5-羟色胺4受体调节剂对肝部分切除大鼠胃肠5-羟色胺分泌和肝再生的影响

目的 探讨5-羟色胺4(5-HT4)受体调节剂(激动剂和抑制剂)对肝部分切除(PH)后大鼠胃肠道5-羟色胺(5-HT)和肝再生的影响. 方法 60只成年SD大鼠PH后分为对照组、西沙必利(激动剂)组和GR113808(抑制剂)组3组;西沙必利组PH后每12 h按10mg/kg体重的西沙必利灌胃,GR113808组PH后每12 h按3mg/kg体重的GR113808腹腔注射;分别于PH后0 h、24 h、48 h、72 h计算肝/体重比,并取血液、胃、小肠和肝组织;用免疫组织化学技术显示胃肠中5-HT免疫阳性(5-HTIR)细胞,用图像分析系统测定胃肠5-HTIR细胞平均灰度,用酶联免疫吸附法(ELESA)检测血液中的5-HT,用银染技术显示肝细胞核仁组织区相关嗜银蛋白(AgNORs). 结果 与对照组比,1. 西沙必利组胃肠中5-HTIR细胞数于PH后48～72 h显著下降(P<0.05)、细胞的灰度于PH后24～72 h显著上升(P<0.05),血中5-HT的含量于PH后24～72 h显著上升(P<0.05),肝/体重比和肝组织AgNORs颗粒数在PH后48～72 h显著增加(P<0.05);2. GR113808组在PH后24～72 h期间,5-HTIR细胞数较对照组无显著性差异,但细胞的灰度显著下降(P<0.05或P<0.01),血中5-HT的含量显著下降(P<0.05或P<0.01),肝/体重比于48～72 h显著下降(P<0.05或P<0.01),肝中AgNORs颗粒数于24～72 h显著减少(P<0.05或P<0.01). 结论 用5-HT4受体调节剂改变胃肠道5-HT的分泌量,可导致肝/体重比和肝细胞的转录活性发生相应的改变;胃肠道分泌的5-HT具有促进肝细胞增殖的作用.     

外源精脒和精胺可诱导大鼠早期再生肝抗酶的表达

目的探讨精脒和精胺对大鼠早期再生肝抗酶(AZ)表达的影响,及在肝再生中的作用。方法外源多胺(溶于0.9%NaCl)皮下注射雄性SD大鼠(180～200g),进行部分肝切除(PH)诱导。采用RT-PCR和Western blotting方法进行PH后大鼠再生肝中AZ基因转录量和蛋白表达量的分析。结果对照组完整肝脏(PH后0h)中,AZ基因转录量、蛋白表达量较低,PH后均快速升高,3h达到峰值,5h出现明显下降,7h再次升高并达到峰值,之后缓慢下降。外源多胺处理后,两种剂量精脒(0.03mg/kg和0.15mg/kg)和精胺(0.06mg/kg和6mg/kg)处理组AZ mRNA及蛋白表达水平变化趋势与对照组相似,但低剂量处理组远远低于相应时间点高剂量处理组。精胺的作用效果更明显,作用时间更持久。结论外源多胺对大鼠早期再生肝AZ mRNA及蛋白表达具有剂量依赖性促进作用,而精胺的作用较强,精脒较弱。     

枸杞多糖通过调控PI3K/Akt/eNOS信号通路对去卵巢大鼠心肌产生抗氧化作用

目的:观察枸杞多糖对去卵巢大鼠心肌PI3K/Akt/e NOS信号通路的影响。方法:将30只SD雌性大鼠随机分为假手术组、去卵巢组、补佳乐组、枸杞多糖高剂量组及枸杞多糖低剂量组,ELISA法比较各组血清雌激素、LDH及CK水平,检测心肌H_2S含量及氧化应激损伤相关指标,HE染色观察各组心肌的形态变化,Western blot法检测各组大鼠心肌e NOS蛋白及PI3K/Akt通路蛋白的表达。结果:与假手术组相比,去卵巢组大鼠血清雌二醇水平降低,心肌H_2S含量和GSH-Px活性下降,心肌e NOS蛋白及PI3K/Akt通路蛋白的表达均有所降低,心肌ROS活性和MDA含量升高(P0.05),心肌细胞排列紊乱,细胞间隙增大,血清LDH和CK活性均增多;与去卵巢组比较,枸杞多糖高剂量组大鼠血清雌二醇含量增加(P0.05),心肌H_2S含量、GSH-Px活性、e NOS蛋白及Akt磷酸化水平均提高,心肌ROS活性和MDA含量下降(P0.05),血清LDH和CK活性均降低,并且改善大鼠心肌形态的变化。结论:枸杞多糖可以通过调控PI3K/Akt/e NOS通路改善去卵巢大鼠心脏变化防治绝经后心血管病变。     

一氧化氮和前列腺素F2α对大鼠颗粒细胞雌二醇及孕酮分泌的影响

为探讨一氧化氮（NO）和前列腺素（PGF2α）对大鼠卵巢颗粒细胞分泌雌、孕激素的影响，给未成年雌性大鼠注射孕马血清促性腺激素（PMSG），48h后取卵巢，收集颗粒细胞并分组培养。24h后，分别加入NO供体硝普钠（SNP）、PGF2α和SNP＋PGF2α，48h后收集细胞培养液，用放免法测定雌、孕激素的含量。结果发现SNP可增加颗粒细胞孕酮分泌，减少雌二醇分泌，且呈量效关系；PGF2α可使雌二醇和孕酮含量均降低；SNP和PGF2α联合可使孕酮含量升高，雌二醇含量降低。结果提示SNP和PGF2α都参与大鼠卵巢颗粒细胞雌、孕激素合成的调节。     

卵巢切除对大鼠肾上腺雌激素受体亚型表达的影响

目的通过对去卵巢大鼠雌激素受体(ER)亚型在肾上腺表达的观察,研究去卵巢对大鼠肾上腺功能影响的机制。方法选择成年Wistar大鼠20只,10只为假手术组,10只为模型组(去卵巢组),6周后处死大鼠,分离摘取肾上腺,称重后常规石蜡包埋切片,分别进行ERα、ERβ抗体的免疫组织化学染色,并取动物血清测量雌二醇(E2)和促卵泡生成素(FSH)的含量。结果1.ERα与ERβ在大鼠肾上腺均有表达,主要分布在肾上腺皮质部,以球状带和束状带为主,网状带有少量分布,ERβ的表达强于ERα。2.ERβ在大鼠模型组的表达强于假手术组,有统计学意义,ERα在模型组的表达略强于假手术组,但无统计学意义。3.卵巢切除后,大鼠血清FSH升高,E2下降,与假手术组相比,有显著差异。结论卵巢切除可影响雌激素受体在大鼠肾上腺的表达,尤其是对ERβ表达的影响较为显著。卵巢切除能够减少大鼠血清雌激素的分泌,使垂体反馈性的增加FSH的分泌。     

皮质酮对大鼠早期再生肝抗酶mRNA及蛋白表达的影响

目的 研究外源皮质酮对部分肝切除(PH)诱导的大鼠早期再生肝抗酶mRNA及蛋白水平的影响.方法 PH前3d对成年雄性SD大鼠进行双侧肾上腺切除术,皮质酮悬浮于芝麻油中皮下注射去肾上腺鼠,抗酶mRNA及其蛋白水平的测定采用RT-PCR和Western blotting法. 结果 与对照组(n=6,以下相同)相比,去肾上腺组及10mg/kg、20mg/kg体重皮质酮处理组抗酶mRNA水平变化不明显,而40mg/kg体重皮质酮处理能显著刺激其转录.在PH后5、7、9h,去肾上腺术鼠抗酶蛋白水平显著低于相应时间点的对照组;皮质酮处理后,蛋白水平在所观察的整个实验过程中均显著上升,且剂量越高,蛋白含量越多,尤其在PH后5h,10、20和40mg/kg体重皮质酮处理组分别比同时间点对照组高43%、79%和93%. 结论 皮质酮对大鼠早期再生肝抗酶蛋白的合成具有剂量依赖性促进作用.     

皮质酮对大鼠肝再生过程中鸟氨酸脱羧酶的抑制

目的 研究大鼠体内主要的糖皮质激素--皮质酮对部分肝切除(PH)诱导的再生肝鸟氨酸脱羧酶(ODC)基因表达及酶活性的影响.方法 乙醚麻醉大鼠,于PH前3d行双侧肾上腺切除术及假手术,皮质酮悬浮于芝麻油中皮下注射玄肾上腺鼠.用RT-PCR、Western blotting及高效液相色谱法(HPLC)分别测定ODC mRNA、ODC蛋白及酶活性.结果 与再生肝相比,完整肝中ODC mRNA、蛋白及其酶活性水平较低.PH后所有组(每组n=6)中ODCmRNA水平均显著升高,5h达到峰值.7h前mRNA含量由高到低依次为去肾上腺组、去肾上腺假手术组(即对照组)、10和40ms/kg体重皮质酮处理组.去肾上腺组(n=13,下同)的ODC蛋白量高于对照组.10mg/kg体重皮质酮处理,在PH后0～24h下降,40mg/kg皮质酬处理组最低.PH后,所有组(每组n=6)ODC活性迅速升高,6h达到峰值;皮质酮处理后活性在6h下降显著,40ms/kg体重皮质酮处理组活性最低.结论 皮质酮处理后,大鼠完整肝及再生肝中ODC mRNA及蛋白水平呈剂量依赖性下降;ODC活性变化的部分原因是由于ODC mRNA及其蛋白量的改变.     

肝细胞生长和分化相关基因在大鼠肝再生中的表达方式及作用分析

目的在基因转录水平了解肝再生中肝细胞的生长和分化情况。方法用搜集网站资料和查阅相关论文等方法获得参与肝细胞生长和分化基因,用大鼠基因组230 2.0芯片检测它们在大鼠肝再生(LR)中的表达情况,通过比较手术组和假手术组中基因表达差异性以确定上述基因中的肝再生相关基因。结果初步证实上述基因中110个基因与肝再生相关。肝再生启动(PH后0.5~4h)、G0/G1过渡(PH后4~6h)、细胞增殖(PH后6~66h)、细胞分化和组织结构功能重建(PH后72~168h)等4个阶段起始表达的基因数为63、11、43和3,基因总表达的次数为63、43、101和80,表明相关基因主要在肝再生启动阶段起始表达,在不同阶段发挥作用。它们共表达上调488次,下调248次,分为6种表达方式,表明肝再生中细胞生理生化活动的多样性和复杂性。结论肝细胞生长和分化贯穿于整个肝再生中。     

大鼠肝再生的肝细胞干性变化中性别决定区转录因子2 mRNA和其他非编码RNA的表达变化与作用

目的 了解大鼠肝再生(LR)0 h和2 h时性别决定区转录因子2(SOX2)基因及其mRNA相互作用的微小RNA(miRNA,miR)和环状RNA(circRNA)的表达变化、相互作用和调节肝细胞干性变化的途径与方式。方法 按Higgins等方法制备大鼠2/3肝切除(partial hepatectomy, PH)模型，按Smedsrod等方法分离肝细胞，用大规模定量检测技术测定大鼠肝再生中肝细胞的mRNA、miRNA合称内源竞争RNA(ceRNA)的表达变化，用Cytoscape 3.2软件构建ceRNA的相互作用网，用ceRNA综合分析等方法解析它们的表达相关性和作用相关性。结果 PH后0 h和2 h时，SOX2 mRNA的比值为1.00±0.09和2.15±0.48,miR-3558-3p为4.53±0.10和0.81±0.16,circRNA＿18404为1.24±0.04和11.10±0.57,circRNA＿18045为1.97±0.47和4.44±0.23。同时，PH后0 h时，SOX2促进的富含AT的交互域5A(ARID5A)、激活转录因子3(ATF3)、BTG抗增殖因...     

外源多胺对大鼠再生肝细胞鸟氨酸脱羧酶基因转录的调节

目的 研究天然多胺(腐胺、精脒和精胺)对大鼠再生肝细胞鸟氨酸脱羧酶(ODC)基因转录的调节,探讨多胺在肝再生中的作用.方法 大鼠部分肝切除术诱导再生肝,采用原位杂交技术分析ODC mRNA的表达量,外源多胺(溶于0.9%NaCl)的处理用皮下注射法.结果 外源多胺处理后,再生肝ODC mRNA水平的变化趋势与对照组相似,但不同种类、剂量的多胺,结果差异明显.在所观察到的整个肝再生期间,高剂量腐胺(20 mg/kg体重)处理组mRNA水平始终低于对照组,特别在部分肝切除后2、4和10 h与对照组相比具有显著性差异(P＜0.05);低剂量(0.02 mg/kg体重)的腐胺处理组,只在4 h和12 h显著高于对照组.高剂量精脒(0.15 mg/kg体重)处理组的ODC mRNA水平始终低于对照组(在10 h例外);而低剂量(0.03 mg/kg体重)处理组则不同,ODC mRNA水平表现出先抑制(在2 h)后促进(在4 h和6 h)的特点.精胺的作用与精脒相似.结论 不同浓度的多胺(主要是精脒和精胺)对大鼠再生肝细胞ODC基因转录存在着反馈调节作用.     

Blunted DNA synthesis and delayed S-phase entry following inhibition of Cdk2 activity in the regenerating rat liver

Activation of the cyclin E/Cdk2 complex may play an important role in mid-G1/S-phase progression in proliferating mammalian cells. We evaluated the effect of targeted inhibition of Cdk2 activity by CYC202 (R-roscovitine) on hepatocytes proliferation in vivo after 70% partial hepatectomy (PH) in rats. In controls, Cdk2 activity and DNA synthesis peaked 24 h after PH. CYC202 abrogated Cdk2 activity, prevented BrdU incorporation and PCNA expression and increased mortality 24 h after PH. Cyclin E and Cdk2 protein expression and complex formation was not affected by CYC202 nor was cyclin D1, Cdk4 and c-ras mRNA expression. Two consecutive injections 8 and 20 h after PH were required to elicit the inhibitory effect of CYC202, which was lost when either the injection at 8 h or at 20 h was withheld. Cdk2 activity and cell progression resumed 48 h after PH in surviving animals suggesting that CYC202 induced a reversible inhibition of the cell cycle. Our results confirm an important role for Cdk2 in hepatocytes proliferation in the regenerating liver. We demonstrate that molecular events, including Cdk2 activation, occurring within the 8th and 24th hour after PH (G1/S-phase transition) are crucial in determining whether or not DNA synthesis and hepatocytes proliferation proceed normally after PH.     

血管内皮生长因子在大鼠肝再生过程中的表达变化

目的通过检测血管内皮生长因子（VEGF）在大鼠肝再生过程中表达量的变化,探讨VEGF在肝再生中的作用。方法300只SD大鼠随机分为正常对照组、假手术组和实验组。实验组大鼠切除2／3肝,分别于术后不同时段取肝组织或原位灌注分离肝实质细胞。用免疫组织化学和Western blotting技术检测肝组织和肝实质细胞中VEGF的表达变化。结果正常肝组织的VEGF阳性细胞很少;肝切除（PH）后24h阳性细胞数显著增加（P〈0．01）,主要分布于门管区周围;PH72h时阳性细胞数达到高峰,几乎遍及整个肝小叶;从PH120h起VEGF阳性细胞数逐渐减少至正常。Western blotting检测结果表明,肝实质细胞的VEGF表达量于PH0～12h较少,PH12h后增多,PH24—72h的表达量约为PH0～12h的2倍,PH72h后逐渐下降,至120h恢复正常;肝组织VEGF的表达量于PH0～12h较少,PH12h后逐渐增多,PH72h时出现高峰,约为PH0～12h的4倍;肝组织VEGF的表达量大于肝实质细胞的表达量。结论VEGF可能是参与肝脏组织结构重建的重要的生长因子：肝实质细胞是肝中VEGF的雷耍来源之一。     

外源多胺对大鼠早期再生肝鸟氨酸脱羧酶蛋白水平的调节

目的 研究多胺(腐胺、精脒和精胺)对大鼠再生肝鸟氨酸脱羧酶(ODC)蛋白水平的调节,分析多胺在肝再生中的作用.方法 外源多胺(溶于0.9%NaCl)皮下注射雄性SD大鼠(180～220 g),部分肝切除(PH)诱导的大鼠再生肝中ODC蛋白水平的分析采用免疫印迹(Western blotting)方法.结果 高剂量的腐胺(20 ms/kg体重)、精脒(0.15 mg/kg体重)和精胺(6 mg/kg体重)处理后,ODC蛋白水平在PH后12 h内均低于对照组,且各组间变化趋势相近;而低剂量腐胺(0.02 mg/kg体重)、精脒(0.03 mg/kg体重)及精胺(0.06 ms/kg体重)处理组在PH后4h ODC水平迅速升高,分别比对照组高15.1%、29.5%和30.3%.结论 一定剂量的多胺对大鼠早期再生肝ODC蛋白水平有反馈调节作用,其中精脒、精胺的作用较强,腐胺较弱.     

大鼠再生肝提取物对肝再生中肝细胞增殖的影响

大鼠肝大部(67%)切除24小时后取残肝匀浆,经加热,酒精沉淀、透析等步骤制备提取物,腹腔注射给正常大鼠和32%肝切术后的大鼠。光镜下观察肝组织切片,计算肝细胞有丝分裂百分率。鼠再生肝提取物可使32%肝切术后24-48小时再生肝细胞有丝分裂百分率明显增加,尤其在术后30小时可达对照组的3.9倍。结果表明,再生肝提取物中含有能够促进肝细胞增生的肝再生刺激因子(HSS),此因子对增殖前期(G_0/G_1早期)细胞作用不明显。     

Identification of p46 Shc expressed in the nuclei of hepatocytes with high proliferating activity: Study of regenerating rat liver

The adaptor molecule Shc is a proto-oncogene product, and it is known to be associated with cell proliferation. However, the role of Shc in the proliferation and regeneration of hepatocytes remains unknown. In the present study, we report that p46 Shc is specifically expressed in the nuclei of proliferative (or regenerative) hepatocytes, suggesting that p46 Shc protein plays a role in hepatocellular proliferation. The expression of Shc was analyzed in liver tissue after partial hepatectomy (PH) or sham operation in Wistar rats by using immunohistochemistry and/or Western blot analysis. In addition, the expression of various cell cycle-related proteins, such as Cdk4, cyclin D1, PCNA, and Cdk1 was analyzed in the tissues of regenerating rat liver. Furthermore, the tyrosine phosphorylation of Shc was studied in liver tissue after PH or sham operation by immunoprecipitation using a monoclonal phosphotyrosine antibody. Although the protein levels of p52 Shc were unchanged in liver tissues after PH or sham operation, tyrosine phosphorylation was detected only in the regenerating rat liver after PH. The levels of p46 Shc protein were markedly increased in liver tissues during the liver regenerative process. In contrast, p66 Shc was not detected in the liver tissues after PH or sham operation. Western blotting and immunohistochemistry showed that the main location of p46 Shc was in the nuclei of proliferating hepatocytes after PH. These data suggest that p46 Shc expressed in hepatocellular nuclei may be closely related to the proliferation of hepatocytes. Therefore, it is suggested that p46 Shc expressed in hepatocellular nuclei may be a useful marker for detecting hepatocytes with high proliferative activity.     

大鼠肝大部切除与D-氨基半乳糖肝中毒后肝细胞增殖及甲胎蛋白和白蛋白免疫细胞化学研究

大鼠肝大部切除后和D-氨基半乳糖肝中毒后第1～7天,逐日取肝组织及血液样本,观察两种类型损伤后肝再生中肝细胞的增殖分化,以及血清甲胎蛋白(AFP)与白蛋白(ALB)浓度变化及其免疫细胞化学变化。结果表明:1.肝大部切除后肝细胞分裂高峰(1.5％)出现于术后第2天,半乳糖肝中毒组的高峰在第3天,且峰值仅为前者的一半(0.8％)。2.半乳糖肝中毒后,门管区和小叶周边带出现许多小型细胞,而大部切除后的肝内无此种小型细胞。3.AFP与ALB免疫细胞化学观察表明,两种损伤后肝再生中均有AFP阳性肝细胞,于第2～3天增多,第4天后渐少。部分小型细胞呈AFP阳性。电镜下见粗面内质网、滑面内质网、高尔基复合体及核周隙等处显示AFP阳性。ALB阳性细胞第1～3天较少,于第4天起渐增多。4.血清AFP含量于第1天开始升高,第4天达高峰,此后下降,ALB含量变化恰与AFP相反,第3天下降至最低点,此后回升。     

Use of ultrathin shell microcapsules of hepatocytes in bioartificial liver-assist device

We previously encapsulated hepatocytes in ultrathin shell microcapsules and showed them to have enhanced differentiated functions over cells cultured in monolayer. Here we have used these microencapsulated hepatocytes in a bioartificial liver-assisted device (BLAD) with a rat hepatectomy model. Primary rat hepatocytes were encapsulated in 150- to 200-microm microcapsules, using an electrostatic droplet generator. The microencapsulated hepatocytes exhibited good in vitro urea synthesis activity in plasma from rats with fulminant hepatic failure (FHF). The ex vivo hemoperfusion was conducted in FHF rats by perfusing plasma at a rate of 1-2 mL/min through 1.5-2 x 10(8) encapsulated hepatocytes packed into a packed-bed bioreactor. Hemoperfusion with the bioreactor was initiated 5 h after operative induction of liver failure and continued for 7 h. The BLAD-treated rats showed improvements over the control groups in survival time and metabolic indicators, including ammonia and total bilirubin levels. Furthermore, expanded bed adsorption (EBA) detoxification technology using Streamline-SP resin was explored to complement the bioreactor with microencapsulated hepatocytes. In vitro experiments indicated that serum ammonia could be specifically removed in dose-dependent manner, whereas the total serum proteins were unaffected by the resin. In ex vivo experiments, hemoperfusion with the resin was initiated 3 h after operative induction of liver failure and continued for 7 h. The resin-treated rats showed obvious serum ammonia removal with no observable total blood protein and blood cell adsorption. Therefore, Streamline-SP resin can potentially be integrated into a BLAD for improved efficacy.     

辅酶Q10对大鼠再生肝细胞线粒体通透性转换的影响

目的 了解辅酶Q₁₀（CoQ₁₀）对大鼠再生肝细胞线粒体通透性转换（MPT）的影响。方法 雌性SD大鼠120只,用不同剂量CoQ₁₀灌胃后行部分肝切除术（PH）,于术后不同时间取肝组织分离线粒体,分光光度计法测定线粒体悬液的A540nm值,之后再加入钙离子诱导并检测A540nm值。结果 PH后6~48h,高剂量（60mg/kg）CoQ₁₀处理组的再生肝线粒体通透性明显低于对照组,而低剂量（6mg/kg）处理组只在48h明显低于对照组,其他时间均无显著差异。用钙离子诱导后,各组各时间点的线粒体通透性随时间延长而不同程度的增强,但PH后6~48 h的CoQ₁₀处理组的再生肝线粒体通透性稍小于对照组。结论 一定剂量的CoQ₁₀能降低大鼠再生肝线粒体通透性,作用主要体现在肝再生的细胞增殖阶段。