进出口食品中单核细胞增生李斯特菌脉冲场凝胶电泳分型研究

目的研究进出口食品中分离的单核细胞增生李斯特菌(LMO)之间分子分型特征和遗传相关性。方法参照美国PulseNet推荐的LMO脉冲场凝胶电泳(PFGE)标准方法,用限制性内切酶AscⅠ酶切LMO染色体DNA进行PFGE试验。用BioNumerics软件对不同地区分离的LMO进行比对,分析菌株之间的相似度。结果 24株LMO分成20种PFGE型,菌株之间的相似度在44.45%～100%。来源于加拿大的LMO16、美国的LMO18、丹麦的LMO13,丹麦的LMO7和顺德的LMO22,广州的LMO21和山西的LMO8,分别有相同的PFGE型,相似度达到100%。结论进出口食品中分离的LMO在整体上表现出较大的遗传多样性,但部分菌株有一定程度的相关性。     

单核细胞增生李斯特菌脉冲场凝胶电泳分型技术的内切酶质量评估

目的对单核细胞增生李斯特菌脉冲场凝胶电泳(PFGE)分子分型的相关影响因素进行分析和探讨,并建立该菌的PFGE双酶切技术。方法分别利用限制性内切酶AscⅠ和ApaⅠ对1/2a、1/2b、1/2c、3a和4b型的单核细胞增生李斯特菌进行PFGE分析(包括1种品牌的AscⅠ和5种品牌的ApaⅠ),通过指纹图谱的比较,优化各种内切酶的实验参数。结果AscⅠ酶切产生11条左右清晰的DNA指纹图谱条带,ApaⅠ酶切产生的条带数量与之相似,但其中约10%的菌株(1/2a、1/2b血清型)均产生消化不完全的DNA片段。同时用5种品牌的ApaⅠ酶消化,并改变消化温度、提高酶浓度、延长酶消化时间均无法克服此现象。结论AscⅠ酶适于1/2a、1/2b、1/2c、3a和4b血清型的单核细胞增生李斯特菌的分型,但ApaI酶适于多数1/2a和1/2b血清型的分型。     

优化与分析单核细胞增生李斯特菌的脉冲场凝胶电泳

目的 优化单核细胞增生李斯特菌(LM)脉冲场凝胶电泳(PFGE)方法,分析菌株之间的相关性. 方法按照标准化的Lm-PFGE方法进行预实验,根据结果对实验方法进行一系列调整.分别用限制性内切酶Apal和Ascl酶对菌株进行酶切,通过脉冲场凝胶电泳获得电泳图谱,利用BioNumeries软件对图谱进行聚类分析. 结果优化后电泳图谱质量明显提高.22株LM被内切酶ApaI分为16种带型,被内切酶AseI分为17种PFGE型.两种酶分别将深圳的10株LM分为9种带型. 结论建立了高分辨力、稳定可靠的Lm-PFGE分型方法.深圳的LM属于多个克隆群的散发流行.     

中国八省市食品来源单核细胞增生李斯特菌的脉冲场凝胶电泳分析

目的 采用国际标准化的脉冲场凝胶电泳（PFGE）分析方法对单核细胞增生李斯特菌（Lm）进行基因分型,初步建立中国Lm的基因分型数据库。方法 按照标准化的Lm-PFGE方法对来自国内8个省市、多种食品来源的118株Lm进行了PFGE分型。结果 118株Lm分成了39种带型,其中GX6A160004型有37株菌,占分析菌株的31．36%,是主要型别。结论 初步建立了中国单核细胞增生李斯特菌用于网络监测分析（PulseNet China）的基础数据库,发现同型菌株在全国多个地区广泛存在。     

食品中单增李斯特菌的脉冲场凝胶电泳分型

目的分析吉林省食品中分离的单核细胞增生李斯特菌(Listeria monocytogenes,LM)的脉冲场凝胶电泳(PFGE)型别,探讨吉林省食品中单核细胞增生李斯特菌污染的同源性。方法将市售熟制米面制品、熟肉制品、中式凉拌菜和即食非发酵豆制品中分离出的39株单核细胞增生李斯特菌进行PFGE分子分型,BioNumerics version软件分析比较同源性。结果 39株单核细胞增生李斯特菌的PFGE结果主要分为6大群,其中1群包括6株,相似度为86.0%以上;2群包括16株,分为2个亚群,2A亚群包括7株,相似度为94.1%以上,2B亚群9株,相似度为74.8%;3群包括3株,相似度为80.0%以上;4群包括14株,亦分为4个亚群;5群包括3株,相似度为85.7%以上;6群包括1株,相似度为63.3%以上。结论吉林省食品中的LM来源于不同的克隆株,但部分LM有不同程度的相关性;PFGE是分析LM同源性的有效方法,对LM的流行趋势、分布特点和分子流行病学研究具有重要意义。     

湖北省36株单增李斯特菌脉冲场凝胶电泳分型

目的:了解湖北省各类食品中分离到的单核细胞增生李斯特菌各菌株之间的遗传相关性,了解湖北省Lm基因型的分布情况和分子流行特点。方法:按照标准化的Lm-PGFE方法对所分离到的36株Lm菌株进行脉冲场凝胶电泳分型。结果:36株Lm菌株通过PGFE分成了12个型别,各型别之间不紧密相关。结论:湖北省食品中Lm的污染来源于不同的克隆株,菌型分散,未发现单个基因型菌株流行的迹象。     

杭州市26株单增李斯特菌脉冲场凝胶电泳分型

目的：为了解杭州市各类食品中分离到的单核细胞增生李斯特菌各菌株之间的遗传相关性及流行病学的意义。方法：对所分离到的LM菌株进行传统生化检测和脉冲场凝胶电泳分型。结果：所分离到的26株LM菌株传统生化反应没有区别，PFGE分成14个图谱类型，各型之间不紧密相关。结论：杭州市食品中LM的污染来源于不同的克隆株，菌型分散，未发现单个基因型菌株流行的迹象。     

联合应用分子血清分型与二元基因分型检测单核细胞增多性李斯特菌的研究

目的了解食品中单核细胞增多性李斯特菌(LM)的分子血清型分布,并探索二元基因分型方法在LM分型检测中的意义。方法对2005年-2012年间河北省分离自食品的154株LM进行分子血清分型与二元基因分型分析。结果 154株LM中,1/2a型菌株最多,占52.60%,其次为1/2c型(22.08%)、1/2b型(15.58%)和4b型(9.74%)。二元基因分型可将154株LM分为31个BT(Binary Type)型,分辨力(DI值)为92.28%。二元基因型与分子血清型综合分析,可将154株LM分为34个型别,DI值为92.56%。通过对进化树分析可见,大多数BT型仅见于一种血清型,仅少数BT型见于2种血清型,提示二元基因型和分子血清型是否存在一种紧密的关系,尚需进一步研究证明。结论分子血清分型与二元基因分型综合应用于LM的分型研究,分型能力强,且具有操作简便、快速、高通量的优势,便于推广,可应用于暴发确认与溯源检测。     

单核细胞增生李斯特菌PFGE分型与血清学分型的联合分析

目的:采用国际标准化的脉冲场凝胶电泳(PFGE)分析方法对单核细胞增生李斯特菌(Lm)进行基因分型,同时进行血清学分型,比较分析两种分型方法的优劣和之间的关系。方法:按照标准化的Lm-PFGE方法对17株Lm进行PFGE分型,分别用限制性内切酶ApaI和AscI酶对菌株进行酶切,通过脉冲场凝胶电泳获得电泳图谱,利用B ioNum erics软件对图谱进行聚类分析。同时对上述菌株进行血清学分型。结果:17株Lm被内切酶ApaI分为13种带型,被内切酶AscI分为14种PFGE型。17株Lm分为5种血清型。结论:Lm-PFGE分型方法是一种高分辨力、稳定可靠的技术。PFGE的分辨力高于血清学分型,两种分型方法密切相关。聚类分析结果显示ApaI酶切分型与H抗原密切相关。     

单核细胞增多性李斯特菌病研究近况

单核细胞增多性李斯特菌是一种短小的革兰氏阳性无芽胞杆菌 ,是一种人畜共患病的致病菌 ,可使人和动物患李斯特菌病。该病病死率高达到 2 0 %～ 30 % [1 ] ,因此引起卫生界的高度重视。该菌在自然界中广泛存在 ,土壤是主要的贮主 ,各种野生和家养动物以及健康人群被认为是该菌的携带者 ,家庭环境和多种食品均可被污染。从国外暴发的几起李斯特菌病的传播媒介看 ,动物性食品是主要的传播源。因此许多学者提出该菌是一种重要的食源性致病菌。1　病原学该菌为短小的革兰氏阳性无芽胞兼性厌氧杆菌 ,长 1～2μm、宽 0 .5μm,常成对排列。在 2 0℃…     

江西省钩端螺旋体分离株脉冲场凝胶电泳分型和分析

目的 采用脉冲场凝胶电泳(PFGE)技术,对江西省钩端螺旋体(钩体)患者及动物宿主中分离的钩体菌株型别进行分子流行病学调查.方法 利用核酸内切酶Not Ⅰ对提取的钩体菌株染色体DNA进行酶切,通过PFGE将DNA片段分离.获得的PFGE图像采用分析软件BioNumerics 4.0进行处理并建立数字化数据库,以相似度＞75%为标准,将获各钩体PFGE图谱与中国15群15型钩体参考标准株进行比较并进行聚类分析.结果 江西省不同地区(的139株钩体可分为46个PFGE型,优势型为LepNot Ⅰ.0071、LepNotⅠ.0072和LepNotⅠ.0043型,分别占所有钩体菌株的28.06%、15.11%和7.19%.139株钩体分离株中,84.89%(118/139)菌株的PFGE图谱与6群6型中国钩体参考标准株基本相符,其中32.37%(45/139)钩体菌株属于黄疸出血群赖型,15.83%(22/139)和15.11%(21/139)钩体菌株分别属于澳洲群澳洲型和爪哇群爪哇型.结论 PFGE是一种快速、准确、高效的钩体分型方法 .黄疸出血群赖型是江西省人群及动物中优势血清型,澳洲群澳洲型和爪哇群爪哇型位于其次.     

2009—2010年山东省食品中单核细胞增生李斯特菌的耐药性和分子分型研究

目的 了解山东省单核细胞增生李斯特菌(单增李斯特菌)耐药及分子分型特点,并探讨耐药表型与PFGE基因组型之间的关系.方法 从2009-2010年山东省6个城市的生畜禽肉、熟肉制品、水产品等食品中采集80株单增李斯特菌,采用微量肉汤稀释法测定其抗生素敏感性,采用PFGE进行分子分型,并对耐药谱与PFGE型别关系进行分析.结果 16.25％(13/80)的菌株存在耐药,其中,业胺培南的耐药率最高(12.50％,10/80),其次是四环素和强力霉素(3.75％,3/80;2.50％,2/80).耐药分型可将80株菌分为9个型别.PFGE将80株菌分为34个带型,以17型和29型为主.A型耐药谱分布范围较广,出现在79.41％ (27/34)的PFGE型别中.结论 2009-2010年山东省单增李斯特菌存在较为严重的耐药现象,单增李斯特菌的PFGE分型与其药敏分型无对应关系.     

单核细胞增生李斯特氏菌多位点序列分型

目的 了解河北省食源性单核细胞增生李斯特氏菌(Lm)的基因序列型(ST)分布特征,为Lm分子流行病学研究提供资料。方法 参考www.pasteur.fr/mlst网站建立的用于Lm分子分型检测的多位点序列分型方法(MLST),对分离自河北省的69株食源性Lm进行分型检测及分析,采用Start2和BURST对检测结果进行分析,绘制SplitsTree进化树。结果 69株Lm可分为16个基因序列型,辛普森指数(DI)为89.98%,发现新型ST705;河北省的优势ST型为ST8、ST87、ST2、ST1、ST3和ST9。结论 河北省优势的ST型型别相对较多,各ST型分布较分散,遗传具有多样性。     

伤寒沙门菌的脉冲场凝胶电泳分型方法研究

目的：运用脉冲场凝胶电泳研究宁波市伤寒沙门菌的分子流行病学。方法：选择XbaⅠ酶对伤寒沙门菌染色体DNA进行酶切，采用脉冲场凝胶电泳技术分析电泳酶切指纹图谱，了解其流行状况。结果：14株伤寒沙门菌，根据电泳图谱分析，可分为3个带型。结论：PFGE具有分辨力高，重复性好的特点，是研究伤寒沙门菌分子流行病学较好的基因分型方法。     

用脉冲场凝胶电泳方法对O139霍乱弧菌分型的研究

目的：利用脉冲场凝胶电泳（PFGE）技术探讨O139群霍乱弧菌的分子分型方法。方法：用SfiⅠ酶和NotⅠ酶切O139群霍乱弧菌染色体DNA，经脉冲场凝胶电泳进行片段分离。结果：14株O139群霍乱弧菌经SfiⅠ酶切后电泳分离可得一个PFGE型，用NotⅠ酶切电泳可分为2个PFGE型。结论：脉冲场凝胶电泳技术分析O139群霍乱弧菌，分型发现微小差别有助于分析追踪疫情和来源。     

PFGE法分析多血清型副溶血性弧菌引起的食物中毒

目的:对从食物中毒样品中分离到的7株副溶血性弧菌作常规鉴定及脉冲场凝胶电泳(PFGE)同源性分析,以明确致病因子。方法:按GB/T4789.7-2008进行副溶血性弧菌分离、生化鉴定、神奈川试验、血清分型;Pulse-Net PFGE分子分型标准实验室操作方法作同源性分析。结果:7株副溶血性弧菌分成三个血清型,即O3∶K6型5株,O4∶K8型和O1∶K56型各1株,分别属于三种不同的PFGE条带型,其中6株菌神奈川试验阳性。结论:这次食物中毒可能为以O3∶K6型为主的不同克隆群副溶血性弧菌混合感染所致。