、高剂量（50、100、150 mg/kg）组,每组8只。连续ig黄连解毒汤3 d,末次给药2 h后,ip脂多糖（10 mg/kg）建立急性肾损伤模型。检测血清中肌酐和尿素氮水平;苏木素-伊红（HE）和高碘酸-席夫（PAS）染色检测肾组织病理变化;免疫组化法检测肾组织B淋巴细胞瘤-2(B-cell lymphoma-2,Bcl-2)和Bcl-2相关X蛋白（Bcl-2 associated X protein,Bax）表达;TUNEL染色检测肾组织细胞凋亡情况;Western blotting检测肾组织磷酸酯酶与张力蛋白同源物（phosphatase and tensin homolog,PTEN）、磷脂酰肌醇3-激酶（phosphatidylinositol 3-kinase,PI3K）、蛋白激酶B(protein kinase B,Akt)、p-PI3K和p-Akt蛋白表达。结果 黄连解毒汤明显降低急性肾损伤小鼠血清中尿素氮及肌酐水平（P<0.0...     

苦参碱含药血清对WB-F344细胞形态、增殖和Jagged1信号分子表达的影响

目的研究苦参碱含药血清对大鼠肝卵圆细胞系WB-F344细胞形态、增殖及Jagged1信号分子表达的影响,探讨苦参碱对肝干细胞诱导分化的作用机制。方法用不同浓度苦参碱含药血清（5%、10%、20%）作用于WB-F344细胞,以未用苦参碱含药血清处理的WB-F344细胞为空白对照组,观察细胞形态学改变,MTT法检测细胞增殖情况,免疫细胞化学法观察ALB、Jagged1蛋白表达变化,RT-PCR观察Jagged1、Hes1mRNA表达的变化。结果经苦参碱含药血清干预后,WB-F344细胞形态发生明显改变：药物组细胞较对照组细胞体积增大,核缩小,核浆比减小,培养48 h大部分细胞呈多边形。MTT结果显示,5%、10%、20%浓度的苦参碱含药血清24、48、72 h均能不同程度抑制WB-F344增殖,且存在时间、剂量依赖性。免疫细胞化学结果显示,空白对照组WB-F344细胞表达Jagged1蛋白,不表达ALB蛋白,经苦参碱含药血清处理后Jagged1蛋白表达显著下降（P〈0.01）,ALB蛋白表达显著升高（P〈0.01）。RT-PCR结果显示,经苦参碱含药血清处理后Jagged1mRNA、Hes1mRNA表达显著下降（P〈0.01）。结论苦参碱含药血清可诱导WB-F344细胞向肝细胞特性方向分化,其作用机制与调节Notch信号通路的关键分子有关。     

益气解毒复方含药血清对胸腺增生型重症肌无力mTEC和Treg细胞增殖的影响

目的:探讨益气解毒复方含药血清对胸腺增生型重症肌无力(MG)患者胸腺髓质上皮细胞(mTEC)和调节性T细胞(Treg)增殖的影响。方法:采用血清药理学方法,将35只SD大鼠适应性喂养1周后随机分为益气解毒复方低、中、高剂量组,空白组,强的松组,每组7只。大鼠连续灌胃1周,制备上述各组含药血清。利用细胞增殖与活性检测(CCK-8)法观察不同浓度益气解毒复方含药血清对mTEC和Treg细胞增殖的作用,并通过共同培养方式观察mTEC及益气解毒复方含药血清对Treg细胞增殖的作用。结果:胸腺细胞经培育,使用mTEC特征性标记荆豆凝集素Ⅰ(UEAI)做流式检测阳性率均值为92.54%。采用磁珠分选Treg细胞,多次磁珠分选后的Treg细胞纯度高达92%,mTEC和Treg细胞均呈较高阳性率表达,细胞为mTEC和Treg细胞,细胞纯度符合后续实验的要求。益气解毒复方含药血清体积分数2.5%~15%时,对mTEC和Treg细胞均有抑制作用,益气解毒复方含药血清浓度≥20%时对细胞的增殖有促进作用,且随作用的时间延长,含药血清对细胞的增殖的促进作用越为明显。培养48 h后的结果显示,与空白组比较,强的松组和益气解毒复方低剂量组差异无统计学意义,中、高剂量组细胞增殖抑制率显著降低(P<0.01)。与mTEC共同培养的Treg细胞,与空白组比较,强的松组、益气解毒复方低剂量组Treg细胞增殖抑制率差异无统计学意义,中、高剂量组细胞增殖抑制率显著降低(P<0.01)。结论:益气解毒复方含药血清能够影响胸腺增生型MG患者mTEC和Treg细胞的增殖,独立培养MG患者的Treg细胞相比,与mTEC共同培养的MG患者Treg细胞增殖具有促进作用,提示mTEC能够调控Treg细胞的增殖,且这种作用在予以益气解毒复方含药血清干预之后更为明显,说明益气解毒复方对Treg细胞的干预,可以通过对mTEC的治疗作用产生,这可能是益气解毒复方治疗MG的作用机制之一。     

解毒护肝饮药物血清对异烟肼致HepG2坏死和凋亡的干预

目的 观察解毒护肝饮药物血清对异烟肼致人肝癌细胞株(human hepatocellular carcinoma cell lines,HepG2)病变的干预,并分析其机制。方法 制备解毒护肝饮和甘草酸二铵的药物血清,建立异烟肼致HepG2细胞损伤模型,以解毒护肝饮和甘草酸二铵药物血清加入HepG2培养液,观察对HepG2坏死和凋亡的干预,以及对HepG2 Fas/FasL表达的影响,以评价解毒护肝饮的疗效机制。结果 解毒护肝饮药物血清对异烟肼致HepG2损伤有明显抑制作用,可以减少HepG2细胞凋亡和坏死,并减少其Fas/FasL表达,效果优于甘草酸二铵胶囊组。结论 以清热利湿解毒兼养阴化瘀为治法的解毒护肝饮有确切的减少异烟肼致HepG2坏死和凋亡的作用,其抗细胞凋亡作用与减少HepG2的Fas/FasL的表达有关。