微卫星DNA分子标记及其在实验动物遗传分析中的应用

分子遗传标记的研究一直是遗传学研究中的一个热点。目前 ,各种分子遗传标记研究在陆地生物学中已深入开展 ,在实验动物中分子遗传标记的研究也是方兴未艾。在各种分子遗传标记中 ,微卫星DNA标记以其特异性的扩增、稳定性、重复性好、能较好地反映物种的遗传结构和遗传多样性变     

RP-HPLC法测定beagle犬血浆中芦丁的含量

目的:建立复方芦丁片中芦丁在beagle犬血浆中含量测定的RP-HPLC法。方法:色谱柱为Merck C18(4.6 mm×250mm,5μm),流动相为乙腈-0.2%冰醋酸溶液(20∶80);流速1.0 mL.min-1;检测波长为360 nm;柱温25℃;进样量20μL。结果:芦丁峰形对称,血浆中内源性杂质不干扰芦丁的测定,保留时间在10分钟左右。血浆中平均回收率为98.92%~112.33%,芦丁最低检出量为0.18 ng。结论:RP-HPLC可用于犬血浆中芦丁的含量测定。     

猕猴微卫星标记的遗传分析

目的 人工繁育猕猴所面临的最大问题是繁殖群体过小所导致的近亲交配,为了防止近亲交配带来的不利影响,采用微卫星分子标记建立猕猴人工繁殖种群的准确系谱非常重要.方法 本研究采用荧光标记引物PCR和毛细管电泳分型的方法将筛选出的14个微卫星位点应用于64只猕猴人工繁育种群,并通过个体鉴别、亲子鉴定以及群体遗传结构分析的方法对其进行评价.结果 这些位点在猕猴中均属于高度多态位点,其中7个位点的期望杂合度（He）和多态信息含量（PIC）值均在0.8以上,14个位点的累计个体鉴别率（CPI）为1.21＆#215;10-18,单亲已知时累积排除率（CPE2）和双亲未知时累积排除率（CPEl）可达0.9999和0.9985.结论 这些位点能够对猕猴种群进行准确的个体鉴别、亲子鉴定和群体遗传学参数计算,是可靠、高效的分子标记,或可应用于猕猴人工饲养种群的遗传学管理.     

经股动脉途径射频消融术建立beagle犬永久性房室传导阻滞模型

目的探讨经股动脉途径射频消融术建立beagle犬永久性房室传导阻滞模型的可行性,并比较其与传统造模方法的利弊.方法将12只beagle犬分成两组,预置起搏器后,左心室消融组(6只)经股动脉途径于主动脉窦下左心室间隔上部消融建立房室传导阻滞模型,右心室消融组(6只)经股静脉途径于koch三角处消融建立房室传导阻滞模型.两组以建立完全房室传导阻滞为终点.术后随访4周后处死动物,比较造模成功率、手术并发症及模型稳定性.结果左心室消融组成功率大于右心室消融组,术中并发症小于右心室消融组,左心室消融组手术时间及X线曝光时间短于右心室消融组(均P<0.05),两组模型稳定性差异无统计学意义(均P>0.05).结论经股动脉途径射频消融术建立beagle犬永久性房室传导阻滞模型较传统途径消融法成功率高且并发症少,在有条件的实验室和有经验的单位,可优先选用经股动脉射频消融术建立房室传导阻滞模型.     

小鼠11个品系20个微卫星基因位点的遗传分析

目的利用PCR对近交系小鼠11个品系的20个微卫星基因座进行遗传检测,为实验室日常检测近交系小鼠的遗传背景提供一种分子生物学方法.方法用20个微卫星引物对11个品系近交系小鼠的基因组DNA进行PCR扩增.根据MMDBJ数据库信息,已知品系C3H、DBA、BALB/c和C57BL/6的多态性位点大小,由此可推知其他品系C57BL/6-Bg、C57BL/10、TA1、TA2、T739、M615和SCID的多态性位点大小.结果应出现的220条条带中有193条与预期的一致.结论利用这20个微卫星基因位点可以将11个品系的近交系小鼠区分开来,近交系小鼠具有丰富的遗传多样性,这些结果对于近交系小鼠的遗传检测具有重要指导意义.     

封闭群比格犬遗传标志微卫星引物的筛选

目的筛选出有效的微卫星引物,利用微卫星遗传标志对封闭群内比格犬的个体遗传情况进行分析。方法从文献中筛选杂合度在0．4～0．8的微卫星引物24对,对本场英系比格犬封闭群中随机筛选出的12只比格犬的混合基因组进行了扩增。结果24对引物中,有7对微卫星引物的扩增结果具有较好的多态性和重复性。利用这7对引物,对8只玛斯公司美系比格犬的混合基因组进行了扩增,结果与本场英系比格犬的扩增结果具有明显的差异。又利用这7对引物对随机筛选出的6只比格犬的个体遗传情况进行了分析,其中3只比格犬表现出明显的差异。结论作者筛选的7对微卫星引物可以对本场比格犬种群的个体遗传情况进行初步分析。     

微卫星DNA与生化标记分析对长爪沙鼠群体遗传分析的比较

目的比较生化标记和微卫星DNA标记方法对长爪沙鼠群体遗传分析的可靠性。方法应用27个生化位点和13个微卫星DNA位点,采用已建立的生化标记和微卫星DNA标记分析方法对国内2个长爪沙鼠群体进行遗传分析,计算并比较两种方法测得的各群体遗传参数。结果生化基因位点中有13个位点在整体中呈现遗传多态性,多态率为48.1%;微卫星位点中有11个位点在整体中表现出多态性,多态率均为84.6%。两种方法测得的平均有效等位基因数趋于一致,微卫星DNA的多态位点百分率和平均杂合度均明显高于生化标记方法。但生化标记和微卫星DNA检测对两个长爪沙鼠群体的遗传多样性差异反映一致,所反映的群体平衡状况也基本一致。结论生化标记分析和微卫星DNA方法均可较好地反映长爪沙鼠群体遗传结构。     

微卫星标记及其在实验动物中的应用

微卫星序列广泛存在于各类真核基因组中，是一种简单序列重复（simple sequence repeats，SSR）。由于它具有多态性高、结果稳定可靠等特点，因此是一种十分理想的分子标记，在遗传图谱构建、数量性状位点（QTL）定位、标记辅助选择、遗传多样性评估、遗传监测等领域都有着重要的应用价值。     

利用双重PCR.技术研究长爪沙鼠的微卫星结构

目的 为了建立快速检测长爪沙鼠群体遗传多样性的方法及获得Z:ZCLA长爪沙鼠封闭群现用微卫星位点的结构.方法 利用17个微卫星位点(9个来自长爪沙鼠,8个来自大小鼠)进行了PCR反应体系及反应条件的优化,组合了6组双重PCR及两个复合式点样,用上述8个组合对普通级z:ZCLA长爪沙鼠封闭群43、44、45三个世代核心群各.100只种鼠进行遗传检测.结果 三个世代的300只种鼠的检测结果表明,9个长爪沙鼠位点均为微卫星,其中7个位点为完全型的微卫星,1个为复合型,1个为不完全型,多态性主要表现在核心序列的重复;来自大小鼠的8个微卫星位点,有7个在z:ZCLA长爪沙鼠核心群中得到有效扩增,只有3个位点在三个世代中均有出现,对测序结果分析后发现,其核心序列均为小卫星.结论 来自长爪沙鼠的位点,无论结构还是遗传方式均符合微卫星遗传标记的特点,可用作检测长爪沙鼠的群体遗传多样性.     

利用微卫星标记对五指山小型猪近交群的遗传分析

目的 分析五指山小型猪近交群的遗传变异及近交程度.方法 利用26个微卫星基因座对五指山小型猪近交群进行了遗传多样性检测,统计了各位点等位基因组成,并计算它们的平均基因纯合率、平均多态信息含量和平均杂合度.结果 近交群26个基因座的共检测到180个等位基因,平均等位基因数为6.92,平均基因纯合率为56.57％,平均多态信息含量为0.6042,平均杂合度为0.4478.结论 五指山小型猪近交群具有较高的纯合度,保持了一定的遗传稳定性.     

西藏小型猪线粒体D-loop区及微卫星多态性的遗传学分析

目的通过分析西藏小型猪线粒体控制区(D-loop区)及微卫星位点的遗传多态性,检测西藏小型猪的遗传背景,从而为其作为实验动物提供分子生物学方面的可靠依据。方法利用特异性引物对西藏小型猪的线粒体D-loop区及10个具有多态性的微卫星位点进行扩增,割胶纯化并对线粒体D-loop区进行测序,另外采用聚丙烯酰胺凝胶电泳的方法分离微卫星位点的等位基因。结果西藏小型猪线粒体D-loop区全序列没有多态性,微卫星位点则具有高度的遗传多态性和杂合度,分别为0.584和0.573。结论西藏小型猪线粒体基因组无多态性,证明其在母系进化和遗传上与其他猪种较为一致,本实验所用的西藏小型猪生长于一个封闭的环境,导致其微卫星位点遗传多态性的中低度水平。     

微卫星标记对封闭群和近交第五代WHBE兔的遗传分析

目的分析比较封闭群白毛黑眼（WHBE）兔和近交第五代（F5）WHBE兔的微卫星结构的变化,寻找针对WHBE兔品系的遗传监测基因位点并应用于实际监测。方法利用21个微卫星位点,通过微卫星分子标记技术对封闭群和近交F5代WHBE兔进行遗传多样性检测和对比。结果在21对微卫星引物中筛选出扩增产物稳定并且具有多态性的11对微卫星引物。封闭群WHBE兔在每个位点上的等位基因数为3－8个不等,11个位点的平均有效等位基因数为3．0344个,平均杂合度为0．4956,平均多态信息含量（PIC）为0．6130,多位点累积个体识别率达到100％,多位点累积非父排除概率（CPE）在双亲信息都是未知情况下的为0．9683,而在得知任一亲本信息的情况下,CPE值为0．9980;近交F5代WHBE兔在每个位点上的等位基因数为3-9个不等,11个位点的平均有效等位基因数为1．8132个,平均杂合度为0．3808,平均多态信息含量（PIC）为0．5241,多位点累积个体识别率达到100％,多位点累积非父排除概率（CPE）在双亲信息都是未知情况下的为0．9264,而在得知任一亲本信息的情况下,CPE值为0．9933。在10个封闭群WHBE特有的等位基因中（与日本大耳白兔、新西兰兔DNA多态性比较）,其中7个微卫星位点的8个等位基因为封闭群与近交F5代WHBE兔所共同特有。近交F5代WHBE兔的平均有效等位基因数和平均杂合度均比封闭群低,说明经过5代培育,近交F5代的基因纯合度高于封闭群,具有更优的遗传稳定性。结论本研究选取的21个微卫星位点中的11个适用于WHBE兔近交系培育的遗传监测。     

微卫星技术对近交系小鼠遗传质量的分析

目的对14个品系近交系小鼠24个微卫星座位进行遗传分析,以期用微卫星位点分析法区分不同近交系小鼠。方法通过Mouse Genome Informatics数据库确定合适的微卫星位点和引物,对近交系小鼠基因组DNA进行扩增,分析不同品系小鼠在所选微卫星座位的基因片段,与数据库小鼠品系数据进行比较,并对14个品系近交小鼠进行了DNA多态性分析。结果24个微卫星位点在不同品系的小鼠之间具有多态性,不同品系小鼠之间的遗传距离为0.045~1.526;在不同的亚系之间也有具有多态性。结论微卫星标记方法能区分不同的近交小鼠品系、近交小鼠亚系,为小鼠遗传质量的检测提供了一个快捷简便的方法。     

微卫星标记对高原蕨麻猪的遗传多样性研究

目的探讨蕨麻猪的亲缘关系,遗传多样性,是否受外来血缘的影响。方法用9个微卫星DNA标记对5群猪进行等位基因频率、遗传距离、系统发生树构建和主成分等分析。结果微卫星标记在125个个体中,共检测出148个等位基因,蕨麻猪最少(55个)。蕨麻猪与兰州猪的遗传距离DA和标准遗传距离DS最大,分别为0.6781和1.3312,DA、DS分别用UPGMA和NJ构建了四种系统发生树,都是蕨麻猪聚为一类,其余4种猪聚为一类。主成分1(PC1)为62.174%,看作是蕨麻猪的代表,与其他4群猪差异较大。结论蕨麻猪与兰州、武威、临洮和青海四群猪相比,遗传距离大,主成分差异大,亲缘关系较远,蕨麻猪比较纯,没有受到这4群猪血缘的影响。     

10个近交系小鼠的微卫星位点分析及其在遗传监测中应用的探讨（一）

选用不同染色体上的８个微卫星位点，应用ＰＣＲ技术对１０个品系的近交系小鼠进行遗传分析，研究结果表明：在无任何亲缘关系的近交系小鼠品系之间，该８个微卫星位点均具有不同的等位基因。含有不同等位基目的微卫星位点所占的百分比从ＭＳＭ／ＭＳ与Ｃ３Ｈ／ＨｅＪ的１００％到（ＣｘＳ）Ｆ与Ｃ５７ＢＬ／６Ｊ间的２５％，平均５６．７２％，在重组近交系间及重组近交系与亲本之间，此比率从（ＣｘＳ）Ｄ或（ＣｘＳ）Ｍ与ＢＡＬＢ／ＣＨｅＡ间的５０％到（ＣｘＳ）Ｄ或（ＣｘＳ）Ｍ与ＳＴＳ／Ａ，（ＣｘＳ）Ｄ与（ＣｘＳ）Ｍ间的２５％，此８个微卫星位点有可能做为在基因水平上进行近交系小鼠遗传监测的标记。     

用12对微卫星引物对版纳小耳猪近交系的遗传学分析

目的　分析版纳小耳猪近交系种群的遗传变异及近交程度。方法　利用 12个微卫星基因座对版纳小耳猪近交系进行了遗传检测。结果　两个亚系以及各家系的聚类情况与小型猪系谱分布一致。且各家系基因纯合率均较高。结论　版纳小耳猪近交系不仅分化为若干个含有不同性状的家系 ,而且也达到了一个很高的近交程度。     

微卫星DNA多态性在十种近交系小鼠遗传监测中的应用研究

目的：研究微卫星DNA多态性在近交系小鼠遗传监测中的应用。方法：选取小鼠不同染色体上的16个微卫星位点，应用PCR技术对常用的10个近交系小鼠进行了微卫星DNA多态性分析。结果：14个微卫星DNA具有稳定扩增效果，在同一品系不同个体之间表现单态性；在不同品系之间表现多态性。结论：运用所筛选的14个位点进行微卫星多态性分析，能够快速、经济地对近交系小鼠进行遗传监测。     

食蟹猴微卫星DNA标记遗传监测及多态性分析

目的 研究国内食蟹猴种群的遗传背景特性,建立食蟹猴种群遗传质量监测方法.方法 采用微卫星DNA遗传标记技术对50只食蟹猴种群个体进行遗传质量监测及DNA多态性分析.结果 从100个微卫星DNA位点中筛选出20个多态性高的位点,其食蟹猴种群个体的等位基因数目为5-10条,个体间均呈现高度的多态性;其观察等位基因数(Na)为5.0～10.0,有效等位基因数(Ne)为4.6118～8.3404,基因多样性(H)为0.7832～0.8801和香隆信息指数(I)为1.5651～2.1592.结论 本实验有效地分析了食蟹猴种群的遗传多态性,为今后筛选特异性微卫星位点来建立食蟹猴种群遗传质量监测方法提供了理论依据.     

应用微卫星和下颌骨形态分析法对不同昆明小鼠种群进行遗传分析

目的为丰富昆明小鼠的遗传学数据,探究其遗传监测方法,应用微卫星和下颌骨形态分析法对不同昆明小鼠种群进行遗传分析。方法从辽宁省两个种群选择SPF级昆明小鼠各30只,选取小鼠不同染色体上10个多态信息丰富的微卫星位点,以PCR扩增和PAGE电泳分型技术测定两个种群的杂合度(he)、多态信息含量(PIC)、遗传距离(DA)等遗传参数;常规方法测定下颌骨11项形态变异参数。结果两个昆明小鼠种群共检测出28个等位基因,31个基因型,he为0.472,PIC为0.382;A种群共检出27个等位基因,28个基因型,he为0.525,PIC为0.402,B种群共检出26个等位基因,27个基因型,he为0.418,PIC为0.361,两个种群遗传距离为0.076,A种群的遗传多样性略高于B种群。两个种群下颌骨形态存在差别,有5项参数达到差异显著或极显著(P﹤0.05或P﹤0.01)。结论两个昆明小鼠种群的遗传距离相近,存在微弱的遗传分化。