软骨肉瘤细胞PTHrP和Sox9及Bc1-2基因表达及其相互作用的研究

目的:研究PTHrP、Sox9和Bc1-2基因在人体软骨肉瘤细胞HTB-94中的相互作用机制.方法:小干扰siRNA阻断PTHrP后,分别检测肿瘤细胞中SOx9、Bc1-2和Co12α1的mRNA及蛋白表迭.结果:PTHrP基因被干扰后,PTHrP基因的mRNA及蛋白表达降低,Sox9、Bc1-2和Co12α1的tuRNA及蛋白表达都受到抑制;而PTHrP基因的干扰作用去除,Sox9、Bc1-2和Co12α1的mRNA及蛋白表达抑制作用也消失.结论:PTHrP基因在肿瘤细胞的抑制引起Sox9、Be1-2和Co12α1肿瘤相关基因的抑制,提示PTHrP基因是Sox9、Be1-2和Co12α1肿瘤相关基因的上游基因.     

软骨肉瘤细胞Caspase-3表达及其与相关基因相互作用的研究

目的:研究肿瘤基因Caspase-3与PTHrP和Sox9在人体软骨肉瘤细胞HTB-94中的相互作用机制。方法:小干扰siRNA分别阻断PTHrP和Sox9后,检测肿瘤细胞中Caspase-3的mRNA和蛋白表达。结果:PTHrP基因被干扰后,Caspase-3的mRNA表达增加了57.7%,蛋白的表达增加了57.1%;Sox9基因被干扰之后,Caspase-3的mRNA表达增加了47.4%,蛋白的表达增加了48.2%。结论:肿瘤基因Caspase-3在软骨肉瘤细胞中的表达与软骨肉瘤相关基因PTHrP和Sox9有关,可能是位于PTHrP和Sox9的下游基因。     

软骨肉瘤相关基因Sox9(siRNA)表达质粒的构建鉴定以及对肿瘤细胞生长和凋亡的影响

目的利用小干扰阻断目的基因的原理将构建的目的基因Sox9的pSilencer3,1-H1 neo siRNA(small interfering RNA)表达质粒转染人体软骨内瘤细胞HTB-94,观察目的基因被阻断后肿瘤细胞目的基因的表达、肿瘤细胞生长和凋亡所受到的影响.方法设计并合成Sox9(siRNA),鉴定后将其转染HTB-94肿瘤细胞,观察肿瘤细胞的Sox9基因的mRNA和蛋白表达的变化.以及被转染肿瘤细胞的生长曲线和肿瘤细胞凋亡的情况.结果Sox9(siRNA)的插入片段测序结果与合成的siRNA结果一致.被转染的HTB-94 Sox9基因的mRNA的表达量下降了35.4%,蛋白的表达量下降了31.3%;Sox9(siRNA)转染HTB-94细胞24h和96h的光吸收值分别为0.146 0.037和0.412±0.036,而正常对照细胞组两个同样时间段的光吸收值分别为0.152±0.0367和0.607±0.029.其中细胞生长增殖速度的差异为32.0%,肿瘤细胞的生长明显受到抑制;Sox9(siRNA)转染HTB-94细胞的干扰组细胞凋亡率为39.2%;而未经干扰的HTB-94肿瘤细胞的细胞凋亡率为0.1%.结论经过设计合成的Sox9(siRNA)表达质粒可以稳定转染人体软骨肉瘤细胞HTB-94肿瘤细胞,被Sox9(siRNA)表达质粒转染的人体软骨肉瘤细胞HTB-94肿瘤细胞Sox9基因的mRNA和蛋白的表达都受到抑制,同时肿瘤细胞的生长繁殖也受到明显抑制.肿瘤细胞的凋亡明显增加.     

肝癌细胞内Sox17基因表达水平与细胞迁移、侵袭力的相关性研究

目的:从基因表达水平上探讨肝肿瘤细胞内Sox17的mRNA表达量与细胞迁移、侵袭力的相关性。方法:收集4种肝肿瘤细胞HepG2、MHCC-97L、LM3、SK-Hep-1及一种非肿瘤肝上皮细胞QSG7701,Real-Time PCR法检测细胞内Sox17、CTTN基因的mRNA表达水平,细胞划痕和Transwell小室侵袭实验检测肝肿瘤细胞迁移、侵袭力。对Sox17基因的表达水平与CTTN的表达量及细胞划痕、Transwell小室侵袭的实验结果进行秩相关检验。结果:与非肿瘤细胞相比,肿瘤细胞内Sox17表达水平普遍较低,CTTN的表达水平较高;在4种肝肿瘤细胞中,Sox17基因的表达水平与CTTN的mRNA的表达水平及细胞划痕区域细胞生长速度、Transwell小室穿膜细胞数的统计结果呈负相关,秩相关系数rs=-1。结论:肝肿瘤细胞内Sox17基因的表达水平的高低与细胞的迁移、侵袭力呈负相关。     

HIF-1α对非霍奇金淋巴瘤细胞凋亡作用机制的探讨

目的:研究HIF-1α对常氧状态下培养的人非霍奇金淋巴瘤(NHL)细胞凋亡的作用及其调控机制.方法:以HIF-1α抑制剂Echinomycin(EC)处理人NHL细胞,采用Annexin-V染色方法检测肿瘤凋亡水平的变化,采用蛋白质印迹法检测各细胞系中Survivin及凋亡相关蛋白Bcl-2和caspase-3的表达水平;进一步应用HIF-1α反义质粒转染肿瘤细胞,检测转染后Survivin蛋白表达水平.结果:HIF-1α抑制剂EC能够诱导NHL细胞的凋亡(P<0.05),具有时间和剂量依赖性.抑制HIF-1α的表达明显抑制了肿瘤细胞中Survivin蛋白表达水平,同时,凋亡相关蛋白Bcl-2表达减低而Caspase-3蛋白表达增加,与对照组相比差异均具有统计学意义,P<0.05.转染反义HIF-1α siRNA后肿瘤细胞中Survivin蛋白表达水平明显下降(P<0.05).结论:抑制HIF-1α能够诱导NHL细胞凋亡,其机制可能与下调Survivin蛋白表达水平有关.     

多烯紫杉醇联合TNF-α对人前列腺癌裸鼠皮下移植瘤的抑制作用

目的：探讨多烯紫杉醇联合TNF-α抑制前列腺癌的作用，并进一步了解其作用机理。方法：建立人前列腺癌细胞的裸鼠皮下移植瘤模型，在多烯紫杉醇和TNF—α的联合作用下观察其对皮下移植瘤生长的抑制作用，并通过RT—PCR、免疫组化方法检测Bax、Bcl-2基因mRNA表达及p53蛋白表达。结果：与多烯紫杉醇组、TNF—α组及对照组相比，多烯紫杉醇和TNF—α联合治疗组可抑制前列腺癌皮下移植瘤生长速度，且肿瘤体积明显减少（P〈0．01）。BaxmRNA表达上调，而Bcl-2mRNA表达水平下降，免疫组化结果表明p53蛋白的表达水平下降。结论：多烯紫杉醇联合TNF—α对前列腺癌有一定的抑制作用，作用机理可能是通过引起促凋亡基因Bax表达增高，从而导致肿瘤细胞加速凋亡而实现的。     

多烯紫杉醇联合TNF—α对人前列腺癌裸鼠皮下移植瘤的抑制作用

目的：探讨多烯紫杉醇联合TNF-α抑制前列腺癌的作用，并进一步了解其作用机理。方法：建立人前列腺癌细胞的裸鼠皮下移植瘤模型，在多烯紫杉醇和TNF—α的联合作用下观察其对皮下移植瘤生长的抑制作用，并通过RT—PCR、免疫组化方法检测Bax、Bcl-2基因mRNA表达及p53蛋白表达。结果：与多烯紫杉醇组、TNF—α组及对照组相比，多烯紫杉醇和TNF—α联合治疗组可抑制前列腺癌皮下移植瘤生长速度，且肿瘤体积明显减少（P〈0．01）。BaxmRNA表达上调，而Bcl-2mRNA表达水平下降，免疫组化结果表明p53蛋白的表达水平下降。结论：多烯紫杉醇联合TNF—α对前列腺癌有一定的抑制作用，作用机理可能是通过引起促凋亡基因Bax表达增高，从而导致肿瘤细胞加速凋亡而实现的。     

Gankyrin基因沉默对人卵巢癌SKOV3/CDDP细胞顺铂耐药性的逆转作用和机制

背景与目的：卵巢癌是常见的妇科肿瘤,抗肿瘤药耐药性的产生是卵巢癌治疗失败的主要原因之一,Gankyrin基因被认为与肿瘤耐药性密切相关,本文探讨了Gankyrin基因沉默对卵巢癌耐顺铂细胞系SKOV3/DDP顺铂耐药性的逆转作用及机制。方法：应用real-time PCR技术考察Gankyrin在SKOV3和SKOV3/DDP细胞中的表达,应用MTS法检测Gankyrin对SKOV3/DDP细胞顺铂耐受性的影响,应用流式细胞术检测肿瘤细胞凋亡和细胞内罗丹明-123(Rhodamine-123,Rh-123)含量的变化,Western blot和real-time PCR技术检测肿瘤细胞耐药相关蛋白MDR1、Caspase-3/8、Survivin和Bcl-2蛋白表达,Western blot法检测p53、NF-κB和PTEN蛋白表达和AKT磷酸化水平。结果：Gankyrin在SKOV3/DDP细胞中表达升高,沉默Gankyrin基因后可增加SKOV3/DDP细胞对顺铂的敏感性。基因沉默前后耐药逆转倍数(resistant factor,RF)为1.81和2.45,肿瘤细胞中Rh-123含量提高了1.73和2.42倍,细胞凋亡率是对照组的2.23倍和4.23倍,耐药相关蛋白MDR1、Survivin和Bcl-2蛋白水平显著下降,MDR1 mRNA表达是对照组的62.8%和21.6%,Survivin mRNA表达是对照组的24.5%和10.3%,Bcl-2 mRNA表达是对照组的47.5%和18.4%,Caspase-3/8、p53和PTEN表达水平上升,AKT磷酸化和NF-κB水平下降。结论：沉默Gankyrin基因可逆转SKOV3/DDP对顺铂的耐药性,可能与抑制药物外排,促进细胞凋亡有关,PTEN/AKT/NF-κB/p53信号通路可能是其中心环节。     

干扰PIM3的表达对人胰腺癌AsPC-1细胞增殖和凋亡的影响及作用机制研究

目的 探讨干扰PIM3的表达对人胰腺癌AsPC-1细胞增殖和凋亡的影响及作用机制.方法 将阴性对照[scramble小干扰RNA(siRNA)]和干扰PIM3(PIM3 siRNA)分别转染至人胰腺癌AsPC-1细胞,分别作为scramble-siRNA组和PIM3-siRNA组,以1×磷酸盐缓冲液(PBS)作为溶剂对照.采用实时荧光定量聚合酶链反应(RT-PCR)检测人胰腺癌AsPC-1细胞PIM3、B细胞淋巴瘤/白血病-2(Bcl-2)、Bcl-2相关X蛋白(BAX)、Ki-67、cas-pase 3 mRNA的相对表达量,蛋白质印迹法(Western blot)检测PIM3、Bcl-2、BAX、caspase 3蛋白的相对表达量;四甲基偶氮唑蓝(MTT)检测干扰PIM3的表达对人胰腺癌AsPC-1细胞增殖能力的影响,流式细胞仪检测干扰PIM3的表达对细胞凋亡能力的影响.探讨干扰PIM3的表达对荷瘤小鼠人胰腺癌AsPC-1细胞的影响.结果 转染后,PIM3-siRNA组细胞PIM3 mRNA和PIM3蛋白的相对表达量均明显低于溶剂对照组和scramble-siRNA组(P﹤0.01).干扰PIM3的表达可明显抑制人胰腺癌AsPC-1细胞增殖,促进其凋亡.干扰PIM3的表达可下调人胰腺癌AsPC-1细胞中Ki-67、Bcl-2基因的表达,上调BAX、caspase 3基因的表达;且干扰PIM3的表达可下调Bcl-2蛋白的表达,上调BAX、caspase 3蛋白的表达.荷瘤小鼠经PIM3 siRNA治疗后,小鼠肿瘤质量和体积均明显下降.结论 PIM3 siRNA可通过干扰PIM3的表达,诱导人胰腺癌AsPC-1细胞的凋亡,在体内体外均可抑制胰腺癌AsPC-1细胞的生长.     

FUNDC1调控肺癌A549细胞及其干细胞的生长、自噬、凋亡和细胞干性的研究

目的:本实验旨在阐明线粒体自噬受体蛋白FUNDC1(FUN 14 domain containing 1)在肺癌病理进程中对肿瘤细胞生长死亡以及细胞干性的调控作用。方法:使用RT-qPCR分析FUNDC1在肺癌组织和细胞中的表达情况。siRNAs和过表达载体转染A549细胞以及诱导形成的A549干细胞团(A549/CSC)。采用CCK-8增殖试剂盒及集落形成实验分析不同处理对肺癌细胞增殖的影响。Western blotting检测FUNDC1、细胞自噬相关蛋白(Beclin-1、LC3-Ⅱ、p62)、凋亡相关蛋白(Bax、Bcl-2、caspase3)和细胞干性相关蛋白(CD133、Sox2、Oct4)的表达。细胞凋亡试剂盒(Elisa)用于测定细胞凋亡水平。流式细胞术分析CD133细胞阳性率。结果:FUNDC1在肺癌组织及细胞中表达上调,干扰FUNDC1抑制A549细胞增殖和保护性自噬,同时诱导细胞凋亡。此外,FUNDC1与CD133表达显著正相关,干扰FUNDC1可显著抑制细胞干性相关基因CD133、Sox2、Oct4的表达。A549/CSC细胞的FUNDC1表达高于正常A549细胞。干扰FUNDC1同样会抑制A549/CSC细胞增殖和保护性自噬,促进细胞凋亡。结论:FUNDC1调控肺癌细胞及CSC细胞的生长、自噬、凋亡及细胞干性。     

邻苯二甲酸二(2-乙基己)酯对大鼠卵巢组织凋亡基因和癌基因表达水平的影响

目的： 探讨邻苯二甲酸二(2-乙基己)酯(DEHP)对大鼠卵巢组织凋亡基因和癌基因表达水平的影响,为评价DEHP的雌性生殖毒性提供科学依据。方法：用不同剂量DEHP灌胃染毒雌性SD大鼠6周,设对照组(玉米油)、低剂量组(100 mg/kg)、中剂量组(500 mg/kg)、高剂量组(1 500 mg/kg),利用荧光定量PCR技术检测卵巢组织凋亡基因(Bcl-2、Caspase-3、Caspase-8、Caspase-9)和癌基因(c-fos、k-ras)mRNA表达的变化。结果：Bcl-2 mRNA表达水平在DEHP高剂量组显著降低,与对照组比较差异具有统计学意义(P<0.01);Caspase-3、Caspase-8和Caspase-9 mRNA表达水平随DEHP染毒剂量升高呈上升趋势,与对照组比较显著升高,差异均有统计学意义(P<0.05或P<0.01)。c-fos mRNA表达量与对照组间的差异无统计学意义(P>0.05),k-ras mRNA表达量在DEHP中剂量组和高剂量组显著高于对照组(P<0.01)。结论：DEHP可能通过线粒体途径激活Caspase通路诱导卵巢细胞凋亡,进而损害大鼠卵巢功能和生殖内分泌功能。且DEHP可激活原癌基因异常表达,具有一定的潜在致癌风险。     

Survivin shRNA干扰对食管癌细胞CDK4 mRNA表达的影响

目的： 以shRNA抑制食管癌ECA109细胞内Survivin的表达,探讨Survivin shRNA干扰对CDK4基因表达的影响。方法：ECA109细胞分为Survivin shRNA干扰组、质粒对照组和空白细胞组,采用RNA干扰技术沉默ECA109细胞株中Survivin基因的表达,RT-PCR检测各组细胞中Survivin和CDK4 mRNA的表达,Western blot方法检测各组细胞Survivin蛋白的表达,流式细胞术检测细胞周期的改变。结果：与质粒对照组及空白细胞组比较,Survivin shRNA干扰组细胞Survivin mRNA及蛋白表达下调,CDK4 mRNA表达明显降低,差异均具有统计学意义(P均<0.05);Survivin shRNA干扰组G2期延长,G2期细胞比例增加,细胞G2期增殖阻滞。结论：Survivin基因可能在转录水平对CDK4具有调控作用,其具体调控机制有待进一步研究。     

辐射诱发大鼠体内旁效应中肺及肾组织凋亡相关基因mRNA的表达变化

目的：探讨不同剂量X射线辐射诱发大鼠体内旁效应中肺和肾组织凋亡相关基因的表达变化。方法：70只雄性Wistar大鼠随机分为正常对照组和不同剂量、不同时间的辐射组,共10组,每组7只。除正常对照组外,其余各组大鼠分别给予2、4、8 Gy X射线单次照射右肺部,铅皮屏蔽身体其余部位。分别于照射后6、24、48 h处死辐射各组大鼠,实时荧光定量PCR检测大鼠右肺、左肺、左肾组织中Cytc、Caspase-9、Caspase-3、Bax和Bcl-2 mRNA表达的变化。结果：与正常对照组比较,2、4、8 Gy辐射各组大鼠右肺、左肺、左肾中Cytc、Caspase-9、Caspase-3 mRNA表达量在照射后均明显升高（P < 0.05或P < 0.01）。除右肺8 Gy辐射后48 h组和左肾2 Gy辐射后6 h组之外,其余辐射组Bax mRNA表达量均明显升高,与正常对照组比较,差异均有统计学意义（P < 0.05或P < 0.01）。除左肾8 Gy辐射后6 h组之外,其余辐射组Bcl-2 mRNA表达量均降低,与正常对照组比较,差异均有统计学意义（P < 0.05或P < 0.01）。结论：不同剂量X射线照射大鼠右肺部后,右肺组织中Cytc、Caspase-9、Caspase-3、Bax表达均显著上调,Bcl-2明显下调。左肺和左肾中未直接受照射组织也对X射线辐射产生了响应,辐射诱导了体内旁效应的产生。各辐射剂量之间、各时间点之间尚未发现明显的效应差异。     

The significance of expression of autophagy-related gene Beclin,Bcl-2, and Bax in breast cancer tissues

The purpose of this study was to detect the expression of autophagy-related gene Beclin1 and apoptosis-related genes Bcl-2 and Bax in breast cancer tissues, to investigate their relationship and significance to the occurrence and development of breast cancer, and to provide an experimental basis for the biological treatment of breast cancer in the future. Human breast cancer tissues and relatively healthy breast tissue adjacent to the tumor were collected during surgical resection. By using RT–PCR and western blot, the mRNA and protein expressions of Beclin1, Bcl-2, and Bax were detected in the breast cancer tissues and the relatively healthy, adjacent tissues. The correlations of these expressions with the occurrence, development, and clinicopathology of breast cancer were analyzed. The mRNA and protein expressions of Beclin1 and Bcl-2 in breast cancer tissues were significantly lower than those in the relatively healthy, adjacent breast tissues (p < 0.05); the lower the degree of tumor differentiation, the lower the mRNA and protein expressions of Beclin1 and Bcl-2 (p < 0.05); the mRNA and protein expressions of Beclin1 and Bcl-2 in breast cancer tissues from patients positive for lymph node metastasis were significantly lower than those negative for lymph node metastasis (p < 0.05); the mRNA and protein expressions of Beclin1 and Bcl-2 in breast cancer tissues from patients positive for distant metastasis were significantly lower than those negative for distant metastasis (p < 0.05); the mRNA and protein expressions of Beclin1 and Bcl-2 in breast cancer tissues from patients positive for ki67 were significantly lower than those negative for ki67 (p < 0.05). The mRNA and protein expressions of Bax were different from those of Beclin1 and Bcl-2. In breast cancer tissues, the mRNA and protein expressions of Bax were up-regulated (p < 0.05); the lower the degree of tumor differentiation, the higher the mRNA and protein expressions of Bax (p < 0.05); the mRNA and protein expressions of Bax in breast cancer tissues from patients positive for lymph node metastasis were significantly higher than those negative for lymph node metastasis (p < 0.05); and the mRNA and protein expressions of Bax in breast cancer tissues from patients positive for distant metastasis were significantly higher than those in patients negative for distant metastasis (p < 0.05). However, the mRNA and protein expressions of these three genes were not correlated with patient age, tumor size, progesterone receptor positivity, or human epidermal growth factor positivity (p > 0.05). The correlation of Bcl-2 and Bax mRNA with Beclin1 mRNA expressed in breast cancer tissues were both statistically significant (p < 0.05). The activity change of autophagy and apoptosis is associated with the tumorigenesis and tumor progression of breast cancer. The joint detection of these three genes (Beclin1, Bcl-2, and Bax) contributes to the early diagnosis of and predicts prognosis for breast cancer, and this also provides an experimental basis for the biological therapy of breast cancer.     

人胃癌细胞株ＳＧＣ-７９０１体外乏氧环境ＨＩＦ-１α、ＶＥＧＦ-Ａ和ＶＥＧＦ-Ｄ基因表达变化

目的：观察乏氧干预对人胃癌细胞ＳＧＣ-７９０１乏氧诱导因子-１α（ＨＩＦ-１α）、血管内皮生长因子-Ａ（ＶＥＧＦ-Ａ）和血管内皮生长因子 Ｄ（ＶＥＧＦ-Ｄ）表达的影响,以及乏氧诱导因子-１α和血管内皮生长因子表达的相关性。方法：将人胃癌细胞ＳＧＣ-７９０１体外培养并乏氧干预０、４、１６、２４ｈ,以反转录 聚合酶链式反应（ＲＴ-ＰＣＲ）方法检测４组ＨＩＦ-１α、ＶＥＧＦ-Ａ、ＶＥＧＦ-ＤｍＲＮＡ的表达情况;免疫印迹（Ｗｅｓｔｅｒｎｂｌｏｔ）检测４组ＨＩＦ-１α、ＶＥＧＦ-Ａ、ＶＥＧＦ-Ｄ蛋白表达情况。结果：与０ｈ相比,４ｈＨＩＦ-１αｍＲＮＡ转录处于下降水平（Ｐ＜０.０５）,１６ｈＨＩＦ-１αｍＲＮＡ转录上升（Ｐ＜０.０５）,２４ｈ转录达到最高水平（Ｐ＜０.０５）。ＶＥＧＦ-ＡｍＲＮＡ和ＶＥＧＦ-ＤｍＲＮＡ表达量均随时间的延长逐渐增加（Ｐ＜０.５）。ＨＩＦ-１α、ＶＥＧＦ-Ａ、ＶＥＧＦ-Ｄ蛋白表达量随乏氧时间的延长逐渐增加（Ｐ＜０.０５）。结论：胃癌细胞株ＳＧＣ-７９０１乏氧环境中,ＨＩＦ-１α、ＶＥＧＦ-Ａ和ＶＥＧＦ-Ｄ的ｍＲＮＡ与蛋白表达均明显增加。     

p38MAPK基因对PM2.5染毒HK-2细胞部分癌基因和凋亡相关基因表达的影响

目的：探讨p38MAPK基因对PM_2.5染毒人肾上皮细胞（HK-2）部分癌基因和凋亡相关基因表达的影响。方法：根据GenBank提供的p38MAPK mRNA序列,设计合成干扰序列,将重组慢病毒载体转染HK-2细胞,构建p38MAPK基因沉默细胞株。分别采用实时荧光定量PCR （qPCR）和Western blot法检测p38MAPK mRNA和蛋白的表达水平鉴定沉默效果。用50 μg/mL的PM_2.5混悬液分别染毒正常HK-2细胞和p38MAPK基因沉默细胞24 h,利用荧光定量PCR和Western blot检测癌基因c-myc,c-fos、p53和凋亡相关基因Caspase-8、Caspase-9、Bcl-2的mRNA和蛋白的相对表达水平。结果：qPCR和Western blot检测结果显示,与正常HK-2细胞比较,p38MAPK基因沉默细胞中p38MAPK mRNA的表达下降了58.50%,p38MAPK蛋白表达水平下降了51.33%（P<0.01）。PM_2.5混悬液对HK-2细胞和p38MAPK基因沉默HK-2细胞染毒后,qPCR检测结果显示,与正常HK-2细胞未染毒组比较,正常HK-2细胞PM_2.5染毒组中c-myc、c-fos、Caspase-8和Casepase-9基因表达分别升高39.89%、15.12%、19.47%和15.45%,p53和Bcl-2基因表达分别下降21.54%和31.77%,差异均具有统计学意义（P<0.05）;与正常HK-2细胞PM_2.5染毒组比较,p38MAPK基因沉默HK-2细胞PM_2.5染毒组中c-myc、c-fos、p53、Caspase-8和Caspase-9 mRNA表达分别下降了84.55%、63.55%、34.49%、37.19%和54.97%,差异均具有统计学意义（P<0.05）。Western blot检测结果显示,与正常HK-2细胞未染毒组比较,正常HK-2细胞PM_2.5染毒组中的c-myc和Caspase-8蛋白表达增加,Bcl-2蛋白表达减少;与正常HK-2细胞PM_2.5染毒组比较,p38MAPK基因沉默HK-2细胞PM_2.5染毒组中的c-myc、Caspase-8和Bcl-2蛋白表达减少（均为P<0.05）。结论：成功构建了p38MAPK基因沉默细胞株,PM_2.5可引起HK-2细胞癌基因和凋亡相关基因表达水平升高,p38MAPK基因可能参与PM_2.5对HK-2细胞的毒性作用过程。     

基因沉默HIF-1α在结直肠癌SW480细胞的缺氧与上皮-间质转化中的作用

目的通过基因沉默缺氧诱导因子-1α(HIF-1α),研究其对结直肠癌SW480细胞的生长增殖、侵袭迁移能力,及对锌指转录因子(Snail)与上皮钙黏蛋白(E-cadherin)表达的影响和作用。方法利用氯化钴(CoCl2)化学诱导建立结直肠癌SW480细胞的缺氧模型,设计合成HIF-1α的小干扰RNA(HIF-1α-siRNA)并将其转染入细胞内。通过四甲基偶氮唑兰(MTT)法检测细胞的体外生长增殖活性,体外侵袭实验(Transwell法)检测细胞的体外侵袭迁移力,逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)及免疫蛋白印迹(Western blot)检测细胞中HIF-1α、Snail及E-cadherinmRNA与蛋白的表达情况。结果 MTT法检测结果显示,缺氧条件下,基因干扰组的OD值及细胞存活率均降低(P<0.05);体外侵袭实验结果显示,基因干扰组侵袭迁移率降低(P<0.05);RT-PCR与Western blot检测结果显示,基因干扰组中HIF-1α和Snail mRNA和蛋白的表达明显降低,E-cadherin mRNA和蛋白的表达明显增强(P<0.05),对3种因子进行相关性分析,结果显示HIF-1α和Snail的表达呈正相关,HIF-1α和Snail均与E-cadherin的表达呈负相关(P<0.05)。结论 RNA干扰沉默HIF-1α基因可抑制结直肠癌SW480细胞的体外生长增殖和体外侵袭迁移能力,其机制可能是由于基因沉默HIF-1α导致细胞中Snail低表达,E-cadherin高表达,抑制了EMT发生、发展所致。     

Ad-ING4对人前列腺癌细胞PC-3体内外抑癌效应的研究

背景与目的：腺病毒作为载体已被广泛用于肿瘤的基因治疗。ING4是生长抑制因子家族中的一个成员,是一种潜在的抑癌基因。本研究旨在探讨腺病毒介导的人ING4基因（Ad-ING4）对人前列腺癌细胞PC-3的体内外抑癌效应及其分子机制。方法：将扩增的Ad-ING4重组腺病毒感染PC-3细胞,用RT-PCR法检测ING4在PC-3细胞中的转录;MTT法检测ING4基因对PC-3细胞增殖的影响：流式细胞术和Hoechst33258染色法检测细胞凋亡的变化;半定量RT-PCR法检测ING4基因的表达对PC．3细胞中的bcl-2、bax、p53和caspase-3凋亡相关基因表达的影响。用Ad-ING4重组腺病毒在裸鼠PC-3移植瘤的瘤体内注射治疗,观察肿瘤生长变化,15d后处死裸鼠,摘除瘤体,称瘤重;用免疫组化法检测瘤组织中Bcl-2、Bax、Caspase-3和CD34蛋白的表达。结果：腺病毒介导的人ING4基因在PC-3细胞中成功转录,明显抑制PC-3细胞增殖,上调p53、bax、caspase．3基因表达和下调bcI-2基因表达,并诱导细胞凋亡。Ad-ING4重组腺病毒能显著抑制裸鼠PC-3移植瘤的生长,瘤重的抑制率达37％,与空病毒载体Ad-GFP组和细胞对照PBS组比较差异有统计学意义（P〈0．05）;免疫组化结果显示Ad-ING4重组腺病毒能明显上调Bax和Caspase-3蛋白的表达水平,下调Bcl-2和CD34蛋白的表达水平。结论：腺病毒介导的ING4基因在体内外均可明显抑制人前列腺癌细胞PC-3的生长,诱导其凋亡,其机制可能是上调P53、Bax、Caspase-3蛋白和下调Bcl-2蛋白表达水平。