骨碎补含药血清对成骨细胞增殖、成骨的影响

目的研究骨碎补含药血清对成骨细胞的增殖、成骨的影响。方法取乳鼠颅骨,利用二型胶原酶反复消化,离心,提取成骨细胞。利用骨碎补含药血清干预,分别测定细胞增殖率、ALP活性、钙盐沉积量、骨钙素分泌量等,研究骨碎补含药血清对成骨细胞的增殖、成骨分化及其抗氧化性的影响;结果用含药血清干预,测定增殖率、ALP活性、钙盐沉积量、骨钙素分泌量、钙化结节量均高于空白对照组。结论骨碎补含药血清可以促进成骨细胞的增殖、成骨分化及其增强其抗氧化性。     

淫羊藿苷对钛颗粒作用下成骨细胞增殖和分化的影响

[目的]研究淫羊藿苷(icariin,ICA)对钛(titanium,TI)颗粒作用下成骨细胞增殖和分化的影响。[方法]多次酶消化法体外分离新生大鼠颅骨成骨细胞,进行原代培养。双重荧光染色激光共聚焦显微镜下观察成骨细胞吞噬钛颗粒后的组织形态学改变。CCK-8法检测0.01、0.05、0.1、0.5、1mg/ml钛颗粒对成骨细胞增殖能力的影响,并筛选出半数致死浓度。在此浓度作用下分别加入10-5、10-6、10-7、10-8、10-9、10-10mol/L的淫羊藿苷进行干预,观察淫羊藿苷对钛颗粒作用下成骨细胞增殖能力的影响,找出最佳药物浓度。以最佳药物浓度干预钛颗粒作用下的成骨细胞,于第3、7、14 d ELISA法检测各组细胞碱性磷酸酶(alkaline phosphatase,ALP)活性,观察药物对成骨细胞分化功能的影响。[结果]激光共聚焦显微镜下可见吞噬了钛颗粒的成骨细胞皱缩变形,微丝(F-actin)排列紊乱。不同浓度的钛颗粒均可抑制成骨细胞增殖,呈浓度依赖性,与对照组相比有显著差异(P<0.05),0.5mg/ml为钛颗粒的半数致死浓度。10-10-10-6mol/L的淫羊藿苷均能促进钛颗粒作用下的成骨细胞增殖(P<0.05),与钛颗粒组相比具有显著差异(P<0.05),10-9mol/L为淫羊藿苷的最佳作用浓度。在此浓度下的淫羊藿苷可以显著抑制钛颗粒引起的成骨细胞ALP活性下降(P<0.05)。[结论]淫羊藿苷可以在体外逆转钛颗粒对成骨细胞增殖和分化的抑制作用,有望成为防治人工关节无菌性松动的有效药物。     

骨形成蛋白联合雷奈酸锶对成骨细胞增殖和分化的影响

目的探索骨形成蛋白(bone morphogenetic protein,BMP)联合雷奈酸锶(strontium ranelate,SR)对成骨细胞增殖和分化的影响,为临床上两者联合使用可行性提供细胞学基础。方法获取SD大鼠成骨细胞,随机分为对照组、SR组、BMP组和BMP-SR组等4组,培养基中分别添加安慰剂、SR、BMP-2和SR联合BMP-2干预,培养12 d后,通过MTT法检测细胞的增殖情况,碱性磷酸酶(alkaline phosphatase,ALP)及茜素红染色观察细胞的功能状态,蛋白电泳观察骨钙素(osteocalcin,OCN)及Runx2蛋白的表达情况。结果 SR及BMP-2单独作用于成骨细胞时,都可以明显促进成骨细胞的增殖,增加ALP活性及矿化能力,同时明显促进OCN及Runx2蛋白的表达;联合使用效果明显优于单独使用,比较差异有统计学意义(P0.05)。结论 BMP-2及SR都可以明显促进成骨细胞增殖和分化,且联合使用效果更佳。     

阿胶强骨口服液含药血清对胎鼠成骨细胞护骨素及护骨素配体mRNA表达的影响

目的研究阿胶强骨口服液含药血清对胎鼠成骨细胞中OPG、RANKL表达的影响,探讨阿胶强骨口服液治疗骨质疏松的分子机制。方法 3月龄Wistar大鼠(雌雄各半)30只,随机分为阿胶强骨口服液,雌激素,及生理盐水对照组,灌胃7d后,制备实验组和对照组的含药血清。将新生SD大鼠分离的颅骨成骨细胞,制成单细胞悬液,消化传代,取二代培养的成骨细胞,制成细胞悬液。培养细胞被分为5组,分别加同体积药液,对照组仅加培养液,继续培养。采用MTT比色分析、3H-胸腺嘧啶核苷(3H-TdR)渗入法测定成骨细胞增殖,用放免法测定细胞内BGP含量,RT-PCR测定胎鼠成骨细胞中OPG、RANKL mRNA的表达。结果阿胶强骨口服液含药血清以剂量依赖方式促进成骨细胞的增殖,与对照组相比,差异显著(P<0．05)。成骨细胞OPG基因mRNA表达在阿胶强骨口服液含药血清100ml／L时最强,与雌激素组比较无显著性差异(P>0 05),且明显高于对照组(P<0．05)。成骨细胞RANKL基因mRNA表达在1000ml／L阿胶强骨口服液含药血清与雌激素组比较无显著性差异(P<0 05),且明显低于对照组(P<0．05)。结论阿胶强骨口服液可在细胞水平上促进骨的合成代谢及前成骨细胞的有丝分裂,分子水平上调节 OPG／RANKL表达而治疗骨质疏松。     

淫羊藿苷含药血清对体外培养大鼠颅骨成骨细胞增殖与分化的影响

目的 研究淫羊藿苷含药血清(Serum of rats administered icariin,SI)对体外培养大鼠颅骨成骨细胞(Rat calvarial osteoblasts,ROB)增殖和分化成熟的影响.方法 以每1 kg体重0.25 g淫羊藿苷的剂量灌服成年大鼠制得淫羊藿苷含药血清,以灌服等体积生理盐水制得对照血清.分别以2.5%,5%和10%3种浓度加入ROB培养基,检测对成骨细胞增殖、碱性磷酸酶(ALP)活性和钙化结节数等的影响.结果 2.5%和5%SI均促进细胞的增殖,尤以5%浓度更为明显,该浓度含药血清提高ROB的ALP活性,增加Ⅰ型胶原表达,并显著提高钙化结节形成数量.结论 淫羊藿经口服后的代谢产物可刺激成骨细胞增殖,促进其分化成熟,是淫羊藿抗骨质疏松的有效成分.     

脂联素对人成骨细胞增殖作用的研究

目的 观察脂联素受体1和2mRNA和蛋白在体外培养的人成骨细胞的表达及其对人成骨细胞的增殖作用，探讨脂联素对成骨细胞的作用机制。方法 分别用RT-PCR和Western blot方法检测脂联素受体1和2mRNA及蛋白的表达，^3H-TdR和细胞计数检测脂联素对人成骨细胞增殖的作用。结果 人成骨细胞表达脂联素受体1和2的mRNA，但只检测到脂联素受体1蛋白的表达，脂联素能够促进人成骨细胞增殖，并呈剂量依赖性。结论 脂联素对成骨细胞可能起旁分泌或内分泌作用。     

晚期糖化终末产物对大鼠成骨细胞增殖和分化的影响

目的　通过探讨晚期糖化终末产物（ Ａｄｖａｎｃｅｄ ｇｌｙｃｏｓｙｌａｔｉｏｎ ｅｎｄｐｒｏｄｕｃｔｓ Ａ Ｇ Ｅｓ）对大鼠成骨细胞增殖和分化的影响,以期揭示老年性骨质疏松症的发病机理。方法　体外合成 Ａ Ｇ Ｅｓ 以不同浓度加入成骨细胞培养体系,作用不同时间后,用 Ｍ Ｔ Ｔ 法测定细胞增殖活性,通过测定碱性磷酸酶观察成骨细胞的分化。结果　较低剂量 Ａ Ｇ Ｅｓ 在不同的培养时间均显著促进大鼠成骨细胞增殖。较高剂量（８００ μｇ／ｍ ｌ～１ ０００ μｇ／ｍ ｌ）只有在培养２４小时具有促增殖作用。低剂量 Ａ Ｇ Ｅｓ 促进成骨细胞分化,中等剂量促分化作用延迟,高剂量无促分化活性。结论　过多的 Ａ Ｇ Ｅｓ 相对降低成骨细胞的数量和活性,使骨形成作用小于骨吸收作用,导致骨质疏松     

bFGF对前脂肪细胞增殖和分化的作用

目的:探讨bFGF对体外培养前脂肪细胞增殖和分化活性的影响。方法:无菌条件下抽吸的脂肪组织进行前脂肪细胞的原代培养,加入生长因子bFGF 10ng/ml,用MTT法观察人前脂肪细胞生长状态,测定前脂肪细胞合成甘油三酯的总量。结果:bFGF有明显的促增殖作用,与对照组比较第1、2天差异不明显,随时间的推移,第6～7天到达高峰;到分化6天和9天时,甘油三酯总量明显升高,与对照组相比差异均有显著性(P<0.05)。结论:重组人bFGF可促进前脂肪细胞的增殖和分化。     

17β-雌二醇对大鼠骨髓间充质干细胞成骨分化的作用

目的观察17β-雌二醇（E2）对大鼠骨髓来源的间充质干细胞（MSCs）成骨分化的作用，探索雌激素替代治疗绝经后骨质疏松的实验机制。方法体外分离培养大鼠骨髓间充质干细胞，利用贴壁法纯化细胞。连续传代3次后，进行成骨细胞的诱导分化，将细胞分为4个实验组，分别添加含有0．13001—0．1nmol·L^-1 17β-E2的成骨细胞诱导分化液，同时设空白对照组。各组细胞培养第7天、14天和21天时利用放免法、酶联免疫吸附法分别测定碱性磷酸酶活性（alkaline phosphatase，ALP）、骨钙素（bone gla protein，BGP）以及Ⅰ型胶原含量，同时在培养21天时用茜素红染色法计数各组细胞的矿化结节数。结果与对照组相比，各实验组表达ALP活性、BGP与Ⅰ型胶原含量、形成矿化结节能力随17β-E2浓度的增加而增强，呈剂量依赖性。差异均有显著性，P〈0．05。结论17β-E2能增强MSCs体外诱导成骨分化，是17β-E2在绝经后骨质疏松预防和治疗中发挥作用的实验依据。     

线粒体对间充质干细胞成骨分化功能的研究

间充质干细胞成骨分化能力异常减弱和成骨细胞数量异常下降都会导致生物体内骨代谢紊乱,诱导骨质疏松症的发生。线粒体在MSC多能性保持和成骨分化过程中具有十分重要的作用,通过能量代谢、抗氧化途径、代谢相关信号通路、线粒体生物发生、线粒体动力学和线粒体自噬等参与间充质干细胞成骨分化的调控,形成了复杂的调节网络。本文综述了MSC成骨分化中线粒体的重要功能和作用,以及部分通过调节线粒体功能发挥抗骨质疏松治疗的药物,为进一步探讨间充质干细胞成骨分化功能失调的机制提供新的思路,为临床治疗骨质疏松症提供新的靶点。     

中药复方护骨胶囊对糖皮质激素诱导骨质疏松大鼠骨密度和骨形态计量学的研究

目的 探讨中药复方护骨胶囊(主要由制何首乌、淫羊藿、熟地黄等多味中药加工而成的复方制剂)对糖皮质激素诱导骨质疏松大鼠骨丢失的影响。方法 3月龄SPF级雄性SD大鼠30只,随机平均分为3组：正常对照组(Nrm)、激素组(Met)和中药组(CH)。Met组：皮下注射甲强龙(Met)5 mg/kg/d,每周5次;CH组：在Met组基础上给予中药复方护骨胶囊(150mg/kg/d)灌胃,实验期12w。大鼠右侧股骨和L5行骨密度(BMD)测定,右侧胫骨行骨形态计量学分析。结果 Met组L5和股骨BMD显著低于Nrm组;CH组L5和股骨BMD显著高于Met组。Met组Tb.N、%Tb.Ar、MS/BS、MAR和BFRs显著低于Nrm组,Tb.Sp、ES/BS显著高于Nrm组;中药组Tb.N、%Tb.Ar、MS/BS、MAR和BFRs显著高于Met组,Tb.Sp,ES/BS显著低于Met组。结论 中药复方护骨胶囊在提高激素诱导骨质疏松大鼠的骨密度,促进骨形成,降低骨吸收,延缓骨丢失方面有积极作用,对继发性骨质疏松的预防和治疗有一定前景。     

中药复方护骨胶囊对糖皮质激素诱导骨质疏松 大鼠骨密度和骨形态计量学的研究

目的 探讨中药复方护骨胶囊(主要由制何首乌、淫羊藿、熟地黄等多味中药加工而成的复方制剂)对糖皮质激素诱导骨质疏松大鼠骨丢失的影响.方法 3月龄SPF级雄性SD大鼠30只,随机平均分为3组:正常对照组(Nrm)、激素组(Met)和中药组(CH).Met组:皮下注射甲强龙(Met)5mg/kg/d,每周5次;CH组:在Met组基础上给予中药复方护骨胶囊(150 mg/kg/d)灌胃,实验期12w.大鼠右侧股骨和腰椎行骨密度(BMD)测定,右侧胫骨行骨形态计量学分析.结果 Met组腰椎和股骨BMD显著低于Nrm组;CH组腰椎和股骨BMD显著高于Met组.Met组Tb.N、%Tb.Ar、MS/BS、MAR和BFRs显著低于Nrm组,Tb.Sp、ES/BS显著高于Nrm组;中药组Tb.N、%Tb.Ar、MS/BS、MAR和BFRs显著高于Met组,Tb.Sp,ES/BS显著低于Met组.结论 中药复方护骨胶囊在提高激素诱导骨质疏松大鼠的骨密度,促进骨形成,降低骨吸收,延缓骨丢失方面有积极作用,对继发性骨质疏松的预防和治疗有一定前景.     

地仲强骨胶囊治疗骨质疏松症的安全性和疗效研究

目的探索地仲强骨胶囊治疗骨质疏松症的安全性和疗效。方法选取132例绝经后骨质疏松症患者随机分为治疗组(n=66)和对照组(n=66)。对照组给予阿仑膦酸钠治疗,治疗组给予地仲强骨胶囊治疗,为期治疗12个月。检测治疗前后两组患者股骨颈及腰椎的骨密度及VAS评分改变,同时测定血清骨代谢指标:I型胶原羧基端肽β特殊序列(β-CTX)和I型胶原氨基端延长肽(PINP)的水平,记录两组治疗总有效率和药物不良反应。结果治疗组的治疗总有效率为84.85%,而对照组为77.27%,两组比较差异有统计学意义(P0.05)。治疗12个月,两组股骨颈及腰椎密度都有不同程度的升高,VAS评分都有不同程度降低,其中治疗组骨密度和VAS评分变化更明显,和对照组比较有明显的统计学意义(P0.05)。同时,治疗组血清β-CTX水平均降低,PINP水平均升高,而对照组β-CTX和PINP水平均降低,两组比较有明显的统计学意义(P0.05)。两组患者治疗均未发现明显药物不良反应。结论地仲强骨胶囊治疗骨质疏松症安全有效。     

中药复方护骨胶囊治疗原发性骨质疏松症的临床研究

目的观察中药护骨胶囊治疗原发性骨质疏松症的临床疗效和安全性，并探讨其可能的作用机制。方法采用多中心随机双盲对照试验方法，将护骨胶囊（试验组）344例与骨松宝颗粒（对照组）121例进行比较研究。临床观察主要指标为骨密度测定、骨代谢指标、中医症状与不良反应等。结果①骨密度疗效：腰椎（L2-4）试验组总有效率59．8％，对照组总有效率60．5％；股骨颈试验组总有效率54．6％，对照组总有效率46．1％；Ward’s三角试验组总有效率56．4％，对照组总有效率40．2％；大粗隆试验组总有效率50．7％，对照组总有效率44．1％。Ward’s三角试验组与对照组比较差异有显著性，其余各部位组间疗效比较差异无显著性。②骨代谢指标：护骨胶囊试验组治疗前后血碱性磷酸酶含量维持不变，而对照组治疗前后血碱性磷酸酶含量明显下降。治疗后试验组与对照组血碱性磷酸酶含量比较差异有显著性。③中医证候疗效：试验组ITT和PP分析总有效率分别为88．2％和88．9％，对照组总有效率分别为71．9％和72．5％，组间疗效比较差异均有显著性。④在试验过程中，试验组无严重不良反应发生。结论护骨胶囊是一种治疗骨质疏松症安全、有效的药物。     

金天格胶囊治疗膝骨性关节炎的临床疗效分析

目的针对膝骨性关节炎患者应用金天格胶囊,观察和评价其临床疗效。方法 72例病人均经临床症状、体征及X线检查确诊,并随机分为两组:治疗组口服金天格胶囊,对照组口服盐酸氨基葡萄糖(Glucosamine Hydrochloride),疗程12周,期间采用WOMAC评分进行疗效评估,并经6个月门诊随访,采用Lequesne指数评价患者的病情改善状况。结果治疗12周后,对照组的疼痛缓解及功能恢复情况与治疗组相比差异有统计学意义(P0.01),且经随访,治疗组患者病情改善状况更佳(P0.01)。结论在膝骨性关节炎患者的治疗上,金天格胶囊能够有效缓解疼痛,明显改善关节活动度,提高患者生活质量,临床疗效肯定。     

基于网络药理学探讨仙灵骨葆胶囊治疗骨质疏松症的作用机制

目的运用网络药理学分析方法进行仙灵骨葆治疗骨质疏松症(osteoporosis,OP)的药理机制分析。方法借助中药系统药理学数据库和分析平台以及中药综合数据库获取仙灵骨葆活性成分以及相关靶标,运用Cytoscape 3.7.1软件绘制“活性成分-靶标”网络图,以“osteoporosis”为关键词从GeneCards:The Human Gene Database获取OP相关基因,运用STRING数据分析平台进行PPI(protein-protein interaction)网络分析,运用DAVID数据分析平台进行基因本体(gene ontology,GO)生物过程富集以及京都基因与基因组百科全书(Kyoto Encyclopedia of Genes and Genomes,KEGG)通路富集分析,并运用Cytoscape 3.7.1软件绘制“通路-靶标”网络图。结果共获取仙灵骨葆相关活性成分115种,核心活性成分有槲皮素、山奈酚、木犀草素、淫羊藿苷元、丹参酮IIA等。活性成分所涉及的靶标共有301个,核心靶标有PTGS2、PTGS1、ESR1等。PPI网络显示了111种核心蛋白之间的互作关系,主要与调节细胞周期有关。GO富集生物过程经筛选后共获得46项,所得生物过程亦与细胞周期有关,正调控NF-kappaB转录活性因子的过程是OP发生的机制之一,与现有研究符合。KEGG通路富集共获得37项,提示仙灵骨葆治疗OP作用集中于PI3K-Akt、TNF、MAPK、Estrogen等信号通路。结论仙灵骨葆核心活性成分中,黄酮类化合物主要通过调节OPG/RANK/RANKL,抑制破骨细胞,促进成骨细胞分化;淫羊藿苷元可增强成骨细胞活性。核心靶标PTGS2可限制M-CSF以及RANKL的表达,进而影响成骨/破骨细胞分化;雌激素受体与绝经后骨质疏松密切相关。核心通路如PI3K-Akt信号通路可增加骨量、促进成骨细胞分化;TNF信号通路、MAPK信号通路等均与成骨细胞分化有关;雌激素信号通路以及GnRh信号通路为仙灵骨葆干预绝经后骨质疏松提供依据。因此仙灵骨葆干预OP机制是通过多种途径、多种靶标、多种信号通路同时进行的,运用网络药理学方法可以在一定程度上对其进行预测。     

金天格胶囊治疗骨质疏松症疗效观察

目的通过观察单纯服用金天格胶囊及金天格胶囊与福美加片联合服用3月、6月后骨质疏松患者的治疗效果及对骨代谢的影响。方法选取我院2012年至2014年龄在65岁至75岁被诊断为骨质疏松症的老年女性患者共106例,随机分成2组。对照组:金天格胶囊3粒,每日三次。治疗组:在西药(钙尔奇D片,每日1片,福美加片,每周1片)抗骨质疏松治疗的基础上加用金天格胶囊3粒,每日三次。分别于治疗前后3月、6月行血钙、磷、血清碱性磷酸酶(ALP)、尿钙/肌酐(U-Ca/Cr)测定,于治疗6月后行MBD测定分析其治疗前后及治疗组与对照组的差异。结果单用金天格胶囊治疗骨质疏松症,治疗3月后症状明显减轻。治疗3月后血钙增加,血清碱性磷酸酶(ALP)、尿钙/肌酐(U-Ca/Cr)均减少,差异有统计学意义(P0.05),血磷水平无明显变化,差异无统计学意义。治疗6月后血钙趋于稳定,与治疗3月后比较无明显增加,差异无统计学意义,治疗6月后血清碱性磷酸酶(ALP)可进一步下降,与治疗前比较差异有统计学意义(P0.01)。与福美加片联合使用总有效率提高,治疗3月后血钙增加,血清碱性磷酸酶(ALP)、尿钙/肌酐(U-Ca/Cr)均减少,差异有统计学意义(P0.05),6月后血钙与治疗3月后比较也无明显增加(P0.05),血清碱性磷酸酶(ALP)、尿钙/肌酐(U-Ca/Cr)均较治疗前明显减少(P0.01),且治疗组较对照组疗效显著,两组间差异有统计学意义(P0.05)。6月后复查骨密度(MBD)治疗前后及对照组与治疗组之间均明显增加,差异有统计学意义(P0.05)。结论金天格胶囊治疗骨质疏松疗效显著,能有效地缓解症状,提高骨密度,与西药福美加片联合治疗效果更佳。     

金天格胶囊在绝经后骨质疏松症的治疗效果分析

目的评价金天格胶囊治疗女性绝经后骨质疏松症的临床疗效。方法选择绝经后骨质疏松症患者86例,采用随机、对照试验设计,分为治疗组和对照组,其中治疗组52例,应用金天格胶囊,对照组34例,应用阿仑磷酸钠。结果治疗组在疼痛控制上明显优于对照组,两组在骨代谢指标包括雌二醇(E2)、甲状旁腺素(PTH)、总25-羟维生素D(Vit Dtl)、血清总I型胶原氨基端延长肽(T-PINP)、N-端骨钙素(N-MID)和β-胶原特殊序列(β-Cross)观测结果上无明显差异。结论金天格胶囊治疗绝经后骨质疏松症效果优于阿仑磷酸钠,值得临床推荐。     

复方玄驹胶囊与麒麟丸治疗少弱精症的临床观察

目的 观察复方玄驹胶囊、麒麟丸治疗少弱精症患者的疗效.方法 采用服药前后自身对照及两种药物相互对照的临床研究方法,对100例少弱精症患者随机分为两组.一组口服复方玄驹胶囊（3粒,3次/日）、一组口服麒麟丸（6g,3次/日）,12周为一个疗程.以精子密度和（a＋b）级精子为主要疗效指标,以a级精子、精子活动率为次要疗效指标,评价两种药物的效果.结果 有95例患者完成了临床研究,两组在精子密度、（a＋b）级精子、a级精子和精子活动率,治疗完成后较治疗前均有显著性差异（P＜0.05）.治疗完成后两组在精子密度、（a＋b）级精子、a级精子差异有统计学意义（P＜0.05）,而在精子活动率上无统计学差异（P＞0.05）.结论 两药物对少弱精症患者精液质量的提高均有一定的治疗效果,复方玄驹胶囊对少弱精症的效果较麒麟丸更佳.