基于Ang/Tie-2信号通路研究补肾活血方导法调控大鼠种植窗期子宫组织血管生成的助孕机制＊

目的 基于Ang/Tie-2信号通路，探讨补肾活血方孕前导法给药调控肾虚血瘀-胚胎着床障碍病证结合模型大鼠种植窗期子宫组织血管生成的助孕机制。方法 阴道涂片HE染色法观察，选取动情周期规律的健康未交配雌性SD大鼠60只，随机分为5组：空白组、模型组、阿司匹林组、补肾活血方高剂量组、补肾活血方低剂量组，动情前期时入组，分组给药并合笼，于妊娠第5天处死，腹主动脉采血后，迅速剖取子宫并制片，采用光镜观察各组大鼠子宫内膜组织形态，采用免疫组化法（IHC）检测各组大鼠子宫组织中VEGF、FLK-1表达水平及螺旋动脉数量，采用Western-Blot检测各组大鼠子宫组织中Ang-1、Ang-2、Tie-2蛋白表达水平，采用Real-Time PCR检测各组大鼠子宫组织中Ang-1、Ang-2、Tie-2 mRNA表达水平。结果 给药组能明显改善肾虚血瘀-胚胎着床障碍病证结合模型大鼠种植窗期子宫内膜组织形态，并接近空白组水平；模型组大鼠子宫湿重、子宫脏器指数、螺旋动脉数量、VEGF、FLK-1及子宫组织Tie-2蛋白表达、Ang-1mRNA、Ang-2mRNA和Tie-2mRNA表达等均较空白组降低（P < 0.05）；补肾活血方高剂量组大鼠妊娠第5天子宫组织VEGF、FLK-1、螺旋动脉数量、Ang-1蛋白、Tie-2蛋白及Ang-1mRNA、Tie-2mRNA表达量较模型组明显增加（P< 0.01）。结论 补肾活血方孕前导法给药，改善肾虚血瘀-胚胎着床障碍病证结合模型大鼠种植窗期子宫内膜组织形态，促进子宫组织血管生成，改善组织血瘀状态，促进胚胎着床，可能与其提高大鼠子宫组织VEGF、FLK-1、Ang-1、Tie-2表达水平，并维持Ang-2正常表达有关。     

补肾活血法对肾虚血瘀型大鼠雌、孕激素及其受体的影响

目的:探讨补肾活血法对肾虚血瘀型大鼠雌孕激素及其受体的影响。方法:选动情前期大鼠按随机数字表法分为空白组、模型组、补肾活血方药低剂量组、高剂量组和五子组造肾虚血瘀模型,妊娠第4天处死大鼠,留取血清及子宫标本,放射免疫法测定血清雌二醇(E_2)、孕酮(P),免疫组化结合图像分析系统检测子宫雌激素受体(ER)、孕激素受体(PR)含量。结果:模型组E_2、P、ER、PR明显低于空白组;各治疗组E_2和P、高剂量组ER和PR、低剂量组和五子组的PR比模型组明显升高。多元相关性分析,ER、PR与E_2呈正相关,间质PR与P呈正相关。结论:补肾活血法可升高肾虚血瘀型大鼠E_2、P水平,调控ER、PR表达,利于子宫内膜成熟及胚泡着床。     

补肾活血方对肾虚血瘀型大鼠着床期子宫内膜血供相关因子的调控

目的:子宫内膜的血液供应状态与胚胎着床息息相关,血管内皮生长因子(VEGF)通过与血管内皮生长因子受体(VEGFR-2)结合,可促进子宫内膜螺旋小动脉生成、发育及成熟,改善子宫组织的血液供应。本研究旨在观察模型大鼠着床期血液流变学、血管内皮生长因子(VEGF)及其受体(VEGFR-2)的表达,探究补肾活血方改善肾虚血瘀模型大鼠着床期子宫内膜血液供应机制的研究。方法:统一处于动情前期的雌性SD大鼠50只,随机分为空白组、模型组、补肾活血方高剂量组(14.6 g·kg~(-1))、低剂量组(7.3 g·kg~(-1))、五子衍宗丸组(1.68 g·kg~(-1)),除空白组外,各组通过羟基脲灌胃(450 mg·kg~(-1))及尾静脉快速推注高分子右旋糖酐(5 m L·kg~(-1))造成肾虚血瘀模型。与此同时,空白组和模型组给予蒸馏水灌肠,其余各组给予不同剂量中药灌肠,动情期合笼,至妊娠第4天。末次给药1 h后股动脉取血,进行血液流变学检测。后迅速脱颈处死大鼠,取出子宫称重并固定,计算大鼠子宫指数,运用免疫组化法检测子宫内膜组织中VEGF、VEGFR-2的含量及螺旋动脉血管数量。结果:与空白组相比,模型组大鼠子宫指数降低,血液流变学各指标显著升高,子宫内膜VEGF、VEGFR-2含量及螺旋动脉血管数量明显减少。与模型组相比,补肾活血方低、高剂量组大鼠子宫指数增加,血液流变学各指标显著下降,子宫内膜VEGF、VEGFR-2含量及螺旋动脉血管数量明显升高。结论:补肾活血方可通过上调着床期VEGF及其受体VEGFR-2在子宫内膜中的表达,促进子宫螺旋动脉血管生成,同时可改善肾虚血瘀模型大鼠着床期血液流变学,促进内膜组织的血液灌注,促进胚胎着床。     

补肾活血方提高妊娠大鼠胚泡着床率的实验研究

[目的]观察中药补肾活血方对妊娠大鼠胚泡着床率的影响.[方法]选用妊娠SD大鼠随机分为空白组、模型组和中药低、中、高剂量组,于妊娠第5天扫描电镜观察各组子宫内膜胞饮突发育情况,妊娠第10天计数各组大鼠胚泡着床数.[结果]模型组子宫内膜表面未见明显的胞饮突发育,表现为增生早期的子宫内膜变化,中药中、高剂量组可见发育中的胞饮突,发育形态明显超前于模型组,接近于空白组;模型组胚泡着床数显著低于空白组(P<0.01),中药中、高剂量组胚泡着床数显著高于模型组(P<0.01).[结论]临床用量的补肾活血方能明显改善大鼠子宫内膜表面胞饮突的发育,有助于子宫内膜容受性的建立,从而最终提高胚泡的着床率.     

补肾活血中药对子宫内膜异位症大鼠生殖功能干预研究

目的：探讨补肾活血中药对调节子宫内膜异位症（EMS）模型大鼠生殖功能的作用。方法：将EMS模型大鼠分为模型组和补肾活血汤高、中、低剂量组及阳性药组,另设假手术组,分别给药8周后观察在位内膜的PR表达和排卵数目,剩余各组大鼠分别与雄性大鼠按2：1比例合笼,观察＂孕鼠＂活胎数。结果：阳性药组和补肾活血汤中、高剂量组大鼠的在位内膜PR表达与模型组比较明显升高,阳性药组和补肾活血汤各剂量组的排卵数与模型组比较明显增多,补肾活血汤各剂量组的活胎数与假手术组相比差异无统计学意义。结论：补肾活血中药能有效调节EMS模型大鼠子宫内膜孕激素受体的表达,促进卵泡发育,提高妊娠率,达到有效调节生殖功能的目的。     

补肾助孕方对肾虚薄型子宫内膜大鼠内膜容受性的影响及机制研究

目的：观察补肾助孕方对肾虚薄型大鼠子宫内膜容受性的影响,探讨中药的作用机制。方法：雌性SD大鼠30只,随机分为对照组10只,造模组20只,通过羟基脲灌胃建立肾虚合并着床障碍型子宫内膜大鼠模型。随后将20只造模组大鼠随机分为模型组和补肾助孕方组,每组10只。对照组、模型组均灌服蒸馏水10 mL/kg;补肾助孕方组灌服中药0.3 mg/kg,均1次/d,持续3个动情周期(15 d)。在第3个动情期后处死大鼠,酶联免疫吸附法检测动脉血中雌二醇、孕酮的水平。取子宫标本,光镜下观察子宫内膜形态,测量子宫内膜厚度、子宫间质厚度、子宫腺体数、子宫血管数。免疫组化法检测各组内膜组织中整合素β3和白血病抑制因子的表达。结果:与正常对照组比较,模型组大鼠动脉血雌二醇、孕酮的水平减少;子宫内膜腺体稀少,上皮变薄,间质致密,血管少;子宫内膜厚度、子宫间质厚度、子宫腺体数、子宫血管数均减少;整合素β3和白血病抑制因子的表达减少。补肾助孕方组较之模型组,有明显的改善。结论：补肾助孕方可改善肾虚合并着床障碍型状态大鼠子宫内膜的容受性,可能与提高血中激素水平,增加内膜中整合素aβ3和白血病抑制因子的表达有关。     

坤灵丸对子宫内膜增生模型大鼠的实验研究

目的:研究分析坤灵丸对肾虚血瘀型子宫内膜增生症大鼠子宫内膜形态学及血清六项激素的影响。方法:选取SPF级雌性SD大鼠70只,将其随机分为空白组10只,造模组60只。造模参照《雌性大鼠肾虚血瘀模型初探》建立肾虚血瘀型子宫内膜增生大鼠模型。随后将模型组60只大鼠随机分为模型组、坤灵丸组、补肾活血方组、米非司酮组共4组,每组15只,分别灌服相应药液。给药21 d后处死大鼠,剖开腹腔,取出子宫,HE染色观察子宫形态学变化。腹主动脉取血,分离血清,检测六项激素含量。结果:与空白组比较,模型组子宫内膜厚度增加;与模型组比较,各用药组子宫内膜厚度减少,子宫内膜腺体数量多,腺体弯曲,腺上皮多呈单层高柱状上皮细胞。与空白组比较,模型组大鼠血清雌激素(E2)、泌乳素(Prol)、黄体生成素(LH)、卵泡雌激素(FSH)含量均明显升高(P 0. 01),孕激素(P)、睾酮(T)含量明显降低(P 0. 01);与模型组比较,各用药组大鼠血清E2、Prol、LH、FSH含量均明显降低(P 0. 01或P 0. 05),P、T含量明显升高(P 0. 01或P 0. 05)。结论:坤灵丸和补肾活血方能够降低子宫内膜厚度,改善血清激素水平。     

肾虚血瘀-子宫内膜容受性不良模型大鼠的建立

目的：建立肾虚血瘀一子宫内膜容受性不良大鼠模型,为研究补肾活血法改善子宫内膜容受性的作用机理提供病证结合实验动物模型。方法：将48只SD大鼠随机分为模型组、阳性对照组及空白组,每组各16只。模型组予羟基脲450mg·（kg·d）-1,灌胃10d,第4天开始加用肾上腺素0．3mg·（kg·d）-1皮下注射7d,阳性对照组（胚胎着床障碍动物模型）、空白纽予等量生理盐水灌胃10d,第4天开始加用等量生理盐水皮下注射7d,建立大鼠模型。结果：模型组高、中、低切变率下全血黏度、聚集指数与空白组、阳性对照组比较,均明显升高（P〈0．05）。与空白组比较,模型组及阳性对照组大鼠透射电镜下子宫内膜上皮细胞核结构不规则,核内异染色质增多,线粒体数量减少,空泡化,内质网水肿扩张明显,大小不均;扫描电镜下胞饮突数量明显减少,发育差,分布不均;而模型组与阳性对照组均无明显差异。妊娠第8天,模型组、阳性对照组的胚泡着床率和平均着床点数均比空白组大鼠明显减少（P〈0．05）。而模型组与阳性对照组无明显差异。结论：羟基脲灌胃450mg·（kg·d）-1,造模10d,第4天加用肾上腺素0．3mg·（kg·d）-1皮下注射7d,可成功建立肾虚血瘀一子宫内膜容受性不良大鼠模型。     

基于miR-221介导的细胞自噬探讨补肾温阳化瘀方治疗肾阳虚血瘀型子宫内膜异位症的作用机制

目的：探讨补肾温阳化瘀方治疗大鼠肾阳虚血瘀型子宫内膜异位症（EMs）的疗效及可能的作用机理。方法：将100只实验大鼠随机分为假手术组、模型组、中药高剂量组、中药低剂量组和西药组,每组20只,肾阳虚血瘀组EMs造模成功后分别给予补肾温阳化瘀方高、低剂量及孕三烯酮灌胃,假手术组和模型组纯净水灌胃,连续3周。Western blot检测Beclin-1、P62蛋白表达;RT-PCR检测miR-221及Beclin-1、P62 mRNA水平。结果：与假手术组比较,模型组在位内膜的Beclin-1蛋白及mRNA水平显著升高（P<0.01,P<0.05）,P62蛋白及mRNA水平显著下降（P<0.01,P<0.05）,miR-221水平显著升高（P<0.01）。与模型组比较,中药高、低剂量组在位内膜及异位灶的Beclin-1蛋白及mRNA水平显著下降（P<0.05）,P62蛋白及mRNA水平显著升高（P<0.01,P<0.05）,miR-221水平显著下降（P<0.01,P<0.05）。miR-221与Beclin-1 mRNA呈现正相关...     

阿司匹林联合补肾活血中药对薄型子宫内膜影响的研究

目的：探讨补肾活血中药联合小剂量阿司匹林对肾虚血瘀型薄型子宫内膜不孕症的临床治疗效果。方法：90例患者随机分成三组,A组服用中药;B组服用补肾活血中药联合小剂量阿司匹林;C组服用小剂量阿司匹林。采用B超连续监测子宫内膜厚度、子宫动脉阻力指数（R1）及雌二醇（E2）、孕酮（P）等来综合评价子宫内膜及妊娠情况。结果：治疗后,中西医结合组的治疗效果优于其他两组。结论：中西医结合治疗薄型子宫内膜引起的不孕有明显的优势。     

益肾法对自发性高血压大鼠血压和肾血流影响的研究

目的:观察益肾法对自发性高血压大鼠(SHR)血压和肾脏血流的影响。方法:将16只SHR随机分为模型对照组,杞菊地黄丸组,二仙汤组和苯那普利组,连续灌胃给药6周。分别观测血压动态变化和肾血流情况。结果:滋阴补肾的杞菊地黄丸组和苯那普利组的收缩压低于模型对照组(P<0.05),其降血压作用强于温补肾阳的二仙汤;二仙汤组肾血流高于模型对照组(P<0.05),其对肾血流的改善作用强于杞菊地黄丸。结论:益肾中药可以降低SHR的收缩压,以滋阴补肾的杞菊地黄丸的降压作用更为显著。益肾中药可以改善SHR的肾血流量,以温补肾阳的二仙汤的作用更为显著。     

五脏补血法理论及临床应用探讨

血液的生成与五脏关系密切,据此确立五脏补血法:养心补血法、健脾补血法、润肺补血法、滋肝补血法、益肾补血法。     

补肾活血法治疗慢性心力衰竭探析

根据老年人肾虚、多瘀的生理病理特点和慢性心力衰竭的临床表现及现代研究,认为肾虚血瘀是慢性心力衰竭的重要病机。肾虚为本,血瘀为标,是慢性心力衰竭发生发展的主要致病因素。补肾活血是慢性心力衰竭的主要治法。     

补肾祛瘀冲剂治疗肾虚血瘀型老年高血压临床研究

目的:观察补肾祛瘀冲剂治疗肾虚血瘀型老年高血压的临床疗效.方法:将150例中医辨证为肾虚血瘀型老年高血压患者随机分为对照组和治疗组各75例,对照组给予硝苯地平片口服,治疗组在对照组治疗的基础上加用自拟补肾祛瘀冲剂治疗,两组均以8周为1个疗程.结果:治疗后治疗组收缩压、舒张压、头痛、头晕、胸闷、腰膝酸软中医证候积分水平均较治疗前及同期对照组明显改善(P＜0.05),具有统计学意义.结论:补肾祛瘀冲剂联合硝苯地平治疗肾虚血瘀型老年高血压可显著改善临床症状,疗效显著.     

补肾活血法治疗肾虚型骨关节炎临床研究

目的观察补肾活血方治疗肾虚型膝骨关节炎的临床疗效及对炎症因子的影响。方法选取膝骨关节炎患者113例,随机分为治疗组(56例)和对照组(57例),分别采用补肾活血方和塞来昔布、氨基葡萄糖联合用药治疗,观察2组临床疗效,应用平均Womac关节炎指数评分和平均骨关节炎严重程度指数评定用药前后临床症状改善情况,采用ELISA法检测血清炎症因子肿瘤坏死因子(TNF)-α、白细胞介素(IL)-6。结果治疗组总有效率为89.3%,优于对照组(P<0.05);Womac关节炎指数评分较治疗前显著改善(P<0.01),与对照组比较有显著差异(P<0.05);骨关节炎严重程度指数较治疗前显著改善(P<0.05),与对照组无显著差异(P>0.05)。治疗组血清TNF-α、IL-6水平明显降低(P<0.01,P<0.05)。结论补肾活血方治疗肾虚型膝骨关节炎总体疗效优于塞来昔布、氨基葡萄糖联合用药;通过抑制炎症因子的产生而减轻炎症反应是其重要机理之一。     

肾病中的瘀血

瘀血既是肾病的病理产物 ,又是肾病发展和加重的重要原因。从肾病中瘀血的辨认、瘀血与肾病的关系、运用活血化瘀法的注意事项、常见主证的治法等方面进行了探讨。     

补肾活血汤治疗原发性骨质疏松症40例

目的:观察补肾活血汤治疗原发性骨质疏松症的临床疗效。方法:选取骨质疏松症患者80例,随机分为对照组和治疗组各40例。对照组给予维D钙咀嚼片口服治疗,治疗组给予补肾活血汤治疗。结果:对照组有效率为52.5%,治疗组有效率为77.5%,治疗组优于对照组(P0.05);治疗后,治疗组疼痛缓解程度、中医证候积分均优于对照组(P均0.05)。结论:补肾活血汤治疗原发性骨质疏松症疗效确切,能明显改善患者临床症状。     

补肾活血法治疗人工流产后月经过少体会

人工流产后月经过少在临床上以肾虚血瘀型多见,临证采用中药人工周期补肾活血法治疗:经后期拟补肾阴为主,佐以养血,以促进卵泡发育;经间期拟补肾养血、活血通络,以促进卵子排出;经前期拟温补肾阳为主,辅以理气,使黄体功能健全;行经期拟行气、活血化瘀为主,使内膜剥脱、经血下泻;在行经时,当加大活血化瘀之品用量,使瘀去新生,经水自通。     

益肾行气活血法在治疗肾结石中的应用

肾结石是由于肾气亏虚,推动无力,日久而化为结石。肾虚为本,湿热蕴结下焦为表,治当益肾通淋,佐以行气活血之品。     

腹针治疗肾虚血瘀型膝关节骨性关节炎的临床研究

目的：评价腹针治疗肾虚血瘀型膝关节骨性关节炎的临床疗效。方法：选取150名膝关节骨性关节炎患者,随机分为治疗组及对照组。对照组基础治疗3个月,治疗组基础治疗＋腹针治疗3个月。分别在治疗前后及治疗后1月、2月进行评分,并分析其差异性。结果：（1）治疗后,2组VAS及HSS评分与治疗前比较,差异有统计学意义（P〈0.01）;（2）治疗后,治疗组VAS及HSS评分与对照组比较差异有统计学意义（P〈0.01）;（3）治疗后1月后,治疗组VAS及HSS评分与对照组比较,差异有统计学意义（P〈0.05）;（4）治疗后2月后,治疗组VAS及HSS评分与对照组比较差异无统计学意义（P〉0.05）;（5）治疗后,治疗组与对照组中医疾病疗效判定标准总有效率分别为91.18%（62/68）和75%（39/52）,二者比较,差异有统计学意义（P〈0.05）;（6）治疗后,治疗组与对照组中医证候疗效判定标准总有效率分别为86.76%（59/68）和63.46%（33/52）,二者比较,差异有统计学意义（P〈0.01）。结论：腹针治疗膝关节骨性关节炎疗效确切,值得推广,但其作用具有一定的时效性。