优化人alpha-syn基因疫苗免疫MPTP慢性PD小鼠的神经保护作用

目的：探讨优化高分泌型人α-突触核蛋白（human alpha—synuclein,ha—syn）基因疫苗免疫MPTP慢性帕金森病小鼠的治疗效果和神经免疫保护作用．方法：建立慢性PD小鼠模型,采用神经毒素MPTP25mg／（kg·d）,2次／wk,累计共10次．建模后随机分为3组：优化基因疫苗组、疫苗组、PBS对照组;每次治疗前,每只动物分别在双侧后肢胫骨前肌部位注射5g／L布比卡因50μL,注射72h后,3组动物分别于同部位同深度注射优化基因疫苗、基因疫苗或PBS各50μL,1次／3wk,共3次．末次免疫后2wk观察行为学改变后,处死取脑．运用免疫荧光、免疫组化等方法观察酪氨酸羟化酶阳性细胞数,以及α-syn表达变化．结果：优化基因疫苗组、疫苗组小鼠爬杆能力与PBS对照组比较都得到明显改善,有统计学差异（P〈0．05）;但优化基因疫苗组与疫苗组行为学评分间差异无统计学意义．优化基因疫苗组酪氨酸羟化酶阳性细胞数与其它两组相比增多约20％-68％（P〈0．05）,α-syn表达减少约15％～45％（P〈0．05）．结论：优化基因疫苗具有较强改善帕金森小鼠行为学的作用,能增强疫苗的免疫原性,促进受损黑质细胞修复,对帕金森病小鼠有更好的免疫治疗作用．     

菖蒲郁金汤对帕金森病小鼠的神经保护作用及机制探讨

[目的] 观察菖蒲郁金汤对帕金森病(Parkinson‘s disease,PD)小鼠的治疗作用以及对多巴胺(dopamine,DA)能神经元的保护作用,并探讨其可能的作用机制。[方法] 将36只C57BL/6雄性小鼠随机分为正常对照组、MPTP模型组、菖蒲郁金汤组,每组12只。MPTP模型组和菖蒲郁金汤组采用1-甲基-4-苯基-1,2,3,6-四氢吡啶(1-methyl-4-phenyl-1,2,3,6-tetrahydropyridine,MPTP)腹腔注射,30 mg/(kg·d),连续7 d,建立PD小鼠模型,正常对照组给予等量0.9%氯化钠溶液腹腔注射,连续7 d。菖蒲郁金汤组在MPTP注射的同时开始给予20 g/(kg·d)菖蒲郁金汤灌胃21 d,MPTP模型组和正常对照组分别在MPTP、0.9%氯化钠溶液注射的同时给予20 g/(kg·d)的0.9%氯化钠溶液灌胃21 d。最后给药结束后1、7和14 d时对各组小鼠分别进行行为学评价。14 d时处死小鼠,取小鼠中脑黑质部位脑组织,应用酪氨酸羟化酶免疫组化染色检测DA能神经元存活数目,免疫印迹法检测α-突触核蛋白(α-synuclein,α-Syn)和自噬特异性蛋白微管相关蛋白1轻链3B(microtubule-associated protein 1 light chain 3 Beta,LC3B)的蛋白表达;取纹状体脑组织,电镜观察神经元超微结构变化及自噬小体。[结果] 与MPTP模型组比较,菖蒲郁金汤组小鼠1、7、14 d时爬杆时间缩短(均P＜0.05),旷场试验的总距离和旷场平均速度均增加(均P＜0.01),7、14 d时悬挂实验分值增加(均P＜0.05);菖蒲郁金汤组小鼠中脑黑质DA神经元存活数目增加(P＜0.01),而且染色浓度增加,α-Syn蛋白表达下调(P＜0.01),微管相关蛋白1轻链3B-Ⅱ(microtubule-associated protein 1 light chain 3 Beta-Ⅱ,LC3B-Ⅱ)/微管相关蛋白1轻链3B-Ⅰ(microtubule-associated protein 1 light chain 3 Beta-Ⅰ,LC3B-Ⅰ)比值增加(P＜0.01)。电镜显示,与MPTP模型组比较,菖蒲郁金汤组纹状体神经元胞质水肿、空泡变性现象减轻,线粒体膜结构相对完整,可见自噬溶酶体。 [结论] 菖蒲郁金汤可有效减轻PD小鼠行为症状,对DA能神经元具有保护作用,通过增强神经元细胞的自噬活性从而促进异常聚集α-Syn的自噬性清除可能是其主要作用机制。     

α-突触核蛋白原纤维诱导的帕金森病小鼠模型的行为表型及病理特征

目的：研究A53T突变型α-突触核蛋白（A53T αS）原纤维诱导的帕金森病（PD）小鼠模型的行为表型及病理学特征。方法：小鼠脑内黑质致密区（SNpc）定位注射5 µg A53T αS建立PD小鼠模型,造模3个月后,通过旷场试验、悬挂试验和Y迷宫检测模型小鼠的运动和认知行为学表型。分别使用抗磷酸化α-突触核蛋白（pSyn）、抗酪氨酸羟化酶（TH）及小胶质细胞特异性蛋白抗体IBA-1作为评价模型小鼠脑内的路易小体包涵体、多巴胺能神经元变性死亡及神经炎症的分子标记,通过免疫组织化学染色法研究模型小鼠脑内典型的病理特征。结果：旷场试验中,模型组小鼠的总运动距离较对照组差异无统计学意义（P＞0.05）;悬挂试验显示模型组小鼠四爪抓杆持续时间较对照组小鼠显著缩短（P＜0.05）;Y迷宫检测表明模型组小鼠的自发转换正确率较对照组差异无统计学意义（P＞0.05）。与对照组比,模型组小鼠中脑SNpc区的pSyn阳性包涵体数量显著增多（P＜0.01）,同时TH阳性神经元数量显著减少（P＜0.05）,IBA-1阳性胶质细胞数量异常增加（P＜0.01）。结论：脑内注射A53T αS原纤维可稳定诱导出PD小鼠模型,该模型小鼠表现出一定程度的肌力和平衡力下降;且可同时模拟出PD的路易小体包涵体、多巴胺能神经元缺失及过度激活的神经炎症等病理特征。