CpG-ODN促进小鼠骨髓来源的树突状细胞成熟作用的实验研究

目的 改进目前体外扩增树突状细胞(dendritic cell,DC)的方法,探讨含CpG序列的寡脱氧核糖核苷酸(CpG Oligodeoxynucleotide,CpG-ODN)促进DC成熟的作用.方法 用500u/ml重组小鼠粒细胞巨噬细胞集落刺激因子(rmGM-CSF)和200u/ml重组小鼠白细胞介素-4(rmIL-4)诱导小鼠骨髓细胞体外分化成DC,采用相差显微镜、扫描电镜、FACS检测细胞表面分子和混合淋巴细胞反应(MLR)等方法比较CpG-ODN、TNF-α等不同培养方法促进DC成熟的作用.结果 培养10d,可获得大量典型的DC,经FACS检测细胞表面分子、MLR等证实,CpG-ODN具有较强的促进DC成熟的作用.结论 CpG-ODN可以有效促进DC的功能成熟,可应用于科研及临床中.     

中药对树突状细胞功能影响的研究

树突状细胞(dendritic cell,DC)是目前已知的功能最强且唯一能激活初始型T细胞、激发初次免疫应答的抗原呈递细胞(antigen-presenting cell,APC),在机体疾病的发生、发展过程中发挥极为重要的作用。近年来,关于中药对免疫功能的影响越来越受到重视,研究中药对DC功能的影响,有助于进一步揭示中药治疗疾病的机制和新药的研发。本文就近几年中药对DC影响的研究进行综述。     

环氧化酶2抑制剂塞来昔布对胶质瘤树突状细胞表型和功能的影响

目的 探讨脑胶质瘤微环境及环氧化酶2抑制剂塞来昔布对树突状细胞( dendritic cell,DC)表型和功能的影响.方法 检测塞来昔布对C6细胞COX-2蛋白表达及PGE2分泌水平的影响.分离人外周血单个核细胞,分为正常诱导组、C6细胞上清组及塞来昔布+C6细胞上清组,体外诱导培养为DC细胞.观察DC形态学变化,检测DC表面分子CD80、CD83、CD86、CD1a的表达.检测DC培养上清中IL-12的水平及其体外刺激同种异体T细胞增殖能力.结果 塞来昔布可呈浓度依赖性下调C6细胞COX-2蛋白表达水平及PGE2分泌水平.各组细胞均可诱导出典型DC形态.三组DC CD1a表达率(％)为(75.56±2.40,75.09±3.67,76.03±3.43),CD83表达率(％)为(72.04 ±3.45,71.44±3.78,73.63 ±3.31),差异无统计学意义(P＞0.05),C6上清组DC CD80、CD86表达率(％)分别为(58.41 ±3.85,58.22±3.25),低于正常诱导组(分别为70.36±2.91,69.31±4.29),差异具有统计学意义(P＜0.01),对应其刺激T淋巴细胞增殖能力降低(P＜0.01),IL-12分泌水平(pg/ml)低于正常诱导组(分别为137.88±5.33,186.04±4.76),差异具有统计学意义(P＜0.01).塞来昔布预处理C6细胞后可提高CD80、CD86表达水平(66.83±2.51,63.51±5.47,P＜0.01)及刺激T淋巴细胞增殖能力、IL-12分泌水平(170.31±3.46,P＜0.01),但仍低于正常诱导组(P＜0.01).结论 塞来昔布可通过抑制COX-2蛋白活性,降低肿瘤局部微环境中的PGE2水平,改善DC的表型和功能.     

CpG-ODN对树突状细胞分泌细胞因子的影响

目的比较免疫佐剂卡介苗（BCG）、含CpG序列的寡脱氧核糖核苷酸（CpG-ODN）刺激小鼠骨髓来源的树突状细胞（DC）分泌细胞因子IL-12、IL-10的水平，探讨CpG-ODN在预防膀胱肿瘤复发中的可行性。方法采用骨髓分离法分离、扩增小鼠骨髓来源DC．ELISA法检测BCG、CpG-ODN刺激DC后培养上清中IL-12、IL-10含量。结果BCG及CpG-ODN刺激DC后IL-12含量均明显增高（P〈0．01）．两组间差异无统计学意义（P〉0．05）；而IL-10含量BCG组明显高于其他各组（P〈0、01）．CpG-ODN组刺激DC后IL-10无明显变化（P〉0.05）．non-CpG-ODN刺激DC后与对照组比较IL-12、IL-10含量无明显变化（P〉0.05），表明CpG-ODN刺激DC引起的IL-12升高具有序列特异性。结论CpG-ODN可诱导DC产生Th1型细胞因子IL-12．对Th2型细胞因子IL-10影响很小．比BCG更能调节免疫应答向Th1型转换．可能在预防膀胱肿瘤复发的应用中具有良好前景。     

TGF-β2对树突状细胞表型和功能的影响

目的: 研究转化生长因子-β2 (TGF-β2)对树突状细胞(dendritic cells, DC)表型和功能的影响. 方法: 体外培养骨髓来源的DC(BMDC)及TGF-β2诱导的DC(TGFβ2-DC). 采用双色免疫荧光化学染色或流式细胞仪(FCM)分析DC的细胞表型. 分离纯化脾脏来源的同种异体T细胞和CD4+ T细胞. 用BMDC及TGFβ2-DC刺激T细胞增殖,并用混合淋巴细胞反应(MLR)测定其能力. 在CD4+ T细胞与BMDC或TGFβ2-DC共培养5 d后,用FCM检测CD4+ T细胞表型的变化. 结果: BMDC表现为CD11c, CD86, MHC class II+和CD8а-的髓系DC. TGF-β2的诱导抑制了DC表面协同刺激分子、MHC classII的表达(P<0.01),并抑制其刺激同种异体T细胞增殖的能力. 与BMDC诱导的CD4+ T细胞相比,TGFβ2-DC诱导的CD4+ T细胞CD152(细胞毒T淋巴细胞相关分子4, CTLA-4)表达上升(P<0.01). 结论: TGF-β2的诱导促使DC表面协同刺激因子表达下降,T细胞合成CTLA-4增加,T细胞的活化和增殖受到明显抑制.     

普伐他汀对人单核细胞源树突状细胞免疫功能的影响

目的　探讨普伐他汀对在免疫调控中起重要作用的人单核细胞源树突状细胞(DC)免疫功能的影响。方法　采用免疫磁珠法分离人外周血CD14+单核细胞,经含重组粒细胞巨噬细胞刺激因子(100 ng/ml)和重组白介素(rhIL) 4(20 ng/ml)的Cellgro培养,使其分化为DC。DC与50~100μmol/L普伐他汀孵育72 h后,采用流式细胞术检测DC表型(CD1a、CD40、CD86、HLA DR),混合T淋巴细胞反应检测DC对淋巴细胞增殖的影响,采用酶联免疫吸附试验法检测细胞培养上清液中Th1/Th2 [白介素(IL)- 12、干扰素(IFN) γ/ IL- 2、IL- 10]细胞因子的浓度。结果　与对照组相比,经普伐他汀处理的DC可下调CD80、CD86、HLA DR和CD1a的表达,对T淋巴细胞增殖作用明显减弱,明显抑制DC- Th1 细胞因子IL -12 和IFN -γ的分泌(P<0.05),但对Th2细胞因子IL -2 和IL -10水平无明显影响。100μmol/L甲羟戊酸可逆转普伐他汀的作用。结论　普伐他汀可明显抑制DC的成熟和免疫活性,此作用与甲羟戊酸途径有关。这可能是他汀类药物免疫调节的新机制。     

脓毒血症对大鼠外周血树突状细胞免疫功能的影响

目的探讨脓毒血症大鼠外周血树突状细胞(DC)数量和免疫功能的变化及意义。方法将SD大鼠随机分为正常对照组和致伤组,正常对照组只麻醉不致伤,并取外周血1次;致伤组以盲肠结扎穿孔制作脓毒症动物模型,分别于伤后4、12、24 h活杀动物取标本。分离两组外周血DC,通过流式细胞仪检测各组的DC数量,DC表面HLA-DR、CD80、CD86表达水平以及DC诱导的T细胞反应性增殖,并检测各组外周血清中白细胞介素(IL)-1β、IL-6水平。结果致伤组DC数量较正常对照组明显下降;DC表面HLA-DR、CD80、CD86表达水平也较正常对照组明显降低。致伤组DC诱导的T细胞增殖能力明显低于正常对照组;伤后血清IL-1β、IL-6显著升高,与正常对照组比较差异有统计学意义。结论脓毒血症早期大鼠外周血DC数量下降,功能降低,与伤后免疫系统功能低下密切相关。     

青藤碱对小鼠骨髓树突状细胞免疫功能的影响

目的研究青藤碱对小鼠骨髓树突状细胞(dendritic cell DC)免疫功能的影响.方法小鼠骨髓细胞用GM-CSF培养7 d,再加入不同浓度青藤碱培养12 h.流式细胞仪检测细胞表达HLA-DR的能力,ELISA检测细胞产生的细胞因子,混合淋巴细胞培养检测细胞提呈抗原的能力.结果青藤碱刺激后的DC细胞表达HLA-DR、产生细胞因子和刺激同种同基因T细胞增殖的能力显著低于正常DC细胞.结论青藤碱可抑制DC的发育成熟和免疫应答功能.     

选择性COX-2抑制剂塞来昔布对转移性肾癌增殖和凋亡的影响

目的探讨COX-2抑制剂塞来昔布对转移性肾癌细胞增殖和凋亡作用的影响。方法选择21例转移性肾癌患者,均经口服选择性COX-2抑制剂塞来昔布每天两次每次400 mg连续治疗,直到疾病不再进展或达到患者不能耐受药物毒性而终止。分别于处理前、用后1周、4周、12周、24周、36周,采用Western blotting法检测COX-2表达,噻唑蓝(MTT)法检测转移灶癌细胞的增殖活性。流式细胞仪检测细胞凋亡情况。结果塞来昔布处理前、用后1周、4周、12周、24周和36周,肾癌细胞中的COX-2蛋白表达水平随着作用时间的延长,表达水平越低。口服塞来昔布后与服用前相比,COX-2表达明显降低。MTT法检测表明,12周、24周、36周塞来昔布的细胞抑制率分别为(4.3±1.17)%、(33.2±5.34)%、(53.4±5.87)%,显著高于处理前的(2.16±0.57)%,表明塞来昔布可以抑制转移性肾癌细胞的增殖。流式细胞仪检测结果,塞来昔布作用12周、24周、36周后的转移性肾癌细胞凋亡率分别为(8.42±0.3)%、(15.12±1.4)%、(32.16±2.1)%,与处理前凋亡率(3.13±0.4)%比较,凋亡率显著上升(P<0.01)。结论选择性COX-2抑制剂可能通过降低COX-2表达,抑制转移肾癌细胞增殖并诱导其凋亡。     

树突状细胞疫苗联合CpG-ODN对膀胱肿瘤细胞的免疫学效应研究

目的 探讨负载肿瘤抗原的树突状细胞(DC)疫苗联合含未甲基化胞嘧啶鸟嘌呤(CpG)序列的寡脱氧核糖核苷酸(CpG-ODN)对膀胱肿瘤细胞的免疫学效应.方法 用小鼠BTT739细胞反复冻融抗原致敏培养第7天的DC,48h后分别加入CpG-ODN及肿瘤坏死因子-α(TNF-α)诱导DC成熟,制备负载肿瘤抗原的DC疫苗,灭活后用于刺激T淋巴细胞制备效应细胞(CTL),乳酸脱氢酶释放实验测定各组CTL对BTT739细胞的杀伤活性,ELISA法测定效应细胞培养上清液的干扰素-γ(IFN-γ)水平,同时检测了CTL对自体淋巴细胞的杀伤活性.结果负载肿瘤抗原的DC诱导的效应细胞分泌较高水平的IFN-γ,并对BTT739细胞具有较高的杀伤效应,CpG-ODN活化的DC疫苗诱导的效应细胞分泌IFN-γ水平及对肿瘤细胞的杀伤活性均高于TNF-α活化的DC疫苗诱导的效应细胞(P<0.01).DC疫苗对自体淋巴细胞无明显免疫杀伤活性.结论 CpG-ODN可增强负载肿瘤抗原的DC疫苗对膀胱肿瘤细胞的免疫杀伤效应,并且对自体淋巴细胞无免疫杀伤活性,为膀胱癌的免疫治疗提供了实验基础.     

负载肿瘤抗原的DC疫苗对小鼠体内膀胱肿瘤的抑制作用

目的 研究负载肿瘤抗原的DC疫苗对T739小鼠体内膀胱肿瘤的免疫学效应.方法 建立BTT 739荷瘤小鼠动物模型,随机分为实验组和实验对照组和空白对照组,于肿瘤细胞接种后第7、14天给予相应DC疫苗治疗,每组分2亚组,分别用于测量瘤质量、体积及用于观察荷瘤小鼠存活情况.结果 负载肿瘤抗原的DC疫苗实验组荷瘤鼠肿瘤平均体积和平均瘤质量均显著低于对照组(P＜0.01),生存期长于对照组,并且有2只小鼠无瘤长期存活.经DC疫苗实验组治愈的2只小鼠30 d后无肿瘤生长,再次皮下接种BTT739细胞观察30 d仍无肿瘤发生.结沦负载肿瘤抗原的DC疫苗对膀胱肿瘤荷瘤小鼠具有抑瘤效应和生存期延长作用.     

落新妇苷对小鼠骨髓来源树突状细胞成熟及免疫功能的抑制作用

目的：探讨落新妇苷对小鼠骨髓来源树突状细胞（dendritic cell, DC）成熟和免疫功能的影响。 方法：采用体外条件培养法得到小鼠骨髓来源未成熟树突状细胞,加入脂多糖刺激细胞成熟。落新妇苷（低浓度25 μg/mL、中浓度50 μg/mL、高浓度100 μg/mL）处理细胞后,流式细胞仪分析各组细胞凋亡,细胞表面主要组织相容性抗原复合物分子Ⅰa和共刺激分子CD40、CD80和CD86表达;异硫氰酸荧光素标记葡聚糖内吞实验分析各组DC抗原吞噬功能;酶联免疫吸附测定法检测各组DC培养液上清白细胞介素12亚单位p40（p40 subunit of interleukin-12,IL-12p40）水平;氚-胸腺嘧啶核苷掺入法检测体外混合淋巴细胞反应（mixed lymphocyte reaction, MLR）中各组DC刺激同种反应性T细胞的增殖能力,酶联免疫吸附测定法检测MLR上清IL-2、IL-4、IL-10、γ干扰素水平。 结果：各组DC凋亡率差异无统计学意义（P＞0.05）。与脂多糖组相比,高、中、低浓度落新妇苷组细胞表面主要组织相容性抗原复合物分子Ⅰa和共刺激分子表达明显降低,抗原吞噬能力明显升高,分泌IL-12p40明显减少,刺激同种反应性T细胞增殖的能力显著下降（P〈0.05）。与脂多糖组相比,高、中、低浓度落新妇苷组MLR上清中IL-2和γ干扰素水平明显降低（P〈0.05）,而IL-4、IL-10水平比较,差异无统计学意义（P＞0.05）。 结论：落新妇苷（25、50、100 μg/mL）能够剂量依赖性地抑制体外培养小鼠骨髓来源DC的成熟,并对其免疫功能具有一定的负性调节作用。     

Changes in dendritic cells and dendritic cell subpopulations in peripheral blood of recipients during acute rejection after kidney transplantation

Background Advances in transplantation immunology show that the balance between dendritic cells （DCs） and their subsets can maintain stable immune status in the induction of tolerance after transplantation. The aim of this study was to investigate if DCs and DC subpopulations in recipient peripheral blood are effective diagnostic indicators of acute rejection following kidney transplantation. Methods Immunofluorescent flow cytometry was used to classify white blood cells （WBCs）, the levels of mononuclear cells and DCs （including the dominant subpopulations, plasmacytoid DC （pDC） and myeloid DC （mDC）） in peripheral blood at 0, 1, 7, and 28 days and 1 year after kidney transplantation in 33 patients. In addition, the blood levels of interleukin-10 （IL-10） and IL-12 were monitored before and after surgery. Fifteen healthy volunteers served as normal controls. Patients were undertaking hemodialysis owing to uremia before surgery. Results The total number of DCs, pDC, and mDC in peripheral blood and the pDC/mDC ratio were significantly lower in patients than controls （P 〈0.05）. Peripheral DCs suddenly decreased at the end of day 1, then gradually increased through day 28 but remained below normal levels. After 1 year, levels were higher than before surgery but lower than normal. The mDC levels were higher in patients with acute rejection before and 1 day after surgery （P 〈0.005）. There was no significant difference in IL-10 and IL-12 levels between patients with and without acute rejection. Conclusion The changes in DCs and DC subpopulations during the acute rejection period may serve as effective markers and referral indices for monitoring the immune state, and predicting rejection and reasonably adjusting immunosuppressants.     

塞来昔布对人结肠癌细胞裸鼠移植瘤肝转移和血管生成的影响

目的研究COX-2选择性抑制剂塞来昔布对结肠癌肝转移瘤微血管生成以及血管生成因子VEGF、bFGF表达的影响,从而探讨COX-2对结肠癌肝转移瘤血管形成的作用机制.方法细胞培养建立稳定的结肠癌细胞株HT-29和HCT-116,利用脾切除法建立结肠癌肝转移动物模型,免疫组化检测结肠癌肝转移瘤MVD、VEGF、bFGF蛋白表达.结果结肠癌肝脏转移率,HT-29组、HCT-116组和塞来昔布组分别为83.33%、16.67%和33.33%.肝脏转移瘤MVD、VEGF、bFGF的表达,HT-29组与HCT-116组、塞来昔布组比较治疗组表达减弱,有显著统计学差异(P＜0.01,P＜0.05);塞来昔布组与HCT-116组比较无显著性差异(P＞0.05).结论塞来昔布可能通过抑制促血管生成因子VEGF、BFGF的表达,进而抑制了结肠癌肝转移瘤新生血管生成.     

红树林淡紫拟青霉胞外多糖对小鼠DCs吞噬功能的影响

目的 探讨红树林来源的淡紫拟青霉胞外多糖对小鼠骨髓源性树突细胞(DCs)功能成熟的影响.方法 从小鼠骨髓腔中分离获得骨髓细胞,加入重组小鼠粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子(rmGM-CSF)、重组小鼠白细胞介素-4(rmIL-4)诱导分化为未成熟DCs,用不同浓度淡紫拟青霉胞外多糖干预,流式细胞术检测DCs的表面标志CD11c、主要组合相容性复合体(MHCⅡ)类分子、CD80、CD86的表达情况及吞噬葡聚糖(FITC-dextran)的能力,反转录-聚合酶链反应(RT-PCR)检测该多糖对DCs Toll样受体(TLR)2 mRNA和TLR4 mRNA表达的影响.结果 经300、400 μg/mL多糖作用48 h后DCs表面分子CD11c、MHCⅡ类分子、CD80、CD86的表达较空白对照组显著上调(P＜0.01);经多糖作用的DCs吞噬FITC-dextran能力下降,尤其是300、400μg/mL的多糖与空白对照组相比作用效果明显(P＜0.05);另外,该多糖还可下调DCs TLR2 mRNA和TLR4 mRNA的表达,尤其经100～400μg/mL多糖处理的DCs下调作用显著,与空白对照组相比差异有统计学意义(P＜0.05).结论 淡紫拟青霉胞外多糖可上调小鼠骨髓源性未成熟DCs表面CD11c、MHCⅡ类分子、CD80和CD86的表达,降低其吞噬能力,下调TLR2 mRNA和TLR4 mRNA的表达,初步表明该多糖可刺激DCs分化成熟.     

结核性胸膜炎患者树突状细胞亚群的检测及意义

目的 检测树突状细胞(DC)及其各亚群[髓样树突状细胞(mDC)和浆细胞样树突状细胞(pDC)]在结核性胸膜炎(TP)患者外周血及胸腔积液中的变化,并且分析其与白细胞介素-12(IL-12)水平的相关性,探讨其临床意义.方法 以12例健康志愿者作为对照组,采用流式细胞术对16例TP患者(TP组)外周血和胸腔积液中总体树突状细胞(tDC)及其各亚群的比例进行检测;同时,用ELISA法对TP患者外周血浆和胸腔积液中IL-12的含量进行检测.结果 Tp组患者外周血中tDC和mDC比例显著高于对照组,治疗后tDC比例下降明显;TP组患者胸腔积液中tDC和mDC比例高于外周血,但pDC低于外周血;TP组患者血浆中IL-12的含量显著高于对照组,而胸腔积液中IL-12的含量则明显高于其血浆含量;TP患者血浆中IL-12的水平与外周血tDC、mDC呈正相关,并且胸腔积液中IL-12的水平也与胸腔积液tDC、mDC呈正相关.结论 DC,尤其是mDC在TP中具有重要的抗结核免疫作用.     

核酸疫苗Sj31BIN联合IL-12免疫抗日本血吸虫攻击感染的实验研究

目的 :在证明日本血吸虫重组蛋白酶B核酸疫苗Sj31BIN具有抗生殖免疫作用的基础上 ,联合使用IL 12 ,观察IL 12是否具有佐剂效果。方法 :分别用Sj31BIN +IL 12和IL 12免疫Balb/C小鼠。攻击感染后 6周计数成虫负荷和组织内虫卵数及肝脏表面虫卵结节数。结果 :Sj31BIN +IL 12免疫小鼠可降低成虫发育率。肝组织减卵率为5 9 74% ;肠组织减卵率为 5 9 6 0 % ;肝脏表面虫卵结节减少率为 71 30 % ;单独使用IL 12有一定的免疫保护作用。结论 :Sj31BIN +IL 12能诱导小鼠产生较强的抗生殖免疫作用。