5个S180克隆细胞株RAPD特征及S180-S2D9传代细胞生物学特性研究

目的 研究5个S180克隆细胞株随机扩增多态性DNA（RAPD）特征以及S180-S2D9传代细胞的生物学特性。方法 运用23条引物对S180-S2D9、S180-S2D7、S180-S1F11、S180-S1H10、S180-S1B11的基因组DNA进行RAPD-PCR扩增,以琼脂糖电泳观察结果;对S180-S2D9原代、25代、50代、75代细胞基因组DNA．进行RAPD分析;计数染色体数目;原代、50代细胞分别接种入KM小鼠腹腔,观察腹水的生长情况及小鼠的存活天数;流式细胞仪测DNA含量。结果 筛选出3条在各克隆株扩增产物间有差异的引物,通过这3条引物分析S180-S2D9的RAPD特征,原代、25代、50代、75代细胞之间的RAPD条带无差异;原代、25代、50代、75代细胞的染色体数差异无统计学意义。原代、50代细胞分别接种于10只昆明小鼠腹腔,两组的存活天数分别为13～23d、13～20d,原代与50代组存活天数的差异无统计学意义。流式细胞仪测DNA相对含量分别为0．3890、0．3542、0．3575、0．3984。以上结果提示,S180-S2D9传到75代时未发现遗传变异。结论 可以运用RAPD-PCR技术对克隆细胞株进行质量控制。S180-S2D9克隆株性质均一,致瘤特性稳定。     

小鼠肝癌H22细胞克隆株的RAPD分析

目的应用随机扩增多态性DNA（RAPD）技术检测小鼠肝癌H22细胞克隆株的遗传变异。方法用47条引物对小鼠肝癌H22细胞的4个克隆株H22-H8D8,H22-H2G4,H22-H2E10,H22-H2C4基因组DNA进行RAPD分析。结果47条引物均能扩增出明显的条带,条带数多为4~10条,片段大小在200~2000 bp之间。其中4条引物的扩增条带具有多态性,表现为带的有无、移动和强弱差异。结论RAPD技术可以用来检测小鼠肝癌H22细胞克隆株基因组之间的差异。     

淋球菌RAPD分型的引物筛选与应用

目的为了研究不同淋球菌菌株的基因多态性,了解不同菌株之间的亲缘关系,选择适当的随机引物。方法以淋球菌基因组DNA为模板,对淋球菌进行RAPD扩增,选择多态性好、重复性好、稳定性强的随机引物,并用S38号引物对不同淋球菌基因组DNA进行指纹图谱区分。结果从Sagon公司50条RAPD随机引物中筛选出8条扩增效果良好的引物,经RAPD扩增出的淋球菌指纹图谱间有明显不同的DNA多态性,可对不同菌株进行聚类分析。结论利用RAPD技术对淋球菌进行随机引物的筛选,可为今后淋球菌的分子流行病学研究奠定基础。     

应用RAPD技术检测小鼠肝癌H22细胞克隆株的遗传学改变

目的：用RAPD技术检测小鼠肝癌H22细胞克隆株的遗传变异。方法：小鼠肝癌H22细胞的4个克隆株H22-H8D8、H22-H2G4、H22-H2E10、H22-H2C4,用47条随机引物经PCR扩增,对扩增产物进行电泳,凝胶分析系统观察结果并照相。结果：47条引物均能扩增出明显的条带,条带数多为4-10条,片段大小在200-2000bp之间。其中4条引物的扩增条带具有多态性,表现为带的有无、移动和强弱差异。结论：RAPD技术可以用来对小鼠肝癌H22细胞克隆株进行遗传检测。     

Zmu-1:DHP豚鼠的随机扩增多态性DNA分析

目的：研究Zmu-1：DHP豚鼠基因组DNA的遗传多态性及其遗传概貌，探讨随机引物PCR(RAPD—PCR)在豚鼠遗传质量检测中运用的可行性。方法：用RAPD—PCR法，对新培育的Zmu—1：DHP豚鼠和对照品系DHP豚鼠的基因组DNA进行PCR扩增。结果：从40条随机引物中，筛选出2条呈多态性的引物，分别是第S1202号和第S1219号引物。Zmu—1：DHP品系的扩增产物无多态性变化，而且其条带与多数DHP品系的个体相同。少数DHP品系的个体呈多态性变化，并找到该品系增加和缺失的特征性条带各一种。结论：Zmu—1：DHP品系的基因纯合性及个体一致性较DHP品系高。二个品系的DNA序列存在较少差异，说明豚鼠品系间遗传结构比较接近。一旦选定具有多态性的引物，RAPD—PCR法可以区分豚鼠品系，适用于豚鼠遗传质量检定。     

S180-S2D9传代细胞的DNA指纹图谱、细胞核型、生物学特性及DNA含量的比较研究

目的:通过比较S180-S2D9传代细胞的DNA指纹图谱、细胞核型、生物学特性及DNA含量,对其进行质量控制.方法:提取S180-S2D9传代细胞的DNA后,进行RAPD分析;细胞培养加秋水仙碱,涂片、染色后,显微镜下计数染色体数目;原代、50代、100代细胞分别接种KM小鼠腹腔,观察腹水的生长情况及小鼠的存活天数;培养的细胞用70%乙醇固定,流式细胞仪测DNA含量.结果:与原代、50代细胞相比,100代细胞的DNA指纹图谱发生变异;50代、100代、100代克隆株1、100代克隆株2、100代克隆株3,其染色体均数做方差分析表明,两两单位比较均无显著统计学差异(P＞0.05).原代、50代、100代细胞分别接种于10只昆明小鼠腹腔,3组的存活天数分别为13～23d、13～20d、10～14d,与原代、50代相比,100代均数有显著统计学差异(P＜0.05),原代与50代均数比较无显著统计学差异(P＞0.05).流式细胞术DNA含量分析表明,5株细胞的相对分子质量分别为0.3575、0.3984、0.3542、0.3919、0.3890.结论:在细胞核型与DNA含量的比较上,5株细胞无显著统计学差异;在DNA指纹图谱与对小鼠致死性方面提示传代细胞发生了变异.     

中国地鼠RAPD分析体系的优化

目的　优化中国地鼠RAPD分析体系。方法　以30条引物对山医群体中国地鼠的两个家系基因组DNA在各种不同条件下进行RAPD ,分析比较扩增结果。结果　在下列反应体系及温度循环参数下结果较好:在2 5 μl的反应体系中含有10×buffer 2 5 μl,dNTP 0 2mmol L ,Mg2 2 0mmol L ,引物0 2 μmol L ,Taq酶1 5U ,模板DNA 15ng ,扩增程序为94℃预变性3min后进入循环体系,94℃变性30s ,36℃退火5 0s ,72℃延伸1min ,4 0个循环后接7min延伸。结论　以上述反应体系及温度循环参数进行中国地鼠RAPD ,扩增结果稳定     

三个鼠源性肿瘤细胞系的RAPD分析

目的：探讨鼠源性肿瘤细胞系基因组不稳定程度或基因组损伤与肿瘤发生的关系。方法：用145条RAPD引物对鼠源性Lewis肺癌、SCC891乳腺癌及B16黑色素瘤及其相应正常组织基因组DNA进行RAPD扩增，扩增产物在含溴化乙锭的1．5％琼脂糖凝胶中电泳，紫外透射仪上观察照相。结果：145条引物绝大多数能扩增出清晰、明显的条带。多数引物扩增出的条带呈单态性，在肿瘤及其相应正常组织之间无差异。部分引物扩增出的DNA序列在肿瘤组织与其相应正常组织间存在差异，表现为多态性，即肿瘤组织与其相应正常组织的DNA片段相比，出现带的缺失、增加、移动和强度变化。扩增Lewis肺癌的105条引物中有25条表现多态性；扩增B16黑色素瘤的105条引物中有24条表现出多态性；扩增SCC891乳腺癌的120条引物中有18条表现出多态性。结论：RAPD扩增结果表明三个恶性度较高的瘤株，其基因组损伤程度亦较高，表现为基因拷贝数的增加或等位基因的丢失，进步证实了细胞的癌变与基因组某些改变密切相关。     

红鲫C1HD近交系RAPD标记的建立

目的建立红鲫C1HD近交系的RAPD标记。方法从80条随机引物中筛选出20条扩增效果和多态性较好的引物,对8尾红鲫C1HD近交系和8尾普通红鲫基因组DNA进行RAPD扩增。结果S333引物扩增出一条特异性条带,大小约为2.1 kb。结论S333引物扩增出的特异性条带可以作为区分普通红鲫与红鲫C1HD近交系的分子遗传标记。     

申克孢子丝菌的随机扩增DNA指纹分型

目的：对申克孢子丝菌进行基因分型研究,探索申克孢子丝菌的基因分型标准。方法：用光镜对2株标准株,4株环境分离株和24株临床分离菌株进行形态特征观察,再用随机扩增DNA指纹方法(RAPD)对DNA进行PCR扩增,根据扩增产物的电泳带型来分析DNA多态性。结果：30株菌株镜下可见2种形态结构;30株申克孢子丝菌的DNA指纹带型不同;多引物聚类分析表明,3条引物可将30株不同地区来源申克孢子丝菌分作11个型。结论：(1)在我国申克孢子丝菌中存在2种不同的形态结构。(2)申克孢子丝菌中存在不同的基因型。(3)RAPD法用于申克孢子丝菌菌株鉴定是一种快速、方便、可行的方法。     

长爪沙鼠与实验大小鼠RAPD图谱比较研究

目的比较长爪沙鼠与实验大、小鼠的RAPD图谱，为实验室日常鉴别动物品种品系提供一种分子生物学方法。方法提取基因组DNA（封闭群沙鼠、近交系小鼠BALB／c和C57BL／6、封闭群小鼠KM、近交系大鼠F344和BN以及封闭群大鼠SD），用6条随机引物对其进行PCR扩增。结果在6条随机引物中，p1、p2、p3、p4和p6这5条引物扩增的条带差异较为明显，表现为不同的RAPD图谱。结论RAPD方法可用于鉴定长爪沙鼠与实验大小鼠的差异。     

中华按蚊不同地理株基因组DNA的多态性

目的：研究中华按蚊不同地理株基因组ＤＮＡ的多态性。方法：应用ＲＡＰＤ技术，用２０个随机引物（ＯＰＥ０１￣ＯＰＥ２０）对江苏，福建，海南，贵州，陕西５个省区中华按蚊的基因组ＤＮＡ进行了ＰＣＲ扩增。     

Characterization of Sporothrix schenckii by random amplification of polymorphic DNA assay

Objectives To investigate the DNA polymorphism of Sporothrix schenckii(S.schenckii)and to find the relationship between DNA patterns and geographic areas and clinical manifestations.Method The total DNA was extracted with hexadecyltrimethyl-ammonium gromide.Random Amplification of Polymorphic DNA(RAPD) assay was used to study DNA typing of 24 strains of S.schenckii collected from different aress and isolated from different clinical types.Results Of seven random primers used,three primers(OPAA1,OPD18 AND OPB07)gave good reactions,the sequences of which were 5‘-ACCCGACCTG-3‘,5‘-GAGAGCCAAC-3‘,5‘-GGTGACGCAG-3‘ respectively.The RAPD patterns of the 24 isolated were not completely identical,showing certain degrees of hereditary variability.Different isolates showed a common conserved dna band with the same primer.Dirrerent clinical types showed different genotypes.Conclusion RAPD analysis is useful in DNA typing of S.schenckii,the DNA band type of which is related to geographic origin and Clinical manifestation.     

假丝酵母性阴道炎的病原菌检测及RAPD分析

目的：探讨女性假丝酵母性阴道炎的病原菌种类,分析其随机扩增DNA多态性（RAPD）,为该病的临床诊断及流行病学监测提供依据。方法：刮取106例疑似假丝酵母性阴道炎患者道分泌物,分离培养并鉴定病原菌;利用10种随机引物（RAPD 1~10）对分离病原菌进行RAPD分析。结果：①分离获得假丝酵母72株,其中白假丝酵母56株（77.78%）,非白假丝酵母16株（22.22%）,包括光滑假丝酵母6 株（8.33%）、热带假丝酵母4 株（5.56%）、克柔假丝酵母1 株（1.39%）及其他假丝酵母5 株（6.94%）;②RAPD分析表明：有2种引物（RAPD2和RAPD5）可以获得较清晰、稳定的特异性带型,具有较明显的种间遗传变异性和种内遗传相似性。结论：假丝酵母性阴道炎病原菌以白假丝酵母为主。随机引物RAPD2和RAPD5比较适于白假丝酵母和热带假丝酵母的分型、鉴定。     

应用40条引物进行不同品系小鼠RAPD遗传检测的初步研究

目的：探讨运用ＲＡＰＤ－ＰＣＲ对小鼠进行遗传检测的可能性,筛选在各品系小鼠间具有多态性的引物。方法：运用４０条引物对ＴＡ１、ＢＡＬＢ／ｃ、ＮＩＨ、ＳＣＩＤ、Ｔ７３９、ＤＢＡ／２、６１５、ＢＡＬＢ／ｃ－ｎｕ／ｎｕ等９个品系小鼠的ＤＮＡ进行ＲＡＰＤ－ＰＣＲ扩增,以琼脂糖凝胶电泳观察结果。结果：４０条引物中只筛选出２条多态性引物,其它３８条引物扩增结果无品系间多态性。结论：ＲＡＰＤ－ＰＣＲ方法可以区分９     

BALB/c突变无毛小鼠特异性免疫功能的研究

选用9条随机引物，对Wistar,WKY,F344三个品系的近交系大鼠进行了随机扩增多态性DNA（RAPD）分析。结果显示同一品系大鼠不同个体之间的RAPD图谱都相同，表明所测的三个品系大鼠内部遗传背景均一，在不同品系大鼠之间的RAPD结果有差异。Wistar与WKY之间，Wistar与F344之间，WKY与F344之间的共享度分别为87.9%,98.5%和89.2%。RAPD方法可以作为一种检测近交系大鼠种群内的遗传变异及区分不同品系近交系鼠的遗传检测方法。