晶体蛋白βB2对眼晶体老化的影响

目的:探讨βB₂水溶性蛋白含量的改变对眼晶体老化的影响。方法:常规饲养不同年龄SD大鼠(出生后1d、8d、2周、8周、8个月及1.5年);提取水溶性晶体蛋白,双向电泳(等电聚焦/SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳,IEF/SDS-PAGE)得到大鼠晶体蛋白电泳图形;考马斯亮蓝染色后扫描蛋白图形,分别确认βB₂及晶体内主要伴侣蛋白(αA₂、αB₂),并测定其相对含量。结果:(1)随晶体老化βB₂水溶性成份呈"反常"年龄依赖性升高(r=0.938,P＜0.01)。(2)伴侣蛋白αA₂及αB₂水溶性成份亦呈渐进性升高(r=0.890,P＜0.05;r=0.930,P＜0.01)。(3)βB₂含量的变化趋势与伴侣蛋白αA₂及αB₂密切相关(r=0.949,P＜0.01;r=0.986,P＜0.01)。(4)接近中年期(8周)后,大鼠晶体蛋白明显产生降解或修饰成份(双向电泳出现多个新斑点)。结论:根据结果推论βB₂水溶性成份随老化升高有利于维持晶体蛋白的结构和透光性。     

磷脂酶A2活性与慢性常压低氧性肺动脉高压关系的研究

目的:研究磷脂酶A₂(PLA₂)活性及其相关炎症介质在大鼠慢性常压低氧性肺动脉高压形成中的作用。方法:29只健康SD大鼠随机分为正常对照组、单纯低氧组和低氧加白藜芦醇苷(PD)组。右心导管法检测大鼠肺动脉压力(mPAP),观察右室/左室+室间隔比值(R/L+S)、血浆和肺匀浆中PLA₂、血栓素B₂(TXB₂)、6-酮-前列腺素F_1α(6-k-PGF_1α)、丙二醛(MDA)、超氧化物歧化酶(SOD)水平的变化。结果:低氧3周后大鼠mPAP、R/L+S、血浆及肺匀浆中PLA₂活性、TXB₂、MDA含量显著升高;6-k-PGF_1α、SOD水平下降。用PD预处理后可减轻上述变化。结论:PLA₂通过相关炎症介质及与自由基的相互作用在慢性低氧性肺动脉高压的形成中起着重要的介导作用。     

四氯化碳诱导的肝损伤对大鼠免疫机能的影响

目的:研究化学性肝损伤对机体免疫机能的影响。方法:选择30只健康、1月龄、平均体重(83.20±2.11) g雌雄各半SD大鼠,经一段时间适应性饲养后,随机分成四氯化碳(CCl₄)注射组和对照组。CCl₄注射组大鼠按0.2 mL/100 g体重剂量每周定时注射CCl₄ 2次, 连续注射8周;对照组同时注射等量的橄 榄油。观察CCl₄诱导的肝损伤对机体免疫功能的影响。结果:注射CCl₄大鼠外周血T淋巴细胞比例和白细胞介素2水平显著低于对照组,与此同时B淋巴细胞比例却显著高于对照组;注射CCl₄组大鼠血浆总蛋白含量和白蛋白、α和β球蛋白比例下降,而γ球蛋白上升。结论:CCl₄诱导的肝损伤能明显影响大鼠的细胞免疫和体液免疫功能,造成大鼠的免疫功能失调。     

去甲肾上腺素对血管平滑肌细胞A7r5基因表达谱的影响

目的: 探讨去甲肾上腺素刺激后A7r5血管平滑肌细胞基因表达谱的改变。方法: 应用放射配体结合实验明确A7r5细胞上肾上腺素受体(AR)的表达。采用基因芯片技术观察去甲肾上腺素引起的血管平滑肌细胞基因表达谱的变化。用荧光实时定量PCR验证α_1A－AR,α_1B-AR的mRNA表达变化。结果:A7r5细胞中有α₁-AR和β-AR表达,其最大结合容量(Bmax)分别为(45.0±11.8)fmol／mg蛋白和(17.4±2.5)fmol／mg蛋白。去甲肾上腺素刺激细胞24 h后,有75个基因表达发生明显改变,其中涉及细胞结构、防御、代谢及信号转导等多方面的基因。荧光实时定量PCR结果显示去甲肾上腺素刺激细胞24 h后α_1A－AR和α_1B-AR的mRNA表达增加,与基因芯片的结果一致。结论:去甲肾上腺素激动AR引起A7r5血管平滑肌细胞多种不同功能的基因表达发生改变,提示在血管平滑肌中AR可能通过基因水平的调控而介导多种生物学功能。     

CCl4诱发肝损伤过程中血浆几种花生四烯酸代谢物和激素水平动态变化的研究

目的:深入了解肝损伤对机体血浆花生四烯酸代谢、一些激素代谢以及肝脏功能变化产生的影响。方法:选用30只健康、1月龄SD大鼠,通过腹腔注射CCl₄诱发肝损伤后,第2、4、6、8周观察血浆前列腺素E₂(PGE₂)、6-酮-前列腺素F_1α(6-keto-PGF_1α)、血栓素B₂(TXB₂)、谷-草转氨酶(AST)、碱性磷酸酶(AKP)、皮质醇、胰岛素、生长激素(GH)、甲状腺素(T₄)和三碘甲腺原氨酸(T₃)水平变化。结果:在整个实验期,大鼠血浆PGE₂水平在CCl₄注射后的第2周高于对照组,TBX₂比对照组高,但二者t检验无显著性。而6-keto-PGF_1α与对照组相近;血浆AST和AKP活力分别极显著高于对照组;皮质醇和胰岛素于2、6、8周显著高于对照组;GH、T₃均于第8周显著低于对照组。T₄则于第4、6、8周显著低于对照组。结论:肝损伤影响血中花生四烯酸代谢物水平和代谢;并导致血中几种代谢激素水平的异常变化。     

汉黄芩素对流感病毒感染肺泡巨噬细胞炎症相关因子的影响

目的: 研究汉黄芩素对甲型流感病毒鼠肺适应株A/FM/1/47(H1N1)感染的大鼠肺泡巨噬细胞(NR8383)产生促炎症细胞因子、炎症介质及氧自由基的影响。 方法: 流感病毒感染 NR8383细胞1 h后,加入含汉黄芩素的培养基(终浓度16 mg/L),药物作用后6 h、12 h和24 h,ELISA法检测细胞上清中肿瘤坏死因子α(TNF-α)和单核细胞趋化蛋白 1(MCP-1)的含量,放射免疫测定法检测细胞上清中前列腺素E₂(PGE₂)、磷脂酸A₂(PLA₂)和白三烯B₄(LTB₄)的含量;药物作用后8 h、24 h、36 h和48 h,生化法检测细胞内一氧化氮(NO)含量和诱导型一氧化氮合酶(iNOS)活性,4 h、8 h、18 h和24 h,生化法检测超氧化物歧化酶(SOD)活性和丙二醛(MDA)含量;药物作用后24 h,real-time PCR检测细胞内TNF-α和MCP-1的mRNA水平。 结果: 汉黄芩素抑制了流感病毒感染NR8383细胞后TNF-α、MCP-1的转录和表达(P<0.01),降低了PGE₂、PLA₂、LTB₄和MDA的含量(P<0.05);减少了NO和iNOS的产生(P<0.05),增强了SOD的活性(P<0.05)。 结论: 汉黄芩素明显抑制了流感病毒感染后肺泡巨噬细胞内各种炎症相关因子的产生,具有抗炎作用。     

慢性心力衰竭大鼠内皮素系统表达的变化

目的:研究慢性心衰大鼠在心衰早期(冠脉结扎10d)和心衰晚期(冠脉结扎70d)的左心室内皮素受体A(ET_AR)和内皮素受体B(ET_BR)及内皮素前体(PreproET₁)的mRNA表达水平,了解心衰时心肌内皮素系统的变化及其与病程的关系。方法:用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)检测冠脉结扎心衰模型大鼠的左心室ET_A和ET_B受体及PreproET₁的mRNA表达,以放射免疫技术检测血浆中内皮素(ET₁)和心钠素(ANP)的浓度。结果:冠脉结扎10d后,血浆ET₁、ANP的水平和左心室ET_AR、ET_BR、PreproET₁的mRNA表达水平均明显高于假手术组;冠脉结扎70d后,血浆ET₁和ANP的水平显著高于冠脉结扎10d组和假手术组,ET_A受体mRNA表达水平和假手术组相比无显著性差异,而ET_B受体及PreproET₁mRNA表达水平仍明显高于假手术组,但显著低于冠脉结扎10d组。结论:在慢性心衰的不同阶段,左心室内皮素系统的改变参与机体心脏功能的调节,循环ET₁水平的上升在早期主要是由于PreproET₁的mRNA表达上调所致,在后期则主要与下调的内皮素受体水平有关。     

大鼠30 min全脑缺血再灌注肾脏损伤及其机制研究

目的: 从血栓素(TXA₂)与前列环素(PGI₂)平衡失调和肿瘤坏死因子(TNF-α)的变化方面探讨老龄大鼠脑缺血再灌注肾脏损伤的发生机制。方法: 青年(5月龄)和老龄(20月龄以上)大鼠均分为模型组和正常对照组, 观察大鼠全脑缺血30 min再灌注60 min后肾脏组织形态、肾内及血浆TXB₂、6-Keto-PGF_1α和肾内TNF-α含量的变化。结果: 青年和老龄模型组大鼠肾脏组织形态均出现明显的病理改变, 且老龄较青年更为严重。青年模型组血浆TXB₂/6-Keto-PGF_1α高于青年对照组和老龄模型组, 老龄对照组高于青年对照组。青年对照组肾脏组织TXB₂/6-Keto-PGF_1α低于老龄对照组和青年模型组, 老龄模型组高于青年模型组。老龄模型组肾组织TNF水平高于老龄对照组和青年模型组。结论: 以TXA₂占优势的TXA₂与PGI₂的平衡失调及TNF的增高与大鼠脑缺血再灌注肾脏损伤有关, 老龄大鼠脑缺血再灌注肾脏损伤的病理变化更明显。     

“一肾一夹”高血压大鼠肾脏皮质钠泵α亚单位的基因表达

目的:探讨"一肾一夹(1k1c)"高血压大鼠肾脏皮质钠泵α亚单位各异构体基因表达的改变,为高血压发病机制的深入研究提供理论及实验依据。方法:分别应用RT-PCR及免疫组化技术,探讨1k1c高血压大鼠肾脏皮质钠泵α₁、α₂及α₃亚单位mRNA及蛋白水平基因表达的改变。结果: 正常大鼠肾脏皮质主要表达钠泵α₁亚单位,α₂与α₃亚单位表达较弱;在mRNA水平,1k1c高血压大鼠肾脏皮质钠泵α₁亚单位表达明显较强,α₂与α₃亚单位表达无改变,而在蛋白水平各亚单位基因表达与对照组比较均无明显差异。 结论: 1k1c高血压大鼠肾皮质钠泵α亚单位基因表达发生改变,这种改变可能参与该模型的血压升高机制。     

硝普钠对核因子κB活性影响的初步研究

目的:探讨不同浓度的硝普钠(SNP)对人外周血T淋巴细胞核因子kappa B(NF-κB)活性的影响及机制。方法: 应用人外周血T淋巴细胞培养、Western blot和RT-PCR等技术,观察不同浓度的一氧化氮(NO)供体SNP对人T细胞受植物血凝素(PHA-P)刺激30 min、120 min后IκB_α mRNA和蛋白质表达的影响。结果:中高浓度的SNP能显著减少PHA-P刺激30 min时IκB_α蛋白的降解,并明显增加刺激120 min时IκB_α mRNA的再表达。结论: 中高浓度的SNP抑制NF-κB活性的机制与其通过NO减少IκB_α降解、促进IκB_α再合成有关,而低浓度SNP对NF-κB活性影响的机制可能不是通过IκB_α。     

同种异体BMSCs、ADSCs移植后的抗原性差异

目的　探讨骨髓来源间充质干细胞（MSCs from bone marrow, BMSCs）与脂肪来源间充质干细胞(Adipose tissue-derived MSCs,ADSCs)体内移植后的抗原性差异。 方法 体外培养WKY大鼠BMSCs、ADSCs,经成骨诱导后植入wistar大鼠桡骨缺损区,分别于植入后1、2、4、8周进行缺损区HE染色,于1、2、4、8周免疫组化检测缺损区IL-2、TGF-β、TNF-α、CD4、CD8,采用ELISA法检测脾细胞培养液上清IL-2、TGF-β、TNF-α的含量。 结果 BMSCs、ADSCs移植术后1～2周有少量淋巴细胞、白细胞浸润,IL-2、TGF-β、TNF-α、CD4、CD8蛋白少量表达;二者比较差异无显著性。 结论 BMSCs、ADSCs体内移植后所致的抗原性无显著性差异。     

肺炎衣原体对C57BL/6J小鼠腹膜巨噬细胞泡沫化的影响

目的:探讨肺炎衣原体在C57BL/6J小鼠腹膜巨噬细胞泡沫化过程中的作用。方法:将肺炎衣原体与C57BL/6J小鼠腹膜巨噬细胞培养72h后用油红O方法染色观察细胞的形态变化并测定细胞内胆固醇的含量。结果:肺炎衣原体能使C57BL/6J小鼠腹膜巨噬细胞胞浆内脂质颗粒增多,胆固醇酯占总胆固醇的比例增加。结论:肺炎衣原体能促进C57BL/6J小鼠腹膜巨噬细胞泡沫化。     

α1-肾上腺素受体在缺氧性肺动脉平滑肌细胞增殖中的作用

目的: 探讨肾上腺素α₁受体(α₁AR)及β₂受体(β₂AR)在缺氧性肺动脉平滑肌细胞(PASMCs)增殖中的作用及分子机制。方法: 用贴块法培养新生牛肺动脉平滑肌细胞至第6代,并作免疫组化染色鉴定。细胞在6.6% O₂环境中常压缺氧6、12、24 h,用 -TdR掺入法反映DNA合成测定PASMCs的增殖,用Fura-2/AM测定胞内Ca²⁺浓度。用Northern blotting法观察PASMCs的c-fos、c-myc基因表达和α₁AR mRNA、β₂AR mRNA的变化。加用不同的受体激动剂和抑制剂,探讨α₁AR被激活和抑制后,以及β₂AR激活后对上述变化的影响。结果: 单纯缺氧,PASMCs DNA合成即明显增加,α₁AR激活后,增加更明显;而α₁AR抑制后,明显降低(P<0.01)。β₂AR激活时无明显变化。缺氧后胞内游离钙浓度也增高(P<0.01),PASMCs上c-fos和c-myc基因表达增强(P<0.05),α₁AR mRNA和β₂AR mRNA水平均显著增高(P<0.01)。结论: 结果提示缺氧刺激PASMCs,使胞内钙浓度增加,c-fos和c-myc基因表达增强,引起PASMCs增殖,这一增殖是通过α₁AR介导的,但β₂AR不起主要作用。缺氧时α₁AR增多,既促进肺血管收缩,又加强细胞增殖,在缺氧性肺血管收缩和肺血管重建导致的肺动脉高压中起一定的作用     

精氨酸加压素对大鼠视前区GABA_A受体亚单位磷酸化的影响

目的:研究精氨酸加压素(AVP)对大鼠视前区γ-氨基丁酸(GABA)A型受体(GABA_A受体)亚单位(α、β和γ2)表达和磷酸化的影响。方法:实验分为对照组、AVP组、V1a受体抑制剂+AVP组和V1a受体抑制剂组(均n=10);腹腔注射AVP或V1a受体抑制剂0.5 h后,采用RT-qPCR和Western blot法检测视前区GABA_A受体亚单位(α、β和γ2)表达及磷酸化的变化。结果:与对照组相比,AVP或V1a受体抑制剂组大鼠视前区GABA_A受体亚单位表达均无显著变化;AVP能显著上调视前区GABA_A受体γ2亚单位的磷酸化水平(P0.05);AVP显著增加蛋白激酶C(PKC)和钙/钙调蛋白依赖性蛋白激酶Ⅱ(CaMKⅡ)表达和磷酸化(P0.01)。结论:外源性AVP不影响GABA_A受体亚单位(α、β和γ2)表达,但主要通过V1a受体激活PKC和CaMKⅡ,影响γ2亚单位磷酸化水平,从而调制视前区GABA_A受体介导的抑制性突触传递。     

抑制素α、βA、βB亚基单克隆抗体制备及其初步应用

目的:制备INHα、βA、βB亚基的McAbs,并进行肿瘤免疫组化研究。方法:抗原为猪卵泡液INH提取物及人工合成的INHα、βA、βB亚基肽段(6个)。以上述抗原免疫BALB/c小鼠,经细胞融合、筛选、克隆化,获得杂交瘤细胞14株,对其免疫学特性进行了分析。用纯化的McAbs进行了肿瘤免疫组化研究(285例次)。结果:获得分别分泌抗INHα、βA、βB亚基的McAbs细胞株14个,效价1×10^-4-1×10^-6。免疫组化除生殖系统肿瘤阳性外,还发现乳腺癌的阳性率超过70%。结论:成功制备了分泌抗INH、、B亚基肽的McAbs,纯化后进行了肿瘤免疫组化研究。     

川芎嗪对肠粘膜屏障功能的保护作用

目的:探讨川芎嗪对失血性休克再灌注后肠粘膜屏障功能的保护作用。方法:30只日本大耳白兔随机分为3组:假手术组(A组),单纯休克组(B组),川芎嗪治疗组(C组)。以硫代巴比妥酸比色法、放射免疫法及硝酸还原酶法测定末端回肠粘膜丙二醛(MDA)、肿瘤坏死因子(TNFα)、白细胞介素-1β(IL-1β)及一氧化氮代谢产物(NO^-2/NO^-3)含量,并取体循环血做细菌培养,取肠粘膜行光镜和电镜观察。结果:B组肠粘膜MDA、TNFα、IL-1β含量明显高于A组,NO^-2/NO^-3浓度显著低于A组,而C组变化无显著;B组细菌移位率明显高于A组,而C组与A组比较无显著差异;B组肠粘膜损伤明显重于A组,C组明显轻于B组,而C组与A组差异无显著。结论:川芎嗪能保护失血性休克再灌注后肠粘膜屏障功能,这可能与其清除体内氧自由基、提高一氧化氮水平及阻抑炎性介质作用有关。     

Contribution of Adenosine A2B Receptors in Clostridium difficile Intoxication and Infection

Clostridium difficile toxins A (TcdA) and B (TcdB) induce a pronounced systemic and intestinal inflammatory response. A_2B adenosine receptors (A_2BARs) are the predominant adenosine receptors in the intestinal epithelium. We investigated whether A_2BARs are upregulated in human intestinal cells by TcdA or TcdB and whether blockade of A_2BARs can ameliorate C. difficile TcdA-induced enteritis and alter the outcome of C. difficile infection (CDI). Adenosine receptor subtype (A₁, A_2A, A_2B, and A₃) mRNAs were assayed in HCT-8 cells. Ileal loops from wild-type rabbits and mice and A_2BAR^−/− mice were treated with TcdA, with or without the selective A_2BAR antagonist ATL692 or PSB1115. A murine model of CDI was used to determine the effect of A_2BAR deletion or blockade with the orally available agent ATL801, on clinical outcome, histopathology and intestinal interleukin-6 (IL-6) expression from infection. TcdA and TcdB upregulated A_2BAR gene expression in HCT-8 cells. ATL692 decreased TcdA-induced secretion and epithelial injury in rabbit ileum. Deletion of A_2BARs reduced secretion and histopathology in TcdA-challenged mouse ileum. Deletion or blockade of A_2BARs reduced histopathology, IL-6 expression, weight loss, diarrhea, and mortality in C. difficile-infected mice. A_2BARs mediate C. difficile toxin-induced enteritis and disease. Inhibition of A_2BAR activation may be a potential strategy to limit morbidity and mortality from CDI.