过表达NF-κB对血管平滑肌细胞增殖与凋亡的影响

目的 为了明确过表达NF-κB对血管平滑肌细胞增殖和凋亡中的作用。方法 将血管平滑肌细胞HA-VSMC分为正常对照组、NF-κB过表达组和空载组。通过构建NF-κB过表达载体,转染HA-VSMC细胞后,通过MTT检测各组HA-VSMC细胞的增殖情况,流式细胞仪检测HA-VSMC细胞凋亡情况,WB 检测各组HA-VSMC细胞NF-κB相对表达情况。结果 通过酶切验证证明NF-κB过表达载体构建正确;成功转染HA-VSMC细胞后,MTT检测结果显示NF-κB被激活可以抑制HA-VSMC细胞增殖;流式检测细胞凋亡结果也证实NF-κB激活可以促进细胞凋亡。结论 NF-κB表达升高会抑制血管平滑肌细胞的增殖并促进血管平滑肌细胞的凋亡。     

泰素帝合并PDTC对PC-3细胞凋亡及NF-κB表达的影响

目的探讨泰素帝合并PDTC对PC-3人前列腺癌细胞的杀伤效应及机制。方法应用流式细胞术、RT-PCR、免疫细胞化学方法,观察不同处理后PC-3细胞凋亡率及NF-κB表达的改变。结果PDTC组PC-3细胞凋亡率和死亡率分别为12%和6.8%,泰素帝组为12.5%和7.2%,两药合并后,凋亡率和死亡率分别增加为25.5%和11.5%;泰素帝有促进NF-κB表达和向核内转移作用;PDTC对NF-κB表达及核转位具有抑制作用;两者合并,NF-κB表达量及核转位减少,与单独PDTC相近。结论泰素帝与PDTC均能诱导PC-3细胞凋亡,并且两者具有协同作用,其机制可能与PDTC拮抗泰素帝的激活NF-κB效应有关。     

脓毒症大鼠Fas-L、Caspase-3和NF-κB的表达与肝细胞凋亡的关系

目的　探讨脓毒症时Fas L、Caspase 3、NF κB在肝细胞凋亡信号转导中的作用。方法　Wistar大鼠 3 0只随机分为观察组和对照组 ,观察组 2 4只采用盲肠结扎穿孔术 (CLP)致脓毒症模型 ,以术后 2h、3h、4h、5h时限分为 4组 ,对照组 6只 ,不行CLP术。各组均测定肝脏组织Fas L、Caspase 3、NF κB蛋白表达及肝细胞凋亡的情况 ,同时测定肝脏功能的变化。结果　CLP术后肝组织Fas L、Caspase 3、NF κB蛋白表达升高与对照组相比有显著差异 ;3h组的Fas L、Caspase 3的含量达高峰 ,4h组的NF κB的含量达高峰 ;血浆中丙氨酸转氨酶 (ALT)、乳酸脱氢酶 (LDH)呈异常改变 ,CLP术后血浆中ALT、LDH增加 ,与对照组相比有显著差异 (P <0 .0 1) ,ALT呈进行性增加 ,LDH以 4h组最显著。肝组织细胞凋亡指数呈进行性增加。结论　由CLP所致的脓毒症过程中 ,肝组织Fas L、Caspase 3蛋白表达升高 ,激活促细胞凋亡的程序 ;NF κB蛋白表达亦升高 ,NF κB活性增强 ,抑制细胞凋亡     

大鼠酒精性肝病细胞凋亡中Caspase-3、NF-κB的表达

目的:观察大鼠酒精性肝病组织病理形态学改变,探讨细胞凋亡与Caspase-3、NF-κB的表达及意义。方法:采用灌胃法制备大鼠酒精性肝病(ALD)模型,模型组用40%酒精8g/(kg·d)分两次灌胃共12周,对照组灌等量的生理盐水,实验第8、12周末分批处死动物。用HE染色和电镜分别观察肝组织病理变化和肝细胞超微结构变化,用TUNEL法检测肝细胞的凋亡,用免疫组化法检测Caspase-3、NF-κB的表达。结果:模型组肝细胞凋亡明显增多,主要分布在中央静脉周围,点状、灶状坏死区;Caspase-3、NF-κB主要分布在中央静脉及肝细胞坏死灶周围细胞的胞质中,模型组Caspase-3、NF-κB表达强度明显高于对照组,且NF-κB的表达与Caspase-3的表达呈正相关。结论:大鼠酒精性肝病的发生、发展过程中Caspase-3、NF-κB参与肝细胞凋亡。     

活化的Notch1下调NF-κB对宫颈癌细胞增殖及凋亡的影响

目的构建重组逆转录病毒表达载体pCLNRX—ICN,研究Notch1过度活化对人宫颈癌HeLa细胞生长的影响,并探讨其作用机制。方法通过逆转录病毒感染,将Notch1（ICN）基因导入并整合到HeLa细胞的基因组中。MTT法检测稳定表达ICN对HeLa细胞生长的影响,并将阳性克隆细胞皮下接种裸鼠,观察ICN基因转染前后细胞系在裸鼠体内的致瘤能力。流式细胞仪分析细胞凋亡的变化,Westem blot及EMSA检测转录因子NF—κB及相关基因的变化。结果成功建立了稳定表达ICN基因的宫颈癌细胞株HeLa-ICN。活化的Notch1显著抑制HeLa细胞体内外增殖能力。而且在诱导HeLa细胞发生凋亡的同时,活化的Notch1可上调HeLa细胞中IκBα的表达,并下调NF-κB活性及其调节基因Bcl-2、c-Myc和cyclin D1的表达。结论活化的Notch1可通过诱导细胞凋亡和下调NF—κB活性而抑制人宫颈癌细胞增殖。     

白血病细胞中NF-κB的活化状态及其对细胞凋亡的影响

目的探讨白血病细胞株中核转录因子NF-κB的活化状态及其对白血病细胞凋亡的影响。方法流式细胞术检测白血病细胞及对照组细胞PBMC凋亡率;双荧光素酶报告基因检测各组细胞NF-κB相对活性;NF-κB抑制剂PDTC作用12h后检测各组白血病细胞NF-κB相对活性及细胞凋亡率的变化。此外,qPCR及Western Blot分别检测各组细胞凋亡相关蛋白Bax及Bcl-2的mRNA及蛋白水平的改变。结果与PBMC比较,各组白血病细胞凋亡率明显下降(P<0.05);双荧光素酶报告基因结果显示各组白血病细胞的NF-κB活性显著高于PBMC(P<0.05);PDTC作用后各组白血病细胞NF-κB活性明显下降,细胞凋亡率明显升高(P<0.05);同时,各组白血病细胞Bax的mRNA及蛋白表达水平均明显增高(P<0.05),而Bcl-2的表达水平明显降低(P<0.05)。结论白血病细胞中存在NF-κB的持续性激活,其激活可导致白血病细胞凋亡受阻。     

NF-κB参与GSK-3β对结直肠癌细胞凋亡的调节

目的:研究糖原合成酶激酶-3β(GSK-3β) 参与结直肠癌细胞凋亡调节的可能机制.方法:以化疗药物5-FU诱导结直肠癌细胞colo320凋亡,用蛋白质印迹法检测凋亡细胞总GSK-3β,同时分离细胞核与细胞质蛋白,分析应用GSK-3β抑制剂氯化锂前后细胞核/质GSK-3β和转录因子NF-κB水平.结果:对照组细胞GSK-3β和NF-κB主要位于胞质中,凋亡组细胞总的GSK-3β水平没有明显改变,但发生了细胞质到细胞核的迁移,其选择性活性抑制剂LiCl可抑制5-FU诱导的细胞凋亡,而GSK-3β活性受抑后,细胞核中NF-κB(P65)水平升高.结论:GSK-3β以细胞质/核迁移方式参与并促进了5-FU诱导的结直肠癌细胞凋亡,转录因子NF-κB可能参与了GSK-3β对凋亡的调节.     

膀胱移行细胞癌的ClC-3和NF-κB的表达及意义

目的:探讨ClC-3和NF-κB在膀胱移行细胞癌中的表达及意义。方法:应用免疫组织化学染色技术检测31例病理诊断为膀胱移行细胞癌和6例正常膀胱组织中ClC-3和NF-κB的表达。结果:膀胱移行细胞癌组织中ClC-3主要在癌细胞的胞膜表达,阳性表达率74%(23/31)。其中膀胱移行细胞癌Ⅰ级阳性表达率40%(4/10),Ⅱ级阳性表达率81%(9/11)、Ⅲ级阳性表达率100%(10/10)。NF-κB在癌细胞的胞浆内表达,阳性表达率83%(26/31)。其中膀胱移行细胞癌Ⅰ级阳性表达率60%(6/10),Ⅱ级阳性表达率90%(10/11),Ⅲ级阳性表达率100%(10/10)。6例正常膀胱组织中仅有1例ClC-3表达弱阳性,NF-κB表达均为阴性。膀胱移行细胞癌组织中ClC-3和NF-κB阳性表达率高于正常膀胱组织(P<0.01)。结论:ClC-3和NF-κB可能与膀胱移行细胞癌病理分级和增殖有关。     

阿魏酸钠对缺氧致脑血管内皮细胞NF-κB、IκBα表达的影响

目的 研究阿魏酸钠对缺氧脑血管内皮细胞核转录因子κB(nuclear factor-κB, NF-κB)及IκBα表达的影响.方法 建立大鼠脑皮质微血管内皮细胞(brain microvascular endothelial cell, BMEC)体外培养模型,并施加12 h缺氧条件,分为对照组、缺氧组、阿魏酸钠组.应用MTT法测定细胞活性,采用放射免疫方法测定内皮素(endothelin-1, ET-1)含量,采用免疫细胞化学法检测BMEC的NF-κB及IκBα表达.结果 阿魏酸钠(100 μg/ml)能抑制缺氧诱导的ET-1释放(P<0.01).缺氧刺激血管内皮细胞NF-κB的表达,降低IκBα的表达,阿魏酸钠可以显著抑制缺氧内皮细胞中NF-κB的表达及核移位现象,增加IκBα的表达和BMEC活性.结论 阿魏酸钠对大鼠脑皮质BMEC缺氧损伤具有保护作用,机制与其减少BMEC分泌ET-1,抑制NF-κB蛋白表达,促进IκBα蛋白表达有关.     

NF-κB活性变化对HL-60细胞凋亡及WT1、Bcl-2基因表达的影响

目的为探讨NF-κB变化对白血病细胞凋亡的影响及其机制。方法 用PDTC抑制HL-60细胞NF-κB的活性，观察NF-κB活性抑制前后阿糖胞苷诱导的HL-60细胞凋亡的变化及WT1、Bcl-2表达水平的变化。结果 NF-κB活性抑制能明显增强阿糖胞苷诱导的HL-60细胞凋亡作用，同时明显下调WT1、Bcl-2的表达。结论 NF-κB活性抑制使白血病细胞凋亡增加，其作用可通过直接下调WT1的表达和间接下调Bcl-2的表达来实现.     

环孢素A诱导人胃癌MGC80-3细胞凋亡以及对NF-κB p65表达的影响

目的研究环孢素A(CsA)诱导胃癌MGC80-3细胞凋亡作用以及对NF-κB p65表达的影响。方法倒置显微镜观察CsA高剂量(5、10、15、20μmol/L)组与CsA低剂量(1、2、4、8μmol/L)组处理MGC80-3细胞24 h后细胞形态变化;MTT比色法分别检测两剂量组处理24 h对MGC80-3细胞增殖的抑制作用,以细胞生长抑制率≤5%评价CsA的非毒性剂量;Annexin-V-FITC/PI双染流式细胞仪(FCM)检测CsA高、低剂量组处理后的细胞凋亡率;Western blot法检测CsA高、低剂量组细胞内NF-κB p65的表达。结果 CsA低剂量组处理MGC80-3细胞24 h后显微镜下见细胞生长状况良好,CsA高剂量组见多数细胞生长贴壁不牢、皱缩变圆及坏死脱落的现象。CsA高剂量组对MGC80-3细胞增殖有抑制作用,而CsA低剂量组显示在4μmol/L浓度范围以下对细胞增殖无明显抑制作用。FCM检测表明CsA低剂量组诱导细胞凋亡率与空白组相比差异无显著性,随药物作用剂量增加CsA高剂量组诱导细胞凋亡作用增强。Western blot法表明CsA高剂量组作用后NF-κB p65表达逐渐降低(P<0.05,P<0.01),而CsA低剂量组NF-κB p65的表达基本不变。结论 CsA诱导人胃癌MGC80-3细胞凋亡作用与药物作用浓度呈剂量效应关系,CsA可能通过抑制NF-κB信号通路诱导MGC80-3细胞凋亡。     

环巴胺对人前列腺癌LNCaP细胞增殖和凋亡的影响

目的 探讨环巴胺（Cyclopamine）对人前列腺癌LNCaP细胞增殖和凋亡的影响.方法 不同浓度环巴胺（1、5、10、15μmol·L^-1）干预LNCaP细胞,分别在不同作用时间（24、48、72h）用MTT法检测环巴胺对LNCaP细胞增殖的抑制,Hoechst染色观察细胞凋亡形态的变化,流式细胞术检测细胞凋亡率的变化.结果 环巴胺5、10、15μmol·L^-1浓度组对LNCaP细胞增殖有显著抑制作用,与对照组相比差异有统计学意义（P＜0.01）.随着浓度的增大对细胞增殖的抑制作用显著增强.10μmol·L^-1组于48 h达到半数抑制量（IC50）.环巴胺10μmol·L^-1组24、48、72h凋亡率分别为37.21％、57.38％、57.98％,15μmol·L^-1组凋亡率分别为21.16％、71.31％、72.90％,与对照组相比差异均有统计学意义（P＜0.01）.随着浓度的增大细胞凋亡率逐渐增大.细胞凋亡形态的改变随着环巴胺浓度增大和作用时间的延长而增强.结论 环巴胺能够明显抑制LNCaP细胞的增殖,诱导细胞凋亡.     

Notch3、LGR5及NF-κB在大肠腺癌组织中的表达及意义

探讨大肠腺癌中Notch3、富含亮氨酸重复序列G蛋白偶联受体5（LGR5）及核转录因子κB(NF-κB)的表达及其临床意义。方法 选取2013年1月—2015年10月遵义医科大学附属医院大肠腺癌标本（腺癌组）54例、腺瘤（腺瘤组）30例、正常大肠黏膜组织（正常组）12例,采用免疫组化法,对各组织中的Notch3,LGR5,NF-κB的表达进行检测。结果 在正常大肠黏膜组、腺瘤组及腺癌组中,Notch3、LGR5、NF-κB的阳性率均呈逐渐递增趋势,Notch3、LGR5和NF-κB在大肠腺癌组织中的阳性率分别为63%（34/54）、57.4%（31/54）、63%（34/54）,分别显著高于其在正常组的阳性率（8.3%、16.7%、25%）(P＜0.05)和腺瘤组的阳性率（26.7%、36.7%、30%）。腺瘤组的阳性率与正常组相比,差异无统计学意义（P＞0.05）。上述指标的表达与大肠癌患者年龄、性别、肿瘤发生部位、肿瘤分化程度及肿瘤直径等均不相关（P＞0.05）;但均与淋巴结转移和Dukes分期有关（P＜0.05）。Notch3及NF-κB的表达还与肿瘤浸润深度有关（P＜0.05）;Notch3在大肠腺癌中的表达与LGR5呈正相关（r=0.325,P＜0.05）。结论 Notch3、LGR5、NF-κB可能参与了大肠腺癌的发生、发展过程,有望成为新的肿瘤标志物,作为大肠癌的早期诊断及预后评价指标     

脑组织缺血耐受性与凋亡相关基因NF-κB和caspase-3的表达研究

目的 探讨脑缺血预处理引起的脑保护机制,为临床缺血性脑血管病的防治提供理论依据.方法 48只健康雄性Sprague-Dawley (SD)大鼠(体重200 ～ 250 g)随机分成3组:假手术组(n=16)、脑缺血预处理组(n=16)、脑缺血组(n=16).假手术组:颈部正中切口暴露右侧颈总动脉后缝合皮肤.脑缺血预处理组:按Koizumi线栓法改良制成局灶-局灶脑缺血模型,先阻断大脑中动脉血流30 min后恢复血流,再灌注24 h,之后再阻断同侧大脑中动脉血流24 h.脑缺血组:阻断大脑中动脉血流24 h.分别观察3组动物的以下指标:按Bederson法进行神经功能评分;以干湿重法计算脑含水量,脑含水量(％)=(湿重-干重)/湿重;用免疫组织化学方法检测大鼠海马组织NF-κB和caspase-3的表达.结果 (1)神经功能评分:假手术组、预处理组和脑缺血组分别为0分、(1.13 ±0.99)分和(2.25±0.89)分.各组间比较差异明显(P＜0.05).(2)脑含水量测定:假手术组、预处理组和脑缺血组分别为(69.9±0.38)％、(75.5±0.54)％和(81.9±0.55)％,各组间比较差异明显(P＜0.05).(3)基因表达检测(个/高倍视野):假手术组、预处理组和脑缺血组NF-κB表达分别为11.2±2.59、25.4±3.78和38.6±7.67;假手术组、预处理组和脑缺血组caspase-3表达分别为0.8±0.84、27.2±3.42和37.8±4.49.预处理组NF-κB和caspase-3的表达均低于脑缺血组,而高于假手术组,各组间比较差异有显著性意义(P＜0.05).结论 脑缺血预处理后对再次缺血有保护作用,凋亡相关基因NF-κB和caspase-3表达的减少在这种脑保护机制中可能起重要作用.     

乙醛调控大鼠HSC中NF-κB的表达及其意义

目的: 研究从大鼠肝脏中新鲜分离的肝星状细胞(hepatic stellate cell,HSC)在乙醛刺激下的增殖、IκB和NF-κB的表达,以探讨乙醛调控HSC中IκB和NF-κB的表达及其意义.方法: 用链霉蛋白酶、胶原酶以及密度梯度离心法分离培养大鼠肝星状细胞.采用四甲基偶氮唑蓝(MTT)比色法、免疫组化(Immunohistochemistry)和凝胶电泳迁移率法(EMSA)分别检测肝星状细胞的增殖、IκB和NF-κB的表达.结果: ①成功分离出大鼠肝星状细胞;② 200 μmol/L的乙醛刺激新分离培养的肝星状细胞后,细胞增殖明显[乙醛组A值(2.21±0.10),空白组(0.52±0.05),P＜0.01];③ 200 μmol/L的乙醛刺激传一代肝星状细胞后,IκB的表达量下降明显[乙醛组光密度值(0.32±0.02),空白组(1.60±0.32),P<0.01];④乙醛刺激传一代肝星状细胞后30 min,NF-κB的表达即有增加,到120 min时达最高值[乙醛组光密度值(3.92±0.82),空白组(0.82±0.04),P<0.01].结论: 乙醛可以使静止的肝星状细胞中IκB表达下降和NF-κB活性增加,从而使HSC活化增殖.     

姜黄素对肺纤维化大鼠肺组织NF-κB和IκBα表达的影响

目的观察姜黄素对博莱霉素诱导的肺纤维化大鼠肺组织NF-κB和IκBα表达的影响。方法 SD雄性大鼠144只,随机分为假手术组、模型组、醋酸泼尼松组及姜黄素高、中、低剂量组,每组24只。假手术组大鼠气管内一次性滴注等体积的生理盐水,余各组滴注盐酸博莱霉素。造模后第1天开始给药,持续到处死动物的前1天。各组动物于第7天、14天、28天随机处死8只,取肺组织分别采用免疫组化及Western-blot方法结合图像分析来检测各组大鼠肺组织中的NF-κB和IκBα表达水平。结果与假手术组相比,第7天、14天、28天时模型组大鼠肺组织中NF-κBp65的含量均显著升高（P〈0.01）,而IκBα的含量均显著降低（P〈0.01）;与模型组相比,醋酸泼尼松组及姜黄素高、中、低剂量均可降低大鼠肺组织中NF-κBp65的含量,而升高IκBα的含量,其中7 d、14 d时姜黄素中剂量组IκBα的含量升高较为显著（P〈0.01）,28d时,姜黄素高剂量组IκBα的含量升高最为显著（P〈0.01）。结论一定剂量姜黄素能促进肺组织中IκBα的表达,而抑制NF-κB的活化和表达。     

辛伐他汀对丙烯醛暴露大鼠NF-κB表达的影响

目的通过检测辛伐他汀对大鼠肺组织中NF活性的影响,了解其对减少丙烯醛引起的气道黏液高分泌的可能机制。方法大鼠雾化吸入丙烯醛建立气道黏液高分泌模型。干预组在雾化吸入丙烯醛同时用不同浓度辛伐他汀灌胃。蛋白印迹（western blot）检测MUC5AC蛋白的表达,凝胶阻滞迁移分析方法（EMSA）检测NF-κB的活性。结果丙烯醛吸入刺激后12天,与正常对照组相比,MUC5AC蛋白、NF-κB活性增加。辛伐他汀干预后,与丙烯醛组相比,MUC5AC蛋白、NF-κB活性降低,应用甲羟戊酸后可以部分抵消辛伐他汀的作用,使MUC5AC蛋白产生、NF-κB活性增加。结论辛伐他汀可抑制丙烯醛所致气道粘液高分泌,其部分机制可能通过甲羟戊酸途径抑制NF-κB活性。     

rhEPO对高糖大鼠视网膜 Müller细胞凋亡及 NF-κB表达影响

目的 探讨重组人促红细胞生成素（rhEPO）对高浓度葡萄糖（高糖）作用下大鼠视网膜Müller细胞凋亡的保护作用及对核因子-κB （NF-κB）表达的影响。方法 将Müller细胞随机分为空白对照组、高糖培养组和不同浓度rhEPO组（分别在高糖培养液中加5、10、20、40 kU/L的rhEPO）。培养48 h后MTT法检测各组Müller细胞活力,并通过SP法检测rhEPO干预下NF-κB蛋白表达的变化。结果 高糖培养组Müller细胞活力较空白对照组显著下降（F=70.39,q=9.13,P〈0.01）;rhEPO干预后与高糖培养组相比细胞活力明显提高（q=4.30～7.08,P〈0.05）。高糖培养组NF-κB表达量较空白对照组明显增高（F=49.76,q=4.37,P〈0.05）,而各rhEPO组的NF-κB表达量与高糖培养组相比明显增高（q=5.74～27.08,P〈0.01）。结论 rhEPO对高糖作用下Müller细胞的凋亡具有保护作用,并能增强NF-κB的表达,其机制可能是通过上调NF-κB的表达来发挥作用。     

缬沙坦对糖尿病大鼠视网膜组织NF-κB表达影响

目的 探讨缬沙坦对糖尿病大鼠视网膜组织核因子-κB(NF-κB)表达的影响.方法 将20只Wistar大鼠随机分为正常对照组、高糖诱导视网膜病变模型组、缬沙坦处理组和缓冲液处理组,每组5只大鼠.正常对照组和模型组不做处理,缬沙坦组给予缬沙坦40 mg/kg灌胃, 缓冲液组给予相同体积缓冲液灌胃,用免疫组织化学法检测视网膜组织中NF-κB的表达水平.结果 正常对照组大鼠视网膜组织NF-κB无阳性表达,模型组、缬沙坦组、缓冲液组NF-κB表达水平均明显高于正常对照组(F=262.00,q=18.06～34.59,P<0.01);缬沙坦组NF-κB表达水平较模型组明显降低(q=15.29,P<0.01).结论 缬沙坦能降低大鼠视网膜组织中NF-κB表达水平,对糖尿病大鼠视网膜病变具有保护作用.