电针对去卵巢大鼠Wnt3a和β-catenin的基因及蛋白表达的影响

目的研究电针对去卵巢骨质疏松模型大鼠Wnt3a和β-catenin的蛋白及基因表达的影响。方法选取60只雌性SD大鼠,随机分为空白组、假手术组、模型组、药物组、针刺组,每组12只。空白组不做任何处理,常规饲养;假手术组只暴露双侧卵巢但不切除;其余3组行双侧切卵巢法建立骨质疏松模型大鼠。造模13周后开始治疗,针刺组取"肾俞"、"脾俞"、"三阴交"、"足三里",每次电针刺激15 min(断续波,2 Hz,1.0 mA)并灌服与药物组相同体积的蒸馏水,每日1次,连续治疗5 d,间隔2 d,20 d为1个疗程,共治疗3个疗程;药物组以戊酸雌二醇水溶液(0.02 mg/mL,1 mL/100 g体质量)灌胃,疗程同针刺组;假手术组、模型组灌服与药物组相同体积的蒸馏水,疗程同针刺组;各组大鼠每周称重1次,以此调整给药剂量。治疗结束后麻醉处死大鼠,分离股骨和胫骨,分别用RT-PCR分析法和免疫组化法检测各组大鼠股骨和胫骨Wnt3a,β-catenin蛋白及基因的表达。结果模型组Wnt3a和β-catenin蛋白表达量最低,与空白组和假手术组比较差异有统计学意义(P0.05);经针刺或药物干预后,Wnt3a和β-catenin蛋白表达显著升高,与模型组比较差异具有统计学意义(P0.05);模型组Wnt3a和β-catenin mRNA表达量最低,与空白组和假手术组比较差异有统计学意义(P0.05);经针刺或药物干预后,Wnt3a和β-catenin mRNA表达显著升高,与模型组比较具有统计学意义(P0.05)。结论针刺防治绝经后骨质疏松症的分子机制可能是通过调控Wnt3a和β-catenin的基因和蛋白表达水平,从而激活Wnt/β-catenin信号通路,以此调节骨重建系统的平衡。     

Wnt/β-catenin通路及靶基因c-myc在肝细胞癌组织中的表达

目的 观察Wnt通路激活在肝细胞癌起源中的作用.方法 应用免疫组织化学方法检测31例肝细胞癌患者肿瘤组织(实验组)与癌旁正常组织(对照组)中Wnt2、β-catenin及其靶基因c-myc的表达.结果 在肿瘤组织与癌旁正常组织中,Wnt2蛋白的表达差异无统计学意义(P＞0.05);β-catenin的胞质表达在癌旁组织中明显增高(P＜0.05),而其胞核表达则在肿瘤组织中增高(P＜0.05);c-myc在肿瘤组织中表达增高,两组差异有统计学意义(P＜0.01).结论 β-catenin及其靶基因c-myc在肝细胞癌组织中表达增高,提示Wnt通路激活的过程在肝细胞癌的起源中起到重要作用.

Abstract：

Objective To explore the effect of Wnt signaling pathway activation in the origination of hepatocellular carcinoma. Methods Immunohistochemistry was used to observe the expression of Wnt2,β-catenin and target gene c-myc in hepatocellular carcinoma (experimental group) and peficancerous tissue (control group) from 31 patients. Results The expression of Wnt2 had no significantly difference in both groups (P ＞0. 05). The expression of β-catenin in cytoplasm was significantly higher in peficancerous tissue. However,the expression of β-catenin in nucleus was significantly higher in hepatocellular carcinoma ( P ＜ 0. 05). The expression of c-myc was also significantly higher in hepatocellular carcinoma (P ＜ 0. 01).Conclusion β-catenin and it' s target gene c-myc overexpressed in hepatocellular carcinoma. The activation of Wnt signaling pathway played an important role in the origination of hepatocellular carcinoma.     

Wnt/β-catenin信号通路与狼疮肾炎的关系

目的探讨Wnt/β-catenin信号通路中的分子在狼疮肾炎(LN)患者中的表达。方法选取2015年5月至2016年4月在兰州大学第二医院就诊的LN患者18例作为LN组,另选取年龄、性别相匹配的健康体检者19名作为对照组。给予LN组激素和(或)激素联合免疫抑制剂治疗,对照组无特殊治疗。LN组患者经过6个月的激素及免疫抑制剂的治疗后,其中治疗有效8例,治疗无效10例。ELISA法检测所有研究对象血清中Wnt1、β-catenin、DKK1的表达。实时荧光定量PCR检测外周血单个核细胞中Wnt1、β-catenin、DKK1 mRNA的表达。结果 LN组患者与对照组Wnt1、β-catenin、DKK1及血清mRNA表达无统计学差异;LN组治疗无效患者血清中β-catenin表达高于治疗有效患者(P0.05)。结论 Wnt/β-catenin信号通路的分子有望成为监测LN治疗无效的指标。     

Axin、β-catenin基因在前列腺癌组织中的表达及意义

目的 探讨Wnt信号途径中Axin、β-catenin mRNA在前列腺癌组织中的表达情况,以及与癌肿病理分级的关系.方法 常规采集90例符合实验条件的前列腺癌及前列腺增生患者病理标本以及临床相关资料,采用荧光定量PCR检测方法 检测Axin,β-catenin mRNA在肿瘤和增生组织中表达情况.采用统计学方法 分析两种基因在癌肿组织及增生组织表达的差异以及与肿瘤病理分级的相关性.结果 荧光定量PCR检测发现:Axin、β-catenin的mRNA水平在前列腺癌和增生前列腺组织中表达差异明显.并且β-catenin mRNA的表达与癌肿病理分级密切相关.结论 Axin、β-catenin在前列腺癌组织中表达的差异可能是前列腺癌发生的原因之一.并且进一步证明了Wnt信号途径异常和肿瘤发生密切相关.     

Wnt/β-catenin在IgA肾病中的表达及意义

目的:探讨Wnt/β-catenin及其下游靶基因在IgA肾病中的表达,分析其与患者的临床病理参数的相关性。方法:根据肾小管间质病变程度分组,采用RT-PCR、Western blot和En Vision-免疫组化技术检测各组IgA肾病患者以及正常对照组患者肾活检组织中Wnt/β-catenin及其下游靶基因snail、基质金属蛋白酶-7(MMP-7)、α-平滑肌动蛋白(α-SMA)的表达,各组之间进行比较。结果:IgA肾病患者肾活检组织中β-catenin、snail、MMP-7、α-SMA mRNA和蛋白表达水平较正常对照组升高(P0.05)。β-catenin、snail在伴有轻度肾小管间质病变的IgA肾病患者肾活检组织中表达水平高于无肾小管间质病变的IgA肾病患者(P0.05),其后随着肾小管间质病变程度的加重逐渐下降。MMP-7、α-SMA在IgA肾病患者肾活检组织中的表达水平与肾小管间质病变的严重程度相一致。结论:Wnt/β-catenin及其下游靶基因在IgA肾病中表达异常,可能参与IgA肾病的发生发展。     

β-catenin基因的异常表达与胰腺癌发生和生物学行为的关系

目的　研究β- catenin基因的异常表达与胰腺癌发生和生物学行为的关系。方法　应用免疫组织化学 Pic Ture TM二步法 ,检测 4 7例胰腺癌组织、12例胰腺导管内肿瘤 (上皮中度不典型增生 )和 8例正常胰腺组织中β- catenin的表达 ;同时检测胰腺癌增殖细胞核原 (PCNA)作为胰腺癌增殖状态的指标。结果　β- catenin蛋白主要定位于正常胰腺腺泡和导管上皮细胞的连结处 ,8例正常胰腺组织均呈正常表达 ;胰腺导管内肿瘤异常表达率为 5 0 % (6 / 12 ) ;胰腺癌异常表达率为 6 8.1% (32 /4 7) ,与胰周淋巴结和肝脏癌转移和 1年生存率显著相关 (分别 P<0 .0 5 ,0 .0 1和 0 .0 5 ) ,而与胰腺癌大小、分化程度、增殖状态及浸润无关 (P>0 .0 5 )。结论　β- catenin基因的异常表达是胰腺癌发生的分子机制之一 ,也是判断胰腺癌转移和预后的良好指标。     

临床及肾脏病理与狼疮性肾炎肾脏损害的相关性

目的:探讨狼疮性肾炎(LN)患者临床及病理与肾脏损害之间的关系,明确肾脏损害的相关血清学指标及病理表现.方法:回顾性分析我院182例LN患者的临床及病理资料,进行统计学分析.结果:(1)LN患者Ⅳ型和Ⅴ型的肾脏损害(蛋白尿、血尿、血肌酐)最重,抗ds-DNA抗体、抗核小体抗体及补体C3降低在Ⅳ型多见.(2)血脂、血浆白蛋白及血红蛋白均与肾脏损害明显相关(P＜0.01).(3)肾脏损害指标升高时,免疫复合物C1q、C3、EM沉积均达90%以上;肾脏损害指标与AI、CI及其病理参数明显正相关.结论:血脂异常、低蛋白血症、贫血、抗ds-DNA抗体、核小体抗体及补体C3均为提示肾脏损害程度的血清学指标.Ⅳ型和Ⅴ型的肾脏损害最重,并且蛋白尿、血尿、血肌酐水平与肾脏的病理沉积相关.     

β-catenin、APC表达异常在肾上腺皮质腺瘤形成中的作用

目的 观察β-连环素(β-catenin)、APe在肾上腺皮质腺瘤(ACA)发生中的作用.方法 运用免疫组织化学SP法检测36例ACA,10例周围正常肾上腺组织中β-catenin及APC蛋白表达.聚合酶链反应(PCR)-DNA双向测序法分析ACA及正常组织中β-catenin基因外显子3突变.结果 免疫组织化学染色显示正常组织β-catenin为细胞膜着色,无胞质或胞核内染色.ACA中12例存在胞质或胞核内β-catenin异常染色,异位表达率为33.3%(12/36).APC在正常组织中表现为胞质着色(10/10),阳性表达率为100.O%.36例ACA中29例为胞质内正常染色,7例APC胞质内不同程度表达缺失,阳性表达率为80.5%(29/36).PCR-DNA双向测序法检测正常组织中未见β-catenin基因外显子3突变(0/10),ACA中可见5例存在β-catenin外显子3点突变,突变率为13.8%(5/36),ACA细胞中β-catenin、APC的异常表达及β-catenin外显子3突变与正常组织比较差异均有统计学意义(P＜0.05).结论 β-catenin外显子3突变及β-catenin、APC蛋白的异常表达在ACA形成过程中是一种频发事件.     

肝细胞肝癌中Wnt5a基因的表达及其临床意义

目的 探讨Wnt5a基因mRNA及其蛋白在肝细胞肝癌(hepatocellular carcinoma, HCC)中的表达规律及其临床意义.方法 应用实时定量RT-PCR方法 检测22例HCC癌和癌旁配对组织中Wnt5a基因mRNA表达,采用免疫组织化学(ABC)法检测76例Wnt5a蛋白的表达情况,结合病人的临床病理资料分析Wnt5a基因在HCC中的表达意义.结果 对比癌旁肝组织,68%(15/22)的肝癌组织Wnt5a基因mRNA呈上调表达(P=0.038);而80.3%(61/76)的HCC癌组织Wnt5a蛋白显示低或阴性表达(P<0.001),Wnt5a蛋白低表达与病人的性别、肿瘤的大小、肿瘤的分化程度、HBsAg、以及有无肝硬化无关(P>0.05),而与高的甲胎蛋白水平(AFP,P=0.020)和差的肿瘤分期有关(P<0.001).结论 Wnt5蛋白缺失表达是HCC进展中的频发事件,Wnt5a在HCC肿瘤发生过程中可能发挥肿瘤抑制基因活性,该蛋白极可能是一个有用的HCC预后不良指标.     

GCM1通过激活Wnt3a/β-catenin信号通路改善绝经后骨质疏松症

目的 探究GCM1对小鼠胚胎成骨细胞前体细胞（MC3T3-E1）成骨分化及矿化的影响。方法 实验设置control组、BMP2诱导组、BMP2+ov-NC组、MP2+ov-GCM1组、BMP2+sh-NC组、BMP2+sh-GCM1组,BMP2用于诱导细胞成骨分化。通过碱性磷酸酶(ALP)染色及茜素红染色检测GCM1对MC3T3-E1成骨分化及矿化的影响;通过Western blot检测成骨分化相关蛋白及Wnt3a/β-catenin蛋白的表达变化。结果 GCM1在绝经后骨质疏松症患者血清中低表达。过表达GCM1能够促进BMP2诱导MC3T3-E1的成骨分化和矿化,而抑制GCM1表达则抑制了BMP2诱导MC3T3-E1的成骨分化和矿化。此外,过表达GCM1增加了Wnt3a/β-catenin蛋白表达,激活Wnt3a/β-catenin信号通路,抑制GCM1表达则与上述结果相反。结论 GCM1在绝经后骨质疏松症患者血清中低表达,过表达GCM1则可能通过激活Wnt3a/β-catenin信号通路、促进MC3T3-E1成骨分化及矿化,进而改善绝经后骨质疏松症。     

胃癌组织中KAI1和β-catenin的表达及其意义

目的:探讨胃癌组织中KAI1和β-catenin在胃癌的发生、发展、浸润和转移中的作用。方法 :应用SP免疫组化技术，检测54例胃腺癌中KAI1和β-catenin的表达，并分析其与临床病理特征的关系和两基因之间的相关性。结果:胃癌组织中KAI1低表达; β-catenin异常表达，且异常表达率与胃癌的淋巴转移、远隔转移、临床分期有关。多个因素的分组间差异有显著性（P＜0.05），两者的表达呈负相关（r=-0.286,P＜0.05）。结论:胃癌组织中KAI1和β-catenin的表达与某些临床病理特征有关，且两种表达存在相关性。检测两者的表达水平对胃癌的诊断和预后可能有一定的参考价值。     

sox-9通过Wnt3a/β-catenin通路促进大鼠骨髓间充质干细胞分化

目的探讨sox-9对骨髓间充质干细胞(bone marrow-derived mesenchymal stem cells,BMSCs)增殖能力和分化能力的影响。方法分离并鉴定BMSCs,对细胞进行sox-9过表达和敲降处理。将细胞分为对照组、过表达对照组、干扰对照组、sox-9过表达组、sox-9干扰组。CCK8法检测细胞增殖活性;免疫组化观察细胞的Ⅱ型胶原蛋白(CollageⅡ)和聚蛋白聚糖(Aggrecan)表达水平; Western blot检测细胞sox-9、Wnt3a、β-连环蛋白(β-catenin)表达水平。结果各组细胞增殖能力无显著差异(P0.05); sox-9过表达组的Collage Ⅱ和Aggrecan表达显著升高,而Wnt3a和β-catenin的表达显著降低(P0.05)。结论sox-9可能是调控间质干细胞向软骨细胞分化能力的关键因子,通过抑制Wnt3a/β-catenin信号途径,促进其向软骨细胞分化。     

β-catenin在胰腺癌中表达的意义

目的 探讨β-catenin(连环素)在胰腺癌表达的临床意义。方法 对手术切除的46例胰腺癌标本进行免疫组化染色，检测β-catenin在胰腺癌中的表达，并分析其和胰腺癌的分级、分期以及有无转移等指标的关系。结果 β-catenin在胰腺癌细胞膜的异常表达率为54．3％，且分化越差则在细胞膜的异常表达率越高，有转移者高于无转移者；其在细胞浆的异常表达率为21．7％，与胰腺癌的分化、分期及有无转移无显著相关性，但23例术前介入化疗的患者中，肿块缩小者(14例)在细胞浆的异常表达率为0，显著低于9例肿块无缩小者的33．3％；β-cate-nin在细胞膜和细胞浆异常表达具有一致性，为63．0％。结论 β-catenin在细胞膜的异常表达能促进肿瘤转移，在细胞浆内的异常表达可能会促进肿瘤细胞的增殖。     

兔骨关节炎模型中Wnt/β-catenin信号通路研究

目的:探讨兔骨关节炎软骨细胞中Wnt/β-catenin信号通路的表达情况及其在骨关节炎中的作用。方法:采用改良伸直位固定法制作兔骨关节炎模型,分阶段酶消化法分离正常软骨细胞和骨关节炎软骨细胞。采用ELISA法检测正常软骨细胞和骨关节炎软骨细胞中β连环蛋白(β-catenin)、基质金属蛋白酶-3(MMP-3)、基质金属蛋白酶-13(MMP-13)、带有血小板凝血酶敏感蛋白样模体的解整链蛋白金属蛋白酶-4(ADAMTS-4)、Ⅱ型胶原、蛋白聚糖、白细胞介素(IL)-1β、IL-18和IL-33的水平。结果:与正常对照组比较,骨关节炎组β-catenin、MMP-3、MMP-13、ADAMTS-4的蛋白水平均明显升高,Ⅱ型胶原和蛋白聚糖基因的蛋白水平均明显下降,差异有统计学意义(P0.05)。与正常对照组比较,骨关节炎组IL-1β、IL-18和IL-33蛋白水平差异无统计学意义(P0.05)。结论:兔骨关节炎中Wnt/β-catenin信号通路明显激活,介导软骨细胞外基质分解代谢、促进软骨破坏,而炎性因子IL-1β、IL-18和IL-33可能在此过程中并未起到关键作用。     

Wnt/β-catenin、RANKL/LGR4通路因子在骨质疏松性骨折端的表达

目的探讨骨质疏松性骨折(osteoporotic fracture,OPF)骨折端Wnt/β-catenin、RANKL/LGR4通路关键因子的表达。方法选取2016年1月至2017年7月在我院就诊的符合标准的股骨骨折患者56例,分为OPF组27例和对照组29例,伤后3~7 d行骨折手术,于骨折断面内用刮匙刮取骨组织≥200 mg,保存于液氮中。使用液氮研磨RNAiso Plus法提取骨组织总RNA,采用RT-PCR技术检测比较两组之间各因子mRNA的表达差异;使用液氮研磨加裂解液提取骨组织总蛋白,采用Western blotting技术检测比较两组之间各因子蛋白的表达差异。结果 RT-PCR、Western blotting检测OPF组对比对照组患者LRP5、β-catenin、Runx2、C-myc、LGR4因子表达均降低(P0.05),RANKL因子表达升高(P0.05)。结论 OPF与Wnt/β-catenin成骨信号通路中LRP5、β-catenin、Runx2、C-myc因子成骨抑制或减弱有关,与RANKL/LGR4破骨信号通路中RANKL因子破骨增强、LGR4因子破骨抑制有关。可通过调控各因子的表达干预OPF的发生和治疗。     

辛伐他汀对肾脏缺血再灌注损伤中Axin和β-catenin表达的影响

目的:观察辛伐他汀对大鼠肾脏缺血再灌注损伤(IRI)中Axin和β-catenin表达的影响。方法:36只雄性Wistar大鼠,随机分为假手术组(Sham组)、缺血再灌注(IR)组、辛伐他汀(XF)组,每组12只。肾缺血再灌注6h、48h后,检测血清尿素氮(BUN)和肌酐(Scr)的含量;光镜下观察肾组织病理结果;采用免疫组织化学二步法和实时荧光定量PCR检测肾组织中Axin和β-catenin表达的情况。结果:与假手术组相比,IR组肾组织中Axin表达明显降低(P<0.05),β-catenin表达明显升高(P<0.05);辛伐他汀干预后,Axin表达较IR组显著下降(P<0.05),β-catenin表达较IR组显著上升(P<0.05)。相关性分析表明:Axin蛋白与β-catenin蛋白(rs=-0.843,P<0.01),AxinmRNA与β-cateninmRNA(rs=-0.741,P<0.01)均为负相关。结论:辛伐他汀对肾IRI具有一定的保护作用,其机制可能与调节肾组织Axin和β-catenin表达有关。     

Wnt1和β-catenin在结直肠腺瘤中的表达及其意义

目的研究Wnt1和β-catenin在结直肠腺瘤中的表达,及其在结直肠肿瘤发生中的作用。方法用免疫组织化学方法检测61例结直肠腺瘤、20例结直肠癌及其相应正常黏膜石蜡包埋组织标本的Wnt1和β-catenin的表达情况。结果结直肠腺瘤中,随非典型增生程度增高Wnt1表达差异有统计学意义(x~2=16.002,P<0.05)。不同腺瘤组织学类型(x~2=7.509,P<0.05)、不同非典型增生程度间(x~2=6.666,P<0.05)β-catenin的表达差异均有统计学意义。Wnt1表达和β-catenin表达呈正相关(P<0.01,r=0.45)。结论Wnt1和β-catenin在结直肠肿瘤的发生中可能具有重要作用。     

狼疮性肾炎肾小球中PCNA、Fas、Bcl-2、Bax蛋白表达的意义

近年 ,对细胞凋亡 (ａｐｏｐｔｏｓｉｓ)的研究已发现Ｆａｓ蛋白及Ｂｃｌ- 2蛋白分别是促进和抑制细胞凋亡的蛋白 ,而Ｂｃｌ - 2基因家族包含抑制和促进细胞凋亡两类功能相反的蛋白质。Ｆａｓ、ＦａｓＬ基因的异常将导致自身反应性Ｔ、Ｂ淋巴细胞的凋亡异常 ,引起自身免疫性疾病。肾小球系膜细胞的增多不仅取决于系膜细胞的增殖程度 ,而且还取决于系膜细胞凋亡的多少 ,细胞凋亡过程受到严格调控[1] 。资料与方法1　病例选择　参照美国风湿病学会 1982年诊断标准 ,全部病例经肾活检确诊为系统性红斑狼疮。参照ＳＬＥＤＡＩ计分均为狼疮活动。…