三七总苷抑制黑色素瘤A375细胞增殖的作用及机制研究

目的:探讨三七总苷(PNS)对黑色素瘤A375细胞增殖及凋亡的影响。方法:采用终浓度为100、200、400μg/m L的PNS处理A375细胞,分别采用四甲基偶氮唑盐(MTT)法、流式细胞术、定量聚合酶反应(q PCR)法及蛋白免疫印迹法(Western blot)检测细胞增殖抑制率、凋亡率、上皮间充质转化(EMT)相关标记分子mRNA表达、凋亡蛋白及信号通路蛋白表达等指标。结果:与对照组比较,A375细胞经各浓度PNS作用24、48、72 h增殖抑制率均显著升高(P0.05);PNS处理48 h后的A375细胞早期、晚期凋亡率及活化型caspase-3、Bax蛋白和E-钙黏蛋白mRNA表达均显著升高,p-Akt/Akt、Bcl-2蛋白及波形蛋白、N-钙黏蛋白mRNA表达显著降低(P0.05)。结论:PNS具有抑制黑色素瘤A375细胞增殖、诱导凋亡、抑制EMT等作用,其机制可能与抑制PI3K/Akt信号通路的激活有关。     

乙酰紫草素联合奥沙利铂对人结肠癌HT29细胞增殖及凋亡的影响

目的探讨乙酰紫草素联合奥沙利铂对人结肠癌HT29细胞增殖及凋亡的影响。方法将人结肠癌HT29细胞分为空白组、乙酰紫草素组(10μmol/L)、奥沙利铂组(1μmol/L)和联合给药组(10μmol/L乙酰紫草素+1μmol/L奥沙利铂),MTT法检测HT29细胞增殖抑制率,流式细胞术检测HT29细胞凋亡率、qRT-PCR法检测HT29细胞Ki-67、Bcl-2及Bax mRNA表达,Western blot法检测磷酸化磷脂酰肌醇-3-羟激酶(p-PI3K)、磷酸化蛋白激酶B (p-Akt)蛋白表达。结果人结肠癌HT29细胞经乙酰紫草素、奥沙利铂和联合给药处理24、48、72 h后,细胞增殖抑制率均增加,其中联合给药组细胞增殖抑制率最高(P<0. 05)。药物处理HT29细胞48 h后,与空白组比较,乙酰紫草素组、奥沙利铂组和联合给药组凋亡率、Bax mRNA表达增加(P<0. 05),而Ki-67、Bcl-2 mRNA表达及p-PI3K、p-Akt蛋白表达降低(P<0. 05);联合给药组的细胞凋亡率、Bax mRNA表达均高于乙酰紫草素组和奥沙利铂组,Ki-67、Bcl-2 mRNA表达及p-PI3K、p-Akt蛋白表达低于乙酰紫草素组和奥沙利铂组。结论乙酰紫草素和奥沙利铂对人结肠癌HT29细胞均具有抑制增殖及诱导凋亡作用,可能与调控PI3K/Akt信号通路有关,且两者联用时效果更好。     

人参皂苷Rb_1对氧-糖剥夺诱导的大鼠原代皮层神经元损伤的保护作用

目的探讨人参皂苷Rb_1对氧-糖剥夺诱导的大鼠原代皮层神经元损伤的保护作用。方法神经元置于三气培养箱(85%N_2、10%H_2、5%CO_2混合气体)中用无糖细胞外液中培养1.5 h,构建氧糖剥夺,分为对照组、模型组、人参皂苷Rb_1组(0.2、2、20μmol/L)及人参皂苷Rb_1(20μmol/L)+LY294002(1μmol/L)组。采用LDH法和PI/FDA双染检测神经元活性和凋亡率,Western blot法检测神经元p-Akt表达。结果与模型组比较,人参皂苷Rb_1(2、20μmol/L)可显著降低神经元凋亡率、LDH释放(P0.05),人参皂苷Rb_1(0.2、2、20μmol/L)可显著提高神经元p-Akt表达(P0.05);与人参皂苷Rb_1组(20μmol/L)比较,人参皂苷Rb_1+LY294002组可显著逆转人参皂苷Rb_1对神经元凋亡、LDH释放的抑制作用,以及对p-Akt表达促进作用(P0.05)。结论人参皂苷Rb_1可经激活PI3K/Akt来减少OGD诱导的大鼠原代皮层神经元凋亡。     

乙酰紫草素对人结肠癌HCT116细胞增殖、凋亡及上皮间充质转化的影响

目的探讨乙酰紫草素对人结肠癌HCT116细胞增殖、凋亡及上皮间充质转化(EMT)的影响。方法 HCT116细胞经终浓度为0、3、6、12、24μmol/L的乙酰紫草素处理后,分别采用四甲基偶氮唑蓝(MTT)法检测增殖抑制率,流式细胞术检测凋亡率,Hoechst染色法检测凋亡指数,实时定量PCR法检测E-钙黏蛋白、N-钙黏蛋白及波形蛋白mRNA表达,酶联免疫吸附(ELISA)法检测纤维连接蛋白表达。结果乙酰紫草素可呈剂量和时间依赖的方式提高HCT116细胞增殖抑制率;乙酰紫草素也可使HCT116细胞早、晚期凋亡率及总凋亡率,细胞凋亡指数升高;同时,乙酰紫草素可以增加E-钙黏蛋白mRNA的表达,降低N-钙黏蛋白和波形蛋白mRNA及纤维连接蛋白的表达。结论乙酰紫草素具有抑制人结肠癌HCT116细胞增殖、诱导其凋亡及抑制EMT进程的作用。     

人参皂苷CK抑制乳腺癌MCF-7细胞迁移和侵袭的实验研究

目的探讨人参皂苷CK对乳腺癌MCF-7细胞迁移和侵袭的影响及潜在机制。方法体外培养MCF-7细胞,分别通过四甲基噻唑蓝(MTT)法、划痕实验、Transwell侵袭实验及蛋白免疫印迹(Western blot)法检测不同浓度的人参皂苷CK对MCF-7细胞活力、迁移能力、侵袭能力及基质金属蛋白酶-2(MMP-2)、MMP-9表达的影响。结果人参皂苷CK可剂量依赖性的抑制MCF-7细胞的增殖;与对照组相比,人参皂苷CK 5,10μmol/L组的细胞迁移能力及2.5,5,10μmol/L组的细胞侵袭能力呈显著性降低(P0.05);与对照组相比,人参皂苷CK 2.5,5,10μmol/L剂量组的MMP-2及5,10μmol/L剂量组的MMP-9表达呈显著性降低(P0.05)。结论人参皂苷CK具有抑制乳腺癌MCF-7细胞迁移和侵袭的作用,该作用与MMP-2及MMP-9的表达减少有关。     

常春藤皂苷元对前列腺癌DU145细胞增殖、迁移和侵袭能力的影响

目的:探讨常春藤皂苷元对前列腺癌细胞增殖、迁移和侵袭能力的影响,以及可能的机制。方法:培养人前列腺癌细胞株DU145,分别加入不同浓度常春藤皂苷元(25、50、100μg/ml)作用于DU145细胞,继续培养12、24、36、48h,采用MTT法检测不同浓度常春藤皂苷元对DU145细胞增殖的影响;流式细胞术检测细胞凋亡;利用Transwell小室检测细胞迁移和侵袭能力;利用实时荧光定量PCR检测Bcl-2、Bax、PI3K、Akt基因表达,利用Western blot检测Bcl-2、Bax、PI3K、p-PI3K、Akt和p-Akt蛋白表达。结果:随着常春藤皂苷元浓度(25、50、100μg/ml)的增加,可显著抑制DU145细胞的增殖,这种抑制作用具有时间和剂量依赖性;随着常春藤皂苷元浓度(25、50、100μg/ml)的增加,DU145细胞细胞凋亡率升高;与对照组相比,常春藤皂苷元能显著抑制DU145细胞迁移和侵袭能力;常春藤皂苷元不同浓度组处理DU145细胞48h后,随着常春藤皂苷元浓度升高,Bcl-2、PI3K、Akt mRNA和蛋白相对表达量下降,而Bax mRNA和蛋白相对表达量升高。结论:常春藤皂苷元可抑制前列腺癌细胞增殖、迁移及侵袭能力,促进细胞凋亡发生,且表现出一定的剂量-反应关系,其机制可能与抑制PI3K/Akt信号通路有关。     

解毒祛瘀方对MCF-7人乳腺癌细胞侵袭能力的影响及机制探讨

目的:研究解毒祛瘀方对人乳腺癌细胞侵袭能力的影响及机制。方法:以人乳腺癌MCF-7细胞为研究对象,预培养后分为空白组,解毒祛瘀方低、中、高剂量组(0.625,1.25,2.50 g·L-1),阳性药组(5-氟尿嘧啶,10 mg·L-1),分别用0.625,1.25,2.50 g·L-1的解毒祛瘀方及5-氟尿嘧啶处理人乳腺癌MCF-7细胞24 h后,MTT法检测细胞黏附率,Transwell小室实验检测细胞侵袭能力,RT-PCR法检测肿瘤细胞CD44,E-钙黏蛋白及N-钙黏蛋白基因的表达,Western blot法检测肿瘤细胞CD44,E-钙黏蛋白,N-钙黏蛋白,磷酸化细胞外信号调节激酶(p-ERK)及磷酸化蛋白激酶B(p-Akt)蛋白的表达。结果:与空白组比较,解毒祛瘀方低、中、高剂量组可明显抑制人乳腺癌MCF-7细胞的黏附和侵袭能力;且使CD44及E-钙黏蛋白基因及蛋白表达上调,N-钙黏蛋白表达下调,并可以抑制PI3K/Akt及MEK/ERK信号通路的激活(P0.05,P0.01)。结论:解毒祛瘀方可抑制人乳腺癌MCF-7细胞体外侵袭能力,其机制可能与抑制相关异质黏附蛋白的表达、抑制上皮间质转化及调节肿瘤相关信号通路有关。     

蟾毒灵调控PI3K/Akt 通路对结肠癌HT-29 细胞凋亡及周期的影响

目的：研究蟾毒灵诱导人结肠癌HT-29 细胞凋亡及周期阻滞的能力并对其分子机制进行探讨。方法：将人结肠癌HT-29 细胞分为对照组（野生型细胞）,蟾毒灵（Bufalin） 处理组（0.25,0.5,1 μmol/L） 和顺铂（DDP） 组（1 μg/mL）。通过流式细胞术（FCM） 检测蟾毒灵诱导人结肠癌HT-29 细胞凋亡及周期阻滞的作用;使用蛋白质免疫印迹法检测经蟾毒灵处理HT-29细胞24 h 后磷脂酰肌醇-3 激酶（PI3K）、磷酸化磷脂酰肌醇-3 激酶（p-PI3K）、蛋白激酶B（Akt） 和磷酸化蛋白激酶B（p-Akt）蛋白表达的变化。通过实时荧光定量PCR 法（RT-qPCR） 检测蟾毒灵对HT-29 细胞PI3K、Akt mRNA 表达的影响。结果：FCM结果显示,与对照组比较,蟾毒灵（0.25,0.5,1 μmol/L） 组能诱导结肠癌HT-29 细胞的凋亡（P＜0.05）,并呈剂量依赖性。与对照组比较,蟾毒灵（0.25,0.5,1 μmol/L） 组能够诱导结肠癌HT-29 细胞的周期阻滞于G2/M 期,并且蟾毒灵浓度越大,周期阻滞效果越显著（P＜0.05）。蛋白质印迹实验结果表明,与对照组比较,蟾毒灵能够下调PI3K、p-PI3K、Akt 和p-Akt 的表达水平,并呈一定的剂量依赖（P＜0.05）。RT-qPCR 结果显示,与对照组比较,蟾毒灵能够显著下调PI3K 和Akt mRNA 的表达。结论：蟾毒灵能够诱导结肠癌HT-29 细胞凋亡及周期阻滞,其机制可能与抑制PI3K/Akt 信号通路有关。     

葛根素调控PI3K/Akt信号对甲状腺癌细胞凋亡的影响及机制研究

目的:探讨葛根素抑制PI3K/Akt信号对甲状腺癌细胞凋亡的影响及机制。方法:12.5、25、50、100、200μmol/L的葛根素处理人甲状腺癌K1、FTC-133、8505C细胞48 h及200μmol/L葛根素处理细胞24、48、72 h,CCK8检测细胞活力。后续研究分为对照组、葛根素组、PI3K/Akt信号抑制剂LY294002组和葛根素+LY294002组,CCK8检测各组细胞活力;流式细胞仪检测细胞凋亡率及ROS含量;Western blotting检测p-Akt、PCNA、survivin蛋白表达。结果:葛根素可呈时间及浓度依赖性抑制人甲状腺癌K1、FTC-133、8505C细胞活力;葛根素和LY294002均可抑制K1细胞活力,诱导细胞凋亡,诱导ROS产生,下调p-Akt、PCNA、survivin蛋白表达,与对照组比较差异均有统计学意义(P0.05),两者联合对细胞活力抑制、诱导凋亡、ROS产生及p-Akt、PCNA、survivin表达下调作用更显著,且与葛根素组和LY294002组比较差异均有统计学意义(P0.05)。结论:葛根素可抑制甲状腺癌细胞活力和诱导凋亡,其机制可能与诱导ROS产生及抑制PI3K/Akt信号通路有关。     

蝙蝠葛碱通过调控PTEN/PI3K/Akt通路抑制人乳腺癌MCF-7细胞增殖与诱导凋亡

目的:探讨蝙蝠葛碱对人乳腺癌MCF-7细胞增殖与凋亡的影响及潜在机制。方法:培养MCF-7细胞至对数生长期,经终浓度为0、2.5、5、10μg/mL的蝙蝠葛碱处理,其中0μg/mL蝙蝠葛碱为对照组;分别采用MTT法、流式细胞术、Hoechst染色、实时定量PCR法、Western blot检测蝙蝠葛碱对MCF-7细胞增殖抑制率、凋亡率、凋亡指数、凋亡相关基因及PTEN/PI3K/Akt通路相关蛋白表达的影响。结果:与对照组比较,蝙蝠葛碱各浓度组细胞增殖抑制率、凋亡率及凋亡指数均显著升高(P0.01);与对照组比较,蝙蝠葛碱各浓度组Bcl-2 mRNA表达显著降低,Bax、Caspase-3 mRNA表达显著升高(P0.05或P0.01);与对照组比较,蝙蝠葛碱各剂量组PTEN蛋白表达显著升高,p-PI3K、p-Akt蛋白表达显著降低(P0.05或P0.01)。结论:蝙蝠葛碱具有抑制人乳腺癌MCF-7细胞增殖与诱导凋亡作用,其机制与调控PTEN/PI3K/Akt通路有关。     

蜂毒素靶向PTEN/PI3K/Akt信号通路调控非小细胞肺癌细胞的增殖、凋亡

目的蜂毒素能否调控非小细胞肺癌细胞的增殖、凋亡,及其可能的作用机制。方法体外培养非小细胞肺癌细胞A549,在其中加入不同浓度蜂毒素进行干预(0、1、2、4 mg/L),MTT检测细胞增殖抑制率,Annexin V FITC/PI联合流式细胞仪检测细胞凋亡,Western Blot 检测细胞内PTEN、p-PI3K和p-Akt蛋白表达,RT-PCR检测细胞内p53和CyclinD1基因表达。结果蜂毒素能有效抑制A549细胞的增殖,促进细胞的凋亡,上调细胞PTEN的蛋白表达量,下调p-PI3K和p-Akt蛋白表达量,各浓度间差异具有统计学意义(P<0.05);蜂毒素能诱导p53 mRNA、抑制CyclinD1 mRNA的表达,各浓度间差异具有统计学意义(P<0.05)。结论蜂毒素能通过调控PTEN/PI3K/Akt信号通路抑制A549细胞的增殖,促进其凋亡。     

人参皂苷Rg_3调节免疫检查点PD-L1抑制肺癌Lewis细胞增殖的作用及机制研究

目的研究人参皂苷Rg_3对小鼠非小细胞肺癌Lewis细胞(LLC)中免疫检查点程序性死亡分子1配体(PD-L1)的调节作用及其作用机制。方法通过MTT法及细胞长时程动态监测法观察人参皂苷Rg_3对LLC增殖的影响;20 ng/mLγ干扰素(IFN-γ)处理LLC制备PD-L1高表达体外模型,采用人参皂苷Rg_3进行干预,流式细胞术及免疫荧光检测人参皂苷Rg_3对PD-L1表达的影响;采用Western blotting法验证人参皂苷Rg_3对PI3K/蛋白激酶B(Akt)/哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(m TOR)通路相关蛋白表达的影响。结果人参皂苷Rg_3 16、32、64、128μmol/L能够显著抑制LLC增殖(P0.01)及减少IFN-γ诱导的PD-L1表达(P0.05);人参皂苷Rg_3 32、64μmol/L能够降低PI3K、m TOR蛋白的表达水平(P0.01);人参皂苷Rg_3 16、32、64μmol/L能够抑制Akt蛋白的磷酸化(P0.05)。结论人参皂苷Rg_3能够显著抑制LLC中PD-L1表达,通过抑制PI3K/Akt/m TOR通路,阻断PD-L1介导的肿瘤细胞免疫逃逸,增强T细胞的免疫应答作用,抑制LLC生长。     

α-常春藤皂苷对黑色素瘤B16细胞增殖和凋亡的影响及机制

目的:探讨α-常春藤皂苷(α-HN)对黑色素瘤B16细胞增殖和凋亡的影响及潜在机制。方法:常规培养B16细胞至对数生长期,给予不同浓度α-HN(50,100,200μmol·L~(-1))处理,设未经α-HN处理的B16细胞为空白组;采用噻唑蓝(MTT)比色法检测α-HN处理24,48,72 h后各组细胞的增殖情况,采用膜联蛋白V/碘化丙啶(Annexin V-FITC/PI)凋亡试剂盒检测α-HN处理48 h后的细胞凋亡率,半胱天冬蛋白酶(Caspase)活性检测试剂盒检测Caspase-3和Caspase-9的活性,蛋白免疫印迹法(Western blot)检测B淋巴细胞瘤-2(Bcl-2),Bcl-2相关X蛋白(Bax),磷酸化磷脂酰肌醇-3-羟激酶(p-PI3K),磷酸化蛋白激酶B(p-Akt)及磷酸化雷帕霉素靶蛋白(p-mTOR)的表达情况。结果:与空白组相比,经50,100,200μmol·L~(-1)α-HN处理24,48,72 h后,B16细胞增殖抑制率显著增加(P0.01),且随着观察时间的延长,增殖抑制率有逐渐增加趋势,该抑制作用呈时间依赖性和浓度依赖性;与空白组相比,α-HN处理48 h后B16细胞的凋亡率升高,Caspase-3和Caspase-9活性增强,且Bcl-2水平降低而Bax水平升高(P0.01);α-HN处理48 h后的p-PI3K,p-Akt,p-mTOR蛋白表达较空白组降低(P0.05,P0.01)。结论:α-HN具有抑制B16细胞增殖及诱导凋亡作用,其可能通过抑制PI3K/Akt/mTOR信号通路来发挥细胞毒及诱导凋亡作用,在黑色素瘤治疗中有较好的应用前景。     

人参皂苷Rg_5对胃癌BGC-823细胞增殖、凋亡及凋亡相关因子的影响

目的观察人参皂苷Rg_5对胃癌BGC-823细胞增殖、凋亡及凋亡相关因子Bcl-2相关X蛋白(BAX)、B细胞淋巴瘤-2(Bcl-2)表达的影响,探讨人参皂苷Rg_5抑制胃癌生长转移的可能作用机制。方法采用CCK-8法检测人参皂苷Rg_5对BGC-823细胞24、48 h的细胞增殖抑制作用,流式细胞术检测高、低浓度人参皂苷Rg_5对BGC-823细胞凋亡的影响,Western blot法检测凋亡相关因子Bax、Bcl-2蛋白的表达。结果与空白组比较,人参皂苷Rg_550、100、200μmol/L 24 h存活率降低(P0.05),人参皂苷Rg_512.5、25、50、100、200μmol/L 48 h存活率降低(P0.05);与空白组比较,低浓度人参皂苷Rg_5凋亡率升高(P0.05),高浓度人参皂苷Rg_5凋亡率升高(P0.05);与空白组比较,高低浓度人参皂苷Rg_5组Bax蛋白表达均升高(P0.05),高浓度人参皂苷Rg_5组Bcl-2蛋白表达降低(P0.05)。结论人参皂苷Rg_5可有效抑制胃癌BGC-823细胞的增殖,促进BGC-823细胞凋亡,且其促进BGC-823细胞凋亡的机制可能与其降低线粒体途径相关的细胞凋亡因子Bcl-2蛋白的表达,升高Bax蛋白的表达相关。     

莪术醇诱导人卵巢癌SKOV3细胞凋亡及对PI3K/Akt信号通路相关蛋白的影响

目的观察莪术醇对人卵巢癌SKOV3细胞的凋亡作用及对PI3激酶(PI3K)/丝氨酸/苏氨酸激酶(Akt信号通路相关蛋白的影响。方法采用MTT法检测不同浓度莪术醇以及临床常用抗肿瘤药物顺铂对人卵巢癌SKOV3细胞的生长抑制作用;流式细胞仪检测细胞凋亡率及对细胞周期的影响;Western blotting法检测莪术醇、顺铂及其两者联合诱导人卵巢癌SKOV3细胞凋亡过程中PI3K/Akt信号通路蛋白(PI3K、p-PI3K、Akt、pAkt)的表达。结果莪术醇对人卵巢癌SKOV3细胞具有生殖抑制作用,其生殖抑制作用呈剂量-时间正效应关系;莪术醇可以促进人卵巢癌SKOV3细胞的凋亡,细胞凋亡率随着莪术醇浓度增大而增强;不同质量浓度莪术醇处理SKOV3细胞48 h后,细胞周期分布发生明显改变,药物的作用将肿瘤细胞的生长阻止在G0/G1和S期;莪术醇、顺铂及其两者联合在诱导人卵巢癌SKOV3细胞凋亡时,下调了PI3K/Akt信号通路中p-PI3K、p-Akt蛋白的表达水平,且莪术醇和顺铂联合应用时具有协同效应,联合组p-PI3K、p-Akt蛋白表达下调最为明显。结论莪术醇可能通过抑制PI3K/Akt信号通路的激活来阻滞人卵巢癌SKOV3细胞周期,诱导细胞凋亡,进而阻止肿瘤细胞的生长或诱导其分化。     

盐酸石蒜碱对脂肪酸诱导H9c2细胞炎性损伤的保护作用及其机制

目的：研究盐酸石蒜碱(lycorine hydrochloride)对脂肪酸诱导H9c2细胞炎性损伤的保护作用及机制。方法：脂肪酸(100μmol/L)诱导H9c2细胞炎性损伤,采用CCK-8法筛选盐酸石蒜碱最佳给药浓度;蛋白免疫印迹法检测TLR4、p-PI3K、p-Akt、p-mTOR蛋白表达;荧光显微镜及流式细胞术检测H9c2细胞内活性氧(ROS)产生水平。结果：CCK-8筛选出盐酸石蒜碱的最佳给药浓度为5、10μmol/L。与正常对照组比较,模型组TLR4蛋白表达及p-PI3K/PI3K、ROS水平显著升高,p-Akt/Akt显著降低(P<0.05或P<0.01)。与模型组比较,盐酸石蒜碱组TLR4蛋白表达及p-PI3K/PI3K、p-mTOR/mTOR、ROS水平显著降低,p-Akt/Akt水平显著升高(P<0.05或P<0.01)。结论：盐酸石蒜碱对脂肪酸诱导H9c2细胞炎性损伤具有保护作用,其机制可能与抑制TLR4、p-PI3K、p-mTOR蛋白表达,促进Akt蛋白磷酸化,抑制炎性损伤H9c2细胞内ROS的产生有关。     

人参皂苷CK诱导人肝癌HepG-2细胞凋亡的研究

目的探讨人参皂苷CK对人肝癌HepG-2细胞凋亡的作用及机制。方法采用MTT法测定不同浓度(30,60,90μmol/L)人参皂苷CK对人肝癌HepG-2细胞的增殖抑制作用;通过HE染色、AO/EB染色观察人参皂苷CK诱导人肝癌HepG-2细胞凋亡的形态学变化;WesternBlotting检测凋亡相关蛋白P53、Bax和Bcl-2的表达情况。结果人参皂苷CK可明显抑制人肝癌HepG-2细胞的增殖,且呈剂量依赖性和时间依赖性。随着人参皂苷CK给药浓度的增加,出现典型凋亡形态特征的细胞逐渐增多,抗凋亡蛋白Bcl-2和P53表达量逐渐下降,而促凋亡蛋白Bax的表达逐渐升高,Bcl-2/Bax比例明显降低。结论人参皂苷CK可诱导人肝癌HepG-2细胞凋亡,其作用机制可能与下调P53蛋白表达和降低Bcl-2/Bax比例有关。     

白藜芦醇诱导K562/AO_2凋亡与mdr1基因表达的关系

目的研究白藜芦醇(Res)体外对K562/AO2增殖及凋亡的影响,并探讨与耐药基因mdr1表达的关系。方法用噻唑蓝比色法(MTT)检测对照组、不同剂量Res组(25~200μmol/L)作用48 h后K562/AO2增殖率,用流式细胞仪检测各组凋亡率,并用逆转录-聚合链反应(RT-PCR)法检测各组mdr1 mRNA的表达。结果Res体外对人K562/AO2细胞有显著增殖抑制及凋亡诱导作用,Res组(25μmol/L、50μmol/L、100μmol/L、200μmol/L)作用48 h后其凋亡率均显著高于对照组(P<0.05);mdr1 mRNA表达相对强度均显著低于对照组(P<0.05),且随浓度增加而表达减弱。结论Res体外能诱导K562/AO2细胞的凋亡,且呈一定的浓度依赖性,其作用机制可能与逆转mdr1 mRNA基因表达有关。     

红景天苷联合顺铂对人胃癌HGC-27细胞生物学功能的抑制研究

目的：探讨红景天苷联合顺铂通过磷脂酰肌醇3激酶(phosphatidylinositol 3-kinase, PI3K)/蛋白激酶B(protein kinase B,Akt)/雷帕霉素靶蛋白(mammalian target of rapamycin, mTOR)信号通路对人胃癌HGC-27细胞的生物学功能的抑制作用及其机制。方法：选取人胃癌细胞株HGC-27,随机分为空白组、红景天苷组(40μmol/L红景天苷)、顺铂组(10μmol/L顺铂)、联合组(40μmol/L红景天苷+10μmol/L顺铂)。采用四甲基噻唑蓝(MTT)实验检测细胞活力,采用流式细胞仪检测细胞凋亡率,采用划痕实验检测细胞迁移率,采用Transwell小室实验检测细胞侵袭能力,采用实时聚合酶链反应检测PI3K、Akt、mTOR mRNA表达情况,采用蛋白免疫印迹法检测PI3K、Akt、磷酸化Akt(phospho-Akt, p-Akt)、mTOR、磷酸化mTOR(phospho-mTOR,p-mTOR)、凋亡蛋白B细胞淋巴瘤因子-2(B-celllymphoma-2, Bcl-2)、Bcl-2相关X蛋白(Bc...     

血根碱通过调控PI3K/Akt信号通路诱导胰腺癌细胞凋亡的机制

目的:探讨血根碱对胰腺癌细胞凋亡的影响及其信号通路调控机制。方法:不同浓度血根碱(2,4,6μmol·L~(-1))处理小鼠胰腺癌Panc02细胞不同时间(24,48,72 h)后,采用噻唑蓝(MTT)比色法检测血根碱对细胞生长抑制作用的影响;采用磷脂结合蛋白V/碘化丙啶(Annexin V/PI)双染色试剂盒通过流式细胞仪检测血根碱对Panc02细胞凋亡影响;采用花青染料(JC-1)探针试剂盒荧光染料分析检测线粒体膜电位的变化;采用蛋白免疫印迹法(Western blot)检测B淋巴细胞瘤-2(Bcl-2),Bcl-2相关X蛋白(Bax),总蛋白激酶B(Akt),磷酸化蛋白激酶B(p-Akt),总磷脂酰肌醇3激酶(PI3K),磷酸化磷脂酰肌醇3激酶(p-PI3K)的表达情况。结果:与空白组比较,不同浓度的血根碱作用同一时间后,随着药物浓度的增加细胞生长抑制率逐渐升高(P0.05),与空白组比较,同一浓度作用不同时间后,随着时间的增加细胞生长抑制率逐渐升高(P0.05);与空白组比较,血根碱2μmol·L~(-1)组的细胞凋亡率无明显升高,与空白组比较,血根碱4,6μmol·L~(-1)组的细胞凋亡率均明显升高(P0.05);与空白组比较,血根碱2μmol·L~(-1)组时红绿荧光无变化,血根碱4,6μmol·L~(-1)组红色荧光减弱,绿色荧光增强,Panc02细胞线粒体膜电位降低;与空白组比较,血根碱2μmol·L~(-1)组处理的Bax,Bcl-2,p-PI3K,p-Akt,Akt和PI3K蛋白表达均无变化,血根碱6μmol·L~(-1)组Bax蛋白表达增高,Bcl-2及PI3K/Akt信号通路中关键蛋白p-PI3K,p-Akt表达降低(P0.05)。结论:血根碱通过抑制PI3K/Akt信号通路有效地诱导小鼠胰腺癌Panc02细胞经线粒体凋亡途径发生凋亡。