西藏小型猪MSTN基因5''调控区的酶切多态性分析

目的对西藏小型猪MSTN基因进行PCR—RFLP基因多态性分析，并对五指山小型猪、贵州香猪和巴马小型猪进行MSTN基因多态性的比较研究。方法以42头西藏小型猪、17头五指山小型猪、7头巴马小型猪和22头贵州香猪作为研究对象，对猪MSTN基因5’调控区进行了PCR—RFLP多态性研究。结果1、不同猪种之间的基因型频率和等位基因频率有显著性差异（P=0．000），西藏小型猪的MSTN基因表现出3种基因型TT（9．52％）、AA（61．90％）、TA（28．57％），T和A的频率分别为23．81％和76．19％；五指山小型猪的MSTN基因表现出2种基因型TT（82．35％）、AA（17．65％），T和A的频率分别为82．35％和17．65％；贵州香猪的MSTN基因表现出2种基因型TT（81、82％）、TA（18．18％），T和A的频率分别为90．91％和9．09％；巴马小型猪的MSTN基因表现出2种基因型TT（71．43％）和TA（28.57％），T和A的频率为85．71％和14．29％。2、不同MSTN基因型的西藏小型猪的初生重（P=0．761）和离乳重（P=0．319）无显著性差异。结论西藏小型猪、五指山小型猪、贵州香猪和巴马小型猪的MSTN基因5’调控区存在多态性，但暂不能把MSTN基因做为西藏小型猪繁殖性能的分子标记。     

米非司酮对恒河猴促性腺激素分泌水平的抑制作用

目的测定西藏小型猪以及巴马小型猪、贵州香猪和五指山猪的mtDNA控制区5’端序列,比较研究其遗传变异和与国内家猪的亲缘关系。方法扩增四种小型猪的mtDNA控制区5’端,测序并进行所测序列多重比对,确定变异位点、单倍型,并建立亲缘关系树。结果与荣昌猪相比,西藏小型猪mtDNA控制区5’端侧翼区704bp,有20个变异位点,由此归纳出26个单倍型;其中有两种主体单倍型,三个转换位点（305,500,691）的碱基分别为t,a,a和c,g,g。巴马小型猪、贵州香猪和五指山猪mtDNA控制区5’端变异位点较少,分别只有4、4、3种单倍型。亲缘关系树的分析表明,西藏小型猪与其它三种小型猪有较近的亲缘关系。结论西藏小型猪群体存在遗传分化,与巴马小型猪、贵州香猪和五指山猪亲缘关系较近;巴马小型猪、贵州香猪和五指山猪遗传均一性较高,可能与长期的人工选择有关。     

中国3种特有小型猪品系脂联素受体1基因外显子5的多态性分析

目的探讨我国三个特有的小型猪品系-中国农大小型猪，五指山小型猪，广西巴马小型猪脂联素受体1基因多态性分布，为这些小型猪在代谢性疾病和2型糖尿病研究中的应用提供基础资料。方法提取三个品系小型猪血液基因组DNA，针对脂联素受体1基因外显子5～内含子5的部分序列进行PCR扩增，对产物进行鉴定和测序，分析基因多态性。结果在所扩增的片段中共检测出5个sNPs——sNP1：G138A，发生在所有的小型猪品系中，并导致第45位的氨基酸由甘氨酸（Gly）转变为谷氨酸（Glu）；SNP2：G185A，所有的纯合突变均发生在五指山小型猪品系中（4／6，66．67％），而所有的杂合突变则发生在中国农大小型猪品系中（3／10，30％）；SNP3：G200A，全部发生在中国农大小型猪品系中，且均为杂合突变（3／10，30％）；SNP4：C295T，发生在广西巴马小型猪品系中的突变既有杂合突变（1／6，16．67％）也有纯合突变（2／6，33．33％），发生在中国农大小型猪品系中的突变全为杂合突变（2／10，20％）；SNP5：T337G，只出现在中国农大小型猪品系中，且为杂合突变（1／10，10％）。结论SNP1，在所有测定的小型猪品系中检出，这可能是所测小型猪共有的特性。SNP2，可能是小型猪品系之间的差异。SNP3和SNP4，可能是小型猪品系之间的差异，也可能是个体的差异。SNP5，可能是个体差异。     

两个国内小型猪品种GH基因部分序列的多态性分析

目的对西藏小型猪和广西巴马小型猪生长激素基因(GH基因)部分序列的多态性进行分析。方法采用内切酶ApaI和Hin6I对西藏小型猪(108头)和广西巴马小型猪(132头)GH基因-119 bp～+486 bp之间的区域进行PCR-RFLPs分析。结果 (1)从ApaI酶切产生的结果来看,ApaI酶切产生A(449 bp+101 bp+55bp),B(316 bp+133 bp+101 bp+55 bp)两种等位基因。等位基因A的频率高于等位基因B,等位基因A为优势基因。AA基因型频率高于AB和BB基因型频率;(2)从Hin6I酶切产生的结果来看,Hin6I酶切产生G1(605bp)、G2(498 bp+107 bp)、G3(449 bp+156 bp)、G4(449 bp+107 bp+49 bp)四种等位基因。等位基因G4的频率高于等位基因G1、G2、G3。等位基因G1频率很低。基因型G2G3、G2G4、G3G4、G4G4的频率较高。(3)由酶切产生的基因和基因型多态性,发现西藏小型猪与广西巴马小型猪在该基因部分序列差异不显著(P>0.05)。结论国内的优质实验用小型猪,如西藏小型猪和广西巴马小型猪等位基因A频率均较高。     

云南滇南小耳猪与广西巴马小型猪mtDNA D-Loop的初步研究

目的研究封闭群滇南小耳猪与广西巴马小型猪线粒体DNA（mtDNA）的多态性,探索小型猪遗传监测的方法。方法用18种限制性内切酶对23头滇南小耳猪和21头广西巴马小型猪mtDNA D-loop的PCR产物进行RFLP分析。结果滇南小耳猪和广西巴马小型猪的mtDNA D—loop在品种内和品种间均表现出相同的酶切图谱,未见多态性。结论滇南小耳猪与广西巴马小型猪mtDNA D—loop的遗传多样性贫乏,mtDNA PCR—RFLP技术在其遗传监测中不具应用价值。     

我国小型猪品系胰岛素受体底物1基因外显子1的多态性分析

目的 探讨我国特有的三个小型猪品系-中国农大小型猪、五指山小型猪、广西巴马小型猪胰岛素受体底物1基因多态性分布,为这些小型猪在代谢性疾病和2型糖尿病研究中的应用提供基础资料.方法 提取三个品系小型猪血液基因组DNA,针对胰岛素受体底物1基因外显子1的部分序列进行PCR扩增,对产物进行鉴定和测序,分析基因多态性.结果 在所扩增的片段中共检测出2个SNPs,第2 853位,T转换为C;第2 870位,C颠换为G,导致第956位的氨基酸由丙氨酸(A1a)变为甘氨酸(Gly).结论 本实验检测出的两个SNPs均发生在中国农大小型猪中,所检测的五指山小型猪和广西巴马小型猪未发现SNPs,这可能是因为小型猪品系之间存在遗传差异所致.     

我国特有三个小型猪品系PGC-1基因外显子8的多态性分析

目的分析我国特有的三个小型猪品系巴马小型猪、中国农大小型猪、五指山小型猪过氧化物酶体增殖物激活受体γ协同激活子1基因第8外显子的单核苷酸多态性（SNPs）分布特点,为我国小型猪在糖尿病和代谢性疾病研究中提供基础资料。方法以三个品系小型猪基因组DNA为模板,应用特异性引物进行PCR扩增,扩增产物纯化测序,进行BLAST比对分析。结果测序结果表明在小型猪PGC-1基因外显子8有5个单核苷酸多态性位点为：Ala354Val（450C→T）,Gly363Gly（478C→T）,     

西藏小型猪GH基因部分序列的SNP分析

目的：对西藏小型猪GH基因（部分序列）进行SNP分析,筛选体型较小的基因型。方法采用PCR产物直接测序法对108头西藏小型猪GH基因5′端部分片段进行单核苷酸多态性（ SNP）分析。结果通过比对发现GH基因共有5个变异位点,其中T45 C位点的多态信息含量最高。不同基因型生长性状比较的结果显示：在GH基因中T45C突变位点上TC基因型6～8月龄的西藏小型猪的腹围值较小,G84A突变位点上AA基因型3～5月龄的西藏小型猪的体重、体长值较小,G93A突变位点上GG基因型6～8月龄的西藏小型猪的体长、体高值较小。结论在GH基因中T45C、G84A、G93A位点突变的TC、AA、GG基因型可能与体型较小有关。同时发现西藏小型猪在以上位点遗传变异程度大,具有较高的杂合度和遗传多样性,可以为选育工作提供比较丰富的素材。     

西藏小型猪的线粒体DNA控制区分析

目的 研究西藏小型猪的遗传标记以及与其他国内地方猪的亲缘关系.方法 扩增102 头西藏小型猪以及16 头巴马小型猪、17 头贵州香猪的线粒体DNA控制区,测序并与国内其他猪进行比较.结果 西藏小型猪线粒体DNA D-loop区分三个区域.串联重复序列区处于中间位置,包含有15～29 个10 bp的重复片段,分为A、B 两种类型.D-loop 3′端340 bp,与国内其他猪的序列相同比较保守;5′端704 bp,共有22个变异位点.由22 个变异位点中归纳出25 个单倍型,其中有两种主要的单倍型,分别占34.4%和36.6%.根据三个转换位点:305、500、691,将西藏小型猪分成了两组,几乎与串联重复序列所分的A、B两组类型相对应.与西藏小型猪相比,巴马小型猪和贵州香猪D-loop 5′端变异位点较少,分别只有4 种和2 种单倍型,串联重复区也只有一个类型.结论 西藏小型猪可能有两个母系祖先并且与我国西南地区的品种猪有较近的亲缘关系;不同的串联重复片段类型和5′ 端的变异位点可以联合组建西藏小型猪的遗传标记.     

实验用藏猪和巴马小型猪线粒体DNA控制区碱基序列比较

目的：分析比较实验用藏猪和巴马小型猪线粒体DNA控制区D．100p区碱基序列的差异,探讨小型猪的遗传标记。方法：提取59头藏猪和16头巴马小型猪血液基因组DNA,设计特异引物扩增mtDNAD．100p,从凝胶中纯化后直接测序,进行比较。结果：2种小型猪mtDNAD-loop都存在串连重复序列区和非重复序列区（5’端和3’端）;重复序列区处于中间位置,藏猪有2种类型（A型和B型）,巴马小型猪只有1种类型（A型）;藏猪D—loop5’端（704bp）发现有20个变异位点,其中有3个主要的转换位点：305,500,691,巴马小型猪未发现多态位点,与藏猪以及其他猪相比,巴马小型猪D．100p5’端在180、404位有2个碱基差异。结论：藏猪mtDNA D-100p区碱基序列存在2种类型（A型和B型）;巴马小型猪mtDNAD—loop区碱基序列多态性较低,有2个遗传标记位点。