p21HBsAg/HBsAg转基因小鼠肝脏病理学研究

目的观察p21HBsAg/HBsAg转基因小鼠肝脏病理学改变.方法分别选取2、6、12、18、24月龄的SPF级p21HBsAg/HBsAg转基因小鼠和p21+/+野生型小鼠,剖检进行大体观察,取肝脏及肝脏肿瘤组织,进行组织学HE染色及电镜超微结构观察.结果 p21HBsAg/HBsAg转基因小鼠肝脏大体、光镜和电镜下均有明显病理改变.随着月龄的增加,肝脏色暗质硬,表面有结节和肿瘤形成;光镜下,肝细胞浊肿,炎症细胞浸润,脂肪变性,点状、灶状和碎屑状坏死,非典型增生,肝细胞癌.癌细胞分化良好,类似肝细胞,形成索状和腺泡状结构.癌细胞核深染,具核分裂像.电镜下,癌细胞核变形,核膜曲折凹陷,线粒体肿胀,数目增多,嵴减少.4例18月龄转基因小鼠发生肝细胞癌(4/10),6例24月龄的转基因小鼠发生肝细胞癌(6/10),其中2例发现远处转移.结论 p21HBsAg/HBsAg转基因小鼠肝脏出现明显病理损害,18月龄小鼠开始发展成高分化的肝细胞癌,高龄小鼠形成的肝细胞癌能够转移.     

乙型肝炎病毒转基因小鼠病理学观察

目的 观察乙型肝炎病毒（HBV）ayw亚型转基因小鼠的肝、肾等组织的病理改变。方法 选取15只5-48周龄的清洁级C57BL/6J-HBV转基因小鼠及15只C57BL/6J小鼠为对照进行病理大体观察，并取心、肝、脾、肺、肾、肠等组织，切片HE染色和免疫组化特殊染色后进行光镜观察。结果 C57BL/6J-HBV转基因小鼠肝脏产生局部明显的炎症反应；肝细胞肿胀，毛玻璃样变性，灶性坏死伴淋巴样细胞浸润，可见肝细胞质内嗜酸性小体，局部可见巨核肝细胞，偶见多核肝细胞，心，脾、肺、肾、肠等脏器未见明显的病理改变，免疫组化分析说明，血清HBsAg(乙型肝炎病毒表面抗原）为阳性的15只小鼠肝组织有HBsAg的存在，且HBsAg的分布呈胞质型，但不存在于脾、肺、心等组织中，血清HBsAg为阴性的15只小鼠其心、肺，肝，脾，肾，肠等组织中均未见HBsAg的存在；发现两只48周龄C57B羁J-HBV转基因小鼠患肝细胞癌。     

C57-TgN(HBVadr2.0)SMMU转基因小鼠肝脏的组织病理学观察

目的:研究乙型肝炎转基因小鼠品系C57-TgN(HBVadr2.0)SMMU肝脏的组织学及免疫病理学特征.方法:以168只SPF级乙肝转基因小鼠及15只正常C57BL/6小鼠为研究对象,取肝组织连续切片,常规H-E染色,并选取20例有明显单个核细胞肝内浸润的肝标本,免疫组化原位鉴定白细胞分化抗原的肝内分布.结果:37.5%的转基因小鼠肝脏出现人慢性轻度乙型肝炎样的病理改变,病变率随月龄增大显著增高;32.7%有更轻微的非特异性炎症反应;肝内浸润的单个核细胞多数为CD3 、CD4 细胞,未发现CD57 、CD8 细胞浸润.结论:乙肝转基因小鼠C57 TgN(HBVadr2.0)SMMU肝脏可出现不同程度的病理改变,与人慢性轻度乙肝组织学相类似.     

p21~(HBsAg/HBsAg)转基因小鼠的繁殖性能与生长发育

目的探讨p21HBsAg/HBsAg转基因小鼠的繁殖性能与生长发育状态,分析p21HBsAg/HBsAg基因引入小鼠基因组p21位点中对其生长繁殖的影响。方法选者繁殖种鼠40对,日常生产繁殖过程中对相关的繁殖指标及应用分析天平对其体重进行测量和记录,并且与野生对照组进行比较。结果不同日龄野生型小鼠较p21HBsAg/HBsAg转基因小鼠(-/-)增重快,而且两种表型小鼠雄性个体较雌性个体增重快;不同胎次胎间隔差异显著。野生型胎间隔较p21HBsAg/HBsAg转基因小鼠长;不同胎次两种表型小鼠产仔数差异不显著,说明野生型小鼠较p21HBsAg/HBsAg转基因小鼠繁殖能力强。结论p21HBsAg/HBsAg基因转入小鼠基因组p21位点对其生长繁殖具有一定的影响。     

p21~(HBsAg/HBsAg)和p21~(HBX/HBX)转基因小鼠不同月龄血液生理指标的测定

目的检测p21HBsAg/HBsAg和p21HBX/HBX转基因小鼠的血液生理指标,分析p21HBsAg/HBsAg和p21HBX/HBX基因引入小鼠基因组p21位点中对其血液指标的影响。方法用日本光电MEK-5126K血球计数仪(动物芯片)及配套试剂盒对四个月龄不同基因型小鼠的血液生理指标进行测定,并且与野生对照组进行比较。结果多数指标雌雄之间差异显著,并且两种基因型小鼠及野生型在不同年龄、不同指标的动态变化不同。结论p21HBsAg/HBsAg和p21HBX/HBX基因转入小鼠基因组p21位点对其血液生理指标具有一定的影响。     

人乙型肝炎病毒（ayw型）全基因组转基因小鼠病理学观察

目的：观察乙型肝炎病毒（ＨＢＶ）ａｙｗ亚型全基因组转基因小鼠的肝、肾等组织的病理改变。方法：选取２４只１３￣２５周龄的清洁级ＩＣＲ品系ＨＢＶ转基因小鼠及１５只正常ＩＣＲ小鼠为对照进行病理大体观察，并重点取肝、肾、脾、肺、心、脑、睾丸（卵巢）、唾液腺、肌肉和皮肤等组织，切片ＨＥ染色后进行光镜和透射电镜形态观察。结果：上述两种级小鼠大体和光镜下各器官和组织未见有明显病变；两种小鼠移入普通级环境下饲养４     

流式细胞术分析p21HBsAg/HBsAg转基因小鼠肝细胞凋亡

目的观察p21^HBsAg/HBsAg转基因小鼠肝细胞凋亡。方法用流式细胞仪检测6、12、18、24月龄p21^HBsAg/HBsAg转基因小鼠和p21^＋/＋野生型小鼠新鲜肝脏组织。结果转基因小鼠肝细胞凋亡率低于同月龄野生型小鼠。结论HBsAg基因的转入和表达，抑制转基因小鼠肝细胞凋亡。     

乙型肝炎转基因小鼠品系C57-TgN(HBV adr2.0)SMMU的生物学特征

目的：评价乙肝转基因小鼠品系C57－TgN(HBV adr2.0)SMMU生物学特征的稳定性。方法：以F6代乙肝转基因小鼠C57－TgN(HBV adr2.0)SMMU为研究对象，采用基因组DNA PCR，血清ELISA检测，Western印迹分析，免疫组织化学，血清DNA PCR，透射电镜和H－E染色的方法分析HBV基因在转基因小鼠中的整合，表达，复制和组织这变化。结果：F6代乙肝转基因小鼠基因组中稳定整合有HBV基因，肝组织中可检测用HBsAg,HBcAg和X蛋白3种病毒蛋白，血清中HBsAg和HBeAg的表达率分别为19．54％和3．39％，且在血清和肝组织中存在病毒NA和病毒样颗粒；长期的病毒DNA整合，表达和复制可以引起转基因小鼠肝，肺等组织的病理性损伤。结论：乙肝转基因小鼠品系C57－TgN(HBV adr2.0)SMMU具有基因组中稳定整合病毒DNA，血清和肝组织中有病毒蛋白表达和病毒复制的特征，并具有一定的组织这变化，作为生物医药研究的实验动物模型具有推广应用价值。     

不同月龄p21HBsAg/HBsAg和p21HBX/HBX转基因小鼠几种血液生化指标测定

目的 测定p21HBsAg/HBsAg和p21HBX/HBX转基因小鼠及野生型小鼠的血清生化指标,探讨几种血清生化指标在两种转基因小鼠及野生型小鼠的变化规律.方法 对p21HBsAg/HBsAg和p21HBX/HBX转基因小鼠不同月龄11种血清生化指标进行测定并分析比较.结果 p21HBsAg/HBsAg和p21HBX/HBX转基因小鼠不同月龄、不同的指标雌雄之间t检验差异显著,并且随着月龄的变化,雌雄之间的变化规律不同.结论 p21HBsAg/HBsAg和p21HBX/HBX基因的转入对小鼠的血清生化指标具有一定的影响.     

透射电镜观察p21HBHBsAg/HBsAg转基因小鼠肝癌细胞凋亡

目的 观察p21HBsAg/HBsAg转基因小鼠肝癌细胞凋亡.方法 用透射电镜观察p21HBsAg/HBsAg转基因小鼠肝癌细胞凋亡的形态学改变.结果 细胞凋亡早期,细胞核染色体发生边集,核形不规整,核膜表面凹凸;凋亡中期,核内染色质凝聚,趋边呈月牙状,核膜孔消失,核膜呈波纹状皱缩;凋亡晚期,核固缩,细胞膜出芽形成小泡,可见凋亡小体.结论 p21HBsAg/HBsAg转基因小鼠肝癌细胞凋亡具有典型性病变特征,是研究HBV感染诱发肝癌发病机理的合适动物模型.     

禽流感H5N1亚型病毒感染ICR小鼠模型建立

[目的]探讨乙型肝炎病毒表面抗原定位整合(p21HBsAg/HbsAg)转基因小鼠肝癌发生过程中PCNA的表达及意义。[方法]分别选取2,6,12,18,24月龄的SPF级转基因小鼠,取肝脏及肝脏肿瘤组织,进行免疫组织化学S-P法染色。[结果]①阳性肝细胞核内可见棕黄色反应颗粒;②2,6月龄转基因小鼠肝脏有少量散在分布的肝细胞呈PCNA阳性表达,阳性率分别为2.5%,3%;12月龄转基因小鼠肝脏PCNA阳性表达主要出现在非典型增生的肝细胞,阳性率23.65%;18月龄转基因小鼠发生的肝细胞癌PCNA阳性率61.68%;24月龄的转基因小鼠发生的肝细胞癌PCNA阳性率63.56%。12月龄转基因小鼠PCNA阳性率高于2,6月龄转基因小鼠(p<0.01),18月龄和24月龄的转基因小鼠PCNA阳性率高于12月龄转基因小鼠(p<0.05)。[结论]①PCNA能准确反映乙型肝炎病毒表面抗原定位整合转基因小鼠肝细胞的增殖能力,PCNA与肝细胞癌的发生、发展密切相关;②非典型增生的肝细胞有较高的PCNA阳性表达,是一群具有肿瘤增殖潜能的癌前细胞群。     

用精原细胞介导法制备乙肝病毒X基因转基因小鼠的实验研究

目的：探讨精原细胞介导法制备乙肝病毒X基因转基因小鼠的可行性。方法：构建乙肝病毒X基因表达载体pcDNA3-X;应用微量注射针将脂质体包裹的pcDNA3-X表达载体直接注入C57BL／6N雄性小鼠睾丸的曲细精管内，于第一次注射后6周，与雌鼠交配，用PCR法和免疫组化法检测仔鼠基因组中的外源DNA和肝组织中表达的pX蛋白。结果：测序结果与文献报道一致，并且X基因在Hela细胞中表达；共产仔鼠16只，其中1只为阳性仔鼠，阳性率为6．25％。结论：初步证明用精原干细胞介导法制备X基因转基因小鼠是可行的。     

C57BL/6J-HBV转基因小鼠血清生化指标与性别年龄的关系

目的观察C57BL/6J-HBV乙型肝炎病毒转基因小鼠血清总胆红素（T-BIL）、丙氨酸氨基转移酶（ALT）、天冬氨酸氨基转移酶（AST）、总蛋白（TP）和白蛋白（ALB）与性别和年龄的关系，以及与遗传背景相同的C57BL／6J小鼠的差异。方法选取8周龄和24周龄的C57BL／6J-HBV转基因小鼠及C57BL／6J小鼠的血清测定T-BIL、ALT、AST、TP和ALB值。结果C57BL／6J-HBV转基因小鼠与同周龄同性别的C57BL／6J小鼠相比，T-BIL、ALT、AST、TP和ALB均存在显著差异（P〈0．05）；24周龄的C57BL／6J-HBV转基因小鼠ALT和AST与其8周龄鼠相比均存在显著差异（P〈0．05）。结论C57BL／6J-HBV转基因小鼠T-BIL、ALT、AST、TP和ALB值显著高于C57BL／6J小鼠；且C57BL／6J-HBV转基因小鼠ALT和AST值与年龄有关，与性别无关。     

乙肝全基因组转基因小鼠肝组织病理及部分免疫学特征

目的:研究C57-TgN(HBVadr2.0) SMMU“3号”品系乙型肝炎转基因小鼠肝脏的组织病理学及部分免疫学特征.方法:通过对130例SPF级乙型肝炎转基因小鼠和30例同龄正常C57BL/6小鼠肝组织进行免疫组织化学染色、HE染色和浸银染色分析,研究转基因小鼠HBsAg的表达以及病理改变情况.选取15例肝组织有单个核细胞浸润的转基因小鼠检测白细胞分化抗原的表达情况.结果:60.77％(79/130)的转基因小鼠肝脏组织中出现了不同程度的肝组织病理性改变,包括肝细胞变性、单个核细胞浸润和纤维组织增生,且与月龄正相关,而与性别、病毒蛋白的表达无相关性.选取出现单个核细胞浸润的肝组织进行免疫组织化学检测发现,肝组织中浸润的单个核细胞大多为CD3+、CD4+T细胞.结论:C57-TgN (HBVadr2.0) SMMU“3号”品系乙肝全基因组转基因小鼠肝脏产生类似慢性无症状HBV携带者的病理学变化,病理改变与病毒蛋白表达无相关性,与小鼠月龄呈正相关性.     

不同月龄p21^HBsAg/HBsAg和p21^HBX/HBX转基因小鼠血清酶含量的测定

目的 测定p21HBsAg/HBsAg和p 21HBX/HBX转基因小鼠纯合型及野生型小鼠的血清酶,探讨各种血清酶在两种纯合型小鼠及野生型小鼠的变化规律.方法 采用荷兰半自动生化分析仪Ⅱ对于肝功能相关的7种血清酶进行测定,应用SSPS10统计学软件进行T检验及方差分析比较.结果p21HBsAg/HBsAg和p 21HBX/HBX转基因小鼠不同年龄、不同的指标雌雄之间差异显著,并且随着年龄的变化,雌雄之间的变化规律不同.结论p21HBsAg/HBsAg和p21HBX/HBX转基因小鼠的血清酶在不同的年龄具有一定的变化规律,说明p21HBsAg/HBsAg和p 21HBX/HBX转基因小鼠的血清酶具有一定的特征,为其功能性研究及临床检验具有重要参考价值.     

C57BL/6J-HBV转基因小鼠的繁育与检测

目的　摸清C57BL 6J -HBV转基因小鼠的繁育规律 ,建立可靠的HBsAg表达检测方法。方法　对C57BL 6J-HBV转基因小鼠两种不同交配方式的繁殖性能和HBsAg的表达情况进行比较研究 ;应用免疫组化的方法证实血清学诊断HBsAg的准确性并用激光扫描共聚焦显微镜确定HBsAg在肝细胞中的表达部位。结果与结论　从繁殖性能来看 ,两种交配方式窝产仔数差异不显著 (P >0 .0 5 ) ,而离乳数差异具有显著性 ( 0 .0 1

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人ApoE转基因小鼠与TGE_（7－2） TGE_（7－3）转基因鼠系的建立

用含小鼠金属硫蛋白（ＭＴ－１）基因启动子与突变的人ＡｐｏＥ７基因的６．０ＫｂＤＮＡ片段作为目的基因制备转基因小鼠，利用显微注射法将目的基因导入４４１枚受精卵，移植于２０只假孕鼠，其中１５只受孕，共产仔鼠８０只，经ａ－３２Ｐ斑点杂交与Ｓｏｕｔｈｅｒｎ杂交法鉴定出两只整合有人ＡｐｏＥ基因的转基因雌鼠，其拷贝数分别为２和５。将两只首建鼠（雌性Ｆｏ代）与正常雄鼠交配，建立Ｆ１代转基因鼠系ＴＧＥ７－２和ＴＧＥ７－３，为进一步从整体上研究ＡｐｏＥ在脂质代谢中的作用以及ＡｐｏＥ与动脉粥样硬化和Ａｌｚｈｅｉｍｅｒ’ｓ病的关系创造条件。