全反式维甲酸抑制大鼠骨髓间充质干细胞成脂分化信号通路中Fosl1直接调控PPARγ2

目的:研究激活蛋白1(AP-1)在全反式维甲酸(ATRA)抑制大鼠骨髓间充质干细胞(BMSCs)成脂分化信号通路中的调控机制。方法:采用SD大鼠原代BMSCs,体外分离、培养和成脂诱导。油红O染色鉴定细胞脂滴形成情况。应用实时荧光定量PCR(RT-qPCR)检测脂肪细胞形成相关蛋白脂肪酸结合蛋白(FABP)、脂蛋白脂肪酶(LPL)、脂肪酸转运蛋白(CD36)、脂滴包被蛋白(perilipin)、过氧化物酶体增殖物激活受体γ2(PPARγ2)以及AP-1家族各成员(Fosl1、Fosl2、c-Fos、c-Jun、Jun B、Jun D和Fos B)的mRNA表达水平。Western blot检测相关蛋白的表达水平。染色质免疫共沉淀(Ch IP)检测相关蛋白(RARγ和Fosl1)与PPARγ2基因是否存在相互作用。结果:油红O染色显示ATRA处理组中细胞脂滴数量明显减少。BMSCs成脂诱导12 d后,与对照组相比,1μmol/L ATRA处理组FABP、LPL、CD36、perilipin和PPARγ2的mRNA表达均显著降低。RT-qPCR检测AP-1家族各转录因子表达结果显示Fosl1在ATRA处理组成脂诱导第2天、第6天和第10天表达均显著升高。Westren blot结果表明ATRA处理组Fosl1蛋白表达水平显著升高,而PPARγ2蛋白表达降低。Ch IP-qPCR实验发现Fosl1蛋白可结合在PPARγ2基因启动子区域,而RARγ蛋白未直接结合在PPARγ2基因启动子区域。结论:ATRA可抑制BMSCs成脂分化及脂质代谢相关蛋白的表达,可能与其通过上调Fosl1直接结合PPARγ2基因启动子区域、下调PPARγ2表达有关。     

姜黄素对猪脂肪间充质干细胞成脂分化及Krüppel样因子2表达的影响

目的探讨姜黄素对猪脂肪间充质干细胞(AMSCs)成脂分化的影响,及姜黄素调控成脂分化的机制。方法用不同浓度姜黄素处理猪AMSCs,用MTT比色法检测姜黄素对猪AMSCs增殖的影响,用油红O染色提取法检测对成脂分化的程度,用实时定量聚合酶链反应(Real-time PCR)检测对Krüppel样因子(KLF2)和过氧化物酶增殖物激活受体γ(PPARγ)2 mRNA表达的影响。结果当姜黄素浓度为1、5、10μmol/L用于猪AMSCs时对,AMSCs增殖无明显影响,但高于15μmol/L时,则具有显著的抑制作用(P0.05);当姜黄素用于猪AMSCs的成脂诱导分化时,1~30μmol/L的浓度即能显著抑制成脂分化(P0.05),其中25μmol/L浓度获得68.19%的高抑制率;当25μmol/L姜黄素用于检测KLF2和PPARγ2 mRNA的表达,诱导分化2、8和16d的KLF2 mRNA的表达上调率分别达到48.37%、20.56%和9.64%,而PPARγ2 mRNA的表达下调率分别达到16.01%、35.93%和27.27%。结论姜黄素具有抑制猪AMSCs增殖和成脂分化作用,该抑制作用与姜黄素促进KLF2 mRNA的表达和抑制PPARγ2 mRNA的表达相关。     

低浓度H_2O_2预处理增强小鼠BMSCs抗氧化应激损伤能力

目的探讨PI3K/Akt/m TOR信号通路介导的低浓度过氧化氢(H_2O_2)预处理增强骨髓间充质干细胞(BMSCs)抗氧化应激损伤的作用及机制。方法通过差速贴壁法分离培养小鼠BMSCs。BMSCs经或不经低浓度(50μmol/L)H_2O_2预处理12 h,再暴露于不同高浓度H_2O_2(200、250、300和500μmol/L)刺激24 h后,流式细胞术检测BMSCs凋亡;低浓度H_2O_2预处理12 h再暴露于300μmol/L H_2O_224 h后,Western blot检测凋亡相关蛋白Bcl-2、Bax、caspase-3和cleaved-caspase-3的表达以及对PI3K/Akt/m TOR信号通路的影响。结果 H_2O_2呈浓度依赖性诱导BMSCs凋亡,50μmol/L H_2O_2预处理可降低200~500μmol/L诱导的BMSCs凋亡率,以及能降低300μmol/L诱导的促凋亡蛋白Bax和cleaved-caspase-3的上调和抗凋亡蛋白Bcl-2及磷酸化Akt和m TOR蛋白的表达的下调(P0.05,P0.01);PI3K抑制剂LY294002可明显地阻断H_2O_2预处理引起的上述变化。结论低浓度H_2O_2预处理通过活化PI3K/Akt/m TOR信号通路增强骨髓间充质干细胞的抗氧化应激损伤能力。     

Ghrelin抑制小鼠骨髓基质细胞成脂分化

目的观察胃促生长素ghrelin对原代培养小鼠骨髓基质细胞成脂分化的影响。方法体外培养小鼠骨髓基质细胞,MDI诱导剂诱导细胞成脂分化,显微镜观察细胞形态变化;油红O染色法检测细胞甘油三酯含量,化学比色法测定碱性磷酸酶(ALP)活性;MTT法检测细胞克隆化扩增活动,RT-PCR检测过氧化物酶体增殖物激活受体γ2(PPARγ2)和丝氨酸蛋白酶脂肪因子adipsinmRNA表达,Westernblot检测PPARγ2蛋白表达。结果Ghrelin能够剂量依赖性(10-9、10-8、10-7mol/L)地抑制骨髓基质细胞成脂分化,升高ALP活性(P<0·05或P<0·01)。Gh-relin能够降低PPARγ2和adipsinmRNA以及PPARγ2蛋白表达(P<0·05)。Ghrelin对细胞成脂分化早期的克隆化扩增没有显著影响。结论Ghrelin能够显著抑制体外培养小鼠骨髓基质细胞成脂分化,该作用可能与抑制PPARγ2表达有关。     

姜黄素对猪骨髓间充质干细胞增殖和成脂分化的影响

目的 探讨姜黄素(curcumin)对猪骨髓间充质干细胞(BMSCs)增殖和成脂分化的影响及机制。方法 用含不同浓度姜黄素的细胞培养液和诱导分化液,培养和诱导分化猪BMSCs,用MTT比色法检测对BMSCs增殖的影响,用形态学和油红O染色提取法检测对成脂分化的影响,用实时荧光定量PCR（Real-time PCR）检测对成脂分化相关基因过氧化物酶体增殖物激活受体γ（PPARγ2）和脂蛋白脂肪酶（LPL） mRNA表达的影响。 结果 当姜黄素用于猪BMSCs的培养,1μmol/L浓度在培养第3天、第5天和10μmol/L浓度在培养第5天开始能够显著促进细胞增殖（P＜0.05）,但高于15μmol/L则具有显著的抑制作用（P＜0.05）;当姜黄素用于猪BMSCs的成脂诱导分化,所用不同浓度的姜黄素都能显著抑制成脂分化（P＜0.05）,用0.5μmol/L获得28.3%的抑制率,而用20μmol/L获得71.24%的高抑制率;当用20μmol/L姜黄素处理和分别诱导分化5、10和15d,PPARγ2 mRNA表达的抑制率分别达到19.11%、49.52%和76.76%,LPL mRNA表达的抑制率分别达到37.58%、49.32%和74.70%。 结论 适当浓度姜黄素具有促进猪BMSCs增殖和抑制猪BMSCs向脂肪细胞分化的作用,对脂肪细胞的分化发挥了重要调控作用。     

鞣花酸通过Wnt/β-catenin信号途径调节成骨代谢

目的探索鞣花酸是否能够通过Wnt/β-catenin信号通路调节BMSCs成骨代谢。方法 CCK-8实验观察鞣花酸对BMSCs增殖的影响。碱性磷酸酶染色和油红O染色检测鞣花酸对BMSCs成骨分化和成脂分化的调节作用。通过Western blot和real time PCR分析鞣花酸对BMSCs中RUNX2、ALP、Col1、PPARγ、Adipoq和β-catenin的调节作用。结果与对照组相比,鞣花酸可以在一定程度上抑制BMSCs的增殖;通过促进BMSCs中RUNX2、ALP和Col1的表达,促进BMSCs的成骨分化;通过抑制BMSCs中PPARγ和Adipoq的表达,抑制BMSCs的成脂分化。鞣花酸可以上调BMSCs中的β-catenin,发挥促进Wnt通路的作用。结论鞣花酸能够通过激活Wnt/β-catenin信号通路促进成骨代谢。     

低浓度H_2O_2预处理增强骨髓间充质干细胞活力

目的探讨过氧化氢(H_2O_2)预处理增强骨髓间充质干细胞(BMSCs)存活和抗凋亡能力的作用及机制。方法分离、培养、鉴定小鼠BMSCs。观察不同低浓度H_2O_2处理BMSCs 48 h后细胞的增殖,以及SDF-1及其受体CXCR4、CXCR7的表达;其次,观察经50μmol/L H_2O_2预处理BMSCs 12 h后,再经500μmol/L H_2O_2作用,或同时加入CXCR7抗体作用48 h,用Hoechst33342染核观察BMSCs凋亡率,Western blot检测Bcl-2、Bax、CXCR4、CXCR7和信号通路Akt/m TOR关键蛋白的表达。结果 25、50μmol/L H_2O_2能有效促进BMSCs增殖;50、100μmol/L H_2O_2能显著上调SDF-1、CXCR4、CXCR7表达;50μmol/L H_2O_2预处理干细胞能显著增强迁移能力,而CXCR7抗体能阻断此效应;50μmol/L H_2O_2预处理干细胞可显著抑制500μmol/L H_2O_2引起的损伤,凋亡细胞核由30.97%±3.71%降至16.23%±2.51%(P0.01),但仍然显著高于对照组(4.67%±2.37%)(P0.01);同样,预处理能显著下调Bax、上调Bcl-2表达(P0.05),上调Akt/m TOR通路关键蛋白磷酸化,CXCR7抗体则阻断此效应。结论H_2O_2预处理通过CXCR7受体活化Akt/m TOR信号通路增强干细胞存活和抗凋亡能力。     

DMB促进骨髓间充质干细胞向成骨细胞分化并缓解小鼠卵巢切除导致的骨质疏松

目的探讨DMB能否促进骨髓间充质干细胞(BMSCs)向成骨细胞分化,促进骨形成,缓解由于小鼠去除卵巢引起的骨质疏松。方法体外培养BMSCs,将细胞分为对照组、成脂诱导组、成脂诱导+DMB(10-7、10-8和10-9mol/L)、成骨诱导组和成骨诱导+DMB(10-7、10-8和10-9mol/L)。分别通过油红O染色和茜素红染色鉴定BMSCs的多向分化能力。将8周C57BL/6雌鼠分为对照组、卵巢去除(OVX)组和OVX+DMB(1 mg/kg·d)组,共3组,每组10只。DMB连续给药2个月,观察骨量和骨小梁的形成。结果BMSCs纯度达91.2%,DMB以浓度和时间依赖的方式促进BMSCs增殖(P0.05)。DMB促进BMSCs向成骨细胞分化,但抑制向脂肪细胞分化。此外DMB可以显著地提高骨体积/组织体积(BV/TV)、骨小梁数量和厚度(P0.05),促进骨形成。结论 DMB能够促进BMSCs向成骨细胞分化,抑制向脂肪细胞分化,改善由于雌激素缺乏导致的骨质疏松,促进骨形成。     

果糖通过激活Akt信号通路促进3T3-L1细胞的脂肪分化

目的:研究果糖(fructose)对3T3-L1前脂肪细胞分化过程的影响及其作用机制。方法:对体外培养的3T3-L1前脂肪细胞给予鸡尾酒法诱导脂肪分化,并使用1 g/L的果糖进行诱导干预。油红O染色法定量分析细胞内的脂质含量;RT-qPCR法检测脂肪分化过程中脂滴包被蛋白2(Plin2)、CCAAT/增强子结合蛋白(C/EBP)α和C/EBPβ的mRNA表达水平;Western blot检测脂肪分化标志蛋白过氧化物酶体增殖物激活受体γ(PPARγ)和脂肪细胞蛋白2(αP2)的蛋白表达水平。结果:与单纯用分化培养基(DM)的对照组相比,实验(DM+fructose)组的脂肪细胞体积及胞质内脂滴积累量显著增加,脂肪分化标志蛋白PPARγ和aP2的表达水平显著上调(P0.01),Plin2、C/EBPα和C/EBPβ的mRNA表达水平亦显著上调(P0.05)。此外,加入果糖之后Akt信号通路中的关键分子Akt的磷酸化水平显著增加(P0.01),加入Akt特异性阻断剂之后,PPARγ和aP2的表达水平显著下调。结论:果糖能够促进3T3-L1细胞的脂肪分化,可能是通过激活Akt信号通路实现的。     

油酸联合胰岛素和地塞米松诱导hADSCs成脂

目的 利用油酸联合胰岛素和地塞米松诱导人脂肪间充质干细胞(human adipose derived stromal cells,hADSCs)成脂,探索一种在人体内脂肪细胞生成的诱导条件,更接近人的生物学状态,对疾病预防、治疗具有指导意义.方法 从人大腿部吸脂术所抽取的脂肪组织,分离培养hADSCs,并进行鉴定:免疫荧光染色法检测细胞表面分子的表达;进行成脂、成神经诱导.采用25、50和80μmol/L三种浓度的油酸联合胰岛素和地塞米松诱导hADSCs的成脂,油红O染色观察细胞成脂情况.结果 分离原代细胞,镜下观察呈长梭形,漩涡状排列,表面标记物CD49d和CD105为阳性表达.细胞成脂诱导后,胞浆出现大量脂滴,油红O染为红色;经神经诱导后,细胞伸出细长突起,突起之间有网状连接.油酸联合胰岛素和地塞米松可成功诱导hADSCs成脂:可见细胞内脂滴形成,油红O染为红色,三种浓度以80μmol/L浓度组油红O阳性细胞率最高.结论 成功从人大腿皮下脂肪分离、培养hADSCs,并使用80μmol/L油酸联合胰岛素和地塞米松对其诱导12d,可以获得满意的成脂效果.     

去泛素化酶USP14调控H_2O_2诱导的H9c2细胞氧化应激损伤

目的:观察抑制泛素特异性蛋白酶14(ubiquitin-specific protease 14,USP14)的活性对H_2O_2诱导的H9c2细胞氧化应激损伤的影响。方法:体外培养H9c2心肌细胞,用H_2O_2(25μmol/L)处理2 h,建立心肌细胞氧化应激损伤模型。将细胞分为对照(control,CON)组、模型组(H_2O_2组)、USP14抑制剂IU1处理组(IU1组)和IU1处理后建模组(IU1+H_2O_2组)。MTS法检测H9c2心肌细胞活力;流式细胞术检测细胞内活性氧簇(ROS)的产生和细胞存活率;Western blot法检测丝裂原活化蛋白激酶家族相关蛋白的表达变化。结果:与CON组相比,H_2O_2组细胞活力、细胞存活率显著降低,细胞内ROS含量、Bax/Bcl-2、P53、p-ERK1/2、p-JNK和p-P38的蛋白水平显著增加(P0.05);与H_2O_2组比较,IU1+H_2O_2组细胞活力、细胞存活率显著增加,细胞内ROS含量、Bax/Bcl-2、P53、p-ERK1/2、p-JNK和p-P38蛋白水平显著降低(P0.05)。结论:抑制USP14活性可以减轻氧化应激条件下H9c2心肌细胞的损伤,其机制可能与抑制丝裂原活化蛋白激酶信号活化和下调凋亡相关蛋白有关。     

四硫代钼酸铵作为新型硫化氢供体的鉴定及其对皮肤细胞的保护作用

 目的: 本研究旨在检测金属络合物四硫代钼酸铵(ATTM)的硫化氢(H₂S)释放能力并进一步观察其减轻氧化应激诱导的皮肤细胞损伤的作用。方法:反应瓶法检测ATTM在细胞培养基中释放的H₂S,二氯二氢荧光素二乙酸酯或罗丹明123染色结合荧光显微镜照相术分别检测细胞内活性氧簇(ROS)的含量和线粒体膜电位(ΔΨ_m),用试剂盒检测细胞存活率和乳酸脱氢酶(LDH)的释放。结果:与H₂S供体GYY4137类似,ATTM在细胞培养基中可剂量依赖性地释放H₂S。在25~400 μmol/L 的浓度范围内,ATTM处理对人皮肤细胞(HaCaT细胞)的存活率无明显影响(P>0.05)。紫外线照射或外源性给予ROS供体(过氧化氢,H₂O₂)处理均可增加HaCaT细胞内ROS的含量。400 μmol/L H₂O₂处理可明显降低HaCaT细胞的存活率(P<0.01),而在H₂O₂处理前给予ATTM预处理,细胞存活率明显提高,其中在100和200 μmol/L浓度时ATTM具有最好的细胞保护作用(P<0.01)。400 μmol/L H₂O₂处理还可损害细胞的ΔΨ_m和细胞膜并使LDH释放增加(P<0.01)。而在细胞遭受损伤前给予200 μmol/L ATTM预处理可明显改善ΔΨ_m的水平(P<0.05)并抑制LDH从细胞内释放(P<0.01)。结论:ATTM具有释放H₂S的能力并可保护人皮肤细胞对抗氧化应激诱导的损伤效应。     

Semaphorin 3A过表达对H_2O_2诱导的人脐静脉内皮细胞损伤的影响

目的:探讨semaphorin 3A(Sema 3A)对过氧化氢(H_2O_2)诱导的人脐静脉内皮细胞(HUVECs)损伤的影响。方法:构建Sema 3A过表达载体,以脂质体转染法转染HUVECs,过表达效果以qPCR和Western blot法验证;待测细胞以200μmol/L H_2O_2处理4 h;qPCR法检测炎性细胞因子水平;乳酸脱氢酶(LDH)、超氧化物歧化酶(SOD)和丙二醛(MDA)水平以相应比色法检测;细胞活力以MTT法检测;流式细胞术检测细胞凋亡,凋亡相关蛋白cleaved caspase-3及Bcl-2水平以Western blot法检测。结果:Sema 3A过表达能显著增加H_2O_2诱导的HUVECs凋亡、炎性细胞因子分泌以及LDH和MDA含量,同时显著抑制SOD活性和细胞活力;Sema 3A对未经H_2O_2处理的HUVECs没有损伤效应,即其对HUVECs的损伤具有H_2O_2依赖性。结论:Sema 3A能显著加重H_2O_2诱导的HUVECs损伤,在氧化应激所致的内皮细胞损伤过程中发挥促进作用。     

上调GDF-15 表达对H2O2 诱导的H9C2 心肌细胞生物学特性及PI3K/ AKT 信号通路的影响

目的：探讨上调生长分化因子-15（GDF-15）的表达对H₂O₂诱导的H9C2心肌细胞增殖、凋亡及PI3K/AKT信号通路的影响。方法：CCK8法检测不同浓度的H₂O₂处理H9C2心肌细胞后的细胞增殖情况;H9C2心肌细胞分为Control组、NC组、H₂O₂组、GDF-15+H₂O₂组,各组细胞处理24 h后收集细胞,RT-PCR及Western blot分别检测各组细胞中GDF-15的mRNA及蛋白表达;CCK8法及流式细胞术分别检测细胞的增殖和凋亡情况;2′,7′-二氯二氢荧光素黄二乙酸酯（DCFH-DA）探针检测细胞活性氧簇（ROS）水平;Western blot检测Ki67、B细胞淋巴瘤/白血病-2（Bcl-2）、Bcl-2相关X蛋白(Bax)、PI3K、p-AKT蛋白表达。10 μmol/L的PI3K/AKT信号通路抑制剂LY294002处理H9C2心肌细胞,通过CCK8法及流式细胞术分别检测GDF-15+H₂O₂组及PI3K/AKT信号通路抑制剂组细胞活力及凋亡率,Western blot检测Ki67、Bcl-2、Bax、PI3K、p-AKT蛋白表达。结果：不同浓度H₂O₂处理H9C2心肌细胞后,细胞活力均受到抑制,且有浓度依赖性（P<0.05）,由于200 μmol/L的H₂O₂处理H9C2心肌细胞后可抑制将近一半的细胞增殖,选择200 μmol/L的H₂O2作为研究对象;与Control组比较,H2O2组GDF-15的mRNA及蛋白表达均显著升高,细胞增殖显著降低,凋亡率增加,ROS水平升高,Ki67、Bcl-2、PI3K、p-AKT蛋白表达降低,Bax蛋白表达升高（P<0.05）;与H₂O₂组比较,GDF-15+H₂O₂组细胞GDF-15的mRNA及蛋白表达均显著升高,细胞增殖显著增加,凋亡率降低,ROS水平降低,Ki67、Bcl-2、PI3K、p-AKT蛋白表达升高,Bax蛋白表达降低（P<0.05）。PI3K/AKT信号抑制剂组细胞活力及Bcl-2、PI3K和p-AKT的蛋白表达均显著低于GDF-15+H₂O₂组,细胞凋亡率及Bax蛋白表达显著高于GDF-15+H₂O₂组（P<0.05）。结论：上调GDF-15表达可促进H₂O₂诱导的H9C2心肌细胞增殖,降低细胞凋亡,其机制可能与调节细胞中ROS水平,Ki67、Bcl-2、Bax表达及PI3K/AKT信号通路有关。     

过表达IGF-1对脐带间充质干细胞氧化损伤的抑制作用

 目的: 分析过表达胰岛素样生长因子1(IGF-1)对脐带间充质干细胞(UC-MSCs)氧化损伤的抑制作用,开发UC-MSCs新的应用模式。方法: 通过酶消化法,从脐带组织中分离UC-MSCs,并采用流式细胞术对细胞的表面特异标志物进行鉴定,通过逆转录病毒感染体系,构建过表达IGF-1的UC-MSCs(UC-MSCs-IGF-1),并进一步通过实时荧光定量PCR和流式细胞术对UC-MSCs-IGF-1的IGF-1表达水平进行评价,同时分析UC-MSCs-IGF-1的表面标志物及成骨成脂分化能力;用不同浓度的H₂O₂(0 μmol/L、10 μmol/L、50 μmol/L和100 μmol/L)处理细胞,分析UC-MSCs-IGF-1在增殖活力维持、抗氧化损伤和抗凋亡方面的优势。结果: UC-MSCs表面标志物CD29、CD90和CD105的表达均呈阳性,而CD34的表达为阴性,符合正常间充质干细胞的表型特征;实时荧光定量PCR和流式细胞术结果表明,应用逆转录病毒感染体系构建的UC-MSCs-IGF-1在IGF-1表达方面远高于正常UC-MSCs,同时干细胞表型与UC-MSCs一致,且具备正常的成脂成骨分化能力;在H₂O₂的氧化损伤作用下,与UC-MSCs相比,UC-MSCs-IGF-1具有较强的增殖活力和抗氧化、抗凋亡功能,同时细胞中的SOD活性略高于UC-MSCs。结论: 过表达IGF-1对UC-MSCs的氧化损伤及氧化引起的凋亡均具有一定的防护作用,与正常UC-MSCs相比,UC-MSCs-IGF-1可能在临床应用方面具有一定的优势。     

红细胞生成素抑制活性氧诱导的红细胞衰亡

目的:观察红细胞生成素(erythropoietin,EPO)对过氧化氢(H_2O_2)刺激后红细胞衰亡(eryptosis)和红细胞中活性氧簇(reactive oxygen species,ROS)生成的影响,并探讨其可能机制。方法:将1%健康人红细胞悬液在以下3组不同的体外培养液中孵育:对照组(C组,培养基为PBS液)、H_2O_2组(H组,培养基为H_2O_2终浓度100μmol/L的PBS液)和EPO组(E组,培养基为H_2O_2终浓度100μmol/L、EPO终浓度2×10~4U/L的PBS液)。分别在孵育24 h和60 h时,留取红细胞以备检测。使用流式细胞术检测红细胞的衰亡率、红细胞内ROS和红细胞内钙离子浓度(_i~([Ca2+])),观察各检测指标的变化并分析其相关性。结果:红细胞衰亡率在C组随孵育时间延长而增加,在相同观察时点,H组较C组明显增加(P0.01),E组较H组明显降低(P0.01)。H组红细胞的ROS生成较C组明显增多,_i~([Ca2+])较C组明显升高(P0.01);E组红细胞的ROS生成较H组明显减少,_i~([Ca2+])较H组明显降低(P0.05或P0.01)。结论:H_2O_2诱导健康红细胞加速衰亡,而EPO可以抑制H_2O_2诱导的红细胞衰亡,其机制可能与抗氧化及_i~([Ca2+])的改变有关。     

氧化应激诱导自噬对骨髓间充质干细胞增殖与凋亡的影响

 目的: 观察氧化应激是否可诱导骨髓间充质干细胞(MSCs)自噬,探索在氧化应激微环境中自噬对MSCs增殖和凋亡的影响及可能机制,以期提高移植MSCs治疗糖尿病勃起功能障碍(DMED)的效果。方法: 以过氧化氢(H₂O₂)模拟氧化应激微环境。台盼兰染色细胞计数法及MTT分析检测不同浓度(0 、50、100、200、400 μmol/L)H₂O₂对MSCs增殖的影响。联合MTT、流式细胞术、Western blot及透射电镜等方法研究H₂O₂对MSCs凋亡及自噬的影响。结果: H₂O₂呈浓度依耐性抑制MSCs增殖,IC₅₀=(384.5751±16.8895)μmol/L;Western blot分析及透射电镜提示H₂O₂在诱导MSCs凋亡的同时,诱导MSCs产生自噬;MTT分析及流式细胞术提示H₂O₂组细胞增殖受抑、凋亡率上升,阻断自噬后细胞增殖进一步减弱,凋亡率进一步上升;Western blot结果提示H₂O₂诱导cleaved caspase-3增多及多聚ADP-核糖聚合酶1(PARP1)裂解增强;阻断凋亡后,cleaved caspase-3降低及PARP1裂解减弱;阻断自噬后,cleaved caspase-3进一步增多及PARP1裂解进一步增强。结论: 氧化应激对MSCs存活具有双重作用,在诱导MSCs凋亡的同时还诱导保护性自噬,阻断MSCs自噬可以增加MSCs的凋亡,因此进一步增强细胞保护性自噬将有望提高移植MSCs在糖尿病高氧化应激微环境中的存活率,从而改善移植MSCs对糖尿病勃起功能障碍的疗效。     

蜕皮甾酮减轻心肌细胞氧化应激损伤

目的:研究蜕皮甾酮对心肌细胞氧化损伤的作用。方法:H9c2细胞常规培养,经过氧化氢(H_2O_2)处理后建立损伤模型,分为:对照组,蜕皮甾酮高剂量(2μmol/L)、中剂量(1.5μmol/L)和低剂量(1μmol/L)组,H_2O_2组。CCK-8法检测蜕皮甾酮对H9c2细胞活力的影响;流式细胞术检测H9c2细胞的凋亡率;用分光光度法检测乳酸脱氢酶、肌酸激酶同工酶的活性以及丙二醛、超氧化物歧化酶含量;激光共聚焦联合流式细胞术观察细胞内活性氧簇(ROS)的产生和线粒体膜电位的变化;用Western blot法检测H9c2细胞内Bax、Bcl-2和cleaved caspase-3的蛋白水平。结果:在所选浓度范围内,蜕皮甾酮对H9c2细胞的活力无明显影响。与对照组比较,H_2O_2组H9c2细胞的LDH、CK-MB、ROS、MDA及凋亡率明显增加,通过不同浓度的蜕皮甾酮作用后,H9c2细胞的LDH、CK-MB、ROS、MDA及凋亡率显著下降,与H_2O_2组比较差异有统计学显著性。与对照组比较,H_2O_2组H9c2细胞的SOD和线粒体膜电位明显下降;与H_2O_2组比较,蜕皮甾酮高、中、低剂量组H9c2细胞的SOD和线粒体膜电位明显提高。对比对照组,H_2O_2组中H9c2细胞Bax和cleaved caspase-3的蛋白水平明显升高,Bcl-2的表达水平明显下降;与H_2O_2组比较,蜕皮甾酮高、中、低剂量组中H9c2心肌细胞表达Bcl-2蛋白上升,Bax和cleaved caspase-3的蛋白水平下降。结论:蜕皮甾酮对氧化应激条件下的H9c2细胞具有保护功能,其机制可能和减少氧化应激产物,增强抗氧化酶功能,调节线粒体功能和抑制细胞凋亡相关。