基于内切-1,4-β-半乳聚糖酶水解的黄芪糖指纹图谱的建立及不同种质资源黄芪的鉴别

目的:建立基于内切-1,4-β-半乳聚糖酶水解的黄芪糖指纹图谱,用以鉴别不同种质资源的黄芪。方法:以内切-1,4-β-半乳聚糖酶对不同种质资源蒙古黄芪(移栽芪和野生芪)和膜荚黄芪(移栽芪和野生芪)多糖进行酶解,通过荧光辅助糖电泳(FACE)获得糖指纹图谱,利用主成分分析进行数据处理,获得区分不同种质资源黄芪的差异性糖组分。结果:内切-1,4-β-半乳聚糖酶酶解产物中五糖和六糖可以作为区分蒙古黄芪移栽芪和野生芪的差异性糖片段,四糖和五糖可以作为区分膜荚黄芪移栽芪和野生芪的差异性糖片段,四糖、五糖和六糖可以作为区分野生蒙古黄芪与野生膜荚黄芪的差异性糖片段。结论:内切-1,4-β-半乳聚糖酶降解的多糖产物能很好的鉴别黄芪种(蒙古黄芪与膜荚黄芪)及生长方式(移栽芪和野生芪)。该研究结果可为黄芪药材的品质评价及活性寡糖的筛选奠定基础。     

基于内切-1,4-β-甘露聚糖酶水解的黄芪糖指纹图谱的建立及不同种质资源黄芪鉴别

以内切-1,4-β-甘露聚糖酶的最佳酶解条件对不同种质资源蒙古黄芪(移栽芪和野生芪)和膜荚黄芪(移栽芪和野生芪)多糖进行酶解,通过荧光辅助糖电泳获得糖指纹图谱,利用主成分分析对数据进行分析,获得区分不同种质资源黄芪的差异性糖组分。结果显示,内切-1,4-β-甘露聚糖酶酶解产物中三糖、四糖和五糖可以作为区分蒙古黄芪(移栽芪和野生芪)的差异性糖片段,五糖和六糖可以作为区分膜荚黄芪(移栽芪和野生芪)的差异性糖片段,三糖和四糖可以作为区分移栽蒙古黄芪和移栽膜荚黄芪的差异性糖片段。研究表明,内切-1,4-β-甘露聚糖酶降解的多糖产物能很好地鉴别黄芪种属(蒙古黄芪与膜荚黄芪),生长方式(移栽芪和野生芪)。该研究为黄芪药材的品质评价及活性寡糖的筛选奠定了基础。     

基于人工胃酸水解的黄芪糖指纹图谱的建立及不同种质资源黄芪鉴别

目的:模拟人工胃液条件处理不同种质资源蒙古黄芪(移栽芪和野生芪)和膜荚黄芪(移栽芪和野生芪)细胞可溶性多糖及糖缀合物,获得一系列PACE糖指纹图谱,用于黄芪的种质资源鉴别和评价。方法:利用SMICA软件对数据进行主成分分析及t检验,获得区分不同种质资源黄芪的差异性糖组分。结果:蒙古黄芪中移栽芪和野生芪分离现象明显,且多糖酸解产物中的四糖和六糖可以作为区分生长方式的主要差异性糖片段,野生蒙古黄芪中四糖的含量高于蒙古移栽芪中含量,移栽蒙古黄芪中六糖的含量高于野生芪中含量;三糖和四糖可以作为区分野生蒙古黄芪与野生膜荚黄芪的主要差异性片段;五糖和六糖可以作为区分移栽蒙古黄芪与移栽膜荚黄芪的主要差异性片段。结论:人工胃酸降解的多糖产物能很好的鉴别黄芪种属(野生蒙古黄芪与野生膜荚黄芪、移栽蒙古黄芪与移栽膜荚黄芪),生长方式(移栽蒙古黄芪和野生蒙古黄芪)。本研究为黄芪药材的品质评价奠定了基础。     

蒙古黄芪、膜荚黄芪及混伪品种子的位点特异性PCR鉴别

目的 基于特异性聚合酶链式反应（PCR）建立一种可以准确、快速鉴别蒙古黄芪、膜荚黄芪种子的方法。方法 利用叶绿体基因组综合数据库（CGIR）及IdenDSS软件分别获取蒙古黄芪、膜荚黄芪的DNA特征片段，在此基础上筛选获得蒙古黄芪与膜荚黄芪的特异性单核苷酸多态性（SNP）位点，根据该位点设计蒙古黄芪特异性鉴别引物对MG-F/MG-R和膜荚黄芪特异性鉴别引物对MJ-F/MJ-R。分别建立蒙古黄芪和膜荚黄芪特异性PCR鉴别方法，优化PCR反应体系，并对该方法的专属性和适用性进行考察。结果 蒙古黄芪特异性PCR鉴别方法，采用引物对MG-F/MG-R、退火温度62 ℃、循环次数28次，经PCR扩增和凝胶电泳后蒙古黄芪在约220 bp处得到特异性条带，而膜荚黄芪和其他混伪品种子无条带；膜荚黄芪特异性PCR鉴别方法，采用引物对MJ-F/MJ-R、退火温度58 ℃、循环次数28次，经PCR扩增和凝胶电泳后膜荚黄芪扩增得到约150 bp的条带，而蒙古黄芪及混伪品无扩增产物。结论 该研究建立的特异性PCR鉴别方法，可以准确、快速对蒙古黄芪、膜荚黄芪进行种源鉴别，为黄芪种子的分类与准确鉴定提供了一定的科学依据。     

蒙古黄芪和膜荚黄芪水溶性蛋白表达

目的:蒙古黄芪和膜荚黄芪都为药用黄芪,二者亲缘关系近,成分相似,药用价值尚未区分。该研究旨在建立蒙古黄芪和膜荚黄芪的水溶性蛋白表达谱,了解两种黄芪之间存在的差别。方法:样品采用水超声提取和丙酮沉淀的方法得到黄芪水溶性蛋白成分,质谱级胰酶酶解后的肽段经nano ESI-LC-MS/MS分析,采用Proteome Discoverer 1. 4软件比对豆科蛋白数据库鉴定蛋白,再使用非标记定量软件SIEVE分析蒙古黄芪与膜荚黄芪水溶性蛋白质表达的差异。最后运用生物信息学方法分析2种黄芪共有蛋白的分类、分子功能、参与的生物过程和信号通路。结果:蒙古黄芪鉴定特异性蛋白有920个,膜荚黄芪鉴定的特异性蛋白有717个,2种黄芪中共同表达的蛋白有472个,其中二者的差异表达蛋白有21个,如PR-10蛋白,NDK-1蛋白,谷蛋白A2,磷脂酶D等蛋白在两种黄芪中差异表达。蒙古黄芪高表达蛋白14个,膜荚黄芪高表达蛋白7个。结论:蒙古黄芪和膜荚黄芪的水溶性蛋白表达谱存在显著差异,特异性蛋白、差异表达蛋白和共同表达的蛋白可为今后两种黄芪的鉴别、药理作用机制的研究和寻找作用靶点提供参考。     

黄芪居群间生物学特性差异及对白粉病抗性研究

目的:研究膜荚黄芪、蒙古黄芪居群间形态、习性、生理特征、抗病性等差异并进行分类。为黄芪种质资源整理,品种培育、改良提供理论依据。方法:从形态、习性等生物学特性和同工酶、可溶性蛋白电泳等生理特点方面对黄芪不同居群进行比较研究,并以同工酶、可溶性蛋白电泳图谱为基础进行聚类分析,同时通过比较各居群感染白粉病的病情指数,研究了它们的抗白粉病能力。结果:蒙古黄芪与膜荚黄芪有很大差异;膜荚黄芪中存在一种花期晚、叶多毛的类型。结论:可以把黄芪分为3个类型:蒙古黄芪,早花型膜荚黄芪,晚花型膜荚黄芪。蒙古黄芪极抗白粉病,膜荚黄芪易感白粉病,其中早花型膜荚黄芪尤其易感白粉病。     

中药黄芪的临床应用

<正>黄芪是多年生草本植物蒙古黄芪或膜荚黄芪的根,性味甘温,入脾、肺经。功效为补气升阳,固表止汗,利水消肿,托疮生肌。黄芪一药,原名黄耆,始载于《本经》,是一味临床常用药物,临床应用的范围甚为广泛。药理学和临床试验表明,黄芪有影响机体代谢,降血糖和心血管作用等多方面药理活性。现将黄芪临床应用作一介绍。1黄芪的活性成分黄芪含有多糖、皂甙、黄酮、氨基酸及微量元素等多种有效成分。从蒙古黄芪中分离得到了4种多糖,两种葡聚糖(AG-1,AG-2)     

黄芪及其民间习用品DNA指纹图谱和有效成分含量的比较

 目的比较2000年版药典收载黄芪品种及其民间习用品的DNA指纹图谱和有效成分黄芪甲苷、总黄酮及总多糖的含量,对黄芪质量标准进行多维研究。方法RAPD法确定DNA指纹图谱,HPLC-ELS测定黄芪甲苷的含量,比色法测定总黄酮的含量,硫酸-苯酚法测定黄芪总多糖的含量。结果DNA指纹图谱分析表明膜荚黄芪、蒙古黄芪和梭果黄芪有着较近的遗传关系,而另外3种黄芪,即苦黄芪、黑毛多枝黄芪和直立黄芪有非常近的亲缘关系。有效成分含量的测定结果证实,黑毛多枝黄芪、直立黄芪中黄芪甲苷的含量高于膜荚黄芪和蒙古黄芪;总黄酮的含量以梭果黄芪最高;总多糖的含量以蒙古黄芪最高。结论对民间使用的黄芪品种进行多维质量研究,为开发黄芪的药用资源提供理论依据。     

影响黄芪有效成分含量的因子的研究

目的 比较不同产地、不同生境条件膜荚黄芪和蒙古黄芪药材中黄芪甲苷、总黄酮及总多糖的含量。方法 HPLC－ELS法测定黄芪甲苷的含量，比色法测定总黄酮的含量，硫酸－苯酚法测定黄芪总多糖的含量。结果 野生黄芪中总黄酮和总多糖含量高于栽培黄芪，不同地区栽培黄芪的有效成分含量相差不多，旱地栽培黄芪有效成分含量高于水地黄芪。结论 通过对不同产地、不同生境黄芪有效成分含量的比较，为黄芪的栽培提供理论依据。     

不同产地黄芪中的黄芪总皂苷含量对比分析

目的:统计不同产地黄芪中的黄芪总皂苷含量并进行对比分析。方法:以我国八个不同产地的蒙古黄芪与膜荚黄芪作为研究样本,对比两个品种黄芪的黄芪总皂苷含量;对比不同种植方式黄芪的黄芪总皂苷含量;对比不同产地黄芪的黄芪总皂苷含量;对比不同产地蒙古黄芪、膜荚黄芪的黄芪总皂苷含量。结果:内蒙古产黄芪的黄芪总皂苷含量最高,为(22.95±1.17)mg/g,吉林产黄芪的黄芪总皂苷含量最低,为(18.12±0.59)mg/g,不同产地黄芪的黄芪总皂苷含量可见明显差异(P0.05)。蒙古黄芪的黄芪总皂苷含量为(21.24±1.06)mg/g,膜荚黄芪的黄芪总皂苷含量为(19.01±0.87)mg/g(P0.05)。野生黄芪的黄芪总皂苷含量高于人工种植黄芪(P0.05);不同产地内蒙黄芪的黄芪总皂苷含量可见统计学差异(P0.05);不同产地膜荚黄芪的黄芪总皂苷含量可见统计学差异(P0.05)。结论:不同产地黄芪的黄芪总皂苷含量具有明确差异性,临床应用中应给予足够重视,根据产地、品种、种植方式等修正方剂中黄芪用量。     

我国黄芪药材资源现状与分析

通过对我国黄芪药材资源的考察调研,探明了黄芪药材资源现状为:主要依赖人工栽培,蒙古黄芪为主流商品,甘肃和山东分别成为栽培蒙古黄芪与膜荚黄芪的新主产区,山西北部半野生种植模式保持了传统道地黄芪药材的特征,但产量有限,目前已形成传统芪与栽培芪并存的资源格局.发现膜荚黄芪的栽培选址、黄芪根腐病以及传统芪采刨难是制约黄芪药材生产的主要技术问题,并从我国黄芪种植区域的合理布局、标准体系建立、生产技术研究与规范化建设等方面提出了若干建议.     

黄芪及其伪品的鉴别

《中国药典》规定豆科植物蒙古黄芪和膜荚黄芪作为正品药用。从来源、性状、显微、粉末对黄芪正品及其伪品作了鉴别。     

黄芪种质资源调查报告

黄芪原植物为膜荚黄芪Astragalus membranaceus（Fisch．）Bge．和蒙古黄芪A．membranaceus（Fisch．）Bge．var．mongholicus（Bge）．Hsiao，野生资源几近枯竭，1970年始有栽培。本研究从查阅文献人手，结合市场产销信息和网络信息，调查重点放在栽培品种、产量、质量、抗性及形态特殊的群体和个体。调查发现黄芪种植区近年发生了很大变化，种子来源复杂、混杂情况严重，野生种质也较难采得。此外，目前品种选育工作薄弱，栽培地区大多缺乏规范的栽培管理和适当的病虫害防治技术等问题，亟待重视和加强。     

黄芪种植产地与生态环境及饮片规格的调查研究

目的:中药黄芪来源于蒙古黄芪及膜荚黄芪,由于黄芪野生资源的接近枯竭,目前商品黄芪以栽培品为主。方法:通过实地调查,了解黄芪的种植产地及生态环境。并且市场上黄芪饮片规格不统一,通过调查了解饮片规格,为饮片标准的制订和饮片质量的控制提供依据。结果:蒙古黄芪多为人工栽培,主要产地为山西恒山地区、甘肃陇南地区、内蒙古南部,栽培面积广,除山西黄芪多为山地直播外,其他均为平川地种植;膜荚黄芪则多为野生,主要分布于黑龙江省和内蒙古东北部,且资源近枯竭,其他地区如山东、河北等只有少量栽培。通过对黄芪饮片的市场调查,发现有5种不同规格的饮片,并且呈现一定的区域特征。结论:建议通过建立自然保护区保护黄芪野生资源,并统一黄芪饮片规格。     

2种类型膜荚黄芪主要药效成分含量及关键酶基因表达量差异研究

目的以2年生2种类型膜荚黄芪Astragalus membranceus(绿茎有毛膜荚黄芪、紫茎有毛膜荚黄芪)根、茎、叶为实验材料,探究其主要药效成分含量及其生物合成途径中关键酶基因表达量的差异,为药材膜荚黄芪资源合理利用及其优良品种选育选育提供科学的理论参考。方法使用HPLC检测膜荚黄芪根、茎、叶中黄芪甲苷与毛蕊异黄酮葡萄糖苷的含量,使用紫外分光光度计检测膜荚黄芪根、茎、叶中总皂苷含量,采用实时荧光定量PCR检测其根中皂苷生物合成过程中关键酶乙酰辅酶A乙酰基转移酶(AATC)、3-羟基-3-甲基戊二酰辅酶A合酶(HMGS)、3-羟基-3-甲基戊二酰辅酶A还原酶(HMGR)、异戊二烯焦磷酸异构酶(IDI)、法尼基焦磷酸合酶(FPS)、鲨烯合酶(SS)、鲨烯环氧酶(SE)、环阿尔庭烷合酶(CAS)基因的表达量。结果紫茎膜荚黄芪根中黄芪甲苷含量始终高于绿茎膜荚黄芪;在生殖生长期时,绿茎膜荚黄芪根中毛蕊异黄酮葡萄糖苷含量高于紫茎膜荚黄芪,而枯萎期二者变化浮动较大;绿茎膜荚黄芪根中总皂苷含量普遍高于紫茎膜荚黄芪。AACT、FPS、HMGS基因表达量与绿茎膜荚黄芪总皂苷含量呈显著相关(P0.05),IDI基因表达量与总皂苷含量呈极显著相关(P0.01),说明这4个基因在绿茎膜荚黄芪总皂苷合成中具有重要影响;HMGR基因与紫茎膜荚黄芪总皂苷呈显著相关(P0.05),其他基因与紫茎膜荚黄芪皂苷含量均有相关性,但未达到显著水平。结论探究了2种类型黄芪3种主要药效成分的动态变化和皂苷类化合物关键酶基因的表达,为黄芪皂苷类化合物合成生理生态机制的明晰、膜荚黄芪资源合理利用及优良品种选育提供了科学的理论依据。     

黄芪类品种的药理研究

本文报告了六种黄芪类品种(膜荚黄芪、蒙古黄芪、多序岩黄芪、多花黄芪、梭果黄芪、东俄洛黄芪)的药理活性,在相同的实验条件下进行了比较。实验结果表明,六种黄芪类品种的药理活性,只有膜荚黄芪和蒙古黄芪在镇痛、免疫功能、利尿、降压、促进微循环、抗过氧化脂质、增加血浆中环磷酸腺苷上有显著的药理作用。提示膜荚黄芪和蒙古黄芪是六种黄芪类品种中质量最佳的。     

基于部分酸水解寡糖特征图谱及免疫活性评价的不同产地黄芪的品质比较

目的 比较不同产地的蒙古黄芪多糖（APS）部分酸水解产物寡糖特征图谱及免疫活性差异,建立以寡糖混合物为指标的黄芪品质评价方法。方法 以黄芪多糖为研究对象,首先通过正交试验选择了最佳部分酸水解的条件,将多糖水解成可供分析的寡糖,建立基于部分酸水解-亲水作用色谱的黄芪寡糖特征图谱,利用SIMCA软件对数据进行多元统计分析以区分不同产地的蒙古黄芪,采用亲水作用色谱与质谱联用对黄芪多糖部分酸水解产物进行结构表征,并通过小鼠腹腔巨噬细胞吞噬中性红实验进行活性评价。结果 通过正交试验得到的最佳水解条件为温度90℃、三氟乙酸浓度1 mol/L,水解时间1 h。黄芪寡糖特征图谱的PCA结果显示,可以将3种不同的蒙古黄芪区分开。质谱解析可知3种不同的黄芪多糖均主要为1→4连接的线性葡聚糖,水解得到聚合度3~8的葡寡糖。山西浑源仿野生黄芪多糖的部分酸水解产物增强巨噬细胞吞噬活性的能力较高于移栽芪且高于未水解的总黄芪多糖。结论 表明基于部分酸水解-亲水作用色谱的黄芪寡糖特征图谱及对细胞免疫功能影响差异可为不同产地及不同种植方式的蒙古黄芪进行品质评价,也是对黄芪质量评价方法的重要补充。同时对其他中药多糖的表征具有一定的启蒙作用。     

基于单糖指纹图谱技术的速生黄芪与野生黄芪的鉴别

目的建立黄芪单糖指纹图谱,找出速生黄芪与野生黄芪糖谱专属性差异,为不同生长方式黄芪鉴别和品质评价提供依据。方法采用单糖指纹图谱技术,对24批不同生长方式的黄芪药材,以黄芪细胞质中游离糖、多糖和糖缀合物为研究对象,建立速生黄芪与野生黄芪的单糖指纹图谱,并对不同生长方式的黄芪中单糖的种类与量进行主成分分析和聚类分析。结果野生黄芪中不同糖类成分的量明显高于速生黄芪,且2种黄芪可按指标成分的比例进行鉴别(速生黄芪中甘露糖-阿拉伯糖3.5∶1,葡萄糖-阿拉伯糖4∶1;野生黄芪中甘露糖-阿拉伯糖3.5∶1,葡萄糖-阿拉伯糖4∶1)。结论该结果不仅为黄芪品质评价指标的筛选提供了依据,同时为以糖类化合物为主要活性物质的中药材质量评价标准的研究提供了思路与方法。     

蒙古黄芪与膜荚黄芪种子形态特征及其鉴别方法的研究

目的为黄芪种子鉴定提供方法,为按中药材GAP原则制定相关标准操作过程(SOP)提供基础研究资料。方法采用肉眼直接观察、光学显微镜观察和电子显微镜进行扫描观察,比较蒙古黄芪和膜荚黄芪两种药用黄芪的种子形态特征和微观结构;通过萌发试验,比较二者的差异。结果通过肉眼和光学显微镜观察,两种黄芪种子的形态差异不明显,在电子显微镜下观察,两种黄芪种子的萌发孔形状、种脐和种皮的微观结构有明显差异;蒙古黄芪较膜荚黄芪种子硬实率高,萌发不整齐,萌发高峰滞后。结论在电子显微镜下能够对两种黄芪种子准确地做出鉴定,种脐、萌发孔、种皮的微观结构可作为鉴别两种黄芪种子的指标;种子硬实率和萌发动态规律可用于两种黄芪种子的辅助鉴别。     

黄芪多糖对机体细胞免疫应答影响的研究进展

黄芪为豆科植物蒙古黄芪或膜荚黄芪的干燥根,其味甘,性微温,具有补气升阳、益卫固表、利尿脱毒、敛疮生肌等功效[1],是一种常见的扶正中药.黄芪多糖(APS)是黄芪中重要的天然有效成分,具有增强免疫功能、提高巨噬细胞活性、抑制EAS、双向调节血糖的作用[2-4].