112例淋巴系统恶性肿瘤骨髓免疫表型分析

背景与目的:淋巴细胞白血病和淋巴瘤骨髓侵犯的诊断以细胞形态学为基础,而免疫分型可通过获得肿瘤细胞分化和发育阶段的信息使淋巴系统恶性肿瘤的诊断更为准确,为临床合理治疗和预后判断提供重要的科学依据.本研究应用多参数流式细胞术(flow cytometry,FCM)探讨淋巴细胞白血病和非霍奇金淋巴瘤(non-Hodgkin's lymphoma,NHL)骨髓侵犯的免疫表型特点.方法:收集112例病理确诊NHL并伴骨髓侵犯和淋巴细胞白血病患者的骨髓标本.应用FCM检测肿瘤细胞的免疫表型.结果:45例前驱B淋巴母细胞白血病/淋巴瘤(precursor B lymphoblastic lymphoma/leukemia,B-ALL/LBL)主要表达CD19、CD10、TdT、CD34、HLA-DR和CD20;32例前驱T淋巴母细胞白血病/淋巴瘤(precursor T lymphoblastic lymphoma/leukemia,T-ALL/LBL)主要表达胞内CD3(cytoplasmic CD3,CyCD3)、CD7、CD5、TdT、膜表面CD3(surface CD3,sCD3)和HLA-DR.77例前驱淋巴细胞肿瘤中,28例(36%)有髓系抗原CD13、CD33的表达;9例(20%)B-ALL/LBL病例有CD20与CD34共同表达,28例(87.5%)T-ALL/LBL病例有CyCD3与TdT共同表达.成熟淋巴细胞肿瘤35例,其中17例慢性淋巴细胞白血病/小淋巴细胞淋巴瘤主要表达CD19、CD20、CD5和HLA-DR,并有CD19与CD5共同表达.4例弥漫大B细胞性淋巴瘤主要表达CD19、CD20、CD10和HLA-DR.3例伯基特淋巴瘤主要表达CD19、CD10、CD20、SIgM.1例套细胞淋巴瘤表达CD5、CD19、CD20、HLA-DR.5例外周T细胞淋巴瘤(PTCL)主要表达sCD3、CD5、CD7、CD4或CD8.1例间变性大细胞淋巴瘤主要表达sCD3、HLA-DR.4例NK/T细胞肿瘤表达CD56、HLA-DR,也表达CD7或CD4或CD8.成熟淋巴细胞肿瘤不表达早期抗原如CD34、TdT.成熟淋巴细胞肿瘤可伴有髓系抗原CD13、CD33的表达.结论:淋巴系统恶性肿瘤侵犯骨髓采用形态学结合FCM免疫学分型可获得T、B细胞来源、肿瘤细胞分化阶段和异常抗原表达等参数,有助于临床诊断和微小残留病灶的检测.     

流式细胞仪CD45/SSC设门在儿童急性白血病免疫分型中的应用

目的：探讨CD45／SSC设门方法在儿童急性白血病流式细胞仪免疫表型分析中的优越性。方法：采用CD45／SSC设门的方法确定原始细胞群,与异硫氰酸荧光素和藻红标记的系相关抗体联合进行三色白血病免疫表型分析,并与FSC／SSC设门方法进行比较。结果：CD45／SSC设门与FSC／SSC设门比较能将骨髓原始细胞与正常淋巴细胞、单核细胞及粒细胞明显分开,所得原始细胞比例与形态学分类明显相关,免疫表型分析假阳性发生率低。CD45与异氰酸荧光素和藻红蛋白标记的系相关抗体同时标记,能对白血病细胞群进行多参数分析,更好地反应白血病细胞抗原表达特性。结论：采用CD45／SSC设门,能将骨髓中原始细胞与正常的淋巴细胞和单核细胞明显分开,假阳性发生率低,免疫分型结果可靠。     

非霍奇金淋巴瘤侵犯骨髓的病理形态及免疫表型特点分析

目的:探讨非霍奇金淋巴瘤(NHL)侵犯骨髓的病理形态、免疫表型特点.方法:对骨髓活检标本,石蜡包埋切片,HE染色,光镜观察形态免疫组化进行表型分析.结果:65例中,B细胞淋巴瘤39例,T细胞淋巴瘤26例.形态学上,B细胞淋巴瘤多以混合型、弥漫型侵犯为主,外周T细胞淋巴瘤(PTCL)以间质型、混合型侵犯多见,伴有浆细胞、嗜酸细胞等反应性成分.毛细胞白血病(HCL)呈蜂窝样外观,具有诊断特异性.26例有髓外原发淋巴瘤者,瘤细胞形态与相应骨髓活检形态一致.免疫组化可对大部分淋巴瘤分型.6例小B细胞淋巴瘤不能分型的,2例结合脾脏病理特点确诊,4例仅有骨髓活检标本的,有待进一步检查确定.结论:多数NHL骨髓侵犯具有明确的形态学及免疫表型特点,可以诊断并分型.少数需结合原发部位及其它检查确诊.     

CD133在急性白血病中的表达

目的研究CD133与急性白血病FAB分型、免疫分型及细胞遗传学改变间的关系.方法对60例急性白血病患者骨髓标本进行细胞形态学及细胞化学检查,确定其FAB亚型;运用直接免疫荧光标记法检测CD133及系列相关免疫标记进行免疫分型;采用RHG法进行核型分析.结果CD133在急性髓性白血病(AML)及急性淋巴细胞性白血病(ALL)细胞膜上均可表达,且往往与CD34或CD34、CD33共表达,CD133急性白血病患者细胞遗传学改变无特异性.结论CD133与CD34一样为早期造血干和(或)祖细胞膜上标记.     

流式细胞术在侵袭性NK细胞白血病诊断中的价值:一例报道并文献复习

 目的　分析侵袭性NK细胞白血病的临床特征及诊治方法,探讨流式细胞术（FCM）对其诊断的价值。方法　分析1例侵袭性NK细胞白血病患者的临床特征,并进行文献复习。结果　患者持续高热、肝脾进行性增大、血三系细胞减少,骨髓中可见不典型细胞,FCM检查示骨髓中NK细胞约占淋巴细胞的83.3 %,免疫表型为CD34-、CD2+、CD7+、CD3-、CyCD3+、CD5-、CD16+、CD56+、CD30-、CD4-、CD8-、CD117-、CD11c-、CD19-、CD45++、SSC+～++,TCR、IgH基因重排阴性,染色体正常,诊断为侵袭性NK细胞白血病。结论　侵袭性NK细胞白血病是一种少见的血液系统恶性疾病,临床表现多样、疾病进展迅速,早期容易误诊,FCM免疫分型结合骨髓细胞学涂片具有简便、快捷、可行、创伤性小的优势,在一些特殊情况下可作为首选检测手段。     

流式细胞术联合形态学检查对淋巴瘤骨髓累犯的诊断价值

目的 探讨流式细胞术(FCM)联合形态学检查对淋巴瘤骨髓累犯的诊断价值.方法 对52例淋巴瘤患者的骨髓标本行FCM、涂片及活组织病理切片检查,观察骨髓受累率、免疫表型数据和检查前后临床分期(CS)、国际预后指数(IPI)的变化.结果 6例霍奇金淋巴瘤(HL)切片法仅发现1例骨髓受累;46例非霍奇金淋巴瘤(NHL)中,骨髓受累FCM检出3l例,涂片法检出5例,切片法检出12例.FCM发现的3l例受累患者中,21例为早期浸润(瘤细胞＜5%);12例为小细胞淋巴瘤(SLL);6例同时表达T、B细胞抗原,1例弥漫大B细胞性淋巴瘤同时表达髓系抗原CD13、CD33;检查后,19例由原分期Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ期升至Ⅳ期,18例进展型NHL的IPI提高.结论FCM联合形态学检查提高了骨髓受累的检出率,并能了解骨髓增生程度,提供免疫表型数据,尤对早期浸润和SLL声重要鉴别价值.准确的骨髓检查提高了患者CS和IPI.     

非霍奇金淋巴瘤免疫分型与骨髓细胞形态学的相关性研究

目的:探讨非霍奇金淋巴瘤免疫分型与骨髓细胞形态学的相关性。方法:选择2015年3月至2017年3月我院收治的NHL骨髓侵犯患者63例,进行骨髓涂片细胞形态学检测与流式细胞（FCM）免疫分型检测,分析两种检测之间的联系。结果:按照骨髓细胞形态学分型结果,63例NHL骨髓侵犯患者其中小细胞成熟细胞型40例（63.49%）、大细胞原始型患者6例（9.52%）、大细胞幼稚型10例（15.87%）以及组织细胞型7例（11.11%）。FCM检测根据骨髓瘤细胞特异性抗原表达情况,诊断为B细胞淋巴瘤患者48例（76.19%）、T细胞淋巴瘤患者10例（15.87%）、NK细胞淋巴瘤患者4例（6.35%）以及间变性大细胞淋巴瘤患者1例（1.59%）。FCM诊断48例B细胞淋巴瘤患者中,小细胞成熟细胞型37例（77.08%）、大细胞原始型4例（8.33%）、大细胞幼稚型5例（10.42%）、组织细胞型2例（4.17%）;10例T细胞淋巴瘤患者中,小细胞成熟细胞型3例（30.00%）、大细胞原始型2例（20.00%）、大细胞幼稚型1例（10.00%）、组织细胞型4例（40.00%）;4例NK细胞淋巴瘤患者中,均为大细胞幼稚型（100.00%）;1例间变性大细胞淋巴瘤患者为组织细胞型（100.00%）。结论:非霍奇金淋巴瘤免疫分型与骨髓细胞形态学之间具有着一定的联系,二者联合运用,可提高临床诊断准确性并为临床提供相应的病理分型意见,值得临床推广。     

应用流式细胞仪对176例急性白血病进行免疫表型分析

目的:研究急性白血病(AL)免疫分型特征及诊断价值。方法:选用三色荧光抗体直接标记AL患者骨髓,应用流式细胞术CD45/SSC设门,进行免疫分型。结果:176例AL患者免疫分型,其中未分化型1例,占0.7%;单纯型101例,占57.3%;变异型74例,占42.0%。变异型参照欧洲协作组EGIL积分标准分型,对伴有淋系抗原的急性髓细胞白血病(Ly+-AML)、伴有髓系抗原的急性淋巴细胞白血病(My+-ALL)、混合型白血病(MAL)可进行鉴别诊断。结论:应用免疫分型可以较好地分析每一例白血病,尤其对于抗原交叉表达者及MAL更有意义。     

流式细胞术检测B细胞淋巴瘤骨髓侵犯的初步研究

背景与目的：骨髓是恶性淋巴瘤发展过程中较易累及的结外器官，常规的检测方法包括骨髓活检和骨髓穿刺，但各有其优缺点，流式细胞术（Flow Cytometry，FCM）是近几十年来发展的新型细胞检测技术，在国外已经较广泛的应用于恶性淋巴瘤的诊断和鉴别诊断。本研究拟探讨FCM在检测B细胞淋巴瘤骨髓侵犯中的可行性及有效性．并初步评价其临床病理价值。方法：采用CD45-SSC设门联合三种不同荧光标记的抗CD45、CD5、CD10、CDl9、CD20、CD22、CD23、CD43、FMC-7、入和K抗体在流式细胞仪上对79例B细胞淋巴瘤患者骨髓进行检测，与骨髓细胞形态学检测比较。结果：①在79例B细胞淋巴瘤患者中，用FCM检测出35例（44．3％）患者有侵犯，而骨髓细胞形态学只检测出16例（20．3％），两者有显著性差异（P〈0．05）；符合率为60／79（75。9％）。②用FCM检测，弥漫大B细胞性淋巴瘤（DLBCL）、滤泡性淋巴瘤（FL）及小淋巴细胞性淋巴瘤（SLL）患者在初诊时的侵犯率分别为20．0％、43。8％和100％。③FCM结果阳性率和AnnArbor分期有明显关系，在分期晚的患者FCM阳性机会高（P〈0。001）．有B组症状及复治的患者中FCM检出骨髓侵犯高于相应的组别，但未显示统计学意义（P〉0.05）．与LDH水平和脾脏累及与否无相关（P〉0．05）。④对未确定具体类型的4例骨髓侵犯患者，根据免疫表型能够确定诊断。结论：FCM是检测B细胞淋巴瘤骨髓侵犯的有效方法，较骨髓细胞形态学敏感；且能够起到辅助诊断的作用；对不同类型淋巴瘤初治患者骨髓侵犯与临床表现、治疗反应的相关性尚需扩大病例进一步研究。     

弥漫性大B细胞淋巴瘤侵犯骨髓的病理学观察

 目的　探讨弥漫性大B细胞淋巴瘤（DLBCL）侵犯骨髓的病理学特点、诊断与鉴别诊断。方法　对24例DLBCL侵犯骨髓的骨髓活检HE染色切片进行形态学观察,20例免疫组化（IHC）法进行免疫表型分析。将其中10例髓外部位原发的NHL患者的骨髓与髓外部位瘤细胞的形态学进行对比观察。结果　DLBCL侵犯骨髓的方式依次为：弥漫型14 例,间质型 6例,混合型2例,结节型1 例,窦内型1例。侵犯程度为重度15例,中度4例,轻度5例。瘤细胞形态学类型为中心母细胞型21 例,免疫母细胞型3例。瘤细胞表达CD20、CD45RA、Pax5等一种或多种B细胞的标记。不表达CD3、CD45RO、CD5、CD10、TdT、CyclinD1、CD38、CD68、MPO。10例髓外原发淋巴瘤患者的骨髓与其髓外部位瘤细胞形态一致。结论　DLBCL侵犯骨髓多具有特殊的骨髓病理学特点。少数轻度、间质型浸润以及混有较多小淋巴细胞者, 免疫组化有助于鉴别诊断。骨髓活检对于DLBCL侵犯骨髓的诊断具有重要意义。     

恶性淋巴瘤骨髓受累的免疫表型特征

目的:探讨淋巴瘤骨髓受累的免疫表型特征。方法:采用流式细胞仪CD45/SSC设门方法对34例恶性淋巴瘤患者的骨髓标本进行检测,以骨髓涂片细胞学检查作阳性对照。收集骨髓受累患者的CD分子表达数据。结果:①对34例恶性淋巴瘤患者的骨髓应用流式细胞仪进行检测,发现23例阳性,阳性率67.65%(23/34),95%可信区间(51.92%,83.37%)。②该23例阳性患者中,非霍奇金淋巴瘤(NHL)19例,霍奇金淋巴瘤(HL)4例。NHL患者中B细胞来源免疫荧光单克隆抗体标记抗原出现频率最高的为CD19,CD20;T细胞来源标记抗原出现频率最高的为CD7。而在HL患者中出现频率最高的为CD9。结论:采用流式细胞仪CD45/SSC设门方法,发现非霍奇金淋巴瘤骨髓受累患者免疫表型特征为:B细胞来源:CD19、CD20;T细胞来源:CD7。霍奇金淋巴瘤为:CD9。     

121例淋巴增殖性疾病的流式细胞学免疫表型分析

背景与目的：多参数流式细胞免疫表型分析可提供有力的技术支持,以提高淋巴增殖性疾病诊断的准确率。我们采用流式细胞仪对121例临床怀疑淋巴瘤患者的135份淋巴结、血液、骨髓和脑脊液标本的免疫表型进行分析,观察其在提高诊断准确率和诊断效率方面的作用。方法：所有标本均进行常规形态学、病理学和免疫组化检测,行WHO标准分型;同时对采集的标本制备单个细胞悬液,行多参数流式细胞学检测。比较常规检测和加用流式细胞学免疫表型分析对检测结果的影响。结果：①淋巴结常规病理中3例误诊或按照WHO标准无法分型的病例,经流式检测诊断明确。②97例外周血和骨髓标本,FAB分类诊断明确的88例,均按照新的WHO分类标准重新分型;FAB分类中诊断未明的有9例,经流式细胞仪进一步分析,仅有一例按照WHO标准仍未能明确诊断。③脑脊液标本多参数免疫标志,有助于中枢神经系统白血病／淋巴瘤的诊断。结论：流式细胞仪免疫表型检测可用于淋巴增殖性疾病的诊断和鉴别诊断,以及微小残留病灶的检测,提高了诊断的准确率。     

造血B祖细胞与急性B淋巴细胞白血病细胞的流式细胞术免疫表型分析与鉴别

目的 分析造血B祖细胞与急性B淋巴细胞白血病（B-ALL）细胞在形态学、免疫表型等方面的差异,为造血B祖细胞、微小残留白血病细胞的正确鉴定提供参考.方法 采用流式细胞术对临床确诊的58例B-ALL患者初诊、缓解、复发期的132份骨髓样本进行细胞免疫表型分析,通过CD34/CD10/CD19/CD45或CD34/CD10/CD45/CD19/CD20/CD38抗体组合鉴定造血B祖细胞群.结果 132份骨髓样本中,45份（34％）检出造血B祖细胞群,检测范围0～36％,其中3份样本出现在初诊病例,1份样本出现在复发病例,41份样本出现在缓解病例.66份缓解病例样本中,造血B祖细胞检出率为62％（41/66）.白血病细胞在初诊、复发病例中均占有核细胞群体5％以上,24份缓解病例样本可检出低于5％的残留白血病细胞.造血B祖细胞与白血病细胞共存在28份样本中,其中3份出现在初诊病例,1份出现在复发病例,24份出现在缓解病例.造血B祖细胞CD45呈阴性至弱阳性连续分布,侧向散射信号（SSC）较低,早期造血B祖细胞群CD34＋,随着细胞成熟度的增加,CD34消失.CD19、CD10在造血B祖细胞整个阶段均为阳性,早期CD10表达强度更高.白血病细胞呈“发育阻滞”模式,呈现为较均一的荧光细胞群;SSC值较正常B祖细胞偏高.白血病细胞抗原表达过强或过低的表型在正常造血B祖细胞均未见到,且造血B祖细胞不会出现交叉系列抗原标记,CD20呈阴性至弱阳性的连续分布.结论 造血B祖细胞在B-ALL患者不同阶段均不同程度地存在,尤其在化疗后的骨髓恢复期有一过性增长,分析此阶段的样本鉴定B系群体来源需谨慎.了解正常细胞的发育背景、认知白血病细胞表型的漂移变化模式及掌握多色分析优化抗体组合的流式细胞技术,对白血病细胞的准确鉴定及微小残留病检测的准确性提升具有重要意义.     

流式细胞术在非霍奇金淋巴瘤诊断与分型中的应用

 目的　探讨流式细胞术对非霍奇金淋巴瘤（NHL）诊断与分型的临床应用价值。方法　收集临床怀疑淋巴瘤的患者手术切除的新鲜淋巴结59例,流式细胞术（FCM）检测异常单克隆淋巴细胞数量及其免疫表型,分析FCM诊断及分型的结果与病理组织学诊断的符合率。结果　28例病理确诊NHL的淋巴结标本中,FCM检测到有异常克隆性淋巴细胞的24例,异常淋巴细胞的比例为4.28 %～89.10 %,其中确诊B-NHL 23例,T-NHL 1例。FCM对NHL的诊断与病理组织学诊断的符合率为85.71 %;FCM对B-NHL诊断的特异度为100 %,敏感度为92 %。在FCM确诊的24例NHL中,根据异常细胞表型进一步分型,与病理诊断均相符。结论　FCM能准确确定克隆性淋巴细胞,协助诊断NHL,并在B-NHL的分型和鉴别诊断中起重要作用。     

小儿急性白血病免疫表型和骨髓细胞DNA含量及其相互关系的分析

目的　了解小儿急性白血病（ＡＬ）的免疫表型、异倍体、细胞周期分布状况及其之间的关系。方法　应用流式细胞仪检测了４２ 例初诊为ＡＬ患儿的免疫表型及骨髓单个核细胞（ＭＮＣ）的ＤＮＡ含量。结果　４例ＡＬ患者同时表达了Ｂ系和髓系的抗原，预后差。ＡＬ患儿骨髓细胞周期的Ｓ期细胞百分率明显低于正常对照。而且，ＡＬＬ组中，亚二倍体患者的Ｓ期细胞百分率均值与超二倍体患者、二倍体患者比较存在显著差异性，ＡＮＬＬ组中，ＣＤ３３ ／ＣＤ１３ ＜ １ 患者的Ｓ期细胞百分率均值与ＣＤ３３ ／ＣＤ１３ ＞ １ 患者比较亦存在显著差异。结论　ＡＬ患儿的免疫表型、倍体关系、细胞周期及其之间的关系，与临床预后密切相关。     

急性髓细胞白血病微分化型流式细胞术免疫分型分析

目的探讨流式细胞术（FCM）检测免疫表型在诊断急性髓细胞白血病微分化型（AML—M0）中的意义。方法采用多色FCM分析14例AML—M0病例的各相关抗原表达情况。结果14例AML—M0中,仅1例依据骨髓细胞形态学作出诊断,其余13例均依靠FCM作出明确诊断。在AML—M0中,髓系抗原CD33 14例（100％）表达阳性,CD13和CD117 9例（64％）表达阳性,CD34和HLA—DR12例（86％）表达阳性,一般成熟髓系相关抗原如CD16、CD10、CD14等均阴性,B和T淋巴细胞特异抗原如CD79a和CD3均为阴性,少数原始细胞表达细胞内髓过氧化物酶（MPO）、TdT。常常表达一些淋系但并不特异的抗原如CD7、CD2或CD19,但比淋巴细胞白血病表达的荧光强度弱。结论FCM免疫分型在AML—M0诊断中至关重要。