逆转录病毒介导IL－2基因导入肝癌细胞的研究

利用逆转录病毒载体系统ＰＡ３１７／ＬＮＣ－ＩＬ－２所产生的含有ＩＬ－２基因及新霉素抗性基因（ｎｅｏｒ）的重组病毒，经共培养转染ＳＭＭＣ－７７２１肝癌细胞株。ＩＬ－２基因受巨细胞病毒早期启动子调控，转染后的细胞置于含新霉素类毒性药物Ｇ４１８（４００ｕｇ／ｍｌ）培养基内培养、筛选３０天，结果果转染率约为１～２％。对存活下来的转染有ＩＬ－２基因和新霉素抗性基因的细胞形态和生长情况进行观察，同时从水平及蛋白质水平对外源性基因的转录和翻译进行检测。结果表明：ＳＭＭＣ－７７２１肝癌细胞在ＩＬ－２基因转染前后形态及生长情况无明显变化；培养上清活性检测发现转染后为转染前的２０～３０倍；逆转录ＰＣＲ分析显示转染后的ＩＬ－２ｍＲＮＡ量明显高于转染前。研究表明我们已成功地将ＩＬ－２基因导入肝癌细胞并获得持续、稳定、高效表达。     

IL-4基因及B7-1基因共转染新型瘤苗的制备及其治疗作用的初步研究

本文研究了ＩＬ－２，ＩＬ－４，ＩＬ－６基因转染后Ｂ１６黑色素瘤细胞表面ＭＨＣＩ类抗原及ＩＣＡＭ－１的表达水平，并探讨了基估ＣＴＬ诱导过程中的作用。结果表明，ＩＬ－２，ＩＬ－４，ＩＬ－６基因转染Ｂ１６黑素瘤细胞表面ＭＨＣＩ类抗原及ＩＣＡＭ－１表达均高于野生型Ｂ１６黑色素瘤细胞及转染对照质粒的Ｂ１６黑色素瘤细胞。     

IL-4基因治疗脑胶质瘤的实验研究

目的 探索一条细胞因子ＩＬ－４基因治疗脑胶质瘤的新途径。方法 用脂质体转染的方法,以重组逆转录病毒做载本,将目的基因鼠ＩＬ－４基因转入包装细胞和大鼠Ｃ６胶质瘤细胞,通过Ｇ４１８抗性筛选,得到分泌ＩＬ－４的细胞株Ψ２ ＩＬ－４和Ｃ６ＩＬ－４。Ｅｌｉｓａ法检测病毒上清中ＩＬ－的含量,通过Ｓｏｕｔｈｅｒｎ ｂｏｌｔ 和Ｄｏｔ ｂｌｏｔ证明ＩＬ－４基因的整合和表达。体外观察并比较了野生型和转基因瘤细胞的细     

肺癌患者Th1／Th2细胞的变化

「目的」观察肺癌患者血浆及外周血单个核细胞（ＰＢＭＣ）诱生ＩＬ－２、ＩＬ－４水平,进而反映患者Ｔｈ１和Ｔｈ２细胞功能。「方法」运用细胞因子诱生及ＥＬＩＳＡ技术,测定４８例肺癌术前患者和２４例术后患者血清及外周血单个核细胞诱生的ＩＬ－２、ＩＬ－４水平。以ＩＬ－２水平反映Ｔｈ１细胞功能,以ＩＬ－４水平代表Ｔｈ２细胞功能。「结果」肺癌患者表及ＰＢＭＣ诱生产生ＩＬ－２水平减低,而ＩＬ－４水平升高。ＰＢＭＣ     

IL—4基因转染人胃癌细胞的实验研究

目的：评价ＩＬ－４基因转染人胃癌细胞株分泌ＩＬ－４的可行性。方法：用脂质体转染法将ＩＬ－４基因转入ＳＧＣ－７９０１人胃癌细胞株，并检测细胞分泌的ＩＬ－４和对ＬＡＫ细胞杀伤肿瘤细胞作用的影响。结果：ＩＬ－４基因可以转染入人胃癌细胞，并表达有活性ＩＬ－４，基因转染可以明显增强ＩＬ－２激活的ＬＡＫ细胞的肿瘤杀伤作用，用大剂量的γ射线照射后，转染细胞仍可以持续分泌ＩＬ－４３～４周期。结论：ＩＬ－４基因转染不改变胃癌细胞的体外生长特性，但可以明显增强抗肿瘤免疫反应     

成纤维细胞介导的人α型干扰素基因疗法与过继免疫化疗联合治…

作者以皮下接种人肝细胞癌细胞ＳＭＭＣ７７２１的裸鼠为荷瘤模型，由人外周血单个核细胞经体外ＩＬ－２和丝裂霉素Ｃ灭活的人肝癌细胞ＳＭＭＣ７７２１共同刺激培养后激活的杀伤细胞（ＡＫ），研究了将成纤维细胞介导的人ＩＦＮ－α基因疗法与ＩＬ－２／ＡＫ／阿霉素过继免疫化疗联合应用后对肝癌的治疗作用。结果表明：（１）给肝癌鼠单独腹腔埋植人ＩＦＮ－α基因转移的ＮＩＨ３Ｔ３成纤维细胞（ＮＩＨ３Ｔ３－ＩＦＮ－α＾＋）就     

成纤维细胞介导的人α型干扰素基因疗法与过继免疫化疗联合治疗人肝癌的实验研究

作者以皮下接种人肝细胞癌细胞ＳＭＭＣ７７２１的裸鼠为荷瘤模型，由人外周血单个核细胞经体外ＩＬ－２和丝裂霉素Ｃ灭活的人肝癌细胞ＳＭＭＣ７７２１共同刺激培养后激活的杀伤细胞（ＡＫ），研究了将成纤维细胞介导的人ＩＦＮ－α基因疗法与ＩＬ－２／ＡＫ／阿霉素过继免疫化疗联合应用后对肝癌的治疗作用。结果表明：（１）给肝癌裸鼠单独腹腔埋植人ＩＦＮ－α基因转移的ＮＩＨ３Ｔ３成纤维细胞（ＮＩＨ３Ｔ３－ＩＦＮ－α￣＋）就能显著抑制肝癌（皮下）体内生长，使荷瘤裸鼠存活期明显延长；（２）在腹腔埋植ＮＩＨ３Ｔ３－ＩＦＮ－α￣＋之后再静脉注射ＡＫ细胞、腹腔内注射ＩＬ－２，发现荷瘤裸鼠的皮下肿瘤结节生长抑制作用更明显；（３）将ＮＩＨ３Ｔ３－ＩＦＮ－α￣＋与ＩＬ－２／ＡＫ／阿霉素联合应用后，对肝癌裸鼠的治疗效果更佳。     

肺癌患者Ⅰ类和Ⅱ类辅助T细胞的变化

目的：研究肺癌患者血浆及外周单个核细胞（ＰＢＭＣ）诱生ＩＬ－２、ＩＬ－４水平及患者Ⅰ类和Ⅱ类辅助Ｔ细胞（Ｔｈ１和Ｔｈ２）细胞功能。方法：用细胞因子诱生及ＥＬＩＳＡ技术,测定３０例肺癌术前患者、１２例术后患者血清及外周血单个核细胞诱生的ＩＬ－２、ＩＬ－４水平,以ＩＬ－２水平反映Ｔｈ１细胞功能,以ＩＬ－４水平代表Ｔｈ２细胞功能。结果：肺癌患者血清及ＰＢＭＣ诱生产生ＩＬ２水平减低,而ＩＬ－４水平升高（Ｐ     

同种异体LAK/IL-2经超声雾化吸入及胸腔内注射治疗晚期肺癌

将ＩＬ－２或ＩＦＮ－γ基因体内转染腹腔巨噬细胞（ＭΦ），其表达的基因产物能提高ＭΦ的细胞毒活性，并诱导ＭΦ分泌ＴＮＦ、ＩＬ－１和ＮＯ等抗肿瘤免疫介质，激发机体的非特异性免疫功能而产生抗肿瘤效应。特别是ＩＬ－２和ＩＦＮ－γ基因联合转染ＭΦ，其表达的产物既能使ＭΦ产生更强的细胞毒活性并发分泌高水平的ＴＮＦ、ＩＬ－１和ＮＯ，又能激活脾ＣＴＬ细胞，从而激发机体的非特异性和特异性免疫功能，产生更强的协同抗肿     

白细胞介素6基因转染的白血病细胞体内抗白血病浸润…

应用白细胞介素６基因转染的高分泌ＩＬ－６的ＦＢＬ－３红白血病克隆株体外扩增后，接种至Ｃ５７ＢＬ／６小鼠，通过动态常规病理检查，观察了ＩＬ－６基因转染的高分泌ＩＬ－６的ＦＢＬ－３细胞体内抗白血病细胞浸润的作用。     

急性白血病患者血清可溶性白细胞介素2受体测定及其临床意义

测定９８例急性白血病（ＡＬ）患者血清可溶性白细胞介素２受体（ｓＩＬ－２Ｒ）水平，各型ＡＬ患者ｓＩＬ－２Ｒ均明显升高，且ＡＬＬ〉Ｍ５〉Ｍ２〉Ｍ３。ｓＩＬ－２Ｒ水平与骨髓中原始细胞数、外周白血细胞数、外周成熟淋巴细胞绝对值无关。动态观察发现化疗后不能获得完全缓解（ＣＲ）患者治疗前ｓＩＬ－２Ｒ明显高于获得ＣＲ患者。各型ＡＬ患者化疗ＣＲ后，ｓＩＬ－２Ｒ水平较治疗前均明显下降，除急性淋巴细胞白血病外，Ｍ２、     

慢性粒细胞白血病患者脑脊液可溶性白细胞介素2受体水平测定

用双抗体夹心酶联免疫吸附试验检测１５例慢性粒细胞白血病（ＣＭＬ）患者脑脊液（ＣＳＦ）可溶性白细胞介素２受体（ｓＩＬ－２Ｒ）水平。结果显示：ＣＭＬ急变期患者脑脊液ｓＩＬ－２Ｒ水平显著高于正常对照，ＣＭＬ慢性期及加速期与正常对照组间均无显著差异。合并中枢神经系统白血病（ＣＮＳ－Ｌ）患者ＣＳＦ中ｓＩＬ－２Ｒ明显高于ＬＣＮＳ－Ｌ者，治疗达缓解后渐降至正常范围。合并ＣＮＳ－Ｌ者ｓＩＬ－２Ｒ水平升高与ＣＳＦ中白血病细胞浸润呈正相关。我们认为ｓＩＬ－２Ｒ可作为ＣＮＳ－Ｌ诊断的参考指标之一，并可用于监测病情，观察疗效。     

白细胞介素18基因修饰的树突状细胞的表型分析及其免？…

目的：研究ＩＬ－１８基因修饰后的树突状细胞（ＤＣ）的表型和功能的变化。方法;以含ＩＬ－１８基因的重组腺病毒体外转染小鼠骨髓来源的ＤＣ,ＥＬＩＳＡ检测ＩＬ－１８分泌水平,以ＲＴ－ＰＣＲ检测ＩＬ－１８ｍＲＮＡ表达,以ＦＡＣＳ法分析其ＤＣ表型变化,采用（＾３Ｈ）－ＴｄＲ检测其ＭＬＲ的变化。     

白血病患者外周血IL－2、mIL－2R和TNF－α的检测及意义

４５例白血病患者，采用固相放射免疫分析法（ＲＩＡ）测定其血清白细胞介素２（ＩＬ－２）的水平，以流式细胞仪（ＦＣＭ）检测其外周血单个核细胞（ＰＭＮＣ）上膜白细胞介素２受体（ｍＩＬ－２Ｒ）的表达，用双抗体夹心ＣＥＬＩＳＡ法测定其血清肿瘤坏死固子α（ＴＮＦ－α）的含量。发现急性白血病（ＡＬ）及慢性位细胞白血病原始细胞危象（ＣＭＬ－ＢＣ）患者血清ＩＬ－２和ＴＮＦ－α的水平明显高于正常，ＣＭＬ－ＢＣ尤其急淋变者的ＰＭＮＣ上ｍＩＬ－２Ｒ阳性率较高，并与血清ＴＮＦ－α有关，而与血清ＩＬ－２无关，ｍＩＬ－２Ｒ阳性常提示白血病患者疗效差，预后不良。     

白细胞介素6基因转染的瘤苗体内造血调控的实验研究

将人白细胞介素６（ＩＬ－６）基因转染至小鼠红白血病细胞（ＦＢＬ－３），经丝裂霉素Ｃ灭活制备成瘤苗，接种于小鼠。接种后第４天，血小板、中性粒细胞即开始升高，第１０天达高峰并持续至第２５天，但白细胞数量变化不大。骨髓和脾脏粒细胞／巨噬细胞克隆形成单位（ＣＦＵ－ＧＭ）、巨核细胞克隆形成单位（ＣＦＵ－ＭＫ）数量亦有不同程度增高。实验表明，ＩＬ－６基因转染的瘤苗能显著增强骨髓和脾脏造血功能，提高外周血血小板和中性粒细胞数量     

白细胞介素2基因治疗耐三苯氧胺乳腺癌的实验研究

为探讨耐三苯氧胺（Ｔａｍｏｘｉｆｅｎ，ＴＡＭ）乳腺癌细胞因子基因治疗的可行性及效果，在体外将逆转录病毒载体介导的白细胞介素２（ＩＬ－２）基因导入耐ＴＡＭ大鼠乳腺癌细胞株Ｙ２，并进行了动物体内抗肿瘤实验研究。结果显示：同亲代Ｙ２细胞比、基因修饰的ＹＩＬ－２细胞形态和细胞生长特性发生改变。ＰＣＲ显示ＩＬ－２基因成功地整合到ＹＩＬ－２细胞内。ＹＩＬ－２细胞（２．０×１０６个／只）在大鼠右腋皮下失去致瘤性，并阻断等量混合的Ｙ２细胞的致瘤性，但阻断作用随亲代细胞数量的增多而减弱。同样数量无ＩＬ－２基因转移的Ｙ２细胞致瘤率为１００％。结果表明ＹＩＬ－２细胞具有抗肿瘤活性。     

阳离子脂质体——病毒增强质粒复合物在肝细胞癌基因治疗中的应用

目的建立一种简便有效的非病毒基因治疗方法。方法用构建的含人ＩＬ┐２基因的腺相关病毒（ＡＡＶ）增强质粒（ｐＡＩ┐ｈＩＬ┐２）与新型阳离子脂质体（Ｄｏｓｐｅｒ）以适当比例混合形成复合物（Ｄｏｓｐｅｒ┐ｐＡＩ┐ｈＩＬ┐２）。体外转染小鼠肝癌细胞系ＭＭ４５Ｔ．Ｌｉ┐２，评估了人ＩＬ┐２基因表达情况。应用直接瘤体内注射方法评估了此方法介导ＩＬ┐２基因的抗肿瘤作用。结果应用Ｄｏｓｐｅｒ┐ｐＡＩ┐ｈＩＬ┐２复合物体外转染ＭＭ４５Ｔ·Ｌｉ，其ＩＬ┐２表达水平每毫升可达１７５Ｕ／４８小时，最高表达时间在转染后第４天（２２５Ｕ／ｍｌ），第１２天仍可表达３０Ｕ／ｍｌ。瘤体内直接注射Ｄｏｓｐｅｒ┐ｐＡＩ┐ｈＩＬ┐２复合物后，瘤组织内可检出ＩＬ┐２ｍＲＮＡ，治疗组肿瘤生长明显减慢，小鼠生存率（转染后３０天）明显提高（Ｐ＜０．０１）。结论Ｄｏｓｐｅｒ┐ＡＡＶ增强质粒复合物能有效介导ＩＬ┐２基因表达，产生较好的抗瘤效应，此方法简便、更适合于临床应用     

转染金属蛋白酶抑制剂对胃癌细胞体外侵袭能力的影响

目的：探讨基质金属蛋白酶抑制剂（ＴＩＭＰ－２）对ＳＧＣ－７９０１胃癌细胞体外侵袭能力的影响。方法：将人全长ＴＩＭＰ－２基因经脂质体包裹转染ＰＡ３１７细胞系，Ｇ４１８筛选，感染人ＳＧＣ－７９０１胃癌细胞系，经体外细胞增殖、细胞电泳率、软琼脂形成和侵袭小室的实验综合分析其生物学行为改变。结果：经ＴＩＭＰ－２基因转不的ＳＧＣ－７９０１细胞和ＭＦＣ细胞和细胞电泳率。软琼脂形成和侵袭能力均明显低于对照组，而     

急性白血病患者外周血几种细胞因子水平的测定及其意义

目的 了解ＩＬ－２等细胞因子在白血病发病机制中的作用。方法 测定了５１例急性白血病患者ＰＢＭＮＣ培养上清中ＩＬ－２,ＩＬ－２,ＩＬ－６水平及血清ｓＩＬ－２Ｒ,ＴＮＦα水平。结果 （１）急性白血病患者ＰＢＭＮＣ培养上清的ＩＬ－２水平显著低于正常（Ｐ〈０．０１）及ＣＲ组（Ｐ〈０．０５）;而ＩＬ－６水平显著高于正常及ＣＲ组（Ｐ〈０．０１）。（２）急性白血病患者血清ｓＩＬ－２Ｒ及ＴＮＦα水平显著高于正常及     

CD3AK细胞和LAK细胞治疗晚期恶性肿瘤的临床和实验研究

将５１例晚期恶性肿瘤患者（男性２３例，女性２８例）分成两组，其中一组（３１例）以ＣＤ３ＭｃＡｂ（ＣＤ３单克隆抗体）和小剂量ＩＬ－２（５００ｕ／ｍｌ）共同诱导的ＣＤ３ＡＫ细胞治疗，另一组（２０例）输注大剂量ＩＬ－２（１０００ｕ／ｍｌ）诱导的常规ＬＡＫ细胞治疗，以探讨降低ＩＬ－２用量、提高杀伤细胞细胞毒活性的可能性。结果显示ＣＤ３ＡＫ组患者生活质量改善、症状缓解均优于ＬＡＫ组。ＣＤ３ＡＫ组ＰＲ＋ＭＲ率较ＬＡＫ组高２９．０％，Ｓ＋Ｐ率和死亡率分别较ＬＡＫ组低１２．４％和９．６％。同时比较了ＣＤ３ＡＫ细胞与ＬＡＫ细胞的体外增殖和细胞毒活性，结果表明ＣＤ３ＡＫ细胞增殖率高于ＬＡＫ细胞（Ｐ＜０．０１），靶细胞抑制率二者在０．０５水平无显著差异。提示ＣＤ３ＭｃＡｂ在刺激杀伤细胞活性，尤其在提高其增殖能力方面，具有显著的作用，ＣＤ３ＡＫ／ＩＬ－２能更有效地治疗晚期恶性肿瘤。