重组人CEA痘苗病毒实验动物的组织结构观察及免疫组化检测

目的：检测重组人ＣＥＡ痘苗病毒在动物体内应用的安全性与可行性，为肿瘤的基因治疗提供实验依据。方法：将重组人ｒＶ－ＣＥＡ和痘苗病毒野生型及生理盐水分别接种纯各新西兰兔，观察组织结构并用免疫组化方法检测兔体内人ＣＥＡＲ 表达。结果：接种ｒＶ－ＣＥＡ组的第８天，兔血清ＣＥＡ含量明显升高，第１５天后在兔血清中测出ＣＥＡ抗体。光镜观察接种ｒＶ－ＣＥＡ兔的心、肝、脾、肾、淋巴结和皮肤等组织，其结构均无异常变化     

HPV 16—E6抗原单克隆抗体检测尖锐湿疣样病变组织

ＨＰＶ１６┐Ｅ６抗原单克隆抗体检测尖锐湿疣样病变组织张素珍杨守京胡川闽刘彦仿（第四军医大学病理学教研室西安７１００３３）关键词单克隆抗体人类乳头状瘤病毒尖锐湿疣免疫组织化学中图号Ｒ３３尖锐湿疣（ｃｏｎｄｙｌｏｍａｔａａｃｕｍｉｎａｔｕｍ，ＣＡ）是由人...     

HPV6b VLPs检测尖锐湿疣病人血清和宫颈分泌物抗体的意义

目的 :探讨人乳头瘤病毒 (HPV)感染后尖锐湿疣 (CA)病人机体产生的免疫反应及特异性抗体用于HPV感染的诊断价值。方法 :采用重组杆状病毒 昆虫细胞系统制备HPV 6bL1VLPs抗原 ,以酶联免疫吸附试验 (ELISA)分别检测 4 9例CA病人和 4 5例正常对照的血清抗体、4 6例CA病人和 36例正常对照的宫颈分泌物抗体 ,并用血凝抑制试验检测抗体的中和活性。结果 :CA组HPV6bL1VLPs特异性的血清IgG抗体和分泌物IgA抗体的OD值和阳性率均显著高于正常对照组 (P <0 .0 0 1)。HPV 6型与HPV 11型DNA阳性者的血清IgG和分泌物IgA抗体的阳性率差异均无显著性 (P >0 .0 5 )。血清IgG和分泌物IgA抗体血凝抑制试验平均效价较正常对照组为高。结论 :生殖道HPV感染后可产生全身和局部生殖道粘膜抗体反应 ,两类抗体均具中和活性。HPV6型与HPV11型感染者的血清和分泌物抗体均存在交叉反应。血清抗体和局部分泌物抗体可能具有用于诊断HPV感染的价值     

聚合酶链反应检测尖锐湿疣组织中HPV DNA

为分析尖锐湿疣组织中人乳头瘤病毒感染情况。     

尖锐湿疣组织HPV6b和11型L1基因多态性及蛋白特性分析

目的：调查温州地区尖锐湿疣组织HPV6b和11型感染情况，分析其L1基因多态性及蛋白特性变化，为基因工程重组L1蛋白疫苗的应用提供理论依据。方法：采用HPV6b和11型L1基因特异性引物对31份温州地区尖锐湿疣组织标本进行PCR扩增，并各取7份阳性PCR产物直接测序，用软件分析HPV6b和11型L1基因多态性及蛋白特性。结果：31份标本中，HPV6b和11型阳性率分别为35．5％和45．2％。与标准基因序列比较，HPV6b和11型L1基因分别形成5和6种突变模式，同源性分别为99．8%～99．9％和99．7％～99．9%。HPV6b型L1基因中仅1处碱基突变引起所编码氨基酸的变异（S→P），但其编码蛋白在亲水性、表面可及性及抗原性上无明显变化；HPV11型L1基因的碱基突变均为无义突变，所编码氨基酸与标准株完全一致。结论：HPV6b和11型是温州地区尖锐湿疣的主要感染型别；HPVBb和11型L1基因序列高度保守。     

宫颈癌组织中HPV16 E6基因的检测及其意义

目的：探讨宫颈癌组织中人乳头状瘤病毒16型(HPV16)E6基因的检测及其意义。方法：运用PCR方法扩增HPV16E6／E7基因，分子克隆技术进行基因的克隆后进一步测定基因序列，宫颈炎和宫颈癌的确诊依赖于病理学方法。结果宫颈癌组织中HPV16E6基因的检出率为45％，显著高于宫颈炎组织中5％的检出率，两者有统计学差异。HPV16E7基因的检出率在两者之间没有显著性差异。结论：HPV16E6基因在宫颈癌的发病中起到重要的作用。宫颈组织中HPV16E6基因的检测有望成为宫颈癌筛查的新手段。     

宫颈非典型增生组织中HPV16－DNA的定量PCR检测

①目的建立定量聚合酶链反应（ＰＣＲ）方法，检测宫颈组织中人乳头瘤病毒１６型（ＨＰＶ１６）的基因含量。②方法通过重叠延伸ＰＣＲ构建一含ＥｃｏＲＩ酶切位点的内参照模板，用竞争性ＰＣＲ（ＣＰＣＲ）检测６例ＨＰＶ１６阳性宫颈非典型增生组织标本中ＨＰＶ１６Ｅ６基因的拷贝数。③结果６例阳性标本ＨＰＶ１６Ｅ６基因的拷贝数为每毫克ＤＮＡ中含１．９９×１０５～２．５０×１０７．④结论用ＣＰＣＲ检测宫颈组织中ＨＰＶ１６Ｅ６基因的含量是可行的，进一步比较不同宫颈疾患组织中ＨＰＶ１６Ｅ６基因的含量，可以从分子水平探讨ＨＰＶ１６的致癌机理。     

核酸原位杂交技术检测尖锐湿疣中HPV病毒的临床意义

尖锐湿疣是由人乳头状瘤病毒（HPV 6、13／11型）引起的性传播疾病，临床上很难与假性湿疣及慢性皮肤营养不良性疾病区别，在普通光镜下难以确诊或易造成误诊，本文应用核酸原位杂交技术检测尖锐湿疣中HPV病毒，旨在为临床早期诊断、鉴别诊断及判断预后提供理论依据。     

喉组织中HPV11,16 E6基因DNA及HPV16 E6 mRNA的定量检测

①目的探讨人乳头瘤病毒11,16型(HPV11,16)转化基因E6 DNA及HPV16 E6 mRNA与喉疾病严重程度的关系.②方法分别用竞争性聚合酶链反应(CPCR)和半定量RT-PCR技术检测喉乳头状瘤、喉鳞癌组织中HPV11,16 E6 DNA和HPV16 E6 mRNA的含量.③结果喉鳞癌组织中HPV11,16 E6 DNA和HPV16 E6 mRNA的含量均高于喉乳头状瘤组织,差异有显著性(t=3.745,2.776,2.759, P<0.01,0.05);高、中、低分化喉鳞癌组织中HPV11,16 E6 DNA含量无显著性差异(F=0.335, 0.234, P>0.05),但低分化喉鳞癌组织中HPV16 E6 mRNA的表达水平显著高于高分化喉鳞癌(F=4.219,q=4.107, P<0.05).④结论 HPV11,16 E6 DNA和HPV16 E6 mRNA的含量有随病理程度加重而增高的趋势,从分子水平探讨转化基因E6的致癌性, 有助于阐明HPV与喉癌发生发展的关系.     

表达HPV16 L1、L2E7蛋白的非复制重组痘苗病毒的构建和鉴定

目的:构建防治宫颈癌的表达人乳头瘤病毒16型、HPV16)L1、L2E7蛋白的非复制重组痘苗病毒疫苗株.方法:以痘苗病毒为载体,利用同源重组技术筛选共表达HPV16 L1、L2E7蛋白的重组痘苗病毒,用PCR和Western-blot技术进行鉴定.结果:该病毒在鸡胚成纤维细胞(CEF)中连续传代15代,经PCR检测证实病毒基因组中有HPV16 L1、L2E7目的基因插入,Western-blot检测证实病毒可以稳定表达L1、L2E7蛋白.结论:构建的病毒NTVJL1L2E7可以在真核细胞中表达HPV16 L1、L2E7蛋白,可以作为治疗和预防HPV16相关疾病的候选疫苗.     

共表达HPV16L1、L2、E67蛋白的重组非复制型痘苗病毒的构建

目的：构建共表达人乳头瘤病毒16型(HPV16)L1、L2、E67蛋白的非复制型重组痘苗病毒人用疫苗株。方法：以痘苗病毒为载体、利用同源重组技术筛选共表达HPV16L1、L2、E67蛋白的重组痘苗病毒并对其进行鉴定。结果：该病毒在CEF细胞上连续传至第15代,经斑点杂交结果表明重组病毒基因组中有L1、L2、E6、E7基因插人;经Western blot检测,重组病毒能稳定表达HPV16L1、L2、E67蛋白。结论：非复制型重组痘苗病毒NTVJE67CKL IL2可作为预防和治疗HPV16相关肿瘤及其癌前病变的候选疫苗。     

可溶性白细胞介素6受体β亚基在重组痘苗病毒中的表达及其对动物的免疫效果

目的 :构建可溶性白细胞介素 6受体 ( IL- 6R) β亚基 ( sgp130 )重组痘苗病毒 ,感染动物细胞使其表达 sgp130 ,用重组病毒免疫动物产生特异性抗 sgp130抗体。　 方法 :将 sgp130基因导入痘苗病毒载体 p JSA1175,用脂质体转染法将重组载体与野生型痘苗病毒在 TK-143细胞中发生同源重组 ,用 Bud R和 X- gal双重选择 ,得到带有人 sgp130的重组病毒 ( Vsgp130 )。　 结果 :采用 IDA和 Western Blotting法证实 ,感染 Vsgp130的 TK-143细胞上清中有较强的 sgp130表达 ,表达产物分子量为 10 0 0 0 0左右。用重组病毒免疫家兔和 Balb/c小鼠 ,可刺激抗体产生。　 结论 :sgp130在痘苗病毒载体系统中的表达成功及抗 sgp130多克隆抗体的产生为进一步研究 IL- 6等细胞因子信号传导机理及研制抗 sgp130单克隆抗体奠定了基础     

宫颈癌及其癌前病变组织中HPV16 E6蛋白的表达及意义

目的：探讨宫颈癌及其癌前病变组织中16型人乳头瘤病毒（HPV16）E6蛋白的表达及其意义.方法：用免疫组化SP法对15例正常宫颈组织、14例低级别宫颈上皮内瘤变（LCIN）、11例高级别宫颈上皮内瘤变（HCIN）以及61例浸润性宫颈癌标本进行了HPV16 E6蛋白表达的检测.结果：HPV16 E6蛋白在正常宫颈上皮、CINⅠ～Ⅱ、CINⅢ及浸润性宫颈鳞癌中的阳性表达率分别为0（0/15）、7.14%（1/14）、36.36%（4/11）、59.02%（36/61）.高级别CIN和浸润性宫颈癌中HPV16 E6蛋白阳性率明显高于正常宫颈组织和低级别CIN（P〈0.05）,HPV16 E6蛋白表达与宫颈癌临床分期、组织分化和淋巴结转移无关（P〉0.05）.结论：HPV16 E6蛋白的检测可能可作为宫颈癌前病变转归的指标.     

宫颈组织临床样本HPV16-E6的阳性率检测

目的 探讨HPV-16感染与宫颈癌的关系.方法 采用免疫组化SP法分别检测宫颈癌浸润癌23例、慢性炎症25例和正常对照组26例宫颈组织临床样本HPV16 E6的阳性率检测及宫颈癌组织中HPV16-E6的表达.结果 慢性炎症宫颈上皮细胞杂交阳性率为8.0%(2/25);CIN阳性率为22.7%(5/22);癌变组织阳性率为56.5%(13/23).其中,Ⅰ期阳性率为44.4%(4/9),Ⅱ期阳性率为55.6%(5/9),Ⅲ期阳性率为80.0%(4/5);正常对照阳性率为3.9%(1/26).提示HPV16-E6的表达与宫颈癌的发生发展密切相关,随着病变程度的恶化,HPV16-E6的阳性率逐渐增加.将宫颈癌上皮细胞阳性百分率与慢性宫颈炎症比较,具有统计学差异(χ2=19.327,P＜0.001),CINs阳性率与慢性宫颈炎症比较也具有统计学差异(χ2=8.0912,P=0.00283),宫颈癌上皮细胞阳性百分率与CINs阳性率相比较,具有统计学差异(P=0.00233).结论 HPV16-E6的表达与宫颈癌的发生发展密切相关,随着病变程度的恶化,HPV16-E6的阳性率逐渐增加.     

喉鳞癌组织中HPV16、18E6和HPV16E7蛋白表达及其相关性研究

目的 :探讨人乳头瘤病毒 (HPV) 16、18型E6和E7蛋白与喉鳞癌发生的关系以及两种蛋白在致病过程中的相互关系。方法 :采用免疫组化SABC方法对 5 8例喉鳞癌 ,30例癌旁组织和 30例声带息肉进行检测。结果 :在喉鳞癌和癌旁组织中的E6蛋白的表达率分别为 31 0 % (18/5 8)和 2 0 0 % (6 /30 ) ;E7蛋白的表达率分别为 32 7%(19/5 8)和 2 0 3 % (7/30 )。声带息肉组中未见E6和E7蛋白阳性表达。E6和E7蛋白表达率在喉癌组与息肉组之间 ,有颈淋巴结转移组与无颈淋巴结转移组之间均有显著性差异 (P <0 .0 1)。E6和E7蛋白在喉鳞癌中的表达结果具有明显的相关性。结论 :HPV16、18E6和HPV16E7蛋白与喉鳞癌发生、发展关系密切 ,E6与E7蛋白在致癌过程中有协同作用     

人宫颈病变组织中HPV16 cDNA,HPV6/11,HSV-Ⅱ,CMV病毒蛋白的表达及对HPV16E7的影响

目的 探讨HPV16 cDNA，HPV16E7、HPV6／11、HSV-Ⅱ、CMV在各类宫颈病变中的表达及其在宫颈癌变中的作用。方法 采用免疫组化方法对10例慢性宫颈炎、10例宫颈尖锐湿疣、45例宫颈上皮内瘤变、20例宫颈浸润癌、10例正常宫颈标本行HPV6／11、HSV-Ⅱ、CMV的测定。用原位杂交行HPV16CDNA的测定。结果 HPV6／11在宫颈尖锐湿疣组阳性表达率明显增高（P〈0．05）。HPV16 cDNA，HSV-Ⅱ及CMV在宫颈癌及宫颈上皮内瘤变中的阳性表达率均增高（P〈0．05）。随病变进展HPV16 cDNA表达增加，与宫颈癌及宫颈上皮内瘤变呈正相关。HPV16 cDNA在宫颈癌及宫颈上皮内瘤变中的阳性表达率明显高于HSV-Ⅱ、CMV的表达（P〈0．05）。在宫颈癌及宫颈上皮内瘤变时，HPV16E7在HPV16合并HSV-Ⅱ及CMV感染时阳性表达率高于单纯HPV16感染时的表达。结论 HPV6／11是引起宫颈癌和尖锐湿疣的主要病因。HSV-Ⅱ及CMV在宫颈癌的发生发展过程中与HPV有一定的协同作用。