海藻硫酸多糖及其与Fe~(3+)络合物对氧化应激THP-1细胞的防护作用

目的探讨海藻硫酸多糖(sulfated polysaccharide,SP)及其与Fe3+反应生成海藻多糖铁络合物(seaweed sulfated polysaccharide iron complex,SPIC)对氧化应激THP-1细胞的作用。方法用化学检测法比较SP和SPIC主要成分。在此基础上,用分光光度法检测SPIC中铁离子的离解;用电子自旋共振(electron spin resonance,ESR)自旋捕捉技术对络合前后物质的羟自由基清除作用进行对比;用ESR自旋捕捉技术检测氧化应激细胞呼吸爆发的变化;用MTT(methyl thiazolyl tetrazolium,MTT)法观察络合反应前后对正常THP-1细胞和对氧化应激THP-1细胞的存活率的影响。结果 SP与Fe3+反应形成络合物SPIC后,主要作用成分有较大变化,主要是Fe3+浓度含量显著升高,硫酸根和蛋白含量明显下降,而总多糖变化较小。Fe3+离解实验表明4h内SPIC中的铁能全部溶出;ESR自旋捕捉技术表明,络合前后对羟自由基清除作用与浓度密切相关;与SP相比,在相同浓度时SPIC对氧化应激后的细胞存活更高些。结论 SPIC络合上Fe3+后,在一定浓度时对氧化应激细胞的保护作用更佳,主要与络合后的离子性质和浓度密切相关。     

褐藻硫酸多糖铁配合物的稳定性及其清除自由基的作用

目的对褐藻硫酸多糖(SP)和SP作为配体合成的一种新型的功能性补铁剂褐藻硫酸多糖铁复合物(SPIC)的理化性质、结构组成,以及自由基清除能力做了对比研究。方法通过SP与Fe(Ⅲ)在适当浓度和条件下络合生成SPIC,用苯酚法测定SP和SPIC的总多糖含量、Hodgson法测定二者的硫酸根含量和Folin酚试剂法测定蛋白含量,红外光谱分析结构,以及电子自旋共振(ESR)结合自旋捕捉检测二者对自由基的清除作用。结果SP与SPIC都具有很好的稳定性且二者的多糖含量相当,而SPIC中蛋白质含量较SP中低,硫酸根含量约为SP的1/2,Fe(Ⅲ)的含量为21.22%。红外光谱分析,可以鉴别SPIC含有稳定的FeOOH核的类型。二者都有清除自由基的作用,但SPIC对超氧自由基的清除作用更强,而对羟自由基清除作用减弱。结论SPIC中铁的络合,有可能达到既补铁,又发挥SP可清除自由基抗氧化功能的双重作用。     

纯化前后海藻硫酸多糖体外清除自由基的电子自旋共振技术研究

目的对比研究纯化前后海藻硫酸多糖(sulfated polysaccharide from Laminaria japonica,SP)体外自由基清除作用。方法按照不同反应体系分别产生羟自由基·OH、超氧阴离子自由基O2·-与脂质自由基RO·,分别在各体系中加入纯化前后SP,采用电子自旋共振技术(electron spin resonance,ESR)对比研究其自由基清除作用。结果纯化前SP 1.25mg/ml对·OH的清除率为60.78%,但随浓度增加清除作用明显减小;0.8mg/ml基本能够全部清除O2·-;对RO·清除作用不明显。纯化后,SP在一定浓度范围内对·OH的清除作用呈量效关系,12mg/ml基本能全部清除O2·-,4 mg/ml对RO·的清除率为23.65%。结论纯化前低浓度SP虽表现活性氧(ROS)自由基清除作用,但由于成分复杂,其机制难以解释;纯化后SP成分均一性提高,具有一定的ROS和RO·清除作用。     

黑灵芝多糖对高糖诱导人脐静脉内皮细胞损伤的影响

目的研究黑灵芝多糖(PSG-1)在高糖诱导的脐静脉内皮细胞损伤的作用并初步探讨其作用机制。方法传代培养人脐静脉内皮细胞,随机分为3组:正常对照(control)组、高糖(HG)组、高糖+PSG-1(PSG-1+HG)组。各组进行以下指标观察:MTT法检测细胞存活率;超氧化物歧化酶(SOD)、丙二醛(MDA)试剂盒测定细胞内SOD活性和MDA的含量;流式检测细胞内活性氧(ROS)的含量。结果 HG组与Control组比较,细胞存活率和SOD的活性显著下降,ROS的产生和MDA含量升高;PSG-1+HG组与HG组相比,细胞存活率和SOD的活性显著上升,而ROS的产生和MDA含量降低。结论 PSG-1对高糖诱导的脐静脉内皮细胞损伤心肌细胞具有保护作用其机制与增强细胞内SOD活性,降低ROS的生成相关。     

枸杞多糖-4的组成成分及对断乳幼鼠生长的影响

为初步研究枸杞多糖对幼鼠生长发育以及对金属离子吸收的影响，测定了枸杞多糖－4（LBP－4）的组成成分，将120只3周龄断乳雌性昆明种幼鼠分为4组，对照组及3个实验组[LBP-4摄入量分别为5，10，20mg/(kg.d)]；每天记录幼鼠进食量，称量体重，21天后测定了小鼠臂部肌肉人和后腿骨骼中钙，镁，锌，铁元素的含量，结果表明枸 杞多糖－4是一种由6种单糖组成的酸性杂多糖，它可以提高食物转化率和体内锌，铁离子的含量，降低体重。     

利用单糖缩合反应测定多糖

一般来说 ,多糖的定量检测方法可分为二大类 ,一类是直接测定多糖本身 ,如高效毛细管电泳法、高效液相色谱法和酶法。前二者需昂贵的仪器和多糖的纯品 ,后者操作步骤繁琐 ,且需要特定的酶 (这种特定的酶目前仅有一、二种 ) ,故在应用中受到很大限制。另一类是利用组成多糖的单糖的性质进行测定。其中利用单糖缩合反应而建立的方法最多。这些方法简单、快速 ,无需多糖纯品和高级仪器 ,因而被广泛采用〔3～ 9〕。本文是作者结合多年从事多糖测定工作的实践体会。原理　多糖水解生成单糖 ,单糖可与强酸共热产生糠醛或糠醛衍生物 ,然后通过显色…     

纳米氧化锌诱导血管内皮细胞凋亡及氧化应激

目的探讨纳米氧化锌诱导血管内皮细胞(ECV304)凋亡与活性氧(ROS)的关系。方法采用龙胆紫染色观察细胞吞噬效应;四甲基偶氮噻唑蓝(MTT)法测定细胞生长活性;琼脂糖凝胶电泳检测细胞凋亡;紫外分光光度计测定超氧化物歧化酶(SOD)、丙二醛(MDA)的含量;荧光分光光度计测定ROS。结果 ECV304细胞可吞噬纳米氧化锌,实验组MTT值(0.85±0.04)、(0.56±0.03)、(0.51±0.05)、(0.45±0.044)与对照组(1.21±0.11)比较,差异有统计学意义(P<0.01);实验组ROS(33.14±0.38)、(35.82±0.61)、(54.13±0.24)、(68.81±1.24)均高于对照组(30.12±1.23);实验组SOD(25.72±0.48)、(25.64±0.36)、(25.53±0.36)、(25.25±0.44)均低于对照组(26.39±0.40);实验组MDA含量均高于对照组(0.56±0.01);a-硫辛酸组细胞凋亡率明显降低。结论纳米氧化锌可以抑制ECV304细胞的活性,通过ROS途径诱导细胞凋亡,产生细胞毒性。     

血液荧光计测定小儿血中锌原卟啉

正常的卟啉代谢情况下 ,原卟啉 IX在铁络合酶作用下与铁形成血红素 ,但在铁缺乏时 ,没有足够的铁与原卟啉 IX结合而影响血红素的合成。在铅中毒时 ,由于铅可抑制卟啉代谢中的铁络合酶 ,使原卟啉不能与铅结合形成血红素。二者在引起贫血的同时可造成原卟啉在体内堆积 ,此时红细胞内含量丰富的锌离子与堆积的原卟啉结合 [1 ] ,导致红细胞内锌原卟啉(ZPP)含量升高。因此 ,测定小儿血中 ZPP含量对小儿缺铁性贫血及铅中毒的诊断与治疗都有着重要意义。1　原理　　血液荧光计是测定全血中荧光物质的前表面型荧光计 ,能用全血直接进行荧光定量…     

纳米二氧化钛对小鼠成纤维细胞的毒性作用

目的探究纳米二氧化钛对小鼠成纤维(Balb/3T3)细胞的毒性作用。方法将处于对数生长期的Balb/3T3细胞暴露于含终浓度分别为0(对照)、1、10、50、100μg/ml纳米二氧化钛颗粒(粒径分别为30、50、100 nm)的DMEM完全培养基中培养24 h。采用CCK-8法测定细胞活性,通过测定细胞培养液上清中LDH的活力来检测细胞膜的完整性,并通过测定细胞内ROS含量来探讨细胞毒性的产生机制。结果与对照组比较,10~100μg/ml不同粒径的纳米二氧化钛染毒组Balb/c3T3细胞的存活率均较低,差异有统计学意义(P0.05);且随着纳米二氧化钛染毒浓度的升高和纳米二氧化钛粒径的下降,Balb/c3T3细胞的存活率呈下降趋势。与对照组比较,10~100μg/ml不同粒径的纳米二氧化钛染毒组Balb/c3T3细胞培养液上清中LDH的活力和ROS的含量均较高,差异有统计学意义(P0.05);且随着纳米二氧化钛染毒浓度的升高,Balb/c3T3细胞培养液上清中LDH的活力和ROS的含量均呈上升趋势。结论纳米二氧化钛对小鼠成纤维细胞的毒性作用呈明显的剂量效应和尺寸效应,纳米二氧化钛诱导Balb/c3T3细胞产生大量活性氧(ROS)可能是导致其产生细胞毒性的主要原因。     

金属对SH-SY5Y细胞氧化应激及Aβ蛋白沉积影响

目的探讨铜、铁、锌、铝金属对人神经母细胞瘤细胞(SH-SY5Y)的氧化应激及β淀粉样蛋白(Aβ)沉积影响,为预防老年性痴呆提供依据。方法采用不同剂量的铜、铁、锌、铝分别作用于SH-SY5Y细胞,通过噻唑蓝(MTT)法检测细胞生长活性,黄嘌呤氧化酶法检测细胞内超氧化物歧化酶(SOD)活力,比色法测定谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)活力,硫代巴比妥酸法检测脂质过氧化产物丙二醛含量,2',7'-二氯荧光黄双乙酸盐(DCFHDA)探针法检测细胞内活性氧(ROS)水平,酶联免疫(ELISA)试剂盒法测定细胞内Aβ1-42蛋白含量。结果铜、铁、锌、铝呈剂量依赖性地抑制细胞活性,50、200、400μmol/L Cu SO4组SH-SY5Y细胞存活率分别为90.47%、74.81%、64.97%,1、2、4 mmol/L Fe SO4、Al Cl3组SH-SY5Y细胞存活率分别为93.08%、78.28%、56.10%和92.21%、85.30%、62.72%,50、100、200μmol/L Zn SO4组SH-SY5Y细胞存活率分别为91.76%、76.51%、61.27%;与对照组比较,各剂量金属组SH-SY5Y细胞存活率均明显下降,差异有统计学意义(P0.05);与对照组比较,各剂量铜、铁、锌、铝组SH-SY5Y细胞抗氧化酶SOD、GSH-Px活性明显下降,ROS水平和丙二醛、Aβ1-42含量明显增加,差异均有统计学意义(P0.05)。结论铜、铁、锌、铝可致神经细胞毒性作用和Aβ蛋白沉积,其机制可能与金属诱导细胞内ROS产生并导致氧化损伤有关。     

间接配合滴定法测定食盐中硫酸根

目的建立食盐中硫酸根的间接络合滴定检验法。方法样品经前处理后加钡镁混合液,在加热条件下,溶液中硫酸根与钡离子反应生成难溶于水的硫酸钡,过量的钡离子在镁离子的置换作用下,以铬黑T为指示剂,以乙二胺四乙酸二钠(EDTA-Na2)滴定,根据钡离子浓度变化计算硫酸根含量。结果加标前后,本方法回收率(96.2%~100.1%)及精密度(0.6%~2.2%)较国家标准方法回收率(85.1%~88.5%)及精密度(1.6%~6.7%)明显提高。结论相比于国家标准方法,本方法以经济实用的氯化镁代替原方法中乙二胺四乙酸二钠镁,节约成本;合并氯化钡与氯化镁为钡-镁混合液,简化操作步骤;添加60℃水浴加热,提升生成硫酸钡的反应效率,提高检测回收率。试剂成本低,操作简便,精密度高,准确性好,更利于推广普及。     

微囊藻毒素-LR对体外培养大鼠睾丸支持细胞中活性氧及丙二醛含量的影响

目的研究微囊藻毒素-LR(MC-LR)对大鼠睾丸支持细胞中活性氧(ROS)水平和丙二醛(MDA)含量的影响。方法分离并培养10只健康18～20日龄清洁级雄性SD大鼠睾丸支持细胞。调整细胞密度为1×104～2×104个/ml,在终浓度分别为0(溶剂对照)、0.15、1.5、15μg/L的MC-LR培养液中染毒24h,采用MMT法测定细胞活性。调整细胞密度为2×105～4×105个/ml,在终浓度分别为0(溶剂对照)、0.15、1.5、15μg/L的MC-LR培养液中染毒6、12、24h,检测睾丸支持细胞中ROS和MDA含量。结果与溶剂对照组相比,染毒24h后各MC-LR染毒组细胞活性均有所增加,但差异均无统计学意义。与溶剂对照组比较,染毒6、24h时15μg/LMC-LR染毒组睾丸支持细胞ROS含量较高,差异均有统计学意义(P0.05)。且随着MC-LR染毒剂量的增加和染毒时间的延长,睾丸支持细胞ROS含量呈上升趋势。不同染毒时间各染毒组睾丸支持细胞中MDA含量与溶剂组相比,差异无统计学意义。结论睾丸支持细胞暴露于本实验剂量MC-LR时可引起细胞中ROS含量升高,但不引起睾丸支持细胞MDA含量的改变。     

叶黄素对人肝癌细胞HepG2的抑制作用及其机制研究

目的研究叶黄素对人肝癌细胞的抑制作用并探讨其可能机制。方法以HepG2人肝癌细胞株和L02正常人肝细胞株为研究对象,设叶黄素低、中、高剂量组(20、40、80 mol/L)和溶剂对照组。常规细胞培养后进行细胞计数、MTT法测定细胞存活率、DCFH-DA法测定ROS活性、HPLC法测定ATP含量、RT-PCR测定Bax mRNA及p53mRNA表达水平。结果 HepG2细胞经叶黄素干预处理后,低、中、高剂量组的细胞存活率显著降低(P<0.05),并且随干预时间的增加而持续降低,ROS水平和ATP含量显著降低(P<0.05);高剂量组的Bax mRNA表达和中、高剂量组的p53 mRNA表达显著增加(P<0.05)。而L02细胞经叶黄素干预处理后,细胞存活率和ATP含量均无显著性变化。结论叶黄素能抑制人肝癌细胞的生长,其机制可能与叶黄素清除细胞内ROS、抑制肝癌细胞ATP生成及上调凋亡基因Bax和p53 mRNA的表达有关。[营养学报,2012,34(4):332-335]     

苏黄止咳胶囊提取物多糖含量的测定方法研究

目的 为加强产品的过程管理,急需开发苏黄止咳胶囊提取物中多糖含量的测定方法。方法 利用多糖的单糖缩合反应,对比分析苯酚-硫酸法与蒽酮-硫酸法测定其多糖含量的优劣,经实验方法比对,最终采用苯酚-硫酸法作为苏黄止咳胶囊提取物中多糖含量的测定方法,通过对传统的苯酚-硫酸法进行优化,调节硫酸加入量,控制反应环境,得出最佳显色条件,对实验结果不产生干扰,对方法的重复性、精密度、稳定性等进行研究。结果 苏黄止咳胶囊提取物中多糖含量约为5.0～7.0 mg/mL,方法的重复性和精密度良好,供试品放置1h内,吸光度相对标准偏差（relativestandarddeviation,RSD）值为0.3%,显示该检测方法稳定。结论 苯酚-硫酸法测定苏黄止咳胶囊提取物中多糖的含量,方法稳定、可靠、简单、易于操作。     

烹调油烟冷凝物对细胞的氧化损伤研究

目的 通过测定细胞内和细胞上清液中活性氧(reactive oxygen species，ROS)水平。以及细胞膜上ATP酶的含量，对烹调油烟冷凝物(COFC)诱发永生化人支气管上皮细(BEAS-2B)产生ROS及其对细胞膜损伤进行研究。方法 采用分光光度法检测细胞外活性氧，荧光标记细胞内活性氧及ATP酶。结果 在烹调油烟染毒的细胞内ROS的产生与ATP酶的活性降低有关。结论 CA3F引起细胞膜损伤时，ROS的大量产生可能是ATP酶活性降低的主要因素，Ca^2 -ATP酶及Mg^2 -ATP酶对ROS敏感性强。     

人单核细胞对煤焦沥青烟提取物诱导BEAS-2B细胞TRAF2 mRNA表达的影响

目的探讨人单核细胞(THP-1)对煤焦沥青烟提取物(CTPE)诱导BEAS-2B细胞肿瘤坏死因子受体相关因子2(TRAF2)mRNA表达的影响。方法构建THP-1细胞和BEAS-2B细胞的共培养模型,用终浓度3μg/m L的CTPE处理共培养模型,细胞培养至第9代时加入肿瘤坏死因子-α(TNF-α)中和抗体和C-Jun氨基端激酶(JNK)抑制剂SP600125,继续培养至第15代(CC15),设立共培养模型CC15组、TNF-α中和抗体组、JNK激酶抑制剂SP600125组,同代培养的BEAS-2B细胞为对照组,用Real-time PCR方法检测各组细胞中TRAF2 mRNA的相对表达水平。结果与CC10组相比,TNF-α中和抗体对共培养细胞作用不同时间时TRAF2 mRNA的相对表达量均降低(P0.001),作用48 h时TRAF2 mRNA相对表达水平达到最低(0.19±0.02)。SP600125抑制剂作用共培养细胞不同时间时c-Jun mRNA的相对表达水平与CC10组相比差异均有统计学意义(P0.001),36 h组表达水平最低(0.03±0.02)。TNF-α中和抗体组和SP600125抑制剂组TRAF2 mRNA相对表达水平(分别为1.73±0.04和1.88±0.05)均高于对照组(1.07±0.06),低于CC15组(2.23±0.09),差异有统计学意义(P0.05)。结论 THP-1可通过TNF-α上调了CTPE诱导的BEAS-2B细胞中TRAF2 mRNA的表达水平,TRAF2和AP-1之间可能存在负反馈作用。     

硝基苯对雄性小鼠生殖系统的影响

目的 研究硝基苯对小鼠睾丸细胞酶活力和锌离子含量的影响,以初步探讨硝基苯对睾丸细胞损伤的可能机制.方法 将清洁级ICR种雄性小鼠按照硝基苯染毒剂量分为低[2 mg/kg(约为1/300 LD50)]、中[20 mg/kg(约为1/30LD50)]、高[200 mg/kg(约为1/3 LD50)]剂量组,并设对照组(植物油),每组10只,以0.005 ml/g经口染毒,每日1次,连续染毒21 d后,取睾丸、附睾称重,计算脏器系数.采用紫外分光光度法测定葡萄糖-6-磷酸脱氢酶(G-6-PD)活力、乳酸脱氢酶(LDH)活力和蛋白质含量,采用原子吸收法测定锌离子含量.结果 高剂量组附睾系数、睾丸系数、小鼠睾丸组织中G-6-PD活力、LDH活力、锌离子含量均低于对照组,差异有统计学意义(P＜0.01).随着染毒剂量的增加,附睾系数、睾丸系数、小鼠睾丸组织中G-6-PD活力、LDH活力、锌离子含量均呈下降趋势.结论 在本实验条件下,硝基苯可对雄性小鼠的生殖功能产生损伤作用.     

孕期和非孕期黄褐斑患者血清铜、红细胞锌、T3、T4的分析

目的:探讨黄褐斑的发生与甲状腺激素、微量元素的关系。方法:用原子吸收分光光度法测定了孕期和非孕期黄褐斑患者和对照组血清铜,红细胞锌,用放免法测定血清中T3、T4的含量。结果:1、孕期黄褐斑患者血清中T3、T4明显高于对照组,二者有显著性差异(P<0.01)。非孕期黄褐斑患者血清中T4明显高于对照组,二者有显著性差异(P<0.05)。2、孕期和非孕期黄褐斑患者血清铜明显高于对照组,二者均有显著性差异(P<0.01)。3、孕期和非孕期黄褐斑患者红细胞锌明显低于对照组妇女。结论:血清铜、甲状腺激素升高、红细胞锌降低,可能是黄褐斑产生的主要原因。     

注射用水中20种化学因子的分析方法研究

目的建立注射用水中镁、铝、铬、铜、锌、砷、镉、锡、钡、铅、钙、钾、硒、银、钠、汞、氟离子、氯离子、硫酸根、硝酸根等20种化学因子含量的分析方法。方法采用ICP-MS碰撞池技术(CCT),样品直接酸化测定注射用水中16种化学因子的含量;采用离子色谱技术(IC)测定4种阴离子的含量。结果 ICP-MS技术测定16种元素的检出限范围为0.009~0.165 ng/mL;回收率均在80%~120%范围之内;IC法测定F-、Cl-、SO2-4、NO-3的检出限在0.005~0.015μg/mL范围内,回收率在90%~102%范围之内。结论上述方法简便、快速、准确,可用于注射用水中20种化学因子的检测,为注射用水的质量控制提供参考。     

崭露头角的健康食品:活性多糖

活性多糖主要是天然植物多糖和一些真菌多糖物质，它是从食物中提取的特殊营养成分，然后作为基料，经深加工制成食品或添加到食物中生产出来的保健食品，发挥其独特生理效应，对人类健康长寿起积极的促进作用。　　某些植物中的多糖成分，可在薏米、紫菜、甘蔗、海藻以及百合科、石蒜科、兰科、虎耳草科等植物的粘液中提取。这些多糖组分，具有不同的生理、生化效应，有些多糖可显著降低心肌脂褐质和皮肤中羟脯氨酸含量以及单氨氧化酶的活性，从而起到延缓机体细胞衰老的作用；某些多糖可降低机体乳酸脱氢酶活性，使肝糖元含量显著增加而…