HBV和AFB1引起树鼩肝癌形成过程中IGF-Ⅱ蛋白表达的动态观察

目的:观察不同病因如黄曲霉毒素B1(AFB1)和(或)人乙型肝炎病毒(HBV)诱发树鼩肝细胞癌(HCC)形成过程中,胰岛素样生长因子Ⅱ(IGF-Ⅱ)的动态变化.方法:成年树鼩按不同处理分为A(HBV+AFB1)、B(HBV)、C(AFB1)、D(空白对照)4组.各组动物定期肝活检;存活动物于实验160周时处死.各次活检以及处死的动物肝组织均用免疫组化S-P法进行IGF-Ⅱ蛋白表达的检测,并辅以常规病理组织学及HBsAg等HBV感染标志的检查.结果:HCC的发生仅见于A、C组,分别为66.7%(14/21)和30.0%(3/10),该两组的IGF-Ⅱ阳性率曲线亦高于其余两组,其中C组的曲线虽曾在实验中期高于A组,但不稳定;A组则于实验期间一直较稳定地保持在较高水平.B组仅有大增生结节但无HCC发生,该组的IGF-Ⅱ阳性表达率曲线在3个实验组中最低,仅高于空白对照D组. 结论:IGF-Ⅱ在HCC的形成过程中呈较稳定、高水平的表达,但这种现象与HCC的诱发因素为化学致癌物还是病毒致癌因素无关.     

黄曲霉毒素B1（AFB1）与乙肝病毒（HBV）协同诱发树鼩肝癌形成过程中的差异表达蛋白质组研究

目的 比较黄曲霉毒素B1（AFB1）与乙肝病毒（HBV）协同诱发树鼩肝细胞癌生长不同阶段的蛋白质表达谱的改变,筛查在AFB1与HBV共同诱发的肝癌发生发展中起重要作用的关键蛋白质分子。方法 用双向凝胶电泳(2-DE)及基质辅助激光解吸飞行时间串联质谱法（MALDI-TOF-MS/MS）对同一动物自身的癌发生前的肝组织（C45w）,癌发生后的肝癌组织（CCa）及未经AFB1处理的对照组动物肝组织（E45w、E105w）进行了相互比较。结果 C45 w组、CCa组、E45 w、E105 w组分别平均检测到(1233±30)个蛋白点（n=3）, (1257±35)个蛋白点（n=3）, (1249±51)个蛋白点（n=3）和(1208±36)个蛋白点（n=3）。以各组中2-DE效果好、点数多的一块胶作为参考胶,分别进行两组间的匹配分析 (E45wvs. C45w,C45w vs. CCa,E45wvs. E105w),筛选出两组之间差异大于或等于2倍的蛋白点65个。应用质谱鉴定出细胞色素C氧化酶等25种胶内差异蛋白质。 结论 在AFB1与HBV共同诱发的树鼩肝癌发生发展不同阶段有明显的差异性蛋白表达谱,为进一步对人肝癌蛋白质组的研究提供了线索。 【关键词】：癌;肝细胞;树鼩科;蛋白质组学     

黄曲霉毒素B1与乙肝病毒协同诱发树鼩肝癌形成过程中的差异表达蛋白

目的 比较黄曲霉毒素B1(AFB1)与乙肝病毒(HBV)协同诱发树鼩肝细胞癌生长不同阶段的蛋白质表达谱的改变,筛查在AFB1与HBV共同诱发的肝癌发生发展中起重要作用的关键蛋白质分子.方法 用双向凝胶电泳(2-DE)及基质辅助激光解吸飞行时间串联质谱法(MALDI-TOF-MS/MS)对同一动物自身的癌发生前的肝组织(C45w)、癌发生后的肝癌组织(Cca)及未经AFB1处理的对照组动物肝组织(E45w、E105w)进行了相互比较.结果 C45w组、Cca组、E45w、E105w组分别平均检测到(1 233±30)个蛋白点(n=3),(1257±35)个蛋白点(n=3),(1 249±51)个蛋白点(n=3)和(1 208±36)个蛋白点(n=3).以各组中2-DE效果好、点数多的一块胶作为参考胶,分别进行两组间的匹配分析(E45w vs C45w、C45w vs Cca、E45w vs E105w),筛选出两组之间差异大于或等于2倍的蛋白点65个.应用质谱鉴定出细胞色素C氧化酶等25种胶内差异蛋白质.结论 在AFB1与HBV共同诱发的树鼩肝癌发生发展不同阶段有明显的差异性蛋白表达谱,为进一步对人肝癌蛋白质组的研究提供了线索.     

急性淋巴细胞性白血病病儿红细胞免疫功能的检测

①目的研究急性淋巴细胞性白血病病儿红细胞免疫黏附肿瘤细胞的能力.②方法应用肿瘤细胞花环和酵母菌花环试验,检测37例急性淋巴细胞性白血病病儿红细胞免疫黏附的能力,并与正常组进行比较.③结果与对照组比较,急性淋巴细胞性自血病病儿红细胞免疫黏附肿瘤细胞的能力和红细胞C3b受体活性明显下降,红细胞CIC受体活性明显上升,差异均有显著性(t=4.62～26.90,P＜0.01).④结论急性淋巴细胞性白血病病儿红细胞免疫功能低下.     

动态研究HBV和AFB1诱发树鼠句肝细胞癌过程中一些基因的表达

目的：探讨人乙肝病毒(HBV)和黄曲霉毒素B,(AFB1)致肝细胞癌(HCC)及协同致HCC作用的机制。方法：将树鼩分为4组：A组：感染HBV加摄入AFB,;B组：只感染HBV;C组：只摄入AFB1;D组：作空白对照。然后定期行肝活检,用免疫组化、分子生物学等技术动态观察一些癌基因(蛋白)和抑癌基因的表达。结果：①A组谷胱苷肽转移酶(GGT)阳性灶个数及面积明显多于、大于B、C组;②A组P21蛋白检出率明显高于B和C组,A组6只P21蛋白阳性的树鼩到120周时全部发生了HCC;③实验后期,A组HBxAg检出率及HBVDNA整合率明显高于B组;④在诱癌过程中,IGF-Ⅱ表达率呈波动形,带癌肝的表达率显著高于无癌肝;⑤105周时,A、B、C组P53蛋白表达率显著高于D组;在A,C组检出P53异常带;⑥第45及105周时,A组c-fos表达率分别为23．1％和20％;C组为38．5％和15．4％,B,D两组均未检出;⑦H-c-myc基因：直到120周,无癌肝组织均未见异常;在肝癌组织中,A组有4例扩增,c组无异常;@CDK4基因：只有A组在第75周有1例扩增,该树鼩在第106周时发生了HCC。在HCC中,A组有25％出现CDK。扩增,C组未见异常。结论：再次证实HBV和AFB。有协同致HCC作用;AFB、有利于HBxAg的表达和HBVDNA的整合;CDK4、Kiras和P53基因的变异参与了HCC的发生和演进;P21和c-fos蛋白的过表达与P^53蛋白的失活,促进了HCC的发生和演进;CDK4和c-myc基因的改变与HBV的感染有一定的关联。     

肝癌患者红,白细胞免疫粘附功能的研究

研究已证明，红细胞可粘附肿瘤细胞，阻止其血行转移；另据报道部分肿瘤患者红细胞免疫粘附肿瘤细胞能力下降，与红细胞免疫粘附功能密切相关[1]。此外，还发现淋巴细胞免疫与红细胞免疫密切相关。[2]但对肝癌病人红细胞及淋巴细胞的免疫粘附功能至今尚未见有文章报道。为进一步了解肝癌患者红细胞与淋巴细胞的免疫粘附功能，从而为临床和实验室观察研究肝癌病人提供理论依据和实验室诊断指标。本文应用免疫粘附混合花环试验，对肝癌患者外周血红细胞和淋巴细胞免疫粘附功能进行测定，现报道如下。1材料与方法1.1材料：病例来源于附属医院和…     

缺铁性贫血患者红细胞天然免疫黏附功能测定及其临床意义

目的探讨缺铁性贫血(IDA)患者红细胞天然免疫黏附功能和免疫分子CD35的变化及其临床意义。方法采用红细胞酵母菌花环试验检测红细胞C3b受体花环率(RC3bRR)及红细胞促中性粒细胞吞噬率(ERPN),采用红细胞免疫黏附肿瘤细胞花环试验检测红细胞黏附肿瘤细胞花环率(RATR),采用流式细胞仪检测红细胞免疫分子CD35(RBC-CD35)数量。结果30例IDA患者治疗前,红细胞天然免疫黏附功能RC3bRR、ERPN及RATR与正常对照组比较显著降低,P<0.05;RBC-CD35数量与正常对照组比较显著降低,P<0.05。30例IDA患者铁剂治疗2、3个月贫血纠正后,RC3bRR、ERPN、RATR及RBC-CD35数量基本恢复正常,与正常对照组比较差异无显著性,P>0.05。结论IDA患者存在可逆性的红细胞免疫功能损害,强调IDA患者早期诊断及早期治疗的重要性。     

人乙型肝炎病毒和黄曲霉毒素B_1诱发树鼩原发性肝癌的研究

人乙型肝炎病毒(HHBV)在原发性肝癌(PLC)发生上可能与黄曲霉毒素B_1有协同作用。经158周实验,41只喂黄曲霉毒素B_1的树鼩中,17只感染了人乙肝病毒,24只未感染,前者有9例发生PLC,后者只有3例发生PLC。9只未接触AFB,但已感染HHBV的树鼩,在83周时有1只发     

红细胞CR1基因组密度多型性红细胞CR1基因组密度多型性

目的:研究不同人群中红细胞CR1基因组密度多型性与红细胞免疫粘附肿瘤细胞能力的相关性。方法:采用PCR加HindⅢ酶切技术测定红细胞CR1基因组密度多型性(HH型、HL型、LL型),采用肿瘤红细胞花环试验测定红细胞免疫粘附肿瘤细胞的能力。结果:在不同人群中,HH型红细胞免疫粘附肿瘤细胞的能力明显大于HL型红细胞,而HL型红细胞免疫粘附肿瘤细胞的能力明显大于LL型红细胞。结论:红细胞免疫粘附肿瘤细胞的能力与CR1基因组密度多型性有关。     

铅中毒儿童红细胞免疫黏附肿瘤细胞能力的研究

目的探讨铅中毒儿童自然条件下的红细胞免疫功能和免疫黏附肿瘤细胞的能力。方法红细胞C3b受体花环率（RBC-C3bRR）和红细胞CIC受体花环率（RBC-ICRR）采用酵母多糖花环试验。红细胞免疫黏附肿瘤细胞（RIT）采用C3b介导的免疫黏附实验。结果铅中毒儿童红细胞免疫功能是降低的,主要表现为RBC-C3bRR、RIT明显降低,RBC-ICRR明显升高。结论铅中毒儿童红细胞免疫功能是低下的,铅对红细胞膜受体活性的损伤可能是铅中毒儿童红细胞免疫功能降低的重要原因。     

肝细胞异型增生的产生及其与肝细胞癌发生关系的实验研究

82只实验树鼩分为四组:A组26只,感染了HBV并同时给予AFB_1;B组34只,未感染HBV但给予AFB_1;C组13只,只感染了HBV;D组9只,既未感染HBV,又未接触AFB_1.实验158周.A组发生LCD16例(61.53%),其中9例发生HCC(56.25%).B组出现LCD18例(52.94%),其中3例发生HCC(16.66%).C组出现LCD 6例(46.15%);D组无LCD产生.82只树鼩有40只出现LCD,其中12只发生HCC(30%).而无LCD的42只,只有1例(C组)产生HCC(2.38%).LCD阳性组发生HCC的相对危险性为LCD阴性组的12.6倍.感染了HBV的树鼩,其LCD发生率显著高于未感染者(P<0.05);而在未感染HBV的动物中,摄入AFB_1的,其LCD发生率也同样比未摄入者高(P<0.05).表明HBV和AFB_1都能诱发LCD;LCD是HCC的癌前病变.     

用原位杂交对HBV和AFB_1与树鼩肝癌发生关系的研究

用生物素标记的HBV DNA探针对经83～158周实验的55只树鼩肝组织的福尔马林固定、石蜡包埋的切片进行原位杂交研究。有45只树鼩接种过HHBV,在肝细胞检出HBV DNA的有30只,另15只肝内HBV DNA阴性。这55只树鼩,有41只摄入了AFB_1,其中肝HBV DNA阳性的A组22只有10只发生PLC;19只HBV DNA阴性的B组,只发现2例PLC。两组差别显著(P<0.05)。未接触过AFB_1的14只树鼩中,肝内HBVDNA阳性的8只(C组),有1例出现PLC;而HBV DNA阴性的6只(D组)无PLC发生。结果表明:HHBV和AFB_1在PLC发生中起协同作用,支持了HHBV感染与PLC存在病因学关系的观点。     

绿茶抑制黄曲霉毒素B_1致大鼠肝癌作用的时间一效应关系

本研究应用我室建立的AFB_1致大鼠肝癌作用短期体内实验模型,探讨绿茶在动物摄入AFB_1前、中、后等不同时期,对AFB_1致肝癌作用的影响.结果表明,绿茶与某些已知的抑癌物不同:它对AFB_1致肝癌作用的抑制效果不受使用时间的影响,不论用于给AFB_1前、中、后期,均有明显的抑制作用.本结果为绿茶作为一种安全有效的抑制AFB_1致肝癌作用的化学预防剂,再次提供有力的依据.     

绿茶在AFB_1致大鼠肝癌作用中对免疫功能的影响

观察绿茶对注射致癌物AFB_1前(A组)、中(B组)、后(C组)3个不同时期的大鼠免疫功能的影响,结果发现,应用绿茶的3个实验组动物外周血白细胞移行抑制指数均低于对照组,其中A、B组与对照组相比,有显著差异;外周血中性白细胞吞噬率,3组均显著高于对照组,说明绿茶对AFB_1致大鼠肝癌时引起的免疫功能低下具有明显的保护作用,提示绿茶的防癌抑癌作用可能与其对免疫功能的保护有一定的关系。     

茶多酚抑制AFB_1致大鼠肝癌作用的初步研究

应用AFB_1致肝癌作用的短期实验模型,观察绿茶成分茶多酚对AFB_1诱发肝癌前病变酶变灶的影响。结果发现,茶多酚对肝癌前病变大偏差酶变灶、小偏差酶变灶及总酶变灶均有显著的抑制作用。提示茶多酚可能是茶叶防癌的主要有效成分之一。     

糖皮质激素对柯萨奇B3病毒感染小鼠免疫状态的调控

目的:研究病毒性心肌炎时应用糖皮质激素治疗对机体免疫指标的调控作用.方法:将240只4周龄Balb/c小鼠随机分为6组,每组40只,包括正常对照组、激素对照组、病毒对照组、早期激素治疗组、中期激素治疗组和晚期激素治疗组.正常对照组每只小鼠腹腔接种0.1 ml不含病毒的Eagle液,其他组每只小鼠均腹腔接种0.1 ml 107.5TCID50/ml的柯萨奇B3(CVB3)病毒液.正常及病毒对照组小鼠均予以生理盐水0.2 ml灌胃,激素治疗组小鼠分别在感染病毒后不同时期给予泼尼松1 mg/kg,灌胃给药10 d.采用膜联蛋白V(Annexin V)联合碘化丙啶(PI)染色双参数技术,即Annexin V/PI法,通过流式细胞术定量检测各组小鼠外周血、胸腺、脾脏淋巴细胞的凋亡,应用流式细胞仪自动细胞计数法测定外周血及脾脏T淋巴细胞亚群CD 3、CD 4、CD 8.采用酶联免疫吸附试验(ELISA)检测抗心磷脂抗体(ACA).结果:正常小鼠外周血、胸腺、脾脏有少量淋巴细胞凋亡,短期服用激素不升高淋巴细胞凋亡率;病毒性心肌炎小鼠淋巴细胞凋亡增加,应用激素治疗可诱导活化淋巴细胞凋亡,减少其对心肌细胞的浸润.病毒性心肌炎小鼠外周血CD 3、CD 4、CD 8下降与应用激素治疗的心肌炎小鼠CD 3、CD 4、CD 8下降无显著性差异.正常小鼠抗心磷脂抗体阳性率很低,病毒性心肌炎小鼠ACA阳性率升高,早期及中期应用激素可降低ACA阳性率.结论:病毒性心肌炎应用激素治疗对细胞免疫功能无严重不良影响,还可明显抑制细胞毒T淋巴细胞对心肌的损害作用以及降低自身免疫应答.     

左旋咪唑等5种药物阻断黄曲霉毒素B1致大鼠肝癌作用的实验研究

本文报告用动物体内短期实验模型,研究左旅咪唑、番石榴叶、绞股兰、维酶素及葫芦素等5种药物影响黄曲霉毒素B_1(AFB_1)致大鼠肝癌的作用。结果发现左旋咪唑对AFB_1诱发大鼠肝组织γ-GT酶变灶平面和立体的5个指标,均显著低于对照组(P<0.05～0.001),表明左旋咪唑对AFB_1致肝癌具有很强的抑制作用;番石榴叶也有较强的抑制效果;绞股兰和维酶素则无显著影响;葫芦素对AFB_1诱发肝γ-GT酶变灶的形成有促进作用。实验结果提示,左旋咪唑对人类肝癌的化学预防将具有较大的实用价值。     

Study on blocking the leukemia immune escape after BMT by Fas-Fas ligand pathway

Background To investigate if bone marrow transplantation (BMT) with bone marrow mononuclear cells (BMMCs) transducted with murine soluble Fas gene (sFas) using adenovirus vector could block the immune escape of leukemia cells eliminate the residual leukemia cells and reduce their relapse.Methods The recombinant adenovirus vector with murine sFas, adsFas, and the control vector adEGFP were constructed using homologous recombination between two plasmids in Escherichia coli. BMT was carried out after the BMMCs were infected with Adenoviruses. The mice models of leukemia/lymphoma were constructed by inoculating female C57BL/6 mice (H-2b) with 10（5） EL4 cells/mouse through caudal vein. Donors of bone marrow grafts were syngeneic male mice. BMMCs were infected with AdsFas or AdEGFP 24 hours before (Group D or E). The following three groups were simultaneously used: Group A, no BMMCs transplanted; Group B, transplanted with BMMCs not infected with adenoviruses; Group C, only transfusing EL4 cells, neither irradiation nor BMT. The hematopoietic reconstitution, generation of leukemia/lymphoma and the survival rate were observed in all groups after BMT. Results The adenovirus vectors were successfully constructed. The titre of virus after purification was up to 2.5×10（11）pfu/ml. Spleen indices examined 11 days after BMT were not obviously different among Group B, D and E (P&gt;0.05), but indices in Group A were significantly lower than those in the latter three groups (P&lt;0.01). Counts of leukocytes and platelets on +30 day showed mice were reconstituted satisfactorily in Group B and D, but very low in Group C and E. The Y-chromosomes existed 2 months after BMT and examination of bone marrow cytology showed that Group B and D were almost normal, but Group C and E had plenty of lymphoblast-like tumor cells. Tumors were obviously observed in the mice of Group C and E by histopathological examination, but the mice in Group B and D were normal. The survival rates were 0 (0/4) in Group A, 100% in Group B (6/6) and D (16/16), 12.5% (2/16) in Group C and 6.25% (1/16) in Group E respectively. It is demonstrated that, in contrast with the control (Group EGFP), survival rate was significantly increased in the sFas Group (P&lt;0.01). Conclusions The transfer of sFas gene by adenovirus changed the prognosis state of leukemia/lymphoma mice after auto-BMT. The transduction of sFas might block the effect of the immune escape of EL4 cells through FasL. These results could thus provide a new direction to find a way to treat the leukemia and its recurrence after BMT.