腺苷A1受体激动抑制心肌细胞肥大

目的 利用体外培养的乳鼠心肌细胞,观测腺苷A1受体激动剂,R(-)-N6-(2-phenylisopropy1) adenosine(R-PIA)对异丙肾上腺素(Iso)诱导的心肌细胞肥大的抑制作用,并且探讨其作用机制特别是与CaMK Ⅱ表达的关系及对心肌细胞[Ca2 ]i瞬间变化的影响.方法 新生大鼠心肌细胞分组给药,以10 μmol/L的异丙肾上腺素(β肾上腺素激动剂,β-AR)诱导心肌肥大,观察1 μmol/L的R-PIA的作用以及钙调素激酶Ⅱ特异性抑制剂KN93(0 2 μmol/L)防止腺苷A1受体的激活对心肌肥厚的作用.[3H]亮氨酸leucine标记法测定心肌细胞蛋白合成;Western blot法测细胞核内CaMKⅡδB的表达水平;Till图像测定系统,以Fura-2做荧光标志,观察心肌细胞[Ca2 ]i瞬间变化.结果 1 μmol/L的R-PIA可以明显抑制Iso诱导的蛋白合成增加[(974 8±58 6)vs(1220 8±240 5)计数/(min·孔),P<0 01],抑制[Ca2 ]i瞬变增加[(189 9±10 7) vs (312 5±8 8)nmol/L,P<0 05]和心肌细胞核内CaMK Ⅱδ B的表达含量增加的作用,该抑制作用可以被A1受体抗拮剂8-cyclopentyl-1, 3-dipropylxanthine(CPDPX)所拮抗.并且当R-PIA与KN93合用时二者有协同抑制作用,其作用较单用KN93组明显[分别为蛋白合成:(R-PIA KN93合用:758 1±80 7)vs(KN93单用:981 3±184 4),P<0 05;[Ca2 ]i瞬变浓度:(R-PIA KN93合用:169 96±10 02)vs(KN93单用:202 39±16 58),P<0 05].结论 在低血清环境下,Iso明显诱导心肌细胞肥大.腺苷通过激动A1受体明显抑制Iso诱导的心肌肥大,其机制可能通过降低心肌细胞[Ca2 ]i瞬间变化和减少心肌细胞内CaMKⅡδB的表达.     

κ阿片受体激动通过钙调神经磷酸酶和胞外信号调节激酶信号抑制异丙肾上腺素诱导的乳鼠心肌肥大

目的探讨κ阿片受体(κ-OR)激动抑制异丙肾上腺素(Iso)诱导的乳鼠心肌细胞肥大的信号转导机制。方法利用体外培养模型,以Iso 10μmol/L诱导心肌细胞肥大,观察κ-OR激动剂U50488 H1μmol/L的作用,并进一步探索在钙调神经磷酸酶(CaN)特异性抑制剂环孢菌素A(CsA)、细胞外信号调节激酶(ERK)抑制剂U0126、L型钙通道阻滞剂维拉帕米及β肾上腺素受体阻断剂普萘洛尔存在的情况下,κ-OR的激活对心肌肥大的影响。Lowry法测心肌细胞蛋白含量;消化分离法及计算机图像分析系统测细胞体积;采用Till阳离子测定系统,以Fura-2/AM为荧光探针,观察胞内[Ca2+]i瞬间变化;Western blot法测CaN、ERK表达。结果U50488 H1μmol/L可以明显抑制Iso诱导的心肌蛋白含量增加、体积增大和胞内[Ca2+]i瞬间变化的增高,其抑制程度与CsA、U0126、维拉帕米及普萘洛尔相似;U50488 H可以抑制Iso诱导的CaN表达增加和ERK磷酸化增加;CaN抑制剂CsA可以抑制Iso诱导的ERK磷酸化增加,ERK抑制剂U0126可以抑制Iso诱导的CaN表达增加。结论κ-OR...     

腺苷A_1受体激动抑制心肌细胞肥大

目的利用体外培养的乳鼠心肌细胞,观测腺苷 A_1受体激动剂,R(-)-N6-(2-phenylisopropyl)adenosine(R-PIA)对异丙肾上腺素(Iso)诱导的心肌细胞肥大的抑制作用,并且探讨其作用机制特别是与 CaMK Ⅱ表达的关系及对心肌细胞[Ca~(2+)]i 瞬间变化的影响。方法新生大鼠心肌细胞分组给药,以10μmol/L 的异丙肾上腺素(β肾上腺素激动剂,β-AR)诱导心肌肥大,观察1 μmol/L 的 R-PIA 的作用以及钙调素激酶Ⅱ特异性抑制剂 KN93(0.2 μmol/L)防止腺苷 A_1受体的激活对心肌肥厚的作用。[~3H]亮氨酸 leucine标记法测定心肌细胞蛋白合成;Western blot 法测细胞核内 CaMK ⅡδB的表达水平;Till 图像测定系统,以 Fura-2做荧光标志,观察心肌细胞[Ca~(2+)]i 瞬间变化。结果 1 μmol/L 的 R-PIA 可以明显抑制 Iso 诱导的蛋白合成增加[(974.8±58.6)vs(1220.8±240.5)计数/(min·孔),P<0.01],抑制[Ca~(2+)]i 瞬变增加[(189.9±10.7)vs(...     

腺苷A1受体激动剂对心肌细胞缺氧再给氧脂质过氧化损伤的保护作用

目的观察腺苷A1受体激动剂对培养的心肌细胞缺氧再给氧脂质过氧化损伤的影响。方法以培养的心肌细胞为模型,在缺氧再给氧损伤细胞后,给予腺苷A1受体激动剂R(-)N6-(2-phenylisopropyl)adenosine(R-PIA)(0.1及1μmol/L),测定培养液上清液中超氧化物歧化酶(SOD)的活性和乳酸脱氢酶(LDH)、丙二醛(MDA)的含量及细胞MTT代谢率的变化。结果腺苷A1受体激动剂可以使培养液上清液中LDH和MDA的含量明显降低,SOD的活性增强,细胞MTT代谢率明显升高,且呈现剂量依赖性。而且这种作用可被腺苷A1受体拮抗剂8-cyclopentyl-1,3-dipropylxanthine(CPDPX)所拮抗。结论腺苷A1受体激动剂对缺氧再给氧损伤培养的心肌细胞有保护作用。     

腺苷A1受体激动剂对异丙肾上腺素诱导心肌细胞肥大的抑制作用

目的利用体外培养的乳鼠心肌细胞,观测腺苷A1受体激动剂,R(-)-N6-(2-phenylisopropyl)adenosine (R-PIA ) 对异丙肾上腺素(Isoproterenol,ISO)诱导的心肌细胞肥大的抑制作用,并且探讨其作用机制.方法在二十四孔培养板上进行新生大鼠心肌细胞培养,待细胞长成单层后,换成低血清培养基,分组给药,48 h后用Lowry's法测心肌细胞的蛋白质含量;用计算机CIAS大恒细胞图象分析系统测量心肌细胞体积;用[3H]-leucine标记法测定心肌细胞蛋白合成.结果在低血清(0.4%)环境下,ISO明显诱导了心肌细胞蛋白含量增加,体积增大和蛋白合成增加.R-PIA 可以明显抑制ISO诱导的心肌细胞蛋白含量增加、体积增大、蛋白合成增加的作用,该种作用可以被A1受体拮抗剂8-cyclopentyl-1,3-dipropylxanthine(CPDPX)所拮抗.结论在低血清环境下,ISO明显诱导心肌细胞肥大,ISO诱导心肌细胞肥大通过激动β-肾上腺受体途径.腺苷明显抑制ISO诱导的心肌肥大,其可能是通过激动A1受体途径来发挥这种抑制作用的.     

黄芪甲苷对高糖诱导的乳大鼠心肌肥大的保护作用

目的探讨黄芪甲苷对高糖诱导的心肌细胞肥大的保护作用。方法利用体外培养模型,以25mmol/L高糖诱导心肌肥大。新生大乳鼠心肌细胞分为正常对照组、高糖组、高糖+16μmol/L黄芪甲苷组、高糖+32μmol/L黄芪甲苷组和高糖+64μmol/L黄芪甲苷组,用Lowry法检测心肌细胞蛋白含量;消化分离法及计算机图像分析系统检测心肌细胞体积;MTT法检测细胞存活率;采用Till阳离子测定系统,以Fura-2/AM为荧光探针,观察心肌细胞[Ca2+]i的瞬间变化。结果与正常对照组相比,高糖使心肌细胞蛋白质含量增加35.7%,体积增大81.3%,[Ca2+]i瞬变增加62.5%%,心肌细胞存活率降低36.1%。加入16μmol/L黄芪甲苷后,与高糖组相比,心肌细胞蛋白质的含量和细胞体积分别降低20.3%和10.6%,[Ca2+]i瞬间变化降低8.0%,心肌细胞的存活率增加20.0%。结论黄芪甲苷对高糖诱导的乳大鼠心肌细胞肥大具有保护作用。     

钙神经素信号途径在前列腺素F2α诱导乳鼠心肌细胞肥大中的作用

目的:探讨Ca2 /钙调蛋白(CAM)依赖的钙神经素(CAN)信号途径在前列腺索F2α(PGF2α)诱导心肌细胞肥大中的作用.方法:用PGF2α(1 μmol/L,0.1μmol/L,0.01 μmol/L,0.001μmol/L)刺激Wistar乳鼠心肌细胞,并用CaN特异性抑制剂环胞素A(CsA)加以干预.以心肌细胞总蛋白含量和心肌细胞面积作为反映心肌肥大的指标,用免疫印迹(Western-blot)测定心肌细胞内CaN-α蛋白表达,用Fura 2/AM为荧光指示剂测定心肌细胞内游离钙浓度([Ca2 ]i).结果:除0.001μmol/L浓度的PGF2α外,1.0μmol/L,0.1μmol/L,0.01μmol/L的PGF2α均可明显提高心肌细胞内蛋白质浓度,而其中0.1μmol/L PGF2α作用最显著,增加了(67.78±11.19)%,并且使乳鼠心肌细胞面积增加了(68.94±1.52)%.0.1μmol/L PGF2α刺激的心肌细胞CaN-α蛋白表达增加和[Ca2 ]i提高,并且加入CsA可阻断0.1μmol/L PGF2α诱导的乳鼠心肌细胞肥大效应.结论:PGF2α可能通过Ca2 /CaM-CaN信号途径刺激乳鼠心肌细胞发生肥大.     

钙离子在肿瘤坏死因子α诱导心肌肥大中的作用

目的 研究Ca2+在肿瘤坏死因子α(TNF-α)诱导心肌细胞肥大中的作用.方法 Lowry法测心肌细胞蛋白含量;计算机图像分析系统测心肌细胞体积;3H-亮氨酸掺入法测心肌细胞蛋白合成;Till阳离子测定系统观察胞内[Ca2+]i瞬变.结果 IP3R阻断剂2-APB(30 μmol/L)或RyR阻断剂ryanodine (50 μmol/L)能降低由TNF-α(100μg/L)诱导的心肌细胞蛋白合成、蛋白含量以及细胞体积增加,二者合用抑制作用更强.L型Ca2+通道阻断剂nifedipine(50 μmol)对上述反应无明显作用(P＞0.05).IP3R阻断剂2-APB(30μmol/L)或RyR阻断剂ryanodine(50 μmol/L)能降低由TNF-α(100 μg/L)诱导的心肌细胞内钙离子瞬变幅度增高,二者合用作用抑制更强.L型Ca2+通道阻断剂nifedipine(50μmol/L)对其无明显作用(P＞0.05).结论 TNF-α通过调节心肌细胞内钙离子浓度从而诱导心肌细胞肥大.而在此过程中TNF-α可能主要是通过作用IP3R和RyR促使胞内钙贮库Ca2+释放而引起胞内钙离子水平增高的,而非通过打开L型Ca2+通道.     

U50488对大鼠离体心心律及心肌细胞内游离钙的影响

观察选择性Kappa(κ)阿片受体激动剂U50488对大鼠离体心心律及心肌细胞内游离钙([Ca2+]i)的作用.结果显示:U50488可诱发心律失常并增加静息心肌细胞[Ca2+]i,U50488诱发心律失常及增加心肌细胞[Ca2+]i的作用可被选择性κ阿片受体拮抗剂Nor-binaltorphimine(Nor-BNI)及选择性磷酯酶C抑制剂U73122、新霉素及链霉素所阻断.表明心脏κ阿片受体激活所致的心律失常是由于磷酸肌醇信号传导通路激活引起心肌细胞[Ca2+]i增多所致.     

PI3K阻断剂LY294002对TNF-α诱导心肌肥大的Ca~(2+)-CaMKⅡ和CaN通路的影响

目的研究PI3K是否通过Ca2+-Ca MKⅡ和Ca N信号途径参与肿瘤坏死因子-α诱导的心肌肥大。方法应用激光共聚焦显微镜检测单个心肌细胞内Ca2+浓度变化。Lowry法测心肌细胞蛋白含量。计算机图象分析测心肌细胞体积。应用Western blot法测定心肌细胞Ca MKⅡδB和Ca N蛋白表达。结果 1PI3K阻断剂LY294002(50μmol/L)明显抑制TNF-α(100μg/L)诱导的心肌细胞内钙离子浓度增高(P0.01),对正常心肌细胞内Ca2+浓度无明显影响。其抑制程度与LY294002+2-APB(30μmol/L)组相近(P0.05),小于LY294002+ryanodine(50μmol/L)组(P0.05)。2LY294002明显抑制TNF-α诱导的心肌细胞蛋白含量的增加及细胞体积的增大;其程度与LY294002+2-APB无统计学差异,但大于单用2-APB组,小于LY294002+ryanodine组(P0.05)。PI3K阻断剂LY294002明显抑制TNF-α诱导的心肌细胞Ca MKⅡδB和Ca N表达增加(P0.01),其抑制程度与LY294002+2-APB组相近(P0.05)。结论 PI3K通过作用IP3R使心肌细胞内Ca2+浓度增加,进而调节心肌细胞内Ca MKⅡδB和Ca N的表达,从而参与TNF-α诱导的心肌肥大。     

腺苷A1受体激动剂对异丙肾上腺素诱导心肌细胞肥大的抑制作用

目的 利用体外培养的乳鼠心肌细胞，观测腺苷A1受体激动剂，R(-)-N6-(2-phenylisopropyl)adenosine(RPIA)对异丙肾上腺素(Isoproterenol，ISO)诱导的心肌细胞肥大的抑制作用，并且探讨其作用机制。方法 在二十四孔培养板上进行新生大鼠心肌细胞培养，待细胞长成单层后，换成低血清培养基，分组给药，48h后用Lowry's法测心肌细胞的蛋白质含量；用计算机CIAS大恒细胞图象分析系统测量心肌细胞体积；用[^3H]-leucine标记法测定心肌细胞蛋白合成。结果 在低血清(0．4％)环境下，ISO明显诱导了心肌细胞蛋白含量增加，体积增大和蛋白合成增加。RPIA可以明显抑制ISO诱导的心肌细胞蛋白含量增加、体积增大、蛋白合成增加的作用，该种作用可以被A1受体拮抗剂8-cyclopentyl-1，3-dipropylxanthine(CPDPX)所拮抗。结论 在低血清环境下，ISO明显诱导心肌细胞肥大，ISO诱导心肌细胞肥大通过激动β-肾上腺受体途径。腺苷明显抑制ISO诱导的心肌肥大，其可能是通过激动A1受体途径来发挥这种抑制作用的。     

缬沙坦对血管紧张素Ⅱ诱导的肥大心肌细胞胞内钙的影响

目的:观察血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)1型受体(AT1)拮抗剂缬沙坦(Valsartan)对AngⅡ诱导的肥大心肌细胞胞内钙([Ca2+]i)变化的影响,并探讨其机制。方法:原代培养的大鼠心肌细胞,3H-亮氨酸掺入法测定心肌细胞蛋白质合成速率,利用共聚焦显微镜技术测定[Ca2+]i。结果:AngⅡ诱导心肌细胞肥大48h后[Ca2+]i明显增加,与空白对照组比较差异有统计学意义(P<0.01);缬沙坦预处理后,[Ca2+]i与肥大组相比下降,差异有统计学意义(P<0.01),与空白对照组相比,差异无统计学意义(P>0.05)。结论:AngⅡ诱导肥大心肌细胞[Ca2+]i增加,缬沙坦通过阻断AT1受体,抑制肥大心肌细胞[Ca2+]i增加。     

心肌细胞内钙释放对心肌细胞PTEN表达的影响

目的探讨雷尼丁（Ryanodine,RY）介导的心肌细胞内钙释放对PTEN mRNA和蛋白表达影响。方法新生Wistar乳鼠心肌细胞原代培养。用不同浓度的RY（0.0110μmol/L）促进心肌细胞内钙释放,特异的钙敏感指示剂Fura-2/AM测定心肌细胞内钙浓度（[Ca2+]i）。逆转录聚合酶链式反应（RT-PCR）、Western blot分别检测PTEN mRNA和蛋白表达。结果RY在0.011μmol/L浓度范围内,能浓度依赖性地促进心肌细胞内钙释放,RY在10μmol/L时,心肌细胞内钙浓度低于RY在1μmol/L时的效应,但仍高于对照组;RY在0.011μmol/L浓度范围内能浓度依赖性促进心肌细胞PTEN mRNA和蛋白表达,RY在10μmol/时,心肌细胞PTEN mRNA和蛋白表达低于1μmol/L的效应,但仍高于对照组。结论RY介导的心肌细胞内钙释放可影响心肌细胞PTEN基因表达,其表达在RY处于0.011μmol/L范围内具有浓度依赖性。     

黄芪抑制去甲肾上腺素诱导大鼠心肌细胞内游离钙含量升高的作用

目的 :研究黄芪对去甲肾上腺素 (NE)诱导大鼠心肌细胞内游离钙 [Ca2 + ]i 含量升高的作用。方法 :应用AR CM MIC阳离子检测系统 ,采用Ca2 + 指示剂Fura 2 /AM检测培养新生大鼠单个心肌细胞内游离钙的浓度 ,并观察Am对NE诱导大鼠心肌细胞内 [Ca2 + ]i 升高的影响。结果 :当细胞外Ca2 + 浓度为 1 .3mmol/L时 ,大鼠心肌细胞 [Ca2 + ]i 为 ( 97.1 1 +8.2 1 )nmol/L ,给予 1 0 -5mol/L的NE ,可使大鼠心肌细胞 [Ca2 + ]i 增至 ( 2 91 .73± 1 5 .0 3 )nmol/L,而经黄芪处理的大鼠心肌细胞的 [Ca2 + ]i则由 ( 95 .98±8.1 4)nmol/L增至 ( 1 1 4.2 8± 9.2 9)nmol/L。结论 :NE能诱导大鼠心肌细胞内游离钙含量明显升高 ,黄芪对心肌细胞静息 [Ca2 + ]i无明显影响 ,但能抑制NE诱导大鼠心肌细胞 [Ca2 + ]i 升高     

急性缺氧对环匹阿尼酸诱导的大鼠远端肺静脉平滑肌细胞内钙浓度升高的影响

目的:研究急性缺氧对Ca2+-ATPase抑制剂——环匹阿尼酸(CPA)诱导的大鼠远端肺静脉平滑肌细胞(PVSMC)内钙浓度([Ca2+]i)升高的影响及机制。方法:选用6只雄性SD大鼠(体重200~250 g),培养大鼠PVSMC,运用荧光显微镜和细胞内钙浓度检测系统观测CPA及急性缺氧(4%O2)对PVSMC的[Ca2+]i影响及钙池操纵性钙通道(SOCC)阻断剂氯化镍(Ni Cl2)和SKF96365的干预作用。结果:含5μmol/L硝苯地平(电压依赖钙通道阻断剂)的无钙Krebs溶液孵育PVSMC,10μmol/L CPA使PVSMC的[Ca2+]i小幅度升高,急性缺氧能使[Ca2+]i升高幅度增加;恢复细胞外Ca2+至2.5 mmol/L后,10μmol/L CPA使[Ca2+]i显著升高,急性缺氧可导致CPA诱导的[Ca2+]i升高显著增强;SOCC阻断剂Ni Cl2(500μmol/L)和SKF96365(50μmol/L)均能明显抑制急性缺氧条件下CPA诱导的[Ca2+]i升高,但对高钾(60 mmol/L KCl)Krebs溶液引起的[Ca2+]i反应无影响。结论:急性缺氧能够使CPA诱导的大鼠远端PVSMC的[Ca2+]i升高增强,[Ca2+]i升高可被SOCC阻断剂阻断,提示急性缺氧能够增强SOCC活性,使细胞外Ca2+通过SOCC内流增强,从而导致大鼠远端PVSMC的[Ca2+]i升高。     

丹参酮Ⅱ A抑制血管紧张素Ⅱ诱导大鼠心肌肥大的机制

目的在原代培养的新生大鼠心肌细胞的基础上,观察丹参酮ⅡA磺酸钠盐(STS)对血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)诱导的心肌细胞肥大的影响,以探讨STS在钙调神经磷酸酶(CaN)依赖的信号通路心肌肥大中的作用. 方法以培养的原代心肌细胞为模型,用AngⅡ刺激细胞外Ca2+内流,丹参酮ⅡA及钙离子拮抗剂维拉帕米(Ver)进行干预,检测心肌细胞[Ca2+]i及钙调神经磷酸酶(CaN)、丝裂素活化蛋白激酶(MAPK)和蛋白激酶C(PKC)活性;[3H]-亮氨酸掺入法测定心肌细胞蛋白质合成速率作为心肌细胞肥大的指标.结果AngⅡ刺激组[Ca2+]i水平及蛋白核酸合成速率明显增高,与对照组相比差异显著(P＜0.01),而STS能有效地降低由AngⅡ刺激引起的[Ca2+]i增高(P＜0.01 vs AngⅡ组),明显抑制AngⅡ诱导的蛋白质合成速率的增加(P＜0.01 vs AngⅡ组).AngⅡ刺激组CaN、PKC活性与对照组相比差异有显著性(P＜0.05、P＜0.01).STS及Ver抑制AngⅡ介导的心肌细胞CaN、PKC活性的增高.结论CaN通路在AngⅡ刺激的心肌细胞肥大中起重要作用;STS具有Ca2+阻滞剂的特点,能有效地降低由AngⅡ刺激引起的[Ca2+]i增高,导致CaN活性降低阻滞心肌肥大的发生和发展.     

一氧化氮对缺氧豚鼠心肌细胞游离钙浓度的影响

目的:探讨左旋精氨酸(L-arginine,L-arg)及NG-亚硝基-L-精氨酸甲酯(NG-nitric-L-arginine-methyl ester,LNAME)对缺氧豚鼠心肌细胞内游离钙浓度([Ca2+]i)变化影响.方法:采用离体豚鼠心Langendorff法灌注,胶原酶I型分离细胞,再用荧光指示剂方法(Fure-2/AM)标记心肌[Ca2+]i变化.分为3组:对照组、L-arg组和L-NAME组.观察缺氧后心肌[Ca2+]i的变化.结果:①正常氧状态下,心肌[Ca2+]i均值为120.0±14.3 nmol/L(n＝10).②缺氧状态下心肌[Ca2+]i增加与缺氧时间(程度)成正相关,相关系数r为0.99左右.③一氧化氮(NO)在缺氧条件下对心肌[Ca2+]i有影响.结论:在短期轻度缺氧条件下,NO不足使心肌[Ca2+]i增加,若能设法增加细胞内的NO含量,可以提高心肌细胞的自我保护作用.在长时间重度缺氧条件下,NO可能对心肌细胞有损伤作用.     

缺血/再灌注心肌к阿片受体的变化及其与抗I/R性心律失常的关系

目的 观察κ阿片受体(κ opioid receptor,κ-OR)在抗大鼠心肌缺血/再灌注(ischemia and reperfusion,I/R)中的变化及其与抗I/R性心律失常的关系。方法 将48只SD大鼠随机分为6组,每组8只,即对照组、U50,488H组、I/R组、U50,488H+I/R组、BNI+U50,488H+I/R组和BNI+I/R组,用于建立在体的大鼠I/R模型,观察κ-OR激动剂U50,488H对大鼠心肌I/R模型室性心律失常的影响。另取18只SD大鼠随机分为6组,每组3只,即对照组、假手术组、再灌注即刻组、60、180和360 min组,用于RT-PCR及Western blot检测I/R处理后心肌组织中κ-OR mRNA转录及其蛋白的表达。结果 对照组偶发早搏,I/R组心律失常的发生率明显增加(P<0.01)。给予U50,488H可以明显降低I/R引起的室速和室颤的发生率(P<0.01)及心律失常的评分(P<0.05)。U50,488H抗心律失常的作用可被选择性的κ-OR拮抗剂nor-BNI完全阻断(P<0.01),而nor-BNI本身对I/R所致心律失常没有影响。RT-PCR的结果发现,κ-OR mRNA的转录水平在再灌注的即刻、再灌注后60及180 min时,明显高于对照组(P<0.01),在60 min时达到高峰,360 min时恢复到正常水平。Western blot检测表明,在再灌注的即刻、再灌注后60,180 和360 min时,κ-OR蛋白的表达量均明显高于对照组(P<0.05)。结论 在心肌I/R时,κ-OR基因的转录和其蛋白表达的水平明显上调,可能与其抗I/R性心律失常的作用相关。     

丝裂素活化蛋白激酶参与钙激动剂介导的心肌肥大

目的 :探讨不同来源的细胞内钙 （[Ca2 +] i）对心肌细胞丝裂素活化蛋白激酶 （MAPK）介导的心肌细胞肥大反应的作用。方法 :以培养的大鼠心肌细胞为模型 ,用血管紧张素 （Ang ）刺激心肌细胞外 Ca2 +跨膜内流、三磷酸肌醇 （IP3 ）刺激胞内 Ca2 +释放 ,γ-3 2 P-ATP掺入法和免疫印迹 （western blot）测 MAPK活性及蛋白含量 ,氚 -亮氨酸（3 H-L eu）、氚 -胸腺嘧啶 （3 H-Td R）掺入量作为心肌细胞肥大的指标。结果 :Ang ,IP3 刺激 15 min均能显著增加心肌细胞 MAPK活性及蛋白含量 ,并提高 3 H-L eu,3 H-Td R掺入量 ,与对照组心肌细胞相比差异显著 （P<0 .0 1）。结论 :钙激动剂诱导的 MAPK活性及含量的增加参与了心肌细胞肥大 ,心肌细胞的肥大与 [Ca2 +] i 的来源无关     

代谢抑制处理后大鼠心室肌细胞反向Na+/Ca2+交换体转运功能的变化

目的:利用荧光标记法观察代谢抑制处理后,大鼠心肌细胞反向Na+/Ca2+交换体（NCX）转运功能的变化。方法:酶解法分离制备钙耐受心肌细胞用Fura-2/AM负载,采用双激发荧光光电倍增系统（IonOptix Photom etry Sys-tem）检测钙信号。结果:细胞置于无Na+液后,可见[Ca2+]i逐渐升高,L-型Ca2+通道阻断剂n ifed ip ine在浓度为1μmol/L时,不影响此现象;而NCX的抑制剂N i2+,在浓度为1 mmol/L时,则完全阻断[Ca2+]i的升高。采用20mmol/L乳酸加10 mmol/L脱氧葡萄糖作为代谢抑制物处理心肌细胞不同时间,正常Tyrode液灌流10 m in,之后检测无Na+液引发[Ca2+]i升高效应的变化,发现5 m in处理与对照组无显著性差异,10和30 m in处理后此效应逐渐减弱。结论:首次发现,代谢抑制处理后心肌NCX的反向转运功能被抑制,阐明其调节机制,将为心肌缺血/再灌注损伤的治疗提供新思路。