高糖诱导人脐静脉内皮细胞凋亡的机制

目的 探讨高糖诱导人脐静脉内皮细胞凋亡的机制.方法 (1)将人脐静脉内皮细胞分为3组:正常对照组(5.5 mmol/L葡萄糖)、高渗对照组(5.5 mmol/L葡萄糖+27.5 mmol/L甘露醇)、高糖组(11 mmol/L、22 mmol/L、33 mmol/L、44 mmol/L葡萄糖),以上各组细胞培养48小时,采用流式细胞术及Hoechst 33258核染色观察各组细胞凋亡情况.(2)人脐静脉内皮细胞分为3组:正常对照组(5.5 mmol/L葡萄糖)、高糖组(33 mmol/L葡萄糖)、高糖+雷帕霉素组(雷帕霉素预处理24小时后加入33 mmol/L葡萄糖),以上分组细胞均培养48小时,Western blot分析各组马铃薯球蛋白(Tuberin)、P-Tuberin、核糖体蛋白S6激酶(P70S6K)、P-P70S6K、bcl-2、Bax蛋白表达水平.结果 (1)与正常对照组早期凋亡率(2.9200 +0.0159)％相比,高糖组明显增加,且呈剂量依赖性[(4.8400 ±0.0092)％、(6.7200±0.0041)％、(8.4900 ±0.0047)％、(9.9500±0.0124)％,P均＜0.05)];高渗对照组早期凋亡率(2.9200±0.0023)％与正常对照组比较差异无统计学意义(P＞0.05);与正常对照组晚期凋亡率(2.3700±0.0059)％比较,高糖组晚期凋亡率显著增加,且呈剂量依赖性[(3.2500±0.0280)％、(4.3600±0.0191)％、(5.9800±0.0083)％、(7.0100±0.0099)％,P均＜0.05];高渗对照组细胞凋亡率为(2.3600±0.0205)％,与正糖对照组比较差异无统计学意义(P＞0.05).(2)与正常对照组比较,高糖组P-Tuberin/Tuberin(1.2774±0.0026比1.0052±0.0012)、P-P70S6K/P70S6K(1.2129 ±0.0065比0.8157 ±0.0030)、Bax/β-actin (0.7484±0.0004比0.3966 ±0.0029)表达水平均显著升高,差异有统计学意义(P均＜0.05),bcl-2/β-actin表达明显降低(0.2949±0.0010比0.6398±0.0011,P＜0.05);高糖+雷帕霉素组P-P70S6K/P70S6K(0.9287±0.0019)、Bax/β-actin(0.5558±0.0052)表达水平低于高糖组(P＜0.05),bcl-2/β-actin (0.4546±0.0023)表达高于高糖组(P＜0.05).结论 高糖可能通过激活Tuberin/mTOR活性,从而降低bcl-2、增加Bax表达而导致血管内皮细胞凋亡.     

神经酰胺在高糖诱导的人脐静脉内皮细胞凋亡中的作用

目的 观察神经酰胺（CER）在高糖诱导的人脐静脉内皮细胞凋亡中的作用。方法分别以流式细胞术和TUNEL法、高压液相色谱法等检测细胞凋亡、CER和酸性鞘磷酯酶（ASM）。结果（1）高糖呈浓度依赖性引起细胞内CER和酸性ASM活性增加,左旋葡萄糖无类似效应;（2）地昔帕明可抑制高糖诱导的内皮细胞凋亡,外源性（CER）可逆转其抑制作用;（3）外源性CER及酸性ASM可诱导内皮细胞凋亡;（4）高糖诱导的细胞内CER增加与高糖浓度及细胞凋亡均正相关。结论由酸性ASM水解引起的细胞内神经酰胺增加参与了高糖诱导的内皮细胞凋亡。     

谷氧还蛋白1在高糖诱导的血管内皮细胞凋亡中的作用及其机制

目的: 观察谷氧还蛋白1(glutaredoxin1, Grx1)在高糖诱导的血管内皮细胞凋亡中的作用及机制.方法: 在高糖环境中培养人脐静脉内皮细胞,制备人脐静脉内皮细胞损伤模型. 细胞分为正常对照组、损伤组、Grx1预保护组. 倒置显微镜下观察细胞形态. MTT比色法检测细胞活力以初步观察Grx1对细胞损伤的作用;采用Annexin V-FITC/PI 双染法, 流式细胞仪检测Grx1对人脐静脉内皮细胞凋亡的影响;利用Western blot法分析Grx1对Akt、JNK蛋白水平表达的影响.结果: Grx1预保护组与损伤组比较, 细胞状态明显改善. 与高糖损伤组比较, Grx1预保护组的细胞存活率显著提高(78%±3% vs 59%±2%, P<0.05), 早期凋亡率(0.2360%±0.0156%vs 0.4156%±0.0374%, P<0.05)和晚期凋亡率(0.2433%±0.0278% vs 0.3689%±0.0083%,P<0.05)均明显降低. 与正常对照组相比, 高糖组p-JNK相对含量明显增多(0.64±0.07 vs0.48±0.03, P<0.05), 而高糖组p-Akt水平较正常对照组显著降低(1.29±0.035 vs 0.69±0.11,P<0.01). 同时, hGrx1保护后p-JNK蛋白水平较高糖组显著降低(0.39±0.05 vs 0.64±0.07,P<0.05);而p-Akt蛋白水平较高糖组显著增高(0.69±0.11 vs 1.07±0.13, P<0.01).结论: Grx1可通过抑制JNK激活及激活Akt通路来拮抗高糖诱导的内皮细胞凋亡.     

热休克蛋白27抗细胞凋亡的分子机制

热休克蛋白(heat shock proteins，HSPs)是存在于细胞内的一种主要分子伴侣，在生理和应激条件下均能表达。它们是在结构上拥有高度保守晶体蛋白序列的一组多肽，按分子量可以分为HSP100、HSP90、HsP70、HSP60和分子量为20000～30000的小分子量HSPs(small HSPs，sHSPs)、泛肽等几个亚家族。HSP25／27(啮齿动物25000，     

心肌特异性高表达热休克蛋白27抑制阿霉素诱导的小鼠心肌凋亡

目的观察小鼠心肌特异性高表达热休克蛋白27(Hsp27)对于阿霉素(Dox)诱导的心肌细胞凋亡的影响。方法野生型(WT)和心肌特异性高表达Hsp27的转基因(TG)小鼠,实验组和对照组(n=3)分别用Dox25mg/kg和等体积生理盐水进行一次腹腔注射,3d后取心脏,经TUNEL染色和蛋白印记分别观察心肌细胞凋亡及可诱导热休克蛋白(iHsps)的表达情况。结果Hsp27在TG鼠心肌中特异性高表达。Dox处理后WT和TG鼠的心肌细胞凋亡较对照组均显著增加,但TG的凋亡比WT显著减轻[(5.22±0.60)‰和(10.67±2.41)‰,P<0.01];Dox刺激后Hsp70和血红素加氧酶1(HO-1)表达增加,TG鼠表达水平要显著高于WT鼠[Hsp70:(1.793±0.237)和(1.013±0.14),P<0.01;HO-1:(6.884±1.104)和(4.385±0.463),P<0.05],而αB-晶体蛋白(αBC)在各组间没有显著差异。结论Hsp27心肌特异性高表达能够有效抑制Dox诱导的小鼠心肌细胞凋亡。     

高糖诱导血管内皮细胞凋亡及其调控机制研究进展

凋亡是一系列因素发生变化最终导致细胞程序性死亡,在维持组织稳态中起重要的作用。一大群物理、化学以及生物的因素能通过激活复杂却又严格控制的细胞内信号传导通路来激发凋亡。高糖或糖尿病在心血管疾病中起重要作用,其对内环境的改变能够直接或间接的导致细胞凋亡,尤其是在心血管疾病中占有重要地位的血管内皮细胞所发生的凋亡,更是受高糖环境的影响。本文对高糖环境下,内皮细胞发生凋亡的信号通路机制的近期研究进展作一综述。     

高糖诱导血管内皮细胞凋亡及其调控机制研究进展

凋亡是一系列因素发生变化最终导致细胞程序性死亡,在维持组织稳态中起重要的作用。一大群物理、化学以及生物的因素能通过激活复杂却又严格控制的细胞内信号传导通路来激发凋亡。高糖或糖尿病在心血管疾病中起重要作用,其对内环境的改变能够直接或间接的导致细胞凋亡,尤其是在心血管疾病中占有重要地位的血管内皮细胞所发生的凋亡,更是受高糖环境的影响。本文对高糖环境下,内皮细胞发生凋亡的信号通路机制的近期研究进展作一综述。     

高糖诱导人脐静脉内皮细胞衰老

使用正常糖浓度培养液和高糖培养液处理人脐静脉血管内皮细胞48h后,观察细胞形态,β－半乳糖苷酶染色鉴定衰老细胞,PCR—ELISA法检测端粒酶的活性,流式细胞仪检测细胞周期和细胞内活性氧水平。结果发现,与正常糖浓度处理的内皮细胞比较,不同浓度高糖培养液作用48h后的内皮细胞β－半乳糖苷酶染色阳性细胞明显增多,细胞周期多停滞于G0／G1期,S期显著减少,端粒酶活性明显下降,细胞内活性氧水平明显升高（P〈0．05或P〈0．01）。认为高糖环境可加速内皮细胞衰老进程,其作用机制可能与氧化应激有关。     

高糖对人脐静脉内皮细胞表面血栓调节蛋白表达及活性的影响

目的观察高糖对血栓调节蛋白在原代人脐静脉内皮细胞的表达和活性的影响。方法体外培养人脐静脉内皮细胞,实验分为三组:1对照组;210 mmol/L葡萄糖组;320 mmol/L葡萄糖组,孵育细胞24 h。分别用流式细胞术、实时荧光定量聚合酶链反应和酶标仪检测血栓调节蛋白的蛋白、m RNA表达及活性强度。结果20 mmol/L葡萄糖组和10 mmol/L葡萄糖组相比于对照组在血栓调节蛋白的蛋白(41.38±3.41、32.60±2.59比27.96±1.58)、m RNA(2.05±0.19、1.44±0.32比1)水平上均升高(P0.05),20 mmol/L葡萄糖组与对照组相比在血栓调节蛋白活性上也增强(0.4157±0.0129比0.3957±0.0100,P0.05),但10 mmol/L葡萄糖组与对照组在血栓调节蛋白活性上差异无显著性。结论高糖可增加血栓调节蛋白表达,并增强其活性,提示这可能为内皮细胞对于高糖的一种防御机制。     

cAMP反应元件结合蛋白在高糖所致内皮细胞损伤中的作用

目的探讨cAMP反应元件结合蛋白(CREB)在高糖致内皮细胞损伤中的作用。方法建立高糖诱导的血管内皮细胞损伤模型,将内皮细胞ECV304分为对照组、高糖组、转染PCI组、转染PCI+高糖组、转染PCI-CREB组和转染PCI-CREB+高糖组,采用MTT法检测细胞存活率,流式细胞仪检测细胞凋亡率,硫代巴比妥酸法检测丙二醛(MDA)含量,黄嘌呤氧化酶法检测细胞超氧化物歧化酶(SOD)活性。结果转染PCI-CREB组和转染PCI组内皮细胞存活率、SOD活性、MDA含量和细胞凋亡率与对照组相比差异无统计学意义(P>0.05);与对照组相比,高糖组内皮细胞存活率和SOD活性明显下降,而MDA含量和细胞凋亡率明显增加(P<0.05);转染PCI+高糖组内皮细胞存活率、SOD活性、MDA含量和细胞凋亡率与高糖组相比差异无统计学意义(P>0.05);与高糖组相比,转染PCI-CREB+高糖组细胞存活率和SOD活性明显高于高糖组(P<0.05),而MDA含量和细胞凋亡率明显低于高糖组(P<0.05)。结论过表达CREB对高糖诱导的内皮细胞损伤具有保护作用。     

Protection effect of [Gly14]-Humanin from apoptosis induced by high glucose in human umbilical vein endothelial cells

AimsHumanin (HN) is known for its anti-apoptotic functions in neuronal cells. In this study, we sought to investigate the protective effect of [Gly14]-Humanin (HNG) in high glucose (HG)-induced apoptosis of human umbilical vein endothelial cells (HUVECs).Methods3-(4,5-Dimethylthiazol-2-yl)-2,5-diphenyltetrazolium bromide (MTT) assay was used to examine cell viability, DNA chromatin morphology was assessed using Hoechst 33342 staining, and the generation of intracellular reactive oxygen species (ROS) was assessed using the fluorescent probe dichlorofluorescein diacetate (DCFH-DA). The expression of poly ADP-ribose polymerase (PARP), the pro-apoptotic protein bax and the anti-apoptotic protein bcl-2 were examined using western blot analysis. The mRNA level of bax and bcl-2 were detected by quantitative Real-Time PCR.ResultsCompared with treatment with HG 72 h, pretreatment with HNG for 3 h significantly increased cell viability (P < 0.001), reduced nuclear fluorescence of HUVECs (P < 0.05), the levels of cleaved PARP (P < 0.05), ROS formation (P < 0.05) and the ratio of bax/bcl-2 (P < 0.05) compared with treatment with HG for 72 h. Quantitative Real-Time PCR showed that mRNA level of bax reduced (P < 0.05) and mRNA level of bcl-2 increased (P < 0.05) after pretreatment with HNG.ConclusionsOur results imply that HNG can protect HUVECs from apoptosis induced by HG through the bax/bcl-2 pathway.     

艾塞那肽抑制高糖诱导内皮细胞凋亡的作用机制

在正常糖浓度(5.5 mmol/L)和高糖(33 mmol/L)培养的人脐静脉内皮细胞(HUVECs)分别加入不同浓度的艾塞那肽并干预不同时间后,噻唑蓝(MTF)法检测细胞活力,应用流式细胞仪检测细胞早期凋亡率,Western印迹法检测蛋白激酶B(Akt)磷酸化、Bcl-2和Bax蛋白表达水平.结果显示,HUVECs经高糖培养48和72 h后,细胞活力明显下降(P＜0.01).经1、10和100 nmol/L艾塞那肽干预48 h后,细胞活力明显增加,并呈浓度依赖性(P＜0.01).与正常糖浓度组比较,高糖组细胞凋亡率升高,Akt磷酸化和Bcl-2蛋白表达水平下降,Bax蛋白表达增加,Bcl-2/Bax比值降低(P＜0.01).艾塞那肽干预后,细胞凋亡率下降,Akt磷酸化和Bcl-2蛋白表达增加,Bax蛋白表达下降,Bcl-2/Bax比值升高(P＜0.01),而艾塞那肽的作用可被磷酸肌醇3激酶(PI3K)抑制剂LY294002所对抗(P＜0.01).提示艾塞那肽可通过PI3 k/Akt信号通路调节Bcl-2/Bax蛋白表达来抑制高糖诱导的内皮细胞凋亡,起到保护内皮细胞的作用.     

高糖对血管内皮细胞凋亡的影响及卡托普利的干预作用

人脐静脉内皮细胞培养分5组：正常葡萄糖为对照,高糖浓度有20mmol/L,40mmol/L,20mmol/L糖联合10-5mol/L卡托普利,40mmol/L糖联合10-5mol/L卡托普利。细胞凋亡和Fas、Bcl-2基因表达均用流式细胞仪测定。高糖组均引起细胞凋亡增加,引起Fas表达增加和Bcl-2表达减少。卡托普利能够减少高糖所致细胞凋亡,减少Fas表达,增加Bcl-2表达。     

高浓度葡萄糖对人脐静脉内皮细胞内皮型一氧化氮合酶活性及其蛋白表达的影响

不同浓度葡萄糖及高浓度葡萄糖（高糖）加胰岛素孵育人脐静脉内皮细胞（HUVECs）不同时间后，高浓度葡萄糖呈浓度和时间依赖性明显抑制内皮型一氧化氮合酶（eNOS）活性，生理浓度的胰岛素可部分地逆转高糖对eNOS活性及其表达的抑制作用。     

红芪多糖对高糖条件下人脐静脉内皮细胞功能的影响

目的研究红芪多糖（HPS）对高糖条件下人脐静脉内皮细胞（HUVEC）合成和释放一氧化氮（NO）和内皮素-1（ET-1）的影响及作用机制。方法从新鲜脐带中分离HUVEC进行鉴定、培养,细胞分为正常对照组、高糖组（30mmol／L葡萄糖）和HPS干预组。MTT比色法分析HPS对高糖诱导HUVEC增殖率的影响,流式细胞术Annexin—V／PI双染法检测细胞凋亡,硝酸盐还原酶法检测上清液中NO的水平,分光光度法检测细胞内一氧化氮合酶（NOS）、诱导型一氧化氮合酶（iNOS）的浓度,酶联免疫吸附（ELISA）法检测上清液中ET-1的含量,实时荧光定量聚合酶链反应（RT—PCR）检测细胞内皮型一氧化氮合酶（eNOS）、ET-1和c-Jun氨基末端激酶l（JNKl）mRNA的表达水平。组间差异显著性检验使用单因素方差分析,组间两两比较使用LSD法。结果高糖组在6h[（82．4±3．5）％]、24h[（68．2±1．4）％]、48h[（63．0±2．9）％]的细胞增殖率显著低于对照组（100％,P〈0．05）;HPS干预组细胞增殖率随浓度变化呈现先上升后下降的趋势,其中50mg／L[（85．34-4．6）％]、100mg／L[（89．6±1．1）％]、200mg／L[（88．8±3．6）％]HPS干预组较高糖组增加,差异具有统计学意义（均P〈0．05）;高糖组NO[（24．84±1．34）μmol／L]、NOS[（0．54±0．06）U／m1]含量较正常对照组呈现下降的趋势,iNOS[（0．133±0．015）U／m1]和ET_l[1（0．740±0．070）ng／m1]含量则在各时间点均高于对照组,HPS干预组升高不同时间点HUVEC内NO[（23．20±0．55）p．mol／L]、NOS[（0．46±0．10）U／m1]、以及降低iNOS[（0．08±0．020）U／m1]和ET-1[（0．710±0．030）μg/L]的变化,P〈0．05,使其趋向正常水平;HPS可提高高糖所致内皮细胞eNOSmRNA的水平[（0．33±0．02）比（0．23±0．04）],降低ET-1mRNA的水平（2．28±0．31比2．79±0．29）;高糖组细胞内JNK1mRNA水平表达（2．95±0．05）较正常对照组（1．00±0．00）显著增加（P〈0．05）,而HPS干预组（1．45±0．05）则较高糖组（2．95±0．05）明显减少（P〈0．05）。结论HPS对体外高糖诱导HUVEC损伤具有保护作用,这一作用可能与抑制JNK信号通路有关。     

Sulforaphane induces inhibition of human umbilical vein endothelial cells proliferation by apoptosis

Sulforaphane (SUL), one of the isothiocyanates (ITCs), has recently been focused due to its inhibitory effects on tumor cell growth in vitro and in vivo, which is dependent on the direct effect on cancer cells. In the present study, we aimed to investigate the potential anti-angiogenic effect of SUL and its mechanism of action. Using the human umbilical vein endothelial cells (HUVECs) as a model of angiogenesis, we investigated the effect of SUL on the various steps of angiogenesis, including the proliferation of endothelial cells, tubular formation, and matrix metalloproteinase (MMP) production. Sulforaphane induced a dose-dependent decrease in the proliferative activity of endothelial cells, which was dependent on cell apoptosis. Also SUL inhibited tube formation on matrigel, but did not affect MMP production. The present results demonstrate the anti-angiogenic activity of SUL and its potential use as an anti-cancer drug is suggested.     

C肽和胰岛素对高糖诱导的内皮细胞凋亡的影响

高糖可导致人脐静脉内皮细胞凋亡,不同浓度的C肽和胰岛素对高糖诱导的内皮细胞凋亡影响程度不同。合理应用C肽可能对糖尿病大血管病变的防治起到有益的作用。     

自由基清除剂MCI-186对高糖环境中内皮细胞凋亡的干预作用

观察内皮细胞在高糖环境及经肿瘤坏死因子α(TNF-α)诱导后的细胞凋亡情况，并加入自由基清除剂MCI-186予以干扰。检测细胞DNA裂解片段及凋亡信号蛋白(caspase)的表达量，以期探讨MCI-186对高糖环境中血管内皮细胞凋亡的干预作用及凋亡机制。发现高糖环境可增加内皮细胞凋亡率，并上调TNF-α诱导的调亡。MCI-186可抑制高糖诱导的细胞凋亡。但无法干预高糖环境中TNF—a诱导的凋亡。